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赭曲霉毒素A的酶联免疫检测——Ⅰ.抗原的制备
采用活性酯法制备赭曲霉毒素A(OTA)的全抗原,并以正交试验L9(34)来选择活性酯法的佳条件.通过对实验结果的统计分析得出,当OTA与牛血清白蛋白(BSA)的摩尔比为20∶1,OTA∶N-羟基琥珀酰胺∶N',N-二环乙基碳化亚胺的摩尔比为1∶2∶4,OTA的活化时间为60min,偶联时间在90min的情况下,OTA与BSA的连接比可达9.64,OTA的利用率可达48.2%.
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功夫菊酯半抗原的合成及结构表征
目的 为了建立功夫菊酯残留的酶联免疫分析方法,设计并合成了功夫菊酯的半抗原.方法 利用功夫菊酸和α-氰基-(3-苯氧基)苄醇通过酰化、水解、酯化多步反应合成了功夫菊酯的半抗原:2,2-二甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸-α-(N-丁酸基)-甲酰氨-3-苯氧基苄酯.结果 通过质谱和核磁鉴定了半抗原的结构,证明所合成的产物为目标产物.结论 合成的半抗原分子保留了功夫菊酯结构的主要特点,为进一步建立功夫菊酯的酶联免疫分析方法提供了研究基础.
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苏丹红Ⅰ人工抗原的合成
目的 建立苏丹红I(Sudan I)免疫学检测方法,制备具有免疫原性的苏丹红1人工抗原.方法 采用琥珀酸酐法合成苏丹红I的衍生物苏丹红I-半琥珀酸酯(苏丹红I-HS),在此基础上,采用活性酯法将苏丹红I-HS分别与生血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备得到苏丹红I-HS-BSA和苏丹红I-HS-OVA.结果 采用红外光谱、液质联用对苏丹红I-HS进行分析和鉴定表明合成成功,并用紫外光谱法测定苏丹红I与BSA和OVA偶联比分别为11:1和5:1.结论 苏丹红1人工抗原合成成功.
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胶体金免疫层析法快速检测盐酸克伦特罗残留
[目的]建立用于快速检测组织样品中盐酸克伦特罗残留含量的胶体金免疫层析检测方法.[方法]采用免疫竞争法,将抗盐酸克伦特罗-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的盐酸克伦特罗抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中盐酸克伦特罗竞争结合胶体金标记的盐酸克伦特罗单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测结果.[结果]检测猪肉等组织试样时,灵敏度低值可达到0.5ng/ml,只需3-5min,与沙丁胺醇、莱克多巴胺的交叉反应率为0.86%.[结论]用木法检测盐酸克伦特罗,灵敏度高、特异性强、稳定性好,具有良好的应用前景.
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拟除虫菊酯类农药人工抗原的合成与鉴定
目的 合成拟除虫菊酯类农药人工抗原并对其进行鉴定.方法 采用功夫菊酸和3-间苯氧甲酸2种拟除虫菊酯类农药中间体,与四碳"间隔臂"--γ-氨基丁酸反应合成2种半抗原,经质谱鉴定合成成功.以牛血清蛋白为载体,采用活化酯法制备拟除虫菊酯的2种免疫原;以卵清蛋白为载体,采用混合酸酐法制备了3种包被原;经紫外光谱鉴定,粗略计算了偶联物终浓度及结合比.结果 制备的免疫原免疫Balb/c小鼠后得到的小鼠多抗血清经ELISA检测效价达1:50 000以上,IC<,50>达200 ng/ml.结论 拟除虫菊酯人工抗原的制备成功.
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胶体金免疫层析法快速检测氯霉素残留
为建立用于快速检测样品中氯霉素残留含量的胶体金免疫层析试纸条,采用免疫竞争法,将抗氯霉素单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的氯霉素抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中氯霉素竞争结合胶体金标记的氯霉素单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的定性结果.检测虾肉等组织试样时,灵敏度低值可达到1 ng/ml,只需5～10 min,与类似物无交叉反应.试纸条具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为氯霉素残留现场监控的有效筛检手段.
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聚合酶链反应斑点杂交技术在临床乙型肝炎病毒检测中的应用
利用半抗原地高辛配基(digixigenin)制备非同位素标记探针技术,分别标记乙型肝炎病毒全基因探针(DIG-HBVDNA)及乙型肝炎病毒PCR产物C区探针[DIG-HBV(C/preC)],经斑点杂交检测血清HBVDNA及血清聚合酶链反应(PCR)产物,与PCR平行检测122份血清标本.
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天然药物中生物碱类化合物人工抗原的合成及其鉴定方法＊
生物碱是自然界中广泛存在的一类天然含氮有机化合物，具有比较特殊而显著的药理活性。近年来免疫学分析技术常应用于天然药物生物碱的研究，而制备具有良好免疫原性的人工抗原并对其进行鉴定，是建立免疫学分析方法用于生物碱研究的前提和关键。本文主要总结了天然药物中生物碱半抗原与载体蛋白偶联的设计思路及其鉴定方法。
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中药有效成分半抗原抗体应用研究进展
中药有效成分半抗原抗体的应用已经触及中药研究的各个领域.首先,可将半抗原单克隆抗体设计成ELISA试剂盒,定量分析牛物样本或植物粗提取物中有效成分的含量,应用于中药质量控制和中药药代动力学的研究.其次,可将半抗原单克降抗体与固相载体相偶联,做成免疫亲和柱,应用于复杂样品的前处理以及knock-out提取物的制备.后,可将有效成分半抗原单克隆抗体单链可变区(scFv)的基因片段导入植物细胞内,基因重组后可得到有效成分高富集的新品种,实现药用植物的分子育种.
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小分子单克隆抗体的制备与敲除技术研究进展
随着单克隆抗体技术应用的愈加广泛,其生产技术也日臻完善.小分子单克隆抗体技术也日益成为人们研究的热点课题.中药小分子单克隆抗体技术的应用也日益广泛,这门技术给中药有效成分的敲除提供有力的技术支持.该文就小分子单克隆抗体制备与敲除技术进行了综述.就其制备过程中的几个步骤,如:半抗原的制备,半抗原与载体偶联,人工抗原的鉴定及偶联比率的测定,动物免疫与单克隆杂交瘤细胞株的建立,单克隆抗体的大规模制备;小分子单克隆抗体的敲除技术的免疫亲和色谱柱的方法进行了详尽的阐述.笔者相信这门技术会使得中药的研究上更高一个层次,并且提高中药研究的国际化水平.
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人工抗原在中药注射剂过敏反应研究中的应用与进展
中药注射剂中存在一些具有潜在致敏性的小分子物质,因相对分子质量太小而缺乏免疫原性,当其与合适的载体偶联后可导致过敏反应.因此,如何将小分子半抗原与载体偶联制备具有免疫原性和反应原性的完全抗原,是中药注射剂小分子致敏物质筛选的关键.作者从中药注射剂半抗原的特点、载体的选择和使用、偶联方法、完全抗原的纯化鉴定等方面论述了人工抗原抗体制备技术的新研究情况及其在中药注射剂致敏物质筛选中的实验研究进展,以及免疫芯片技术在中药注射剂致敏物质研究中的应用前景,旨在为中药注射剂安全性控制提供新的实验研究思路和方法.
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AI免疫原制备及应用
血管紧张素I(angiotensin,AI)为10肽结构.AI正常生理浓度下没有生理活性,若在血浆浓度很高时,能刺激肾上腺髓质释放儿茶酚胺,作用于脑中枢神经,引起周围血管收缩,使血压升高,还对钠、水的重吸收产生影响[1].AI分子量为1295.69,属于半抗原,必须与大分子载体蛋白相结合制成免疫原,才能免疫动物诱发抗体的产生.本文对AI免疫原制备作一探讨.
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一种能使免疫组织化学DAB显色变浅的方法
免疫组织化学(免疫组化)或免疫细胞化学是应用免疫学或组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位定性、定位或定量的研究.方法是利用抗原与抗体结合所具有的高度特异性,先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫获得特异性抗体,用此抗体去探测组织或细胞中的抗原物质.
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RGD抗体的研制和其在丝素膜中的应用
本研究应用双功能偶联剂小分子间苯二甲基二异氰酸盐(m-xylylen-diisocyanate,简称XDI)作桥梁,将短肽RGD(GLY-ARG-GLY-ASP-SER-PRO-LYS)粘附生长因子偶联到卵清白蛋白(Ovalbumin,简称OVA)载体上,对偶联物RGD-OVA经SDS-聚丙烯酰胺凝胶纯化和紫外光谱测定,确定RGD与OVA偶联比为11:1,用偶联物对兔子进行背部小剂量多点免疫注射,诱发出抗RGD抗体,利用得到的兔抗RGD抗体IgG包埋于丝素材料内,并借助抗原抗体的结合力,结合RGD在该丝素膜表面,对这种结合有RGD抗体的丝素膜进行培养血管内皮细胞(Endothelial cell,简称EC)的试验,结果表明,结合有RGD的丝素膜与其对照组相比,细胞数量有显著提高.
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甲醛诱导获得性过敏体质致哮喘发病机理研究
甲醛可介导多种毒性效应,特别是甲醛诱导型哮喘.传统观点认为,甲醛是一种半抗原,可以与血浆清蛋白或皮肤角蛋白形成完全抗原,通过Ⅰ型超敏反应诱发哮喘.但是有关的研究指出,在甲醛所致哮喘的病例中,只有部分的个体可以在体内检出甲醛特异性IgE(FA-IgE),多数个体体内没有发现FAIgE,提示甲醛诱导型哮喘有其不同于传统理论的发病机理.
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血清青霉素IgM和IgG抗体检测方法的建立及评价
青霉素是一种半抗原,进入血液后可刺激机体产生抗青霉素抗体(IgE、IgG和IgM等).长期以来国内外对青霉素IgE抗体关注较多,而对青霉素IgG和IgM抗体缺乏足够重视.为全面评估人群中青霉素的免疫状况,本研究对人群中青霉素IgG和IgM抗体水平进行检测评价.但是,鉴于现行检测血清青霉素IgM和IgG抗体的间接抗人球蛋白试管法存在检测灵敏度较低、人为影响因素较大,操作繁琐等缺点,本研究特建立微柱凝胶抗人球蛋白法,并对住院患者和健康供血者血清青霉素IgG和IgM抗体进行检测分析,同时与间接抗人球蛋白试管法作对比研究,现报告如下.
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人甲状旁腺激素多肽抗体制备及纯化方法研究
人甲状旁腺激素(hPTH)是维持机体钙磷平衡等生命活动的重要激素, hPTH 1-84、1-34、1-37、44-68、54-84是人体中重要的免疫活性片段[1].HPTH 1-84的分子量为9 500,介于完全抗原和半抗原之间.由于抗hPTH 1-84抗体可测定任何具有免疫活性的hPTH片段, 因此具有重要应用价值.本研究用基因工程表达hPTH 1-84制成3种免疫原,分别免疫家兔后制备抗体,并对特异抗hPTH 1-84抗体和载体BSA抗体的效价进行比较.同时,分别用盐析、Q膜、蛋白A和免疫亲和层析纯化方法对抗hPTH 1-84抗体的纯度、活性和回收率进行研究.
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抗体可以作为半抗原二硝基氟苯免疫靶向治疗的载体
目的:了解半抗原二硝基氟苯(DNFB)结合乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG)后对其抗体功能的影响.方法:常温下把HBIG(13 mg/500 μL PBS)水溶液分别与不同剂量(2、4、8 mg)的DNFB混合, 组成2、4、8 mg管, 混匀过夜后离心. 取2、4 mg管及未加DNFB的HBIG水溶液对照管, 各取半量对半稀释, 以HiTrap分子筛柱脱盐, 3个洗脱液再分别作对半系列稀释11次, 3组共组成36个标本. ELISA法检测乙肝表面抗体的效价. 取2、4 mg管的另一半分别予饱和硫酸铵沉淀后取上清, 以紫外光光度分析仪测定A340, 与加入不同剂量DNFB的5个系列浓度作内标的对照管上清相比较, 计算相应管中HBIG结合掉的DNFB量.结果:2、4 mg管及对照组, 经双因素方差分析及q检验, 三组间同稀释度间吸光差值( A450- A630)无差异, 而各稀释度间则有非常显著差异( P<0.01). 饱和硫酸铵沉淀结合分光光度法测定证实2、4 mg管中6.5 mg HBIG分别结合DNFB 0.67 mg和0.86 mg, 即每一个HBIG分子分别结合88.72及113.48个DNFB半抗原分子, 约占HBIG氨基酸残基的6.12%和7.86%.结论:免疫球蛋白(抗体)可作为半抗原DNFB免疫靶向治疗慢性病毒感染或肿瘤的一种有效载体.
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变应性接触性皮炎的免疫机制
变应性接触性皮炎（allergic contact dermatitis， ACD）是由半抗原-特异性T细胞介导、在过敏原接触皮肤后激发产生的迟发型超敏反应（Ⅳ型超敏反应），包含致敏期和激发期。在致敏阶段，半抗原和皮肤中的内源性蛋白组成具有免疫性的抗原蛋白复合体，复合体被抗原提呈细胞（ antigen presenting cells， APCs）捕获后，随APCs从表皮迁移至淋巴结。随后，抗原蛋白复合体活化初始T细胞。活化的T细胞在淋巴结中增殖并分化成为抗原特异性效应T细胞并迁移至循环中。在激发阶段，效应T细胞被皮肤中的APCs再次激活，分泌多种化学介质并引起抗原特异性炎症反应。本文介绍ACD发展过程中的分子和细胞通路以及机制研究的新进展，探索肥大细胞、 B细胞、自然杀伤T细胞和自然杀伤细胞等在ACD发展过程中的作用。并对现已建立的动物模型进行总结，讨论其特点和运用。
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抗河豚毒素单克隆抗体的制备及其抗毒效应
目的:为制备高毒性的小分子生物毒素河豚毒素(TTX)的单克隆抗体(mAb),探讨TTX中毒免疫抗毒的可能性.方法:以TTX为半抗原,与中国鲎血蓝蛋白(TTH)化学偶联制备人工抗原(TTX-TTH);并以其免疫BALB/c小鼠.用杂交瘤技术制备抗TTX的mAb,用竞争抑制酶免疫分析法测定mAb对TTX结合活性,以mAb与检测抗原的结合被抑制50%时的TTX浓度(IC50)表示mAb的结合反应性.对小鼠预防注射抗体,测试抗体对抗TTX中毒的效果.结果:建立了2株对TTX-BSA阳性反应的mAb(1E4和3C11),均属IgG1亚类;具有TTX结合活性,其IC50值分别为3.2×10-6mol/L和9.9×10-7mol/L;亲和力常数(Kaff)分别为3.0×106 L/mol和2.8×106L/mol.小鼠预防给予mAbs,可对抗1×LD的TTX攻毒,动物存活率71%;抗1.5×LD时,1/3存活;抗毒效果好于小鼠抗血清对照.结论:用新的TTX人工抗原成功地制备了抗TTX的mAb,具有一定的体内预防抗毒效价.
