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琼脂糖凝胶电泳与核酸印迹杂交法检测细菌毒力基因PCR产物的灵敏度比较研究
目的 探讨核酸印迹杂交法在检测细菌毒力基因方面的应用价值.方法 分别以10倍连续稀释的0157:H7肠出血性大肠埃希菌和血清2型猪链球菌染色体提取物为模板,与志贺毒素2基因(stx2)和荚膜多糖2J基因(cps2J)特异性引物进行聚合酶链式反应(PCR).用1%琼脂糖凝胶电泳及核酸印迹杂交法检测PCR产物,比较两种方法的低检测限.结果 1%琼脂糖凝胶电泳对EDL933菌株:stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(2)cfu(56.87 pg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(2)cfu (12.65 pg)/PCR体系;核酸印迹杂交法对EDL933菌株stx2基因PCR产物的低检测限为6.7 × 10(-1)cfu (56.87 fg)/PCR体系,对SC84菌株cps2J基因PCR产物的低检测限为4.3 × 10(-1)cfu (12.65 fg)/PCR体系.结论 用核酸印迹杂交法检测肠出血性大肠埃希菌stx2基因和猪链球菌cps2J基因PCR产物的灵敏度均比普通琼脂糖凝胶电泳检测法高了1000倍.
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3M分子检测系统新的食源性致病菌快速筛选方法
在食品安全与卫生检测中,食源性致病菌的检测越来越受重视,因此全球各国的食品工业中该类项目的检测数量逐年增大.如何准确、快速与简便地检测出产品中的致病菌以适应企业规模化和效率化的发展成为该行业发展中极为关注的焦点.新上市3M分子检测系统将环介导等温核酸扩增技术(LAMP)和生物荧光实时检测技术(BART)结合在一起,这种创新技术全面提升了操作简便性,准确性,检测速度和性价比,在分子层面上实现了针对食源性致病菌准确、高效的检测.其检测灵敏度是普通PCR的10倍,引物设计远比普通PCR更加巧妙,检测结果也更加准确;扩增效率更高,检测时间更短,检测步骤更少,操作中发生人为污染和技术错误的概率大大降低;可以同时检测多个项目,是高通量、多检测项目的技术;实时且自动化的结果判读;对环境要求更低,适用范围更广.
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食品中几种常见的重金属检测方法
当下,人们越来越重视重金属污染的问题,不仅是针对食品中重金属含量超标的问题,包括重金属在环境中如水源、空气中含量超标已经在医药领域的污染等许多方面都受到了群众的广泛关注。近年来,人们针对重金属的快速检测技术取得了不小突破,这对于重金属的检测及筛查起着积极影响,但与此同时,重金属的快速检测技术还需要提高其检测灵敏度以及准确性。目前,重金属的检测技术仍然有许多缺陷,例如:不能对有益重金属和不同价态的重金属元素进行辨别,以对其与有害重金属进行区分。除此之外,还需要特别注意的是样品中其他杂质对测定的影响。
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新型金属检测机Profile Advantage,可将错误剔除率降低95%
肉类、家禽、乳制品、烘焙、即食行业,以及金属薄膜包装的食品制造商和加工公司,现在可以实现之前仅能在干燥产品检测中看到的检测灵敏度了。多年来,“产品效应”(在高水分、高盐分含量或者以金属薄膜包装的部分食品中检测到的电信号)的存在,使检测灵敏度显著降低于检测干燥的、非传导性食品的检测灵敏度。
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三聚氰胺检测二乳制品中三聚氰胺的Varian220-MSGC-MS/MS离子阱质谱仪检测
国标GB/T 22388-2008<原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法>规定的三种仪器检测方法中,即高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱/质谱法(LC-MS/MS)和气相色谱-质谱联用法(GC-MS,GC-MS/MS),GC-MS/MS方法能有效消除背景干扰,因而检测灵敏度较高.
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基因释放剂对痰中耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变检出率的影响
结核分支杆菌DNA依赖性RNA聚合酶β亚单位编码基因(rpoB)是单拷贝基因,提高其检测灵敏度对直接检出痰中耐利福平结核分支杆菌具有重要意义.我们在聚合酶链反应-单链构象多态性分析中(PCR-SSCP)采用基因释放剂和套式PCR,提高痰标本中结核杆菌rpoB基因突变检出率,以快速确定是否为耐药菌感染.
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迈瑞CL-1000i全自动化学发光免疫分析系统
C L-1000i全自动化学发光免疫分析系统是继C L-2000i发光免疫系统平台之后,迈瑞人历经2年的不懈努力与卓越实践,于2015年推出的新一代的高效、灵活的全自动化学发光免疫分析产品。该系统具备如下特点:
(1)采用迈瑞具有独立知识产权的增强型酶促发光体系,其检测灵敏度可达10-20数量级,并具备更好的稳定性,该体系现已获得中国和美国专利局的正式授权。 -
高效液相色谱法测定豆芽中4-氯苯氧乙酸钠残留量
4-氯苯氧乙酸钠(4-chlorphenoxyacetic acid,CPA-Na),俗称促生灵,蕃茄灵,防落素;其结构式为Cl--OCH2COONa.CPA-Na为2,4-D的同系物,是一种植物生长调节剂.我国已将其正式作为允许使用的食品添加剂而列入国家标准,允许使用的卫生标准(GB2760-1996)为1 mg/kg(1ppm).关于CPA-Na的分析方法,目前主要有薄层色谱法(TLC)[1],气相色谱法(GC)[2,3]和气-液色谱法[4].TLC法检测灵敏度较低,制样过程繁琐且条件难以控制,故回收率较低,重现性较差;GC法是将CPA-Na提取后衍生为丙酯,然后用GC-FID分离检测,但方法易受FID检测灵敏度的影响而造成取样量大,且样品前处理步骤较为繁杂,不利于快速分析.目前尚无国家标准测定方法,作者参考有关文献[5],建立了无根豆芽菜中CPA-Na残留量检测的HPLC方法,获得了满意的结果.
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毛细管电泳法测定牛奶中残留的抗生素
牛奶中抗生素主要有β-内酰胺类抗生素如青霉素、头孢菌素等和非β-内酰胺类抗生素如四环素、链霉素等.目前,分析牛奶中抗生素主要用高效液相色谱(HPLC)法、薄层扫描定量法和微生物法.HPLC法为目前常用理化监测抗生素方法,一般仅监测少数几种残留抗生素,如吡啶硫乙酰头孢菌素(cephapirin),且检测灵敏度相对较低,易受干扰.薄层扫描定量法操作复杂、费时,且抗生素在薄层板上的荧光强度随放置时间延长而减弱,人为因素造成的测定误差较大.微生物法具有成本低,灵敏度高的特点,可检测2~150 μg/L残留量的抗生素水平,但一般仅能提供定性、半定量数据,且仅可监测β-内酰胺类抗生素残留,适宜大量样品的筛选之用.
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荧光法测定水和血清中的镁
镁与人体健康有密切关系,血清Mg2+浓度影响神经肌肉传导,当浓度低时引起四肢痉挛.体内缺镁主要表现为身体虚弱、震颤与心律不齐.近年来发现缺镁可能是各种心脏病的前因之一[1].目前测镁的方法很多,有AAS法[2]、分光光度法[3]、荧光法[4]等.AAS法设备较昂贵,分光光度法灵敏度低.荧光法中由于镁本身没有荧光,需要用有机试剂与镁络合生成荧光配合物,此类有机试剂以8-羟基喹啉及其衍生物应用广,但其检测灵敏度高只有0.01 μg/ml[5].我们通过加入溴化十六烷基三甲基铵使镁-7-碘-8-羟基喹啉-5-磺酸二元配合物变成三元配合物,其灵敏度达0.006 μg/ml,为监测血清及水中镁浓度提供了简单可行的方法.
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顶空-固相微萃取-气相色谱测定义齿基托树脂中游离丙烯酸酯类
制作义齿基托的主要材料是义齿基托树脂.目前,广泛使用的义齿基托材料是聚甲基丙烯酸甲酯树脂及其改性产品,义齿基托树脂主要分为自凝型与热凝型两类,前者可以直接使用,后者间接使用,自凝型义齿基托材料丙烯酸酯类释放量大,危害相对较严重[1].义齿基托树脂中对人体有害的甲基丙烯酸甲酯游离单体是通过唾液浸出的,其含量很低,普通顶空进样难于检测出来,固相微萃取是一种无溶剂的浓缩富集技术,可以提高挥发性化合物的检测灵敏度.本研究建立了顶空-固相微萃取-气相色谱(HS-SPME-GC)联用测定人工唾液中痕量游离丙烯酸酯的方法.
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胶束电动毛细管色谱法测定麻黄中的农药残留
胶束毛细管电泳在分离科学中的应用已有广泛报道,但因其检测灵敏度不高,故其在痕量分析中的应用受到一定限制.
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IMMULITE型化学发光酶免疫分析仪检测CRP及其临床应用
C反应蛋白(CRP)是急性期反应蛋白之一,具有激活补体,促进细胞吞噬及其免疫调控的生理功能,临床上对各种炎症或感染性(全身或局部性)疾病的辅助诊断有较高价值.本文选用化学发光酶免疫分析法(CLEIA)高灵敏检测CRP浓度,并与常规胶乳凝集法(LAT)同步比较.结果显示CLEIA法不仅提高了检测灵敏度,且又拓宽了定量检测线性范围.现报道如下.
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联合检测血清AFP、CEA、CA19-9和CA72-4对消化道恶性肿瘤的筛查价值
肿瘤标志物对肿瘤的辅助诊断价值已受到临床的广泛重视,但是肿瘤标志物用于人群肿瘤筛查却遇到了灵敏度不高、特异性不强、漏诊等问题[1-2].联合检测有利于提高检测灵敏度.本文应用AFP、CEA、CA19-9和CA72-4四项肿瘤标志物联合检测消化道恶性肿瘤患者、消化道良性疾病患者和健康对照组血清肿瘤标志物水平,分析及评价四项肿瘤标志物联合检测对消化道恶性肿瘤的筛查价值.
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临床基因扩增实验室的运行现状及质量保证
聚合酶链反应(PCR)技术自问世以来,由于其较高的检测灵敏度在临床上得到了广泛的应用,但也带来了一些假阳性和假阴性的困扰,为此卫生部2002年1月14日发布了卫医发[2002]10号<临床基因扩增检验实验室管理暂行办法>(以下简称<办法>)及其附件<临床基因扩增检验实验室基本设置标准>,及同年2月20日卫生部临床检验中心发布<临床基因扩增实验室工作规范>(以下简称<规范>),良好的规范了基因扩增检测的市场,保证检验报告结果的可靠性,大大提高了疾病诊断的准确性和快速性.
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生物条形码:一种新的痕量蛋白检测技术
目前,蛋白质的痕量检测仍存在一定的困难,一个主要的原因是缺乏像检测核酸的PCR那样高灵敏度的、可对目标蛋白进行扩增的技术[1-2].2003年,美国科学家Mirkin 领导的课题组首次报道了生物条形码检测技术(bio-bar codes assay,BCA)[3],可以对痕量蛋白进行检测.与临床上常规的ELISA法检测相比,其检测灵敏度可达它的106倍.本文针对BCA检测系统的技术要点和发展前景进行了简要综述.
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抗癌药物与DNA相互作用的共振拉曼光谱研究
用激光辐射样品时,会发生散射.在散射光谱中,有些光的频率与入射光频率不同,强度要弱得多,这些光谱中就有拉曼光谱.共振拉曼效应(Resonance Raman effect)即当激发激光波长落入分子电子吸收峰附近时,分子振动的拉曼信号强度得到极大的增强,约是普通拉曼光强度的104~106倍,因共振增强了这些带有物质结构信息的光强度,所以大大降低了所需要的样品浓度,提高了检测灵敏度,能够得到更准确的物质结构信息[1].
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相对定量四色流式细胞术分析正常B淋巴细胞发育成熟过程中的抗原表达规律
流式细胞术因其高度的灵敏性(10~4水平)和可进行多参数分析而成为检测白血病微小残留病(minimal residual disease,MRD)的重要工具.在B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)MRD检测中的作用更是不容忽视.但是由于白血病细胞表达的多样性和个体差异性,以及治疗过程中相当一部分病例会出现肿瘤细胞表达标志改变,尤其是化疗后骨髓中存在大量正常增生的幼稚B淋巴细胞,使MRD的检测难度加大.使用相对定量流式细胞术检测正常B淋巴细胞发育成熟过程中的抗原表达规律,有助于鉴别幼稚B淋巴细胞与MRD,提高MRD的检测灵敏度.
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血清青霉素IgM和IgG抗体检测方法的建立及评价
青霉素是一种半抗原,进入血液后可刺激机体产生抗青霉素抗体(IgE、IgG和IgM等).长期以来国内外对青霉素IgE抗体关注较多,而对青霉素IgG和IgM抗体缺乏足够重视.为全面评估人群中青霉素的免疫状况,本研究对人群中青霉素IgG和IgM抗体水平进行检测评价.但是,鉴于现行检测血清青霉素IgM和IgG抗体的间接抗人球蛋白试管法存在检测灵敏度较低、人为影响因素较大,操作繁琐等缺点,本研究特建立微柱凝胶抗人球蛋白法,并对住院患者和健康供血者血清青霉素IgG和IgM抗体进行检测分析,同时与间接抗人球蛋白试管法作对比研究,现报告如下.
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肌钙蛋白Ⅰ(28~110aa)-C复合物的表达纯化及抗体制备
心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)是诊断急性心肌梗死的"金标准"[1-2].心肌损伤时,外周血中90%以上的cTnI以I-C复合物形式存在[3-4],而28~110间的肽段与C形成复合物稳定,我们根据患者血清中cTnI存在形式,通过引物设计构建pGEX4T-3-cTnI(28~110aa)-C原核表达系统,在大肠杆菌中实现cTnI(28~110aa)-C复合物的稳定可溶性高表达.然后,用该融合蛋白抗原制备抗cTnI单克隆抗体及多克隆抗体,为建立检测方法,提高检测灵敏度做前期准备.