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BrdU抗原及抗体的制备
溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,BrdU)可替代DNA前体胸腺嘧啶核苷竞争掺入S期细胞DNA,取代 3H-TdR的应用,避免放射性污染,且检测方便省时.核苷属小分子半抗原,不能刺激机体产生抗体,需与大分子载体连接成完全抗原才引起宿主有效的免疫应答.本文将尿嘧啶核苷与卵清蛋白(ovalbumin,Ova)或牛血清白蛋白(burine serum albumin,BSA)共价结合,并证实偶联物具有免疫原性.
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一种将低分子量半抗原直接结合在酶标板上的方法
在酶联免疫吸附试验（ELISA）中固定半抗原通常采用与蛋白分子相偶联或共价结合到固相载体上。
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大黄素－BSA包被膜片人工抗原制备及其免疫原性与特异性检测
目的：通过大黄素－BSA包被膜片的免疫原性及特异性研究，探讨半抗原－载体包被膜片人工抗原制备法的可行性。方法：先将BSA包被于PVDF膜片，再与大黄素－偶联剂衍生物偶联，制备大黄素－BSA包被膜片，经膜片皮下包埋法免疫大鼠，用大黄素或大黄酚、大黄素甲醚包被CA膜片免疫分析法检测免疫原性和特异性。结果：大黄素－BSA包被膜片的免疫原性高于或等于液相抗原；其抗血清对三种蒽醌类化合物反应的特异性基本一致（ P＞0．05）。结论：大黄素－BSA包被膜片抗原，具有良好免疫原性和特异性，提示用半抗原－载体包被膜片法制备人工抗原可行。
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记忆NK细胞的形成、维持和功能
传统观念认为,免疫记忆是独属于适应性记忆细胞如抗原特异性的T或B淋巴细胞的.记忆性免疫细胞可以长期存活,再次遭遇相应病原体时可以更快更强地发挥免疫应答作用,其表型特征及表观遗传学特征均与初始细胞不同.与之相反,被定义为固有免疫系统的细胞包括自然杀伤细胞(natural killer cells,NK cells)存活时间短,遭遇病原体时反应迅速但并不具备抗原特异性.然而,近研究发现,鼠和人的NK细胞同样具备了抗原特异性的记忆功能,再次遭遇相应病毒或细胞感染时可更快更强地发挥免疫应答作用,一系列研究挑战了人们对于固有免疫系统和适应性免疫系统的传统分类,NK细胞可能同时具备了固有免疫和适应性免疫的特征,因而研究记忆NK细胞的形成、维持和功能具有重要意义.
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1例樟脑酚引起口腔粘膜过敏反应的报告
樟脑酚(cp)是口腔科常用药之一,具有消毒、杀菌、镇痛作用.可用临床窝洞和根管消毒以及牙髓炎开髓后放开髓孔处止痛等.此药引起过敏反应少见,但因其有较强的细胞毒性或半抗原,可能引起机体免疫损害,也应引起重视.我科门诊2007年9月份接诊1例患者就发生了樟脑酚引起口腔粘膜过敏反应,经及时处理两天后痊愈.
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双黄连注射液中半抗原成分酶联免疫检测方法的建立
目的 研究建立双黄连注射液(金银花、黄芩、连翘)中半抗原成分的间接ELISA检测方法.方法 将黄芩苷(BAL)与牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原BAL-BSA,免疫家兔获得针对BAL的特异性抗体.以BAL为包被抗原,优化用于检测抗血清效价的间接ELISA法的各项实验条件,并采用优化后的ELISA法检测双黄连注射液中的半抗原成分.结果 完全抗原BAL-BSA免疫获得的高效价兔抗血清可以很好地识别BAL;所建立的ELISA法检测结果与双黄连注射液中BAL的量、临床ADR之间存在一定的相关性.结论 合成的BAL-BSA完全抗原具有良好的反应原性与免疫原性;双黄连注射液致敏的主要抗原决定簇与BAL的结构有关;所建立的间接ELISA可用于检测注射液中与BAL结构相关的微量抗原性成分.
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中药有效成分半抗原抗体制备技术的研究进展
作者从中药有效成分半抗原的结构特点、载体和佐剂的使用、偶联方法、完全抗原的纯化鉴定以及其制备的单/多克隆抗体在中药领域的应用等方面论述了中药有效成分半抗原抗体制备技术的新研究情况,旨在为中药现代化提供新的思路和方法.
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半抗原DNP修饰自体肿瘤疫苗治疗恶性黑素瘤
目的: 探讨半抗原二硝基氟苯(dinitrophenyl, DNP)修饰自体肿瘤疫苗治疗恶性黑色素瘤的疗效.方法: 32例Ⅲ期恶性黑素瘤(恶黑)患者,肿瘤或淋巴结切除后,分别采用半抗原DNP修饰的自体瘤苗和未修饰自体瘤苗联合生物化疗进行治疗,观察两组患者淋巴细胞亚群变化、迟发型超敏反应(delayed- type hypersensitivity, DTH)和临床随访.结果: ①两组比较,半抗原修饰瘤苗组较未修饰疫苗组CD8+- IFN- PE明显升高(P《0.05);半抗原修饰瘤疫苗组治疗后CD8+-IFN- PE细胞比例较治疗前明显升高(P《0.05) ,然而,半抗原未修饰瘤苗组治疗前后变化不大(P》0.05).②半抗原修饰瘤苗组患者治疗后DTH明显增强,硬结由(5.4±1.2)mm增大到(23.5±4.2)mm(P《0.05),半抗原未修饰瘤苗组硬结由(6.3±1.4)mm增大到(11.2±3.2)mm(P《0.05),然而,两组DTH达到阳性结果(≥5 mm)的百分比分别为95%和36%(P《0.01).③随访2年,半抗原修饰瘤苗组13 例患者生存时间超过24 个月,其中仅2例DTH阴性;半抗原未修饰瘤苗组8例患者生存时间超过24 个月,6例DTH阳性.结论: 半抗原DNP修饰的自体肿瘤疫苗可增强恶性黑素瘤患者特异性细胞介导的免疫反应,从而延长患者生存时间.
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半抗原修饰的黑素瘤细胞激活树突状细胞诱导特异性T细胞反应
目的:探索半抗原[二硝基氟苯(DNP)]修饰的恶性黑素瘤细胞(恶黑)激活树突状细胞(DC)体外诱导特异性T细胞反应的抗肿瘤效应.方法:采用DNP修饰恶黑细胞B16(H-2b),然后在体外激活C57BL/6小鼠(H-2b)外周血来源的DC,观察其诱导T细胞的增殖和特异性T细胞杀伤功能;在小鼠皮肤迟发性超敏反应实验和荷瘤实验中观察DNP修饰瘤苗+DC的特异性.结果:经DNP修饰的B16细胞激活的DC,诱发T细胞增殖能力和对B16细胞的特异性杀伤效应均明显高于未修饰的B16细胞和DC.动物实验显示DNP修饰瘤苗联合DC具有明显的诱发皮肤迟发性超敏反应作用和抑瘤作用.结论:DNP修饰B16所激活的DC可以诱导更强的恶黑特异性T细胞效应.
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半抗原二硝基氟苯大量结合的乙型肝炎病毒表面抗原抗原性变化
目的 了解半抗原二硝基氟苯(DNFB)结合乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)后对其抗原性的影响.方法 常温下把HBsAg(40 mg/L)的磷酸盐缓冲液(PBS)分别与4和8 mg DNFB混合成4 mg管和8 mg管,以未加DNFB的含同样HBsAg的PBS作为对照管,3管过夜后离心均未出现沉淀.以HiTrap分子筛柱分别对上述3管脱盐,3个洗脱液混匀后再分别作对半系列稀释11次,分别组成4 mg、8 mg及对照组,各12个系列稀释管,共36个标本.以酶联免疫吸附试验分别检测HBsAg的效价.结果 经双因素方差分析,4mg、8mg及对照组间450 nm与630 nm的光密度差值(D450-D630)的差异有统计学意义(F=13.10,P＜0.01),12种稀释度间D450-D030的差异亦有统计学意义(F=74.30,P＜0.01),其中对照组与4 mg组、对照组与8 mg组间D450-D630的差异均有统计学意义(P值均＜0.05),4 mg组与8 mg组间D450-D630的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 半抗原DNFB的大量结合可减弱HBsAg的抗原性.
关键词： 乙型肝炎病毒表面抗原 二硝基氟苯 半抗原 抗原性 -
均相酶免疫分析技术在治疗药物监测中的应用
均相酶免疫技术是一种基于液相均相竞争性反应体系的免疫测定技术,目前,基于该技术建立的药物浓度测定方法以其独特优势已成功应用于临床治疗药物和兴奋剂等小分子以及蛋白质等大分子的检测,但大多依靠进口试剂.本文对均相酶免疫技术的研究现状、技术原理、技术优点进行了综述,重点介绍了该技术在治疗药物监测方面的临床应用以及需要注意的问题,并对该技术的应用前景进行了展望.该技术具有检测速度快、特异性强、自动化程度高等优点,但面临进口试剂价格昂贵、运送周期长等问题,因此我国对该技术的自主研发平台及试剂需求显得尤为迫切.
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抗体酶的研究与应用进展
抗体酶是一类以过渡态类似物为半抗原通过诱导免疫系统产生的具有类似天然酶催化活性的免疫球蛋白.它可促进许多用普通化学方法很难完成,或者天然酶尚未能催化的新奇转变.近,抗体酶也显示出在许多领域的潜在应用价值.文章扼要介绍了抗体酶的设计策略,制备方法及应用前景.
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半抗原2,4-二硝基氟苯体内外抑制肝细胞癌的初步研究
[目的]初步研究半抗原2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)在体内外对肝细胞癌的抑制作用.[方法]用不同浓度的DNFB、氟尿嘧啶(5-Fu)(对照组)分别处理SMMC-7721肝癌细胞株72h,用MTT法测定72h细胞存活率,并计算50％和90％抑制浓度(IC50和IC90).经H22肝癌细胞株皮下种植成功的18只昆明鼠随机分成3组:DNFB组、无水乙醇(Ethanol)组、磷酸盐缓冲液(PBS)组(对照组),并分别瘤内注射100μl的DNFB、Ethanol和PBS,每周2次,共4次.瘤内注射结束2周后剥离肿瘤称重,计算抑瘤率.[结果] DNFB和5-Fu对SMMC-7721肝癌细胞株的IC50分别为32.22μmol/L和3.62μmol/L; IC90分别为49.53 μmol/L和＞200μmol/L.DNFB组、无水乙醇组和PBS对照组终的瘤重分别为0.97±0.53g、1.55±0.76g和3.79±0.75g.与PBS对照组比较,DNFB组和无水乙醇组的抑瘤率分别为74.43％(P=0.00004)和59.20％(P=0.00045),DNFB组和无水乙醇组之间的差异无统计学意义(P=0.16).[结论]DNFB可在体内外抑制肝癌细胞的生长.
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不同牛PrP合成肽段的抗原性研究
目的研究PrP多肽的抗原性以及不同偶联方法对多肽免疫原性的影响.方法选择4段牛PrP多肽(BoP1、BoP2、BoP3、BoP4)为半抗原,KLH为载体,MBS、戊二醛两种偶联方法进行偶联,免疫BALB/c小鼠,间接ELISA方法检测小鼠血清中抗体效价,并对两种偶联方法进行比较.结果两组动物均出现死亡,戊二醛偶联多肽免疫小鼠出现不同程度的腹水,MBS偶联多肽免疫小鼠未见其它异常反应;戊二醛偶联的4种多肽产生的抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),MBS偶联的KLH-BoP3抗体效价低于其它3种多肽(P<0.05);对同一种多肽而言,不同偶联方法KLH-BoP1、KLH-BoP2、KLH-BoP4所产生抗体效价无显著性差异(P>0.05),戊二醛偶联KLH-BoP3产生的抗体效价明显高于MBS偶联KLH-BoP3产生的抗体效价(P<0.05).结论 PrP多肽可作为半抗原刺激小鼠强烈的免疫反应,不同偶联方法,不同肽段抗原性不同,为抗PrP多克隆及单克隆抗体的制备奠定了基础.
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双黄连注射剂中半抗原物质ELISA检测方法的研究
目的:研究双黄连注射剂中半抗原物质的ELISA检测方法.方法:将双黄连注射荆与正常动物血清体外孵育制备完全抗原,免疫动物获得针对双黄连中过敏性半抗原的特异性抗体,ELISA法检测其效价显示.血清稀释至1:128时仍为阳性,按优化条件用间接竞争ELISA法测定血清特异性并绘制抑制曲线.结果:得到回归方程I=13.362 lgC+50.503,相关系数r=0.966 3,检测限为0.93μg/ml,半数抑制浓度IC50=0.92 mg/ml.结论:本文建立的方法可以很好地用于双黄连注射剂中半抗原物质检测.
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染发剂致系统性接触性皮炎7例分析
系统性接触性皮炎(systemic contact dermatitis,SCD)是在已具有接触致敏的个体,当半抗原通过口服、透皮、静脉注射或吸入进入机体到达皮肤而发生的一种炎症性皮肤病1.几年来我们在临床上陆续收治了染发剂致系统性接触性皮炎7例,结合文献分析如下.
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药害伤肺莫商量
伴随医药事业的迅速发展,新药特药不断面世,对疾病治疗无疑产生了新的希望.但药物副作用也在危害人类健康甚至生命.近研究证明,药物及其代谢产物所形成的半抗原和损伤的细胞蛋白质,形成复合物,刺激机体免疫系统产生抗体;此抗体进一步引起肺组织细胞损伤.
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异氰酸酯类代表物人工抗原的合成及鉴定
目的 合成异氰酸酯类物质二异氰酸甲苯酯(2,4-TDI),二苯基甲烷二异氰酸酯(MDI)及环己烷二异氰酸酯(HDI)的人工完全抗原,为检测环境中异氰酸酯类物质的免疫分析方法的建立奠定基础.方法 将不同浓度TDI,MDI,HDI连接到载体蛋白HSA(人血清白蛋白)和OVA(卵清蛋白)上,采用紫外全谱扫描,三硝基苯磺酸法(TNBS)和SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)对合成抗原进行鉴定.结果 合成的TDI、HDI、MDI完全抗原的紫外吸收光谱、SDS-PAGE电泳条带呈现出与半抗原、载体蛋白不同的吸收峰和条带特性,说明半抗原与载体蛋白偶联成功,TNBS法鉴定结果显示成功合成具有不同偶联比的TDI、HDI、MDI的各3种免疫原和包被原.结论 本研究成功合成TDI、MDI、HDI的人工完全抗原,为其免疫测定方法的建立提供了条件.
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胶体金免疫层析法快速检测组织样品中喹诺酮类药物残留
目的:建立用于快速检测组织样品中喹诺酮类药物残留的胶体金免疫层析法.方法:采用免疫竞争法,将抗喹诺酮类单克隆抗体-胶体金复合物包被在胶体金结合垫上,并将人工合成的喹诺酮类抗原包被在硝酸纤维素薄膜表面作为检测线(T线),其与待测样品中相应喹诺酮类药物竞争结合胶体金标记的抗喹诺酮类单克隆抗体,并能以颜色直观显示检测的定性结果.结果:检测肉、鱼、虾等组织试样时,灵敏度低值可达到10 ng/ml,只需3～5 min,与类似物无交叉反应.结论:该试剂具有较高的灵敏度及特异性,操作便捷,稳定可靠,可作为喹诺酮类残留现场监控的有效筛检手段.
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单克隆抗体在农药残留免疫分析中的研究及应用
我国每年农药中毒人数高达10余万人,农药残留严重影响人民健康.我国已加入WTO,绿色食品的标准要与国际接轨,所以对水果、蔬菜、食品及环境的质量要求越来越高.
