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人bFGF卵清蛋白分泌表达载体的构建及分析
目的:构建人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的卵清蛋白分泌表达载体,为建立鸡输卵管生物反应器奠定基础.方法:利用PCR手段,从鸡基因组DNA克隆了4.1k(-4050bp～+42bp)卵清蛋白(ovalbumin)上游调控序列,利用重叠PCR技术,将溶菌酶信号肽(lysozyme signal peptide)基因与人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因融合在一起.结果:经DNA测序和核酸电泳检测,OV启动子基因序列、pcsbFGF和pcOV-sbFGF电泳位点与预计结果一致.结论:人bFGF的卵清蛋白分泌表达载体构建初步完成,可进行进一步转染表达.
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黄芪甲苷Ⅳ对卵清蛋白诱导的哮喘小鼠CD4+T细胞亚型Th1、Th2免疫活性的抑制作用
目的:探讨黄芪甲苷Ⅳ(ASTⅣ)对卵清蛋白(OVA)诱导的哮喘模型小鼠Th1/Th2平衡的免疫调节作用.方法:Ba1b/c小鼠随机分为4组:对照组、OVA组、ASTⅣ组、地塞米松(Dex)组,每组10只.ASTⅣ组小鼠灌胃ASTⅣ溶液,Dex组小鼠灌胃Dex溶液,对照组和OVA组灌胃等体积无菌0.9％氯化钠溶液.酶联免疫法检测上清液中各细胞因子水平,采用流式细胞仪检测脾细胞悬液中Th1(T-bet)和Th2(GATA-3)细胞比例情况,采用qRT-PCR分析转录因子mRNA的表达水平.结果:与OVA组比较,Dex组和ASTⅣ组小鼠Th2细胞因子(IL-4、IL-13、TNF-α)、GATA-3 mRNA明显降低(P＜0.05),Th1细胞因子(IFN-γ)、T-bet mRNA表达明显升高(P＜0.05).OVA组小鼠CD4+GATA-3+细胞明显高于对照组(P＜0.05).而Dex组和ASTⅣ组小鼠CD4+GATA-3+细胞明显降低(P＜0.05),CD4+T-bet+细胞占比明显升高(P＜0.05).结论:ASTⅣ可以纠正OVA诱导的哮喘模型小鼠中Th1/Th2的不平衡,表明该药物可能抑制哮喘的发展和严重程度.
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粉螨性小鼠哮喘模型的建立与评估
目的 探讨采用椭圆食粉螨提取浸液建立C57BL/6小鼠哮喘模型的方法. 方法 45只C57BL/6小鼠随机分成3组:PBS阴性对照组、卵清蛋白(OVA)阳性对照组、椭圆食粉螨(Ale o)哮喘模型组.用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)、脾细胞培养上清液中IL-4、IL-17和IFN-γ的含量,计数BALF中细胞总数并分类,同时切取小鼠未灌洗侧肺组织进行病理学观察. 结果 OVA阳性对照组、Ale o模型组小鼠脾细胞上清和BAILF中IL-4、IL-17及IFN-γ含量与PBS阴性对照组相比,差异均具有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；OVA阳性对照组、Ale o模型组小鼠BALF中细胞总数及各类细胞数与PBS阴性对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01)；小鼠未灌洗侧肺组织病理学观察显示,OVA阳性对照组和Ale o模型组小鼠肺组织口见大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞及巨噬细胞为主. 结论 用椭圆食粉螨提取浸液建立的C57BL/6小鼠哮喘模型具有过敏性哮喘的主要特征.
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新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖免疫增强活性比较
目的 比较新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖(wild/cultivate Cistanehe deserticola Po-lysaccharids,WCDPS/CCDPS)的免疫增强效果.方法 不同剂量(低、中、高)的WCDPS和CCDPS与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)皮下共免疫 ICR小鼠,ELISA法检测 OVA特异性抗体 IgG及抗体亚型IgG1和IgG2a,MTT法检测OVA特异性的淋巴细胞增殖活性,流式细胞术检测CD4+T细胞和CD8+T细胞的表达水平.结果 WCDPS和CCDPS均能够显著提高OVA特异性抗体IgG及抗体分型IgG1和IgG2a的表达水平(P<0.05),且WCDPS和CCDPS相同剂量之间差异无统计学意义(P>0.05);WCDPS和CCDPS能显著促进OVA特异性的淋巴细胞增殖,且相同剂量之间差异无统计学意义(P>0.05);WCDPS和CCDPS也能显著提高CD4+T和CD8+T细胞的百分含量(P<0.05),且相同剂量之间差异无统计学意义(P>0.05),WCDPS和CCDPS对免疫后的小鼠体重没有影响.结论 WCDSP和CCDPS均能显著增强OVA特异性的体液和细胞免疫应答,两者之间差异无统计学意义,并具有较好的安全性.
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普通小麦对OVA诱导小鼠过敏反应的抑制作用及机制
目的 旨在探讨普通小麦(TA)对卵清蛋白(OVA)致敏小鼠过敏反应的作用及其机制.方法 将25只BALB/c雌鼠随机分为对照组、OVA组、TA 100 mg/kg组、TA 200 mg/kg组和地塞米松(dexamethasone,DEX)组,每组5只.将OVA 20μg与氢氧化铝1 mg溶解于100μl PBS溶液中,并向每只实验组小鼠腹腔内注射以致敏小鼠,而对照组小鼠腹腔内则注射100μl 0.9％生理盐水,饮用水饲养.首次致敏后2周,重复上述操作,并将不同浓度药物稀释于1％CMC溶液中继续饲养,饲养过程中记录每只小鼠的过敏症状与行为评分.首次致敏后12 d对照组、实验组小鼠外耳皮下分别注射20μl 0.9％生理盐水与OVA溶液,6 h、24 h测量每只小鼠外耳厚度,24 h后剪取各组小鼠外耳组织经苏木精-伊红(HE)染色后观察过敏症状.首次致敏后6周,颈椎脱臼法处死小鼠,经腹主动脉采集的血液经离心、取上清后,通过ELISA试剂盒检测IgE、IgG1、TNF-α、IL-4及抗OVA IgE、IgG1了解各炎性细胞因子的分泌情况;取出的脾脏组织提取其淋巴细胞后接种于培养皿,以不同的药物刺激后利用ELISA检测Th1细胞因子(IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13),利用RT-PCR检测脾淋巴细胞中IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-12及IL-13的表达情况.结果 OVA组小鼠的过敏症状行为评分与外耳厚度均显著高于对照组及其他实验组,差异有统计学意义(P<0.05),实验组中其与TA呈剂量依赖性降低,组织病理学结果也证实了上述结果.ELISA结果显示,实验组小鼠血浆中IgE、IgG1、IL-4及TNF-α水平与对照组比较显著升高,其水平与TA呈剂量依赖性降低,尤其是IgE、TNF-α在TA高浓度组显示出与DEX组相似的抑制效果.RT-PCR结果显示,实验组较对照组Th1细胞因子(IFN-γ、IL-12)的含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),其水平与TA未显示出剂量依赖性效应,而DEX组显示出明显的抑制作用.实验组Th2细胞因子(IL-4、IL-5及IL-13)的表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),TA组的IL-4、IL-5、IL-13表达均较OVA组有不同程度的降低,尤其在TA 100μg/ml组中其表达较OVA组分别降低了约60％、18％与20％,显示出了明显的抑制作用.结论 TA可能通过选择性抑制Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)及IgE、IgG,而未抑制Th1细胞因子(IFN-γ、IL-12),在保持体内免疫平衡的基础上有效降低过敏相关免疫应答,从而发挥抗过敏作用.本研究为新型抗过敏治疗药物(TA)的开发提供理论基础和实验依据.
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残余卵清蛋白ELISA定量检测方法建立及初步验证
卵清蛋白(ovalbumin,OVA)作为异源物质,接种人体后易引起过敏副反应.因此残余OVA含量检测是生物制品尤其是以鸡胚为培养基质的流感疫苗生产过程中必须监控的指标之一[1].本研究在建立定量检测OVA双抗体夹心ELISA两步法后,对此方法进行优化,建立双抗体夹心ELISA一步法.通过与德国Seramun试剂盒对比,考察此检测方法的适用性.
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TIM4对小鼠食物过敏模型中抗原特异性Th2细胞分化的影响
目的:研究微生物产物对树突状细胞(dendritic cell,DC)和TIM4的作用,探讨在微生物产物参与的食物过敏(food allergy,FA)中TIM4对CD4+T淋巴细胞分化的影响.方法:培养Balb/c小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived DC,BMDC),培养的DC分为两组:金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)刺激组和空白对照组,RT-PCR检测不同组DC的TIM4 mRNA表达;流式细胞仪检测DC表面CD11c、MHC-Ⅱ、CD86的表达.在DC和CD4+T淋巴细胞共同培养中将培养的DC分为5组:空白对照组、SEB+卵清蛋白(OVA)组、SEB组、OVA组及TIM4组,同时取过敏模型小鼠脾脏CD4+ T淋巴细胞,不同组的DC与CD4+ T淋巴细胞共同培养,ELISA 法测定混合培养细胞上清液IL-4与IFN-γ的表达.结果:与空白对照组相比,SEB组DC TIM4 mRNA表达明显增高(0.941±0.018 vs 0.422±0.083,P<0.05),并具有剂量依从性.SEB组DC表面分子MHC-Ⅱ、CD86表达明显高于空白对照组(MHC-Ⅱ:76.684%±3.1803%vs52.984%±3.6026%:CD86:89.746%±2.113%vs 67.558%±0.4341%,均P=0.000).DC和CD4+ T淋巴细胞共同培养中,相比空白对照组.SEB+OVA组IL-4表达显著增高(295.834±20.408 vs 78.335±13.109,P<0.05),而IFN-γ的表达明显减少(362.109±92.271 vs 761.897±102.967,P<0.05);单独的SEB组或OVA组IL-4和IFN-γ与空白对照组无明显差异;TIM4组中IL-4的表达水平较SEB+OVA组明显降低,而IFN-γ的表达明显增高(90.511±15.500 vs 295.834±20.408;807.734±95.436 vs 362.109±92.271,均P<0.05).结论:微生物产物和食物抗原共同作用导致FA,TIM4参与FA的发生.消除TIM4的表达可明显抑制Th2细胞分化,有效纠正Th1/Th2细胞失衡,可阻止过敏性免疫反应.
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糖友,如何巧吃鸡蛋
鸡蛋在我们的生活中随处可见,是一种营养比较丰富的食品.鸡蛋中,含人体必需的多种氨基酸,与人体蛋白质组成相近,是一种理想的天然"补品".有很多人由于没有正确地食用鸡蛋,从而将鸡蛋视为引起高血压、动脉粥样硬化、冠心病等疾病的元凶.有很多糖尿病患者都对鸡蛋敬而远之,这是不对的.患者通过饮食来控制病情固然重要,但也要营养均衡.小小鸡蛋,大大作用鸡蛋的营养很丰富,有人体所需要的优质蛋白.所含的蛋白质主要为卵清蛋白(在蛋清中)和卵黄磷蛋白(主要在蛋黄中).其蛋白质的氨基酸组成与人体组织蛋白质为接近,其吸收率相当高,可达99.7％;鸡蛋还含有一定量的脂肪,以不饱和脂肪酸为多,比较容易被人体吸收;所含的蛋氨酸含量特别丰富,此外,还有人体所需的微量元素,如钾、钠、镁、磷等,尤其是蛋黄中的铁达7毫克100克.鸡蛋无论作为主食、副食,还是作为加餐食用,都是良好的营养食品.
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黄芪对豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1表达的作用研究
本研究利用豚鼠哮喘模型观察血红素氧合酶-1(HO-1)的表达特点及黄芪对HO-1表达的影响. 材料和方法雄性豚鼠30只,体重200～350 g,随机分为5组,每组6只. 腹腔内注射10%卵清蛋白(OVA)溶液1 ml致敏,2周后喷入1% OVA溶液激发30 s,对照组则喷入生理盐水30 s.A组(正常对照组):喷雾生理盐水,每日1次,共2周;B组(哮喘发作1周组 ):每日激发哮喘1次,共1周;C组(哮喘发作2周组):处理同B组,共2周;D组(黄芪治疗1周组 ):每日激发哮喘1次,每次于激发哮喘后30 min腹腔注射黄芪注射液5 g/kg,共1周;E组(黄芪治疗2周组):处理同D组,共2周.各组于后1次激发后6 h采血,测全血碳氧血红蛋白(C OHb)的%含量.取肺做切片,做常规HE染色计数嗜酸性粒细胞(EOS),免疫组化染色选用羊抗 HO-1多克隆抗体.利用计算机图像分析测定豚鼠气道上皮HO-1阳性表达的平均吸光度.以 SAS统计软件进行方差分析.
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妊娠及哺乳期补充二十二碳六烯酸微藻油对卵清蛋白致敏仔鼠的影响
目的 观察母鼠妊娠及哺乳期补充不同剂量二十二碳六烯酸(DHA)微藻油(DMO)对卵清蛋白(OVA)致敏仔鼠的影响.方法 据Balb/C雌鼠妊娠及哺乳期补充DMO量不同将其仔鼠(66只)分为4组,即低剂量组(0.7％ DMO,L组,16只)、中剂量组(2.1％ DMO,M组,16只)、高剂量组(3.5％ DMO,H组,17只)和对照组(0DMO,17只);各组仔鼠随机选取8只于21日龄OVA暴露前处死,剩余仔鼠于59日龄OVA反复暴露后处死,高效液相色谱法测仔鼠21、59日龄血清多不饱和脂肪酸(PUFA)水平;HE染色观察空肠绒毛形态;甲苯胺蓝染色计数空肠肥大细胞密度;酶联免疫吸附实验(ELISA)测血清OVA-IgE、粪便总IgA、OVA-IgA、脾脏单个核细胞(SMC)培养上清白介素(IL)-4、干扰素(IFN)-γ水平;实时PCR测仔鼠SMC IL-10、转化生长因子(TGF)-β1 mRNA表达.多组数据之间采用单因素方差分析进行比较,组间两两比较采用LSD法.结果 M、H组与对照组相比,21日龄血清DHA[(108 ±29)、(102±34)比(40±19) μg/ml,F=12.052,P=0.000]和二十碳五烯酸(EPA)[(6.7±2.3)、(7.7±2.0)比(3.9±1.1) μg/ml,F=9.573,P=0.000]水平显著增加;59日龄n-3DHA水平H组仍高于对照组[(17.1±2.9)比(5.9±3.3) μg/ml,F=10.339,P＜0.000];SMC IL-4水平H组[(42 ±9) pg/ml]低于对照组[(53±12) pg/ml,F=2.484,P＜0.05].结论 母鼠妊娠及哺乳期补充高剂量DMO可增加仔鼠DHA水平,持续至成年期,对仔鼠耐受OVA致敏能力的影响有限.
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SEB/OVA变应性鼻炎模型中调节性T细胞的作用研究
目的 建立变应性鼻炎(AR)小鼠模型,研究金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)和卵清蛋白(ovalbumin,OVA)在建立AR模型中的作用,并探讨小鼠鼻黏膜中调节性T细胞(regulatoryT cell,Treg)的变化.方法 将40只6～8周Balb/c小鼠,随机分为4组:OVA组(A组)、SEB组(B组)、OVA+SEB组(C组)、生理盐水组(D组),建立小鼠AR模型.采用析因设计分析各组小鼠临床症状评分及Foxp3阳性细胞数.结果 A、B、C、D组症状评分分别为0.90±0.99、0.70±0.82、6.80±1.03、0.60±0.70,C组造模成功,OVA与SEB交互效应,P＜0.01;与其他三组相比,C组Foxp3阳性细胞数显著下降,OVA、SEB交互效应,P＜0.01.结论 只有SEB和OVA协同作用后可致小鼠AR,即SEB可以提高机体对OVA的易感性,发挥免疫佐剂的作用;小鼠鼻黏膜中Treg水平下降,不能有效抑制鼻Th2细胞反应,可能是AR发生的原因之一.
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三甲基化壳聚糖卵清蛋白纳米粒的制备
目的:以N-三甲基壳聚糖盐酸盐(N-trimethyl chitosan chloride,TMC)为材料制备新型纳米粒(nanoparticles,NPs),包裹卵清蛋白(ovalbumin,OVA),以提高卵清蛋白的包封率.方法:利用TMC与三聚磷酸钠(tripolyphosphate sodium,TPP)之间的离子胶凝作用制备纳米粒;用纳米粒度及表面电位分析仪测定纳米粒的粒径及zeta电位;探讨OVA溶液的pH值及浓度,TMC溶液的浓度,TPP溶液的浓度等因素对OVA包封率的影响;用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺明胶电泳(Soldium Dodeoyl Sulfate-Polyacrylamide,SDS-PAGE)检验OVA在纳米粒制备及体外释放过程中有无降解.结果:本研究制备的TMC/OVA纳米粒为紧密球形,分布均匀,粒径约为135.4 nm,zeta电位约为+20 mV;OVA的pH值及制备工艺是影响包封率的主要因素;SDS-PAGE电泳证实在纳米粒的制备及释放过程中OVA没有降解.结论:用离子胶凝法制备载蛋白多肽类疫苗的纳米粒,操作简便,采用合适的制备方法,调整处方可将包封率提高到90%以上.
关键词： N-三甲基壳聚糖盐酸盐 纳米粒 卵清蛋白 包封率 -
CPG寡核苷酸对卵清蛋白致敏幼鼠血清中Th1/Th2细胞因子及肥大细胞趋化蛋白1的影响
目的：利用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)建立幼鼠食物过敏模型，观察非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤寡核苷酸(CPG oligodeo-xynucleotide，CPG-ODN)对OVA致敏的干预作用。方法选用2～3周龄BALB/c雌性幼鼠40只建立幼鼠食物过敏模型，分为对照组、不同剂量OVA致敏组(20μg、50μg和100μg组)及CPG-ODN干预组(50μg OVA + CPG-ODN)，每组8只。观察过敏症状并评分；眼球取血，检测血清中OVA-IgE、肥大细胞趋化蛋白1(mast cell chemotactic protein 1，mMCP-1)及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4的水平；空肠组织行病理学检测。结果除对照组外，致敏组小鼠均出现不同程度过敏症状，空肠表现为Ⅰ型变态反应病理特点，Th2细胞因子、OVA-IgE、mMCP-1水平升高，20μg、50μg致敏组Th1水平降低，50μg致敏组指标改变显著；与致敏组相比，干预组小鼠过敏症状及病理改变明显减轻，Th2细胞因子、IgE及mMCP-1水平降低，Th1水平升高。结论用50μg OVA建立的BALB/c幼鼠食物过敏模型致敏效果好，CPG-ODN通过改善Th1/Th2失衡状态，抑制幼鼠食物过敏反应。mMCP-1在过敏性疾病的发生、发展中起重要作用，有望成为食物过敏临床检测指标之一。
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哮喘动物模型建立的研究进展
通过对近10年国内,外支气管哮喘动物建模方面实验研究的回顾与整理,总结哮喘动物模型建立及评价方面新进展,发现过敏性哮喘模型仍是经典与广泛复制的模型类型,而基于哮喘表型与异质性因素而提出的中性粒细胞哮喘、难治性哮喘模型的复制也取得一定进展.
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酪酸梭菌对RSV感染加重的哮喘小鼠气道炎症的影响
目的 酪酸梭菌对RSV感染的哮喘小鼠模型气道的炎症反应的影响.方法6~8周龄雄性BALB/c小鼠36只,随机分为对照组(NC)、模型组(PC)、酪酸梭菌治疗组(LS),每组12只.除对照组(NC)以外,其余各组均采用卵清蛋白腹腔注射致敏和雾化吸入激发,建立小鼠哮喘模型,在哮喘模型建立后第二日用RSV隔日滴鼻,连续3次,复制急性病毒感染哮喘模型.对照组(NC)采用生理盐水替代卵清蛋白和RSV.酪酸梭菌组(LS)于0~33天给予酪酸梭菌灌喂,每日1次,第34天计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中的白细胞数目;制作肺组织的病理切片,进行HE染色和Masson染色,观察肺组织病理变化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF与血清中细胞因子IFN-γ、BALF中IL-12、IL-5及血清中嗜酸性粒细胞趋化因子.结果与模型组(PC)相比,酪酸梭菌组(LS)小鼠BALF中白细胞总数明显降低(P<0.01),BALF及血清中细胞因子IFN-γ、IL-12的水平升高(P<0.01),嗜酸性粒细胞趋化因子、IL-5水平降低(P<0.01).结论酪酸梭菌可减轻RSV感染的哮喘小鼠气道炎症,酪酸梭菌对于RSV感染的哮喘小鼠具有一定的治疗作用.
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不同颗粒物对卵清蛋白致敏豚鼠免疫指标的影响
目的 研究不同颗粒物对卵清蛋白(OVA)致敏豚鼠免疫功能的影响.方法 采集电厂煤灰、锅炉厂烟灰和家用锅底灰分别制备颗粒物染毒溶液,48只清洁级豚鼠随机分为6组:无致敏-空气-盐水激发组,无致敏-煤灰-盐水激发组,OVA致敏-空气-OVA激发组,OVA致敏-煤灰-OVA激发组,OVA致敏-烟灰-OVA激发组,OVA致敏-锅底灰-OVA激发组.豚鼠腹腔注射OVA致敏后,连续5 d进行颗粒物染毒,对照组给予生理盐水.测定豚鼠血清白介素-4(IL-4)、免疫球蛋白G(IgG)和血液嗜酸性粒细胞(EOS)计数.结果 除OVA-煤灰组外,其他OVA+颗粒物组血液中嗜酸性粒细胞数较单纯的OVA致敏组明显增加.OVA+颗粒物组较单纯OVA致敏组白介素-4和免疫球蛋白G水平明显增加,且有统计学意义(P＜0.05).结论 过敏原激发和颗粒物染毒可增加OVA致敏豚鼠的免疫反应强度,即颗粒物对过敏症有增强作用.
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昆布多糖对急性哮喘小鼠气道炎症及重塑影响的研究
目的 观察昆布多糖对卵清蛋白(OVA)致敏激发哮喘小鼠气道炎症及重塑的影响.方法 将32只昆明系小鼠被随机分为模型组、激素吸入组、昆布多糖组和对照组4组,每组8只.经OVA致敏激发制模成功后,模型组用生理盐水0.3 ml灌胃干预,激素吸入组雾化吸入布地奈德混悬液0.4 ml(200 μg)+生理盐水3.6 ml干预,昆布多糖组采用昆布多糖50 mg/kg灌胃干预,均每日1次.对照组采用生理盐水代替OVA致敏激发和灌胃干预.各组动物于42 d后麻醉,行右肺支气管肺泡灌洗留取灌洗液(BALF),并取右肺组织进行病理学观察.在光镜下计数BALF中细胞总数及分类;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测BALF中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)水平;肺组织病理学改变程度在苏木素-伊红(HE)染色后于光镜下进行评价;肺组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达采用免疫组化法检测.结果 与模型组比较,昆布多糖组及激素吸入组BALF中细胞总数及分类计数、IL-4、肺组织病理学评分均显著降低,IFN-γ显著升高(P均<0.01);激素吸入组MMP-9、TIMP-1及昆布多糖组TIMP-1均显著下降(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,昆布多糖组各指标差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与昆布多糖组比较,激素吸入组细胞总数及分类计数、IFN-γ、病理学评分、MMP-9、TIMP-1差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 昆布多糖在一定程度上能抑制急性哮喘小鼠的气道炎症,减轻气道重塑的发生,可能是一种新的治疗哮喘的辅助药物.
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不同致敏方法对小鼠哮喘模型建立的影响
[目的]探讨不同剂量的致敏原卵清蛋白(ovalbumin,OVA)以及不同致敏次数对小鼠过敏性支气管哮喘模型建立的影响.[方法]BALB/c小鼠50只,随机分成5组:正常对照组、A、B、C、D组,每组10只.A、B、C、D组分别用不同剂量的OVA及不同致敏次数来致敏BALB/c小鼠复制哮喘模型.经后1次OVA雾化激发后24h,提取小鼠血液样本以及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)样本.ELISA法检测小鼠BALF和血清中IgE、OVA特异性IgE、IL-4和IL-5的含量;肺组织病理切片经HE染色、PAS染色后,观察各组小鼠肺组织病理改变.[结果]A～D组的BALF中IgE、OVA特异性IgE的含量均高于正常对照组,以模型组B组(IgE:1036.15±80.18,OVA特异性IgE:20.42±1.21)为显著,与正常对照组(IgE:694.75±33.45,OVA特异性IgE:14.74±1.82)比较差异具有统计学意义(P＜0.01);A～D组小鼠BALF及血清中IL-4、IL-5的含量显著高于正常对照组,同样以模型组B组(IL-4:228.52±7.83,IL-5:21.04±1.22)为显著,与正常对照组(IL-4:147.61±10.13,IL-5:13.61±1.09)比较差异具有统计学意义(P＜0.01),且随着OVA剂量的增加,细胞因子水平增加.A～D组小鼠肺组织标本与正常对照组比较,均可观察到明显的炎症浸润性病理表现,而给予高剂量OVA的B及D组小鼠肺部组织病理变化更为明显.[结论]4种造模方法均能成功建立哮喘模型,OVA的致敏剂量比致敏次数具有更为显著的影响.
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钙调素免疫原的制备及检测
目的研究钙调素免疫原的制备. 方法以碳化二亚胺法将钙调素-卵清蛋白偶联物作为免疫原, 采用常规免疫方法免疫BALB/C小鼠, 酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗体效价. 结果用钙调素-卵清蛋白偶联物腹腔注射的BALB/C小鼠经2次体内免疫后测血清中的抗体效价均为阳性. 结论将钙调素和卵清蛋白进行偶联来作为抗原是成功的.
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经卵清蛋白致敏过敏性鼻炎模型豚鼠造模方法探讨
目的 对经卵清蛋白(OVA)致敏过敏性鼻炎模型豚鼠造模方法进行改进.方法 AR模型动物、过敏原、致敏方式、致敏药物剂量及成模评价方法均参考有关文献进行.选择健康豚鼠经OVA致敏制作过敏性鼻炎模型.若成模率低或模型不稳定,进行造模方法的改进,即选用空白对照组分别以原剂量的1.5倍和2倍进行造模.结果 本研究首次造模虽然增加了局部刺激时长,但豚鼠成模率仅为12.5％ (2/16),且不够稳定.在造模过程中,大部分豚鼠未出现喉头水肿、下呼吸道及全身过敏.追加药物剂量后,1.5倍和2倍剂量组分别有1只雌鼠和1只雄鼠的症状总分＞5分,而另1只鼠未达成模标准,造模成功率为50％ (2/4).4只豚鼠均曾观察到鼻塞,其中成模的雄鼠于第4、6次滴鼻后分别出现鼻翼翕动和呼吸困难.结论 AR模型造模成功与否可能与药物剂量、药物浓度、豚鼠体重、动物性别等有关.剂量分别增加至1.5倍和2倍时,成模时间较原剂量缩短,模型稳定程度更理想,在造模过程中未观察到显著的、因增加剂量而导致的不良反应.因此,将来可以考虑在原剂量的基础上,适当加大剂量对豚鼠进行造模.
