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STAg联合CpG ODN和CT鼻内免疫小鼠诱导的特异性抗体应答和脾淋巴细胞的特异性增殖反应
目的 观察可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)和/或霍乱毒素(CT)鼻内免疫BALB/c小鼠后血清IgG、肠冲洗液IgA抗体水平及脾淋巴细胞体外特异性增殖反应,探讨CpG ODN和CT的佐剂效应. 方法 6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20 μl PBS(PBS组)、20 μg STAg(抗原组)、20 μg STAg +10 μg CpG ODN(CpG佐剂组)、20 μg STAg + 1 μg CT(CT佐剂组)、20 μg STAg + 1 μg CT +10 μg CpG ODN(联合佐剂组)滴鼻,间隔2周,免疫2次.末次免疫后第20 d颈椎脱臼处死小鼠,收集血清和肠冲洗液,ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG和肠冲洗液IgA.分离脾淋巴细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测致敏脾淋巴细胞体外增殖活性. 结果 ELISA法测定PBS组、抗原组、CpG佐剂组、CT佐剂组及联合佐剂组小鼠血清IgG A值分别为0.025 6±0.012 1、0.054 2±0.024 4、0.109 4±0.007 5、0.110 1±0.009 1和0.124 6±0.013 7,肠冲洗液IgA A值分别为0.141 8±0.030 2、0.415 2±0.080 7、0.526 9±0.075 4、0.846 5±0.115 5和1.128 9±0.100 3,脾淋巴细胞刺激指数SI分别为1.159 0±0.275 5、1.364 0±0.349 8、1.582 0±0.375 3、1.928 0±0.278 9和2.371 0±0.646 9,差异均有统计学意义(P＜0.01);联合佐剂组肠冲洗液IgA水平和脾淋巴细胞的SI值与CpG佐剂组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 STAg联合CpG ODN和/或CT鼻内免疫小鼠可有效诱导机体免疫反应,两种佐剂联合免疫的效果优于单一抗原或抗原联合单一佐剂.
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CpG寡核苷酸增强UPEC FimH疫苗黏膜免疫的实验研究
尿路致病性大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli,UPEC)是引起尿路感染(UTI)的主要病原菌.FimH蛋白是UPEC I型菌毛的黏附成分,介导UPEC侵入膀胱上皮细胞.本实验用FimH的真核表达质粒和蛋白免疫小鼠可产生较高浓度的IgG抗体.为提高尿路黏膜中保护性ISA的水平.以CpG质粒为佐剂,与FimH的真核表达质粒和原核表达蛋白进行不同组合免疫小鼠,观察不同组的小鼠产生的免疫反应.
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CpG寡核苷酸的免疫刺激作用及其在疫苗中的应用
CpG寡核苷酸(ODN)是含有CpG基元的寡核苷酸,对树突状细胞、单核细胞、B细胞、T细胞和NK细胞等均具有较强的免疫激活功能.因此,目前CpGODN已用作免疫佐剂、粘膜疫苗、肿瘤疫苗及DNA疫苗,具有安全、高效、低毒的效果,在临床上具有十分广阔的应用前景.
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CPG寡核苷酸对卵清蛋白致敏幼鼠血清中Th1/Th2细胞因子及肥大细胞趋化蛋白1的影响
目的：利用卵清蛋白(ovalbumin，OVA)建立幼鼠食物过敏模型，观察非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤寡核苷酸(CPG oligodeo-xynucleotide，CPG-ODN)对OVA致敏的干预作用。方法选用2～3周龄BALB/c雌性幼鼠40只建立幼鼠食物过敏模型，分为对照组、不同剂量OVA致敏组(20μg、50μg和100μg组)及CPG-ODN干预组(50μg OVA + CPG-ODN)，每组8只。观察过敏症状并评分；眼球取血，检测血清中OVA-IgE、肥大细胞趋化蛋白1(mast cell chemotactic protein 1，mMCP-1)及Th1/Th2相关细胞因子IFN-γ、IL-4的水平；空肠组织行病理学检测。结果除对照组外，致敏组小鼠均出现不同程度过敏症状，空肠表现为Ⅰ型变态反应病理特点，Th2细胞因子、OVA-IgE、mMCP-1水平升高，20μg、50μg致敏组Th1水平降低，50μg致敏组指标改变显著；与致敏组相比，干预组小鼠过敏症状及病理改变明显减轻，Th2细胞因子、IgE及mMCP-1水平降低，Th1水平升高。结论用50μg OVA建立的BALB/c幼鼠食物过敏模型致敏效果好，CPG-ODN通过改善Th1/Th2失衡状态，抑制幼鼠食物过敏反应。mMCP-1在过敏性疾病的发生、发展中起重要作用，有望成为食物过敏临床检测指标之一。
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CD40配体-受体载体介导的CpG ODN靶向脐血B淋巴细胞的特异传递及其免疫效应
背景:CpG寡核苷酸是一种高效低毒的免疫佐剂,在许多疾病的基因治疗中具有广阔的应用价值.但存在种属和细胞特异性,细胞摄取率低,易被酶降解,成为临床应用的障碍.目的:拟验证CpG寡核苷酸通过CD40配体-受体载体系统对脐血B淋巴细胞特异靶向传递及其免疫效应的增强作用.设计、时间及地点:观察对比实验,于2004-0412007-10在广州暨南大学附属第一医院血液科、儿科完成.材料:取健康新生儿的肝素抗凝新鲜脐血,事先征得父母知情同意并获医院伦理委员会审核批准.方法:制备CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸交联复合物,与脐血单个核细胞共培养.分别于24,48,72,96 h应用流式细胞仪检测单个核细胞对FAM标记CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度;培养96 h后用直接免疫荧光标记法标记CD19,CD20,CD22单抗,以流式细胞仪检测阳性表达率;细胞悬液加入96孔板,3组分别加入CD40配体-碳二亚胺-多聚左旋赖氨酸-CpG寡核苷酸、单纯CpG寡核苷酸及ddH2O,培养92 h,以四甲基偶氮唑盐比色法测细胞增殖能力;以酶联免疫吸附法测以上3组细胞培养上清IgG水平.主要观察指标:单个核细胞对CpG寡核苷酸的摄取率及平均摄入强度,淋巴细胞亚群的表达,细胞增殖能力,培养上清IgG水平.结果:与单纯CpG寡核苷酸未交联组相比,单个核细胞对交联复合物摄取率更高(98%),达摄取峰值时间吏早.共培养后CD19+,CD22+,CD20+细胞表达升高,细胞增殖量及上清IgG水平均高于对照组(P<0.05).结论:CD40配体-受体载体系统有助于CpG寡核苷酸特异高效的B细胞靶向投递,并增强其免疫效应.
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两种CpG寡核苷酸对乙型肝炎疫苗免疫小鼠淋巴细胞增殖的影响
目的 观察人工合成的两种CpG寡核苷酸(CpG ODN)对乙型肝炎疫苗免疫小鼠淋巴细胞增殖效应的影响.方法 BALB/c小鼠分别经乙肝疫苗、乙肝疫苗+CPG1826和乙肝疫苗+CpG2006免疫后,取小鼠脾和胸腺淋巴细胞,进行非特异性和特异性淋巴细胞增殖试验,应用MTT法分别检测淋巴细胞增殖效应.结果 CpG两组与疫苗组及对照组相比,脾淋巴细胞增殖效应均显著增强,CPG1826组均优于CpG2006组,且差异有统计学意义;CpG两组的胸腺淋巴细胞非特异性增殖效应也显著增强,但CpG两组之间差异无统计学意义.结论 CPG1826和CpG2006均能明显刺激BALB/c小鼠脾脏及胸腺淋巴细胞增殖,且CPG1826显示出更强的脾淋巴细胞免疫刺激效应.
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新型疫苗佐剂--细菌CpG寡核苷酸
佐剂的优化与研制,直接关系到新型疫苗的发展,开发新型疫苗佐剂是免疫策略的重要内容.含有细菌CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN),因其具有免疫激活作用,可作为新型疫苗佐剂,以提高疫苗的免疫效应.本文就CpG ODN免疫佐剂作用机制以及相关研究进展进行了综述.
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活化B淋巴细胞诱导健康人外周血HBcAg 短肽特异性细胞毒性T淋巴细胞
目的 探讨负载乙型肝炎病毒核心抗原18-27(HBcAg 18-27)序列肽的活化B淋巴细胞诱导自体外周血单个核细胞(PBMC)产生HBcAg 18-27特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的能力.方法 免疫磁珠法分选B淋巴细胞,与CpG寡核苷酸(CpG-ODN)(2 μg/mL)和白细胞介素-4(IL-4)(2 ng/mL)共培养48 h,再加入人工合成的HBcAg 18-27肽(50 μg/mL),继续温育12 h.将负载抗原肽的活化B淋巴细胞与自体PBMC进行混合淋巴细胞培养5 d,采用Pro5TM MHC Pentamers技术检测HBcAg 18-27特异性CTL.结果 免疫磁珠法分选B淋巴细胞纯度为89.60%.荧光显微镜观察到HBcAg 18-27抗原肽进入活化B细胞,流式细胞仪定量检测抗原负载率为41.3%.以此作为HBcAg 18-27特异性抗原递呈细胞(APC)能够从自体PBMC中诱导出HBcAg 18-27特异性CTL.对照组(不加APC)HBcAg 18-27特异性CTL为(0.20±0.10)%,实验组(加APC)为(0.50±0.19)%,2组差异有统计学意义(P<0.01).结论 负载了HBcAg 18-27肽的活化B淋巴细胞能够诱导自体PBMC产生HBcAg 18-27特异性CTL.
关键词： CpG寡核苷酸 B淋巴细胞 乙型肝炎病毒核心抗原 细胞毒性T淋巴细胞 -
CpG寡核苷酸可作为幽门螺杆菌疫苗的佐剂
目的研究一种新型黏膜佐剂(一段寡核苷酸,序列为:非甲基化的5'-…嘌呤-嘌呤-CpG-嘧啶-嘧啶-…3'(CpG-ODN)是否可作为幽门螺杆菌(Hp)疫苗的佐剂成分.方法C57BL/6小鼠经口灌胃给予Hp整菌超声粉碎物(WCS)/CpG-ODN或WCS/霍乱毒素(CT),或经鼻给予WCS/CpG-ODN,并设立相应对照组.免疫程序及途径为每周1次,共4次,后1次免疫后1周,以5×10s Hp活菌攻击小鼠,攻击后2周和8周时,处死小鼠,鉴定Hp感染情况.同时收集小鼠血清、唾液、胃液,ELISA法检测血清中IgG、IgGl、IgG2a及IgA水平和唾液、胃液中IgA水平.结果以WCS作为抗原,不同佐剂及接种途径免疫小鼠,保护率分别为:口服CT组75%(9/12),口服CpG-ODN组0%(0/10),滴鼻CpG-ODN组70%(7/10).第2和第8周滴鼻CpG-ODN组小鼠血清IgG2a水平显著高于未免疫的对照组(P＜005).结论通过鼻道免疫CpG-ODN是一很有前景的Hp疫苗佐剂成分.
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CpG寡核苷酸的筛选及其对rSj28GST的免疫佐剂作用
目的研究CpG寡核苷酸(CpG ODN)对日本血吸虫重组28 kDa GST(rSj28GST)抗原分子的免疫佐剂作用和诱导Th1型反应的效应.方法用淋巴细胞增殖试验筛选对鼠有良好免疫刺激作用的CpG ODN;用基因工程方法生产rSj28GST抗原分子;ELISA检测小鼠抗rSj28GST的同型抗体IgG1、IgG2a水平.结果筛选出的CpGODN如1826、2002、18264、2102等具有良好的免疫刺激活性,其SI＞2;纯化的rSj28GST抗原分子,呈单一电泳条带;以CpG ODN为rSj28GST免疫佐剂,其免疫小鼠产生的抗体滴度显著高于对照组,且同型抗体IgG2a与IgG1比值也明显升高.结论 CpG ODN 18264是一种良好的免疫佐剂,并可显著诱导Th1型免疫应答.
关键词： CpG寡核苷酸 日本血吸虫 谷胱甘肽-S-转移酶 免疫佐剂 -
抗人TLR9抗体对CpG寡核苷酸介导的人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α释放的影响
目的:观察细胞膜上的TLR9在CpG寡核苷酸(ODN)激活的信号转导通路中的作用.方法:采用抗TLR9抗体阻断人外周血单个核细胞(hPBMCs)表面的TLR9,观察细胞膜表面的TLR9是否与CpG ODN的内化和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放直接相关.结果:虽然CpG ODN和GpC ODN都能被细胞吞噬,但只有CpG ODN能够引起TNF-α释放;氯喹作为内体成熟抑制剂,在抑制这两种寡核苷酸降解的过程中无显著性差别;当使用抗人TLR9抗体阻断细胞膜表面的TLR9,对CpG ODN的内化、CpG ODN诱导的TNF-α释放以及氯喹对CpG ODN诱导hPBMCs释放TNF-α的抑制作用均没有显著影响.结论:细胞膜上的TLR9对CpG ODN的内化和hPBMCs释放TNF-α没有直接影响.
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A、C型CpG寡核苷酸对变应性鼻炎小鼠鼻腔炎症反应的作用
目的 探讨A、C型CpG寡核苷酸(ODN)对卵清蛋白诱导小鼠鼻腔炎症反应的作用.方法 40只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、变应性鼻炎组、A组和C组.变应性鼻炎组、A组和C组用卵清蛋白致敏及激发,A、C组在激发同时分别应用A、C型CpG ODN干预,正常对照组用生理盐水做对照.观察各组小鼠鼻部症状评分、鼻黏膜病理改变及测量血清IL-4、IL-5和IFNγ水平.结果 A、C组鼻部症状评分均高于正常对照组(P＜0.05或0.01),但明显低于变应性鼻炎组(P＜0.05或0.01).变应性鼻炎组血清IL-4、IFN水平高,IL-5水平低(P＜0.01).C组血清IL-4、IFNγ水平低,IL-5水平高(P＜0.05或0.01).结论 A、C型CpG ODN可抑制卵清蛋白诱导的小鼠鼻腔炎症,且C型CpG ODN抑制作用更强.
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新型免疫佐剂在淋巴细胞杂交瘤技术中的应用
目的观察新型免疫佐剂ImmunEasyTM(CpG ODN)的免疫调节作用,并与弗氏佐剂相比较,探讨其在单克隆抗体制备中的应用前景.方法将小鼠用新型免疫佐剂ImmunEasyTM或弗氏佐剂混合原核表达的重组APRIL抗原,分别以常规免疫和少量抗原免疫方案免疫Balb/c小鼠,用间接ELISA法检测不同时相小鼠免疫血清抗APRIL抗体的总效价及各类和亚类的效价.建立一种能在单个细胞水平反映小鼠B细胞分泌特异性抗体亚类的改良ELISPOT方法,并对两种佐剂免疫组中配对的小鼠进行检测.常规方法制备杂交瘤,以间接ELISA法筛选阳性杂交瘤,比较不同佐剂免疫小鼠所获得的杂交瘤上清液的类及其亚类频率.结果与弗氏佐剂相比,ImmunEasyTM在单克隆抗体制备过程中可明显减少抗原用量,缩短免疫周期,提高免疫血清效价,并增加IgG2a、IgM及IgA抗体的比例.结论在细胞融合制备鼠源性mAb中,应用ImmunEasyTM,可减少免疫原用量,提高效率,还可优先获得某些类及其亚类的mAb.
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CpG寡核苷酸在免疫治疗中的作用
人工合成的含有免疫刺激活性CpG基序的寡核苷酸(CpG ODN)能触发B细胞、NK细胞和T细胞以及专职抗原呈递细胞的免疫调节级联反应.对CpG ODN的反应促使机体免疫环境向Th1型细胞应答漂移以及促炎因子的释放.这成为CpG ODN在免疫治疗中作为免疫保护剂、抗变态反应以及疫苗佐剂的基础.基础研究提供了CpG ODN作用有效性的证据,正进行的临床研究将提示CpG ODN应用的安全性.本文就此相关的研究作一综述.
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联合应用卡介苗有效成分--罗莫肽和CpG-ODN刺激人PBMC分泌细胞因子
膀胱内灌注卡介苗(BCG)是目前预防膀胱肿瘤术后复发和治疗部分浅表性膀胱肿瘤的佳免疫治疗方法[1].其免疫学机制主要是通过BCG激活膀胱黏膜免疫系统,产生以细胞免疫为主的免疫应答,逆转肿瘤局部Th2细胞占优势的免疫抑制状态,发挥杀瘤作用[2],但毒副作用大,许多患者难以坚持完成整个灌注疗程.近来研究发现[3,4],来源于BCG细胞壁的罗莫肽(Romurtide,RM)是新发现的具有免疫活性的小肽,国外已初步用于因肿瘤放、化疗引起的白细胞减少症和血小板减少症等骨髓抑制现象的治疗,但RM是否能替代BCG用于膀胱肿瘤的治疗尚不清楚.本研究中,我们联合应用RM和细胞核有效成分-人工合成的具有非甲基化的胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸(CpG)基序的寡核苷酸(ODG),刺激人外周血单个核细胞(PBMC),并通过检测其培养上清细胞因子的类型及水平,为临床应用BCG的有效成分治疗膀胱肿瘤提供实验依据.
