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ELISA和Realtime-PCR筛检献血员HBV感染结果分析
目的 比较ELISA与Realtime-PCR检测献血员HBV感染的差异,探索准确高效的献血员筛选方法,为提高临床血源质量服务.方法 采集502例献血员血样,分离血清,分别采用ELISA与Realtime-PCR方法进行HBsAg和HBVDNA双盲检测,对两法检测结果不一致的献血员2个月后随访并抽血复检.结果 502例献血员中,两法初检HBV感染的一致率为97.61%(490/502)(S=5.3333,P=0.020 9).2个月后对检测结果不一致的12例献血员复检,有7例2种方法检查均阳性.结论 2种方法的初检结果有较好的一致性,均可用于HBV感染检测.Realtime-PCR的检测效果优于ELISA.
关键词： ELISA Realtime-PCR 筛检 乙型肝炎 献血员 -
宫颈癌组织ICAM-1和VEGF表达与放疗敏感相关性研究
目的:研究细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)和血管内皮生长因子(vascular endo-thalial growth factor,VEGF)在宫颈鳞癌组织中的表达及其与放疗敏感性的相关性.方法:选取2007-07-01-2008-06-30在南通市肿瘤医院妇瘤科住院行根治性放疗的60例宫颈鳞癌患者.采用Realtime-PCR技术检测ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA在宫颈鳞癌组织中的表达,分析不同放疗敏感性患者ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA表达水平差异,探讨ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA之间的相关性.结果:宫颈鳞癌组织放疗前后ICAM-1 mRNA表达水平分别为124.57±58.64和47.38±39.27,差异有统计学意义,P=0.008;VEGF mRNA的表达水平分别为152.75±66.92和73.46±54.41,差异有统计学意义,P-0.023;ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA的表达在放疗抵抗组和放疗敏感组中差异均有统计学意义,P值分别为0.027和0.009;近期疗效中,肿瘤消失组中ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA表达存在一定相关性,r=0.468,P=0.016;肿瘤未控组中ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA表达存在一定相关性,r=0.693,P=0.031.远期疗效中,肿瘤治愈组中ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA表达亦存在一定相关性,r=0.457,P=0.023;肿瘤复发组中ICAM-1 mRNA和VEGF mRNA表达亦存在一定相关性,r=0.637,P=0.018.结论:ICAM-1高表达与宫颈鳞癌放疗抵抗性有关,并且与VEGF的表达在放射抵抗中具有一定的相关性.
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酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠下丘脑GABA及其受体表达的影响
目的:研究酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠下丘脑GABA及其受体表达的影响.方法:利用“多平台水环境法”建立老年大鼠慢性睡眠剥夺模型,将实验大鼠随机分为4组,环境对照组,慢性睡眠剥夺模型组,舒乐安定组以及酸枣仁汤组.应用免疫组织化学方法观察睡眠剥夺21 d后各组大鼠下丘脑GABA含量的变化,Realtime-PCR法检测大鼠下丘脑GABAARα1和γ2亚单位mRNA表达水平.结果:免疫组化法检测结果表明,与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组较环境对照组GABA含量降低(P＜0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组GABA相对表达量相对升高(P＜0.05).Realtime-PCR法检测结果表明,与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组GABAARα1、GABAARγ2表达下调(P＜0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,酸枣仁汤组和舒乐安定组GABAARα1、GABAARγ2表达明显上调(P＜0.05).结论:酸枣仁汤改善睡眠机制与调控大鼠下丘脑GABA的含量及其受体表达有关.
关键词： 酸枣仁汤 慢性睡眠剥夺 免疫组化 Realtime-PCR -
酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠下丘脑5-HT及其受体表达的影响
目的研究酸枣仁汤对慢性睡眠剥夺老年失眠大鼠下丘脑5-HT及其受体表达的影响.方法利用“多平台水环境法”建立老年大鼠慢性睡眠剥夺模型,将实验大鼠随机分为4组,即环境对照组,慢性睡眠剥夺模型组,舒乐安定组以及酸枣仁汤组.应用荧光分光光度法检测5-HT含量的变化,Realtime-PCR法检测大鼠下丘脑5-HT1AR、5-HT2A Rm-RNA表达水平.结果荧光分光光度法检测结果表明,与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组5-HT含量明显降低(P＜0.05);与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组5-HT含量明显升高(P＜0.05).Realtime-PCR法检测结果表明,与环境对照组比较,慢性睡眠剥夺模型组下丘脑5-HT1ARmRNA表达下调,5-HT2ARmRNA表达上调;与慢性睡眠剥夺模型组比较,舒乐安定组和酸枣仁汤组下丘脑5-HT1ARmRNA表达上调,5-HT2A RmRNA表达下调.结论酸枣仁汤改善睡眠机制与调控大鼠下丘脑5-HT的含量及其受体表达有关.
关键词： 酸枣仁汤 慢性睡眠剥夺 Realtime-PCR 荧光分光光度法 -
武汉献血人群抗-HCV ELISA检测反应性标本联合Realtime-PCR的研究
目的:对现有的2种国产抗-HCV ELISA试剂检出的反应性标本进行Realtime-PCR扩增,对结果进行分析,比较2种方法的检出率.为制定ELISA检测结果假阳性的献血者献血资格的恢复措施提供依据.方法:对日常工作中的检测标本用2种抗-HCV ELISA两步法试剂做初检,反应性结果再次双孔复试.对任何一种试剂经复试检测后仍为反应性的标本进行Realtime-PCR扩增,对所有检测结果进行分析.结果:共检测无偿献血标本63 169份,其中检出抗-HCV反应性标本206份,对206份标本进行Realtime-PCR扩增,共扩增出91例HCV-RNA阳性标本,53例科华试剂单反应性标本中仅2例HCV-RNA结果为阳性,41例新创试剂单反应性标本中6例HCV-RNA结果为阳性.ELISA试剂检出的标本S/CO值在不同的区间内的,都有HCV-RNA为阳性的标本.结论:ELISA试剂检测出的抗-HCV标本很多可能为假阳性,特别是单侧试剂呈反应性的标本.但即使ELISA检测S/CO值仅在灰区的单试剂反应性标本,仍不能排除为HCV感染者.
关键词： 丙型肝炎病毒 抗-HCV ELISA Realtime-PCR -
2010年云浮市手足口病病原学监测结果分析
目的对2010年云浮市哨点医院手足口病(HFMD)监测结果进行分析,了解云浮市手足口病的病原学特征,为云浮市手足口病的防治提供科学的依据.方法 收集73例监测哨点医院手足口病病例送检的粪便标本,应用Real time-PCR技术检测肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CAl6)、非EV71和CA16的其它肠道病毒核酸.结果 73例手足口病患者中42例为肠道病毒核酸阳性,阳性率为57.5％,其中EV71病毒、CA16病毒以及非EV71和CA16的其它肠道病毒分别占总阳性数的71.4％、7.1％、21.4％.三种不同型别肠道病毒在全年中交替变更；病毒检出高峰出现在5～6月,病例人群男性高于女性(1.92∶1),4岁以下儿童病例阳性率高.结论 云浮市2010年手足口病疫情发病高峰为5～6月,4岁以下儿童病例发病数多,肠道病毒EV71型是2010年云浮市手足口病流行的主要毒株类型.开展手足口病流行病学和病原学研究,将有助于提出更好的预防和控制措施.
关键词： 手足口病 流行特征 Realtime-PCR 肠道病毒EV71型 -
具有中和活性的抗人IL-1β单链抗体的构建
目的 构建抗人IL-1β单链抗体(anti-hIL-1β scFv)的原核表达载体,并对其表达的蛋白进行生物学活性检测.方法 使用PCR的方法从含有抗人IL-1β抗体基因的质粒中获得抗人IL-1β的单链抗体基因,将其插入原核表达载体pET-27b中,构建重组表达载体pET-27b-hIL-1β scFv.将该载体转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后诱导表达,经凝胶过滤色谱柱上复性得到可溶的抗人IL-1β的scFv蛋白.使用ELISA方法鉴定scFv抗体的特异性结合活性,使用Real time-PCR的方法检测scFv抗体的中和活性.结果 成功地对抗人IL-1β单链抗体进行诱导、表达和复性,蛋白相对分子质量约为28 000.ELISA结果证实scFv蛋白对hIL-1β具有特异性结合能力.Real time-PCR实验结果证实该scFv抗体可以有效阻断人IL-1β刺激人T细胞表达细胞因子IL-18及IL-1β的作用.结论 通过原核表达系统得到的抗人IL-1β单链抗体经复性后,与人IL-1β蛋白有特异性结合能力,并且表现出中和活性,为进一步研究人IL-1β相关疾病及其治疗性抗体奠定了基础.
关键词： IL-1β 单链抗体 包涵体复性 中和活性 Realtime-PCR
