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消灭丝虫病地区病原学监测方法的研究
为筛选适宜在消灭丝虫病地区应用的简易、经济、实用的病原学监测方法，对单克隆抗体（McAb）-ELISA检测丝虫特异IgG4和快速免疫色谱技术（ICT）检测血清和血浆中的班氏丝虫抗原诊断丝虫病的效果进行对比研究。结果检测班氏微丝蚴血症者59例，丝虫特异IgG4阳性57例，阳性率96.61%；ICT丝虫抗原阳性56例，阳性率为94.92%。两种方法均具有较高的敏感性，差异无显著性（P＞0.05）。同时分别检测非流行区健康者40人，囊虫病患者30例及25例华支睾吸虫病患者血清，两种方法均呈阴性，未出现交叉反应，特异性为100%。现场研究两种方法分别检测基本消灭丝虫病后出生儿童302人，消灭丝虫病地区人群372人，晚期丝虫病患者55例（乳糜尿41例，象皮肿14例），原微丝蚴血症转阴者60例。结果仅消灭丝虫病地区人群中1例（以往血检阴性）丝虫特异IgG4强阳性，ICT丝虫抗原弱阳性，但反复镜检未发现微丝蚴。其余均为阴性。研究表明，两种方法均具有较高的敏感性和特异性，均可用于消灭丝虫病地区病原学的监测。McAb-ELISA检测丝虫特异IgG4可大面积用于消灭丝虫病地区的病原学监测。而ICT检测班氏丝虫抗原更适用于个案病例的检测。
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弓形虫McAb的制备和鉴定
弓形虫是一种人兽共患病的病原寄生虫,是一级实验动物必须检测的项目之一.目前常用的检查方法是检测血清抗体.抗原检查应该是直接、直观的手段,但是直接涂片、饱和盐水漂浮和动物接种等方法或检出率低或步骤繁琐.制备制异性的McAb,用于弓形虫抗原检测是这个研究的出发点.
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免疫删减法制备共刺激分子CD80单克隆抗体及其生物学活性鉴定
目的:制备共刺激分子CD80单抗并鉴定其生物学活性.方法:采用给经MDA453细胞免疫的小鼠注射环磷酰胺100 mg/(kg·次)诱导对MDA453细胞的免疫耐受基础上,再用已建立能稳定表达hCD80分子的MDA453细胞免疫小鼠,取经检测抗体阳性强的小鼠脾细胞,按常规方法制备单抗.通过T增殖阻断实验鉴定其活性.结果:CELL-ELISA、FACS鉴定获得一株抗CD80单抗,腹水效价为10-6,属IgG1亚类.T细胞增殖阻断试验显示,此单抗能部分阻断T细胞对相应刺激的增殖反应.结论:应用环磷酰胺免疫删减法成功制备膜抗原CD80单抗,该单抗有一定应用前景.
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抗人树突状细胞单克隆抗体可变区基因克隆和序列分析
目的:为了将抗树突状细胞(dendritic cells,DC)抗体应用于临床疾病治疗,计划克隆获得抗人DC单克隆抗体(McAb)的可变区序列,在此基础上进一步获得人源化的抗人DC抗体.方法:运用RT-PCR技术,从分泌抗人DC McAb的杂交瘤细胞株(H1E11)中,克隆出VH和VL基因片段,并对VH和VL进行了测序分析.所测得的重链和轻链在基因库中与相关的Ig的VH和VL基因序列进行经Blast同源性比较.结果:通过碱基和蛋白序列的比较确认为小鼠IgG的VH和VL基因.运用Dnasis软件对VH和VL基因进行阅读框分析和模拟翻译,并参照Kabat等人(1991)编写的Ig蛋白质编码序列图谱,根据其FRs和CDRs的序列特征进行Ig的家族分析,发现VH共有414 bp,编码138个氨基酸序列,属于小鼠IgG重链Ⅲ(A)家族;VL由396 bp编码,产生132氨基酸,属于轻链κV家族.结论:成功克隆抗人DC McAb重链和轻链的可变区.
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脑囊虫病人血清特异IgG4测定
应用McAb-ELISA检测脑囊虫病人血清特异性IgG4抗体,检出率为93.83%(152/162),GMRT为1:1424.其中重度囊虫感染病人的特异IgG4检出率为100%(29/29),GMRT为1:2095;中度感染病人为95.45%(63/66),GMRT为1:1510;轻度感染病人为89.55%(60/67),GMRT为1:400.显示血清特异IgG4抗体水平与囊虫感染度有关.经药物治疗后,脑囊虫病人血清特异IgG4抗体水平逐渐下降,4个疗程后的特异IgG4检出率降为38.46%(10/26),GMRT为1:246.IgG4测定具有高特异性和敏感性,是囊虫感染诊断及疗后动态观察的有效途径.
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鼠疫抗原单克隆抗体的制备及效果评估
目的制备鼠疫F1抗原检测试剂.方法用杂交瘤细胞融合技术制备抗鼠疫McAb;用ELISA法检测其特异性、敏感性;用双抗体夹心ELISA法检测鼠疫F1抗原.结果抗鼠疫F1抗原McAb效价达1:1×106,与9种细菌抗原无交叉反应,ELISA法可检测到的鼠疫F1抗原的小浓度为0.0065μg/ml,经多次验证,结果稳定.结论该McAb具有高特异性和敏感度,所制备的试剂盒有望成为鼠疫流行病学监测和免疫学诊断的重要手段.
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抗CD28分子单克隆抗体的制备及其免疫学特性
目的 制备抗人CD28单克隆抗体,对其免疫学特性进行分析.方法 利用多肽技术合成的CD28抗原免疫BALb/c小鼠,应用细胞杂交技术,获得抗CD28的单克隆抗体,并对其免疫学特性进行了分析.结果 经过融合、亚克隆成功获得了9株抗人CD28的杂交瘤细胞株,均为IgG,4株为IgG2a,5株为IgG2b.利用竞争抑制实验分别对其中的5株进行了抗原位点测定,5株分别针对三个不同的抗原位点.结论 此单抗细胞株的建立,对于深入研究CD28单抗对T淋巴细胞的作用机理有重要意义.
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抗霍乱弧菌O139型的单克隆抗体免疫印迹分析抗原表位及应用
目的制备霍乱弧菌O139型 (Vibrio cholerae O139, VC O139)单克隆抗体后应用免疫印迹技术识别抗原表位特性. 方法 SDS-PAGE结合Western blotting 以及APAAP方法. 结果霍乱弧菌O139型抗原经还原剂处理,SDS-PAGE 11%～20%梯度胶电泳,转印染色后,能分辨出20余条清晰的蛋白带和脂多糖片状图谱.3株抗霍乱弧菌O139型单抗的抗原表位, 主要集中于20～70 kD相对分子质量的蛋白带,其中O139的2株单抗O139-14、O139-15分别与68～50 kD、45～25 kD、20～14 kD对应VC O139的蛋白质抗原表位起反应,而另外一株单抗,O139-92只与65 kD、20 kD的抗原表位特异性结合. 结论 VC O139的O139-14、O139-15 McAb同对应抗原表位点的结合分布较广,有利于对VC O139抗原的快速、敏感、特异检测.
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金标免疫渗滤法在脑囊虫病诊断中的应用
为寻找简便可行的脑囊虫病诊断方法,将2株抗猪囊尾蚴囊液抗原McAb,一个滴于硝酸纤维素膜上,另一与胶体金结合,建立了检测脑囊虫病患者脑脊液(CSF)中循环抗原(CA)的金标免疫渗滤法(DIGFA).本法中抗原、抗体通过渗滤在膜上进行反应,10分钟内即可用肉眼观察结果.以该法检测48例脑囊虫病患者CSF、26份健康人CSF及23例非囊虫病患者CSF.对检测样本作了沸浴处理,处理前后的48例脑囊虫病患者CSF阳性检出率分别是77.08%和93.75%,处理前后的对照CSF阴性符合率均未改变.26例健康人CSF,阴性符合率为96.15%;23例非囊虫病患者CSF,1例出现阳性反应,交叉反应率为4.35%.该方法可检出小抗原量为0.5μg/L沸浴处理可提高脑囊虫病人CSF的CA阳性检出率.DIGFA敏感、特异、重复性好,操作简便,无需特殊设备,可用于囊虫病的诊断.
