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弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导体液免疫应答的动态观察
观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原(Excreted-secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化,为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据.BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以ESA为抗原(20μg/只),对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液20μL(μg/只),滴鼻免疫2次(间隔2周).分别于2次免疫后第1、2、3、4、5、6、7周颈椎脱位处死小鼠.EuSA法测定血清IgG、IgA,粪便sIgA及肠液sIgA.结果表明,免疫组小鼠血清IgG、IgA和粪便sIgA及肠液sIgA均增高.血清IgG、IgA水平分别第5周、第4周达高峰,免疫后第1～7周(P＜0.05)显著高于对照组.粪便sIgA第4周即达高峰,之后逐渐降低,至第7周仍(P＜0.05)显著高于对照组.肠液sIgA第4周达高峰,第2、3、4周(P＜0.05)高于对照组.可见,弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导体液免疫应答,特异性抗体生成明显且可持续较长时间.
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重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合IL-2、IFN-γ佐剂鼻内免疫小鼠诱导的小肠黏膜免疫应答
为探讨IL-2和IFN-γ的佐剂效应,本研究观察了重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(rTgPGAM2)联合IL-2或IFN-γ滴鼻免疫小鼠诱导小肠黏膜IgA抗体分泌细胞(IgA-ASCs)和小肠冲洗液sIgA的免疫应答.将48只6周龄雌性BALB/c小鼠随机均分为6组,免疫组分别用500 IU IL-2、1000 U IFN-γ、30 μg rTgPGAM2、30 μg rTgPGAM2+500 IU IL-2或30 μg rTgPGAM2+1000 U IFN-γ滴鼻免疫小鼠,抗原和佐剂溶于20 μL PBS中,对照组用20 μL PBS滴鼻.免疫3次,一免和二免间隔2周,二免后1周三免.三免后第14天,颈椎脱臼处死小鼠,免疫组化检测小鼠十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA-ASCs,计算阳性率,ELISA测定小肠冲洗液sIgA水平.结果表明,免疫组十二指肠、空肠和回肠黏膜中IgA-ASCs 阳性率高于PBS组,其中rTgPGAM2、rTgPGAM2联合IL-2或IFN-γ佐剂组差异显著(P<0.05或P<0.01).rTgPGAM2联合IL-2或IFN-γ佐剂组小肠冲洗液sIgA水平显著高于PBS组(P<0.01).rTgPGAM2、TgPGAM2+IL-2和TgPGAM2+IFN-γ滴鼻免疫小鼠均可有效诱导肠黏膜免疫应答,IL-2和IFN-γ可显著增强抗原的免疫效应,IL-2的佐剂效应优于IFN-γ.
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不同剂量弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答
目的 观察不同剂量弓形虫排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens, ESA)鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答,确定适宜免疫剂量. 方法 40只BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只.分别用5、10、20和30 μg ESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,对照组用20 μl/只PBS滴鼻.于末次免疫后第14 d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测鼻咽冲洗液和小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, iIEL)、肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes, MLNL)及脾淋巴细胞. 结果 实验期间,小鼠健康状况良好.随鼻内免疫ESA剂量的增加,特异性抗体水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也显示不同程度的增生性应答.其中,30 μg组小鼠血清IgG、脾淋巴细胞数量与10 μg组、5 μg组和PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);30 μg组小肠冲洗液sIgA、鼻咽冲洗液sIgA、iIEL和MLNL数量,20 μg组小肠冲洗液sIgA和MLNL数量与5 μg组及PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);20 μg组血清IgG与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 20 μg和30 μg ESA鼻内免疫能有效诱导粘膜及系统免疫应答.
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重组人IL-2联合STAg鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的免疫应答
目的 观察重组人白细胞介素-2(rhuIL-2)联合弓形虫可溶性速殖子抗原(STAg)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答,探讨rhuIL-2的佐剂效应及适宜剂量. 方法 5～6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为6组,每组10只.实验组以STAg 20 μg或分别加rhuIL-2 250、500、1 000、2 000 IU滴鼻免疫,抗原与佐剂溶于20 μl PBS中,对照组以PBS滴鼻,免疫2次,间隔2周.末次免疫后30 d,颈椎脱臼处死全部小鼠,ELISA法检测血清IgG和粪便sIgA水平;分离脾淋巴细胞、肠上皮内淋巴细胞(iIEL),并计数. 结果 与PBS组相比,各佐剂组血清IgG水平都有增高,其中STAg+500 IU IL-2组IgG水平增高显著(P＜0.01);STAg+500 IU IL-2组和STAg+1 000 IU IL-2组粪便sIgA抗体水平显著高于PBS组和STAg组(P＜0.05).联合IL-2佐剂免疫小鼠脾淋巴细胞和产生了增殖性应答,其中STAg+500 IU IL-2组和STAg+1 000 IU IL-2组脾淋巴细胞数显著高于PBS组和STAg组(P＜0.05);TAg+500 IU IL-2组iIEL高于PBS组(P＜0.05). 结论 rhuIL-2作为佐剂联合STAg鼻内免疫小鼠可有效诱导粘膜免疫、系统的细胞免疫和体液免疫应答;500 IU IL-2为鼻内免疫小鼠的适宜剂量.
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弓形虫STAg不同途径免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答动态变化
目的 动态观察弓形虫可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)滴鼻和皮下免疫小鼠诱导的黏膜免疫和系统免疫应答. 方法6周龄BALB/c小鼠90只随机分为3组,分别以20 μg STAg滴鼻或皮下注射免疫小鼠2次,间隔2周,对照组不做处理.末次免疫后1、2、3、4和5周,每组随机处死6只小鼠.ELISA法测定小肠冲洗液sIgA和血清IgG,分离并计数小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)和脾淋巴细胞. 结果对照组小鼠小肠冲洗液sIgA水平和IEL数及血清IgG水平和脾淋巴细胞数均维持在较低水平.滴鼻免疫组小鼠小肠冲洗液sIgA水平升高,与对照组比较差异有统计学意义(FsIgA=10.074.FIEL=14.747,P<0.01),其中第5周sIgA水平、第2～5周IEL数量与皮下免疫组比较差异有统计学意义(FsIgA=7.862,FIEL=9.807,P<0.05).皮下免疫组小鼠血清IgG水平和脾淋巴细胞数均升高,与对照组比较差异有统计学意义(FIgG=8.207,F脾细胞=11.209,P<0.05),第5周脾淋巴细胞数与滴鼻组比较差异有统计学意义(F=6.826,P<0.05). 结论 20 μg STAg滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜免疫应答水平优于同剂量的皮下免疫,同时也诱导了较高水平的系统免疫应答.皮下免疫可诱导较高水平的系统免疫应答,但其诱导的黏膜免疫应答较弱.
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STAg联合CpG ODN和CT鼻内免疫小鼠诱导的特异性抗体应答和脾淋巴细胞的特异性增殖反应
目的 观察可溶性速殖子抗原(STAg)联合CpG寡核苷酸(CpG ODN)和/或霍乱毒素(CT)鼻内免疫BALB/c小鼠后血清IgG、肠冲洗液IgA抗体水平及脾淋巴细胞体外特异性增殖反应,探讨CpG ODN和CT的佐剂效应. 方法 6周龄BALB/c小鼠60只,随机分为5组,分别用20 μl PBS(PBS组)、20 μg STAg(抗原组)、20 μg STAg +10 μg CpG ODN(CpG佐剂组)、20 μg STAg + 1 μg CT(CT佐剂组)、20 μg STAg + 1 μg CT +10 μg CpG ODN(联合佐剂组)滴鼻,间隔2周,免疫2次.末次免疫后第20 d颈椎脱臼处死小鼠,收集血清和肠冲洗液,ELISA法检测血清弓形虫特异性IgG和肠冲洗液IgA.分离脾淋巴细胞,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测致敏脾淋巴细胞体外增殖活性. 结果 ELISA法测定PBS组、抗原组、CpG佐剂组、CT佐剂组及联合佐剂组小鼠血清IgG A值分别为0.025 6±0.012 1、0.054 2±0.024 4、0.109 4±0.007 5、0.110 1±0.009 1和0.124 6±0.013 7,肠冲洗液IgA A值分别为0.141 8±0.030 2、0.415 2±0.080 7、0.526 9±0.075 4、0.846 5±0.115 5和1.128 9±0.100 3,脾淋巴细胞刺激指数SI分别为1.159 0±0.275 5、1.364 0±0.349 8、1.582 0±0.375 3、1.928 0±0.278 9和2.371 0±0.646 9,差异均有统计学意义(P＜0.01);联合佐剂组肠冲洗液IgA水平和脾淋巴细胞的SI值与CpG佐剂组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 STAg联合CpG ODN和/或CT鼻内免疫小鼠可有效诱导机体免疫反应,两种佐剂联合免疫的效果优于单一抗原或抗原联合单一佐剂.
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小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答
目的 观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应.方法 将5～6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20 μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20 μl/只PBS滴鼻.观察小鼠健康和死亡情况,记录体重.末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP(Peyer's patches)个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)及肠系膜淋巴结细胞(mesenteric lymph node lymphocyte,MLNL)并计数.眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA.结果 72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势.各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组(P＜0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P＜0.01).免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组(P＜0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P＜0.01).结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果好.
关键词： 弓形虫 排泄-分泌抗原(ESA) 粘膜免疫 鼻内免疫 粘膜疫苗 -
弓形虫排泄-分泌抗原和可溶性速殖子抗原免疫原性的观察
目的 观察弓形虫速殖子排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen, ESA)和可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)鼻内免疫小鼠的免疫原性. 方法 BALB/c小鼠随机分为4组,分别用PBS 20 μl/只、体外排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in vitro, ESAv)、腹腔排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigen in mice, ESAm)和STAg各20 μg/只鼻内免疫2次,间隔14 d.分别于末次免疫后14 d和44 d每组处死8只小鼠,计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)和脾淋巴细胞,ELISA法检测血清IgG和小肠冲洗液sIgA抗体水平. 结果 实验期间,ESAm组小鼠于二次免疫后状态欠佳,其他各组小鼠健康状况良好.末次免疫后14 d,各抗原组脾淋巴细胞及iIEL均增殖活跃,细胞数与PBS组比较,差异具统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);至免疫后44 d,两种ESA组脾淋巴细胞及iIEL数与PBS组比较差异具统计学意义(P＜0.05).各抗原组血清IgG水平在免疫后14 d和44 d均明显增高,与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).免疫后14 d肠液sIgA水平ESAv、ESAm和STAg组与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),ESAm和STAg组与ESAv组比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),两种ESA组在免疫后44 d与PBS组比较差异仍具统计学意义(P<0.05). 结论 ESAv、ESAm和STAg鼻内免疫均可诱导粘膜及系统的细胞和体液免疫应答,有较强的免疫原性.但ESAm可能对机体有毒副作用,不适宜直接鼻内免疫.
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TSo联合IFN-γ鼻内免疫小鼠的抗弓形虫感染保护作用
目的研究速殖子超声裂解物(TSo)联合IFN-γ鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用. 方法将6～7周龄BALB/c小鼠100只随机分为4组,每组25只.分别用PBS 10 μl、20 μg TSo、500 U IFN-γ和20 μg TSo+500 U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔2周.末次免疫后第10 d,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击.分别于攻击后第7、10、13、16、19 d处死小鼠,计数脑、肺、肝组织内弓形虫速殖子,观察其动态变化. 结果 TSo+IFN-γ鼻内免疫组可使受攻击小鼠脑、肺、肝组织内弓形虫速殖子数减少,攻击后第13和19 d TSo+IFN-γ组小鼠脑内速殖子数比PBS组分别减少63.92%和58.39%(P均<0.05). 结论 TSo+IFN-γ鼻内免疫小鼠可产生有效的保护性免疫,可减少脑、肺、肝组织内弓形虫速殖子数.组织内速殖子计数可以作为抗弓形虫感染保护力的重要评价指标.
关键词： 弓形虫 速殖子超声裂解物(TSo) IFN-γ 鼻内免疫 粘膜疫苗 -
HIV-1CN54合成gag DNA疫苗鼻内免疫BALB/c小鼠诱发的免疫应答
目前80%的HIV感染是通过粘膜表面(主要是肠道和生殖道)发生的.粘膜免疫保护粘膜表面不感染HIV,除抗体的作用之外,CD8+ CTL细胞应答也发挥重要作用.HIV-1CN54是B′/C重组毒株,中国与欧盟合作以其为代表毒株研制疫苗,以期预防和控制艾滋病.我们以前的研究表明用HIV-1CN54合成gag(syngag)的DNA疫苗进行肌肉注射免疫小鼠诱发比较强的体液和细胞免疫应答,本研究则采用鼻内接种DNA疫苗的方法,观察是否诱发系统和粘膜的免疫应答.
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双价痢疾疫苗滴鼻免疫小鼠诱导持续性粘膜与系统免疫反应
用双价痢疾疫苗(FSM-2117)滴鼻免疫小鼠后7、30和90 d,分别观测粘膜和系统免疫反应的变化.疫苗经鼻内免疫后7 d,诱发鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内LPS IgA、IgG水平显著增高(P＜0.01),而特异性抗体水平在免疫后30、90 d明显下降,尤其是胃肠道和鼻咽部粘膜,但仍明显高于PBS对照组水平;疫苗滴鼻免疫后7 d,小鼠NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加,其中以CD4+ T细胞增加为主,脾细胞中B22+细胞显著增加;4次免疫后30 d,NALT、NP和脾淋巴细胞出现上述变化,而4次免疫后90d,仅NALT和NP淋巴细胞出现同样变化.
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黏膜佐剂鼻内免疫抗旋毛虫感染作用的探讨
目的研究黏膜佐剂霍乱毒素B亚单位(CT-B)经鼻内免疫诱发旋毛虫感染的黏膜免疫.方法 24只NIH小鼠随机分为四组,即:①CT-B免疫组(CT-B);②正常对照组(C);③CT-B免疫感染组(CT-B+INF);④单纯感染组(INF).CT-B组和CT-B+INF组每周经鼻免疫1次(幼虫抗原100μg、CT-B 10μg),共3次,末次免疫后1周,CT-B+INF组和INF组同时给予200条旋毛虫幼虫攻击感染,感染后一周,检查小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力.CT-B组与C组于CT-B组末次免疫后7日,CT-B+INF组与INF组于攻击感染后7日,对各组小鼠血清免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG),肠黏液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)进行比较.结果与单纯感染组相比,CT-B+INF组肠道成虫数明显减少,雌虫生殖力明显降低,成虫与新生幼虫减虫率分别为89.95%和74.93%.CT-B+INF小鼠肠黏液sIgA、血清IgA较对照组小鼠明显提高(0.29±0.07 vs 0.09±0.02,0.25±0.09 vs 0.08±0.01,P＜0.001);而两组IgG1和IgG2b水平无显著性差异(P＞0.05).CT-B+INF组小鼠肠黏液sIgA、血清IgA较INF组小鼠相比有显著性差异(0.78±0.25 vs 0.08±0.15,0.42±0.10 vs 0.10±0.10,P＜0.001),而两组IgG1和IgG2b水平无显著性差异(P＞0.05).结论本研究显示CT-B不仅能提高局部黏膜sIgA水平诱导局部免疫应答,还能提高IgA水平诱导全身免疫应答,提示CT-B能显著提高机体对旋毛虫感染的免疫保护作用.
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干扰素对M2e-HBc疫苗鼻内免疫的佐剂作用
目的 研究干扰素对鼻腔黏膜免疫M2e-HBc疫苗的佐剂作用.方法 小鼠经鼻腔黏膜免疫,用流感病毒攻击.测定抗体水平和对小鼠的保护.结果 小鼠可产生局部和系统保护性抗体IgA、IgG,对流感病毒的亚致死性攻击产生完全保护.结论 干扰素对M2e-HBc疫苗鼻内免疫具有较强的免疫佐剂作用.
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弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的黏膜及系统免疫应答
目的 观察弓形虫排泄-分泌抗原(excreted-secreted antigen,ESA)鼻内免疫小鼠诱导黏膜和系统免疫应答的效果.方法 将64只BALB/c小鼠随机分为8个组,每组8只.实验组小鼠分别用腹腔感染弓形虫小鼠第0,6,12,24,36,48和60小时无菌收集的腹腔液中获取的ESA 20 μg/只滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,以PBS20 μl/只滴鼻为对照.逐日观察小鼠状况,于末次免疫后第14天颈椎脱位处死小鼠,检测血清特异性IgG、小肠冲洗液sIgA水平,分离肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes,iIEL)及肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes,MLNL)并计数.结果 60 h组小鼠初次免疫后第8-11天,有倦怠、饮水及采食量减少等表现,体重增长较其他组缓慢(P＜0.05),其他组小鼠健康状况良好.不同时相ESA鼻内免疫小鼠后特异性抗体水平升高,MLNL、iIEL发生增殖性应答.48 h组和60 h组各项指标均明显高于0 h组(P＜0.01)及PBS组(P＜0.05).结论 48 h和60 h弓形虫ESA均能诱导黏膜及系统免疫应答,但60h ESA可能对机体有毒副作用,不适宜直接滴鼻免疫,48 h ESA可作为弓形虫黏膜疫苗的候选抗原.
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重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2联合白细胞介素-2或干扰素γ诱导小鼠的脾淋巴细胞免疫应答
目的 观察重组弓形虫磷酸甘油酸变位酶2(Recombinant Toxoplasma gondii phosphoglycerate mutase 2,rTgPGAM2)联合白细胞介素-2(Interleukin-2,IL-2)或干扰素γ(Interferon γ,IFNγ)滴鼻免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答,探讨IL-2和IFNγ的佐剂效应.方法 将48只BALB/c小鼠随机均分为6组:rTgPGAM2组(30 μg)、IL-2组(500 IU)、IFNγ组(1 000 IU)、rTgPGAM2(30 μg)+IL-2(500 IU)组和rTgPGAM2 (30 μg)+IFNγ(1 000 IU)组和对照组(20μl PBS),免疫途径均为滴鼻免疫,共免疫3次.末次免疫后第14天,颈椎脱臼处死小鼠,CCK-8法检测各组小鼠脾淋巴细胞增殖活性,ELISA法检测脾淋巴细胞培养上清中IL-2、IFNγ、IL-4和IL-10水平.结果 经rTgPGAM2刺激后,与对照组比较,各免疫组小鼠脾淋巴细胞刺激指数(Stimulation index,SI)均显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组(P＜0.01或P＜0.05)；经ConA刺激后,仅IL-2组SI显著高于对照组(P＜0.01).各免疫组小鼠脾淋巴细胞培养上清中IL-2和IFNγ含量均显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01),rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ组显著高于rTgPGAM2组(P＜0.01或P＜0.05)；rTgPGAM2组及其联合IL-2或IFNγ组IL-4含量显著高于对照组(P＜0.05)；而IL-10的含量,只有IFNγ组和rTgPGAM2+ IFNγ组显著高于对照组(P＜0.05).结论 rTgPGAM2联合IL-2或IFNγ鼻内免疫小鼠诱导的脾淋巴细胞免疫应答优于rTgPGAM2单独免疫,表明IL-2和IFNγ具有良好的佐剂效应,IL-2的佐剂效应更佳.
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弓形虫排泄-分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的脾与肠相关淋巴组织细胞免疫效应及动态变化
目的 观察弓形虫与Vero细胞共培养提取的排泄-分泌抗原(ESA)鼻内免疫BALB/c小鼠诱导的脾及肠相关淋巴组织(GALT)细胞免疫效应及动态变化.方法 84只BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组,实验组以ESA(20 μg/只)为抗原,对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液(20 μl/只),鼻内免疫2次,间隔2周.末次滴鼻后第1、2、3、4、5、6、7周处死小鼠,分离脾、派伊尔结(PP)及小肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数.结果 实验组小鼠脾淋巴细胞第3周达高峰,第1、2、3周明显高于对照组;PP淋巴细胞明显增生,第3周达高峰,第1、2、3、4、5周显著高于对照组;IEL第2周增生达高峰,第1～3周显著高于对照组.结论 弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导不同黏膜部位及系统特异性的细胞免疫应答,且可持续较长时间.
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STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用
目的 探讨可溶性速殖子抗原(STAg)联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用及蜂胶的适宜剂量.方法 将60只BALB/c小鼠随机分为5组,每组12只,分别用20 μg STAg、20 μg STAg+5 μg蜂胶、20 μg STAg+10 μg蜂胶、20 μg STAg+20 μg蜂胶及20 μg STAg+40 μg蜂胶鼻内免疫小鼠2次,间隔14 d.末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击,4×104个/只,观察小鼠存活情况.攻击后第30天处死全部小鼠,分离计数小鼠脑、肝组织内速殖子和肠系膜淋巴结淋巴细胞(MLNL)、脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平.结果 随着蜂胶剂量的增加,小鼠脑、肝速殖子数呈下降趋势,20 μg STAg+40 μg蜂胶组显著低于20 μg STAg组,脑、肝组织减虫率分别为46.10%和60.11%;MLNL和脾T淋巴细胞增殖活性提高,其中20 μg STAg+40 μg蜂胶组小鼠MLNL和脾T淋巴细胞数分别为(2.09±0.24)×107和(1.89±0.21)×107,均显著高于20 μg STAg组;肺冲洗液、粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG抗体水平呈增高趋势,但各组间差异无统计学意义.结论 STAg联合蜂胶佐剂鼻内免疫小鼠可有效诱导抗弓形虫感染的保护作用,适宜的蜂胶剂量为40 μg.
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重组人干扰素γ联合弓形虫STAg鼻内免疫小鼠的免疫保护作用
目的 观察重组人干扰素γ(IFNγ)联合可溶性速殖子抗原(STAg)鼻内免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及抗弓形虫感染作用.方法 将BALB/c小鼠随机分为STAg组、STAg+IFNγ组和对照组,分别用20μg STAg、20μg STAg+1 000 U IFNγ和20 μl PBS鼻内免疫2次,间隔14 d.末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子灌胃攻击(4×104个/只),观察小鼠存活情况,并计算存活率,攻击后第43天处死全部小鼠,计数肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷,分离并计数肠上皮淋巴细胞(iIELs)、派伊尔氏结(PP)和脾淋巴细胞,ELISA法检测小鼠粪便弓形虫特异性sIgA和血清IgG水平.结果 IFNγ联合STAg鼻内免疫能保护小鼠抵抗弓形虫攻击,小鼠存活率(93%)明显高于STAg组(60%)和对照组(47%);小鼠iIELs(1.81×105)、PP(3.21×107)和脾(3.01×107)淋巴细胞均显著增生,明显高于STAg组和对照组;粪便中sIgA水平(A492=0.435)显著高于对照组(A492=0.047),血清IgG水平(A492=0.233)显著高于STAg组(A492=0.193)和对照组(A492=0.115);肝、脑组织内弓形虫速殖子虫荷显著减少,分别比对照组减少80.90%和64.50%.结论 IFNγ联合STAg鼻内免疫效果优于单独STAg免疫,IFNγ能协同STAg有效诱导黏膜和系统免疫应答,提高弓形虫攻击小鼠的存活率,降低肝、脑组织内虫荷.
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重组弓形虫热休克蛋白70鼻内及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答比较
目的 比较重组弓形虫热休克蛋白70(rTgHSP70)滴鼻及皮下免疫小鼠诱导的免疫应答及其持续时间.方法 将90只BALB/c小鼠随机分为3组:滴鼻组用20μg rTgHSPT0滴鼻,皮下组用80μg rTgHSPT0皮下免疫,间隔2周加强免疫1次,对照组不处理.末次免疫后第1、2、3、4、5、6周,每组分别处死小鼠5只,ELISA法检测血清IgG水平、鼻咽和肠冲洗液sIgA水平;分离脾淋巴细胞和肠上皮内淋巴细胞(IEL)并计数.结果 滴鼻组小鼠血清IgG水平第1-6周高于皮下组和对照组,其中第3-5周差异有统计学意义(P＜0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠第3-5周,皮下组小鼠第4-5周鼻咽冲洗液sIgA水平显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠小肠冲洗液sIgA水平第1-6周显著高于皮下组和对照组(P均＜0.001);皮下组小鼠第3、4周显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠脾淋巴细胞数量第2-4周显著高于对照组(P＜0.000 1),3-4周显著高于皮下组(P＜0.001);皮下组小鼠第2-4周显著高于对照组(P＜0.001).滴鼻组小鼠IEL数量第1-6周显著高于对照组(P＜0.000 1),第3～4周显著高于皮下组(P＜0.000 1),皮下组小鼠第1-5周显著高于对照组(P＜0.05).结论 rTgHSP70皮下和滴鼻免疫小鼠均能诱导有效的黏膜和系统免疫应答,且滴鼻免疫的效果优于皮下免疫,是rTgHSP70更为有效的免疫途径.
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ESA与STAg联合滴鼻免疫小鼠诱导的特异性免疫应答
目的 观察弓形虫排泄分泌抗原(ESA)与可溶性速殖子抗原(STAg)联合或单独滴鼻免疫小鼠的免疫应答效果,筛选弓形虫黏膜疫苗候选抗原.方法 将40只BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只.实验组分别用20μg STAg、30 μg ESA及二抗原联合(15μg ESA与10 μg STAg)滴鼻免疫2次,间隔14d,对照组用PBS以20μl/只滴鼻.于末次免疫后第14天,取血清,收集小肠冲洗液,检测特异性抗体,分离肠上皮内淋巴细胞(iIEL)和脾淋巴细胞并计数.结果 整个实验期间,各组小鼠健康状况良好,体重逐渐增加.STAg组、ESA组及联合抗原组小鼠黏膜、血清中特异性抗体水平依次升高,脾淋巴细胞和iIEL增殖反应逐渐增强.联合抗原组和ESA组血清IgG抗体和小肠冲洗液sIgA升高尤为显著.同时,联合抗原组、ESA组脾淋巴细胞和iIEL增生显著高于对照组.结论 ESA单独或联合STAg滴鼻免疫小鼠均能激发弓形虫特异性黏膜及系统免疫应答.两种抗原联合免疫的研究,将有助于制定更加完善的弓形虫疫苗研究策略.
