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粘膜相关淋巴组织的结构特征及粘膜疫苗的研究进展
始于20世纪初的粘膜免疫研究经过近百年的发展,已经取得了很大的进步,对粘膜免疫系统结构的认识日趋深化,粘膜疫苗的研究也获得了重大进展,现在已有效果良好的粘膜疫苗应用于人体.然而有关粘膜免疫的作用特点仍存在很多不明了的地方,一些新研制的人用粘膜疫苗在投放市场后相继出现各种问题,这说明相关的研究仍需不断深入以解决前述问题.
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不同剂量弓形虫ESA鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答
目的 观察不同剂量弓形虫排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens, ESA)鼻内免疫小鼠诱导的粘膜及系统免疫应答,确定适宜免疫剂量. 方法 40只BALB/c小鼠,雌雄各半,随机分为5组,每组8只.分别用5、10、20和30 μg ESA滴鼻免疫小鼠2次,间隔14 d,对照组用20 μl/只PBS滴鼻.于末次免疫后第14 d,颈椎脱臼处死小鼠,ELISA法检测鼻咽冲洗液和小肠冲洗液sIgA、血清IgG抗体水平,分离并计数肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, iIEL)、肠系膜淋巴结淋巴细胞(mesenteric lymph node lymphocytes, MLNL)及脾淋巴细胞. 结果 实验期间,小鼠健康状况良好.随鼻内免疫ESA剂量的增加,特异性抗体水平不同程度的升高,MLNL、iIEL及脾淋巴细胞也显示不同程度的增生性应答.其中,30 μg组小鼠血清IgG、脾淋巴细胞数量与10 μg组、5 μg组和PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);30 μg组小肠冲洗液sIgA、鼻咽冲洗液sIgA、iIEL和MLNL数量,20 μg组小肠冲洗液sIgA和MLNL数量与5 μg组及PBS组比较,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);20 μg组血清IgG与PBS组比较差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 20 μg和30 μg ESA鼻内免疫能有效诱导粘膜及系统免疫应答.
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弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠诱导的Peyer's patches持续性细胞免疫应答
目的 以可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)和霍乱毒素 (cholera toxin,CT)佐剂制备的弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫小鼠,观察肠粘膜诱导部位Peyer's patches(PP)的细胞免疫应答及持续时间,探讨其免疫机制.方法 BALB/c小鼠96只,随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20 μg/只)为抗原,CT(1 μg/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组PBS滴鼻.滴鼻2次(间隔2周)后,每组6只小鼠分别于第1、2、3、4、6、8、10、12周处死.计数PP个数,制备PP淋巴细胞悬液,计数并涂片;免疫细胞化学法检测CD4+、CD8+T细胞亚群.结果 实验期间两组小鼠PP数目均无明显变化;实验组免疫后PP淋巴细胞数量明显增生,第2周达高峰,第1、2、3周显著高于对照组(P＜0.05),其中以CD4+T细胞增生为主,第1周～第8周高于对照组(P＜0.01),CD8+T细胞第1周～第4周显著增高(P＜0.01),CD4+/CD8+比值无显著变化(P＞0.05).结论 弓形虫复合粘膜疫苗滴鼻免疫BALB/c小鼠可有效诱导肠PP部位持续性的免疫应答,从而激活肠粘膜效应部位淋巴细胞的抗弓形虫感染作用.
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小鼠腹水中弓形虫排泄分泌抗原鼻内免疫小鼠诱导的免疫应答
目的 观察弓形虫感染小鼠腹水中分离的排泄-分泌抗原(excreted/secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠对不同粘膜部位和系统的免疫效应.方法 将5～6周龄BALB/c小鼠随机分为4组,每组10只,实验组分别用从感染弓形虫后24、48、72 h小鼠腹水中提取的ESA 20 μg/只鼻内免疫小鼠2次,间隔2周;对照组用20 μl/只PBS滴鼻.观察小鼠健康和死亡情况,记录体重.末次免疫后第3周处死小鼠,计数PP(Peyer's patches)个数;分离PP淋巴细胞、脾淋巴细胞、小肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL)及肠系膜淋巴结细胞(mesenteric lymph node lymphocyte,MLNL)并计数.眼眶采血和收集直肠内粪便,ELISA检测血清特异性IgG水平及粪便sIgA.结果 72 h ESA组小鼠免疫后健康状况较差,体重逐渐降低,死亡4只;其他组小鼠体重仍呈增高趋势.各实验组小鼠IEL、MLNL、脾淋巴细胞以及PP淋巴细胞的增殖活性均高于对照组(P＜0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P＜0.01).免疫后第3周,各实验组小鼠血清IgG、粪便sIgA水平均高于对照组(P＜0.05),72 h和48 h ESA组高于24 h ESA组(P＜0.01).结论感染后不同时间提取的腹水弓形虫ESA鼻内免疫小鼠均可诱导不同粘膜部位及系统特异性的免疫应答,48 h ESA的免疫效果好.
关键词： 弓形虫 排泄-分泌抗原(ESA) 粘膜免疫 鼻内免疫 粘膜疫苗 -
TSo联合IFN-γ鼻内免疫小鼠的抗弓形虫感染保护作用
目的研究速殖子超声裂解物(TSo)联合IFN-γ鼻内免疫小鼠抗弓形虫感染的保护作用. 方法将6～7周龄BALB/c小鼠100只随机分为4组,每组25只.分别用PBS 10 μl、20 μg TSo、500 U IFN-γ和20 μg TSo+500 U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,间隔2周.末次免疫后第10 d,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击.分别于攻击后第7、10、13、16、19 d处死小鼠,计数脑、肺、肝组织内弓形虫速殖子,观察其动态变化. 结果 TSo+IFN-γ鼻内免疫组可使受攻击小鼠脑、肺、肝组织内弓形虫速殖子数减少,攻击后第13和19 d TSo+IFN-γ组小鼠脑内速殖子数比PBS组分别减少63.92%和58.39%(P均<0.05). 结论 TSo+IFN-γ鼻内免疫小鼠可产生有效的保护性免疫,可减少脑、肺、肝组织内弓形虫速殖子数.组织内速殖子计数可以作为抗弓形虫感染保护力的重要评价指标.
关键词： 弓形虫 速殖子超声裂解物(TSo) IFN-γ 鼻内免疫 粘膜疫苗 -
幽门螺杆菌粘膜疫苗的研究进展
胃窦部幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染可引起许多胃十二指肠疾病,包括B型(胃窦)胃炎、消化性溃疡、胃粘膜相关淋巴组织淋巴瘤和胃癌.临床上对Hp感染的治疗主要采用以抗生素为主的治疗方案,虽可在一定程度治愈Hp感染,但不能预防Hp再感染,同时抗生素的使用可导致Hp耐药菌株的产生和带来许多严重的副作用.而Hp疫苗可以解决这一难题,使得Hp疫苗接种成为了根治Hp感染和预防再感染的唯一方法.目前,Hp疫苗的研究进展迅速,粘膜疫苗以其有效的保护性免疫效果成为这一研究的热点.我们对Hp粘膜疫苗的组成、接种途径、免疫效果及保护性免疫机制等方面的研究进展加一综述.
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056 粘膜佐剂的研究进展
哺乳动物的粘膜免疫系统是一个完整的淋巴细胞网络,正常情况下可对经粘膜侵入的外来有害抗原物质发生免疫应答.由粘膜途径进行接种疫苗可在感染部位直接诱导局部保护性免疫应答,防止感染和疾病.大多数免疫原性弱的抗原经粘膜供给时易引起免疫耐受,阻碍了粘膜疫苗的进一步研制和开发.为了克服粘膜疫苗使用中面临的问题,人们设计出多种粘膜佐剂以增强相应抗原经粘膜供给时促进机体发生免疫应答的能力.本文将重点介绍现在研究较多的一些粘膜佐剂类型,如微生物及其代谢产物、细胞因子、CpG基序及化学合成类佐剂等的研究情况.深入了解粘膜佐剂作用的分子机理,有益于促进安全、有效的粘膜疫苗的开发.
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粘膜疫苗在胃肠道感染性疾病中的应用
肠粘膜疫苗是目前预防和治疗幽门螺杆菌感染(H.pylori)、各种肠道感染等消化系统疾病的新方法,并在治疗上取得了较好的疗效,此文简要综述当前研制的粘膜疫苗在胃肠道感染疾病中的应用.
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柯萨奇病毒A16粘膜疫苗的制备及其免疫效果研究
目的 利用同源重组技术将柯萨奇病毒A16型(Coxsachievirus A16,CA16)VP1基因重组入枯草芽孢杆菌基因组,进而将VP1蛋白展示在芽孢表面制备CA16粘膜疫苗.将疫苗滴鼻方式免疫小鼠,检测小鼠血清中VP1特异性抗体滴度,体外中和实验检测抗体的保护作用.方法 将枯草芽孢杆菌CotB基因与VP1基因连接后插入整合质粒pDG1662得到重组质粒pDG 1662-CotB-VP1,电转化法将线性化重组质粒转化枯草芽孢杆菌1A771,抗生素抗性筛选,PCR、Western-Blot、免疫荧光鉴定VP1基因重组及蛋白表达情况.将该疫苗滴鼻免疫小鼠,ELISA法检测血清抗体滴度,体外中和实验分析该抗血清的中和活性.结果 VP1基因成功重组入枯草芽孢杆菌基因组中并将蛋白展示在芽孢表面.该疫苗免疫小鼠后有效的诱导了小鼠体液免疫反应,并且该抗血清在体外中和实验中表现了较好的中和活性.结论 CA16 VP1蛋白展示在枯草芽孢杆菌芽孢表面制备的疫苗能刺激小鼠产生具有保护作用的中和抗体,为研制CA16粘膜疫苗奠定了基础.
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滴鼻免疫有效的诱导粘膜及系统免疫反应
为了探讨粘膜疫苗滴鼻免疫对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响,将BALB/c小鼠随机分为三组,每组15只,FSM-2117或FS-5416 4×107cfu/只经滴鼻途径免疫小鼠,间隔两周,4次免后7天活杀,收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清,ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIg和AIgG;分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP淋巴细胞,细胞中加入全菌破碎抗原共培养,于不同时间取出细胞,提取RNA做RT-PCR.两株菌苗经鼻内免疫均诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA、IgG的显著增加(P＜0.01);免疫动物的NALT、NP、PP结淋巴细胞在体外经抗原刺激后均在不同时间出现IFN-γ和IL-4mRNA的表达,而TGF-β mRNA的表达在免疫前后无明显变化.疫苗经鼻粘膜免疫可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生,鼻粘膜是一个安全有效的免疫途径.
