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食品中常见有机磷农药残留的检测方法
为有效解决食品安全事件频发问题,本文对食品中常见的有机磷农药残留的检测方法进行了介绍和分析。目前的检测方法包括传统色谱法(气相色谱法、高效液相色谱法)、快速检测法(荧光免疫法、放射免疫法、酶免疫分析法、流动注射免疫)与快速酶抑制检测法。
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HIV-1CN54合成gag DNA疫苗鼻内免疫BALB/c小鼠诱发的免疫应答
目前80%的HIV感染是通过粘膜表面(主要是肠道和生殖道)发生的.粘膜免疫保护粘膜表面不感染HIV,除抗体的作用之外,CD8+ CTL细胞应答也发挥重要作用.HIV-1CN54是B′/C重组毒株,中国与欧盟合作以其为代表毒株研制疫苗,以期预防和控制艾滋病.我们以前的研究表明用HIV-1CN54合成gag(syngag)的DNA疫苗进行肌肉注射免疫小鼠诱发比较强的体液和细胞免疫应答,本研究则采用鼻内接种DNA疫苗的方法,观察是否诱发系统和粘膜的免疫应答.
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舌下免疫治疗对螨性支气管哮喘的临床观察
支气管哮喘是常见的呼吸道疾病,随着哮喘药物种类和用量的增加,哮喘的患病率反而增高.注射免疫治疗效果明显已得到公认.然而其注射疗程长,病人痛苦而难以坚持.舌下免疫治疗具有简便、安全等特点,现报告如下.1对象
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乙型肝炎疫苗注射免疫失败的常用原因分析
目的 总结乙型肝炎疫苗注射免疫失败的常用原因.方法 选取2006年1月至2016年1月期间,在我镇卫生院卫生防疫科进行乙型肝炎疫苗接种的人群有8000人作为观察对象,经过随访乙型肝炎五项检测,发现有个别人没有产生抗体,分析其原因.结果 8000人中,有75人没有产生抗体,发生概率为0.94%,发生的原因较多.结论 乙型肝炎疫苗注射后不产生抗体的发生概率较低,原因较复杂,应做好对免疫人群的解释教育工作.
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注射免疫时易出现的问题及原因分析
禽的免疫有很多种,但是根据禽的年龄和疫苗的种类不同,大多的疫苗必须是通过注射来进行免疫,注射免疫可以出现好多意想不到的问题,现在简述如下.
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直肠接种卡介苗可诱导出与注射接种相似的免疫应答和保护作用
本文通过直肠途径接种卡介苗(BCG),并与肠胃外途径接种进行比较对结核分枝杆菌(结核杆菌)的免疫应答及保护作用.实验选用动物为BALB/c小鼠、远交系Hartley豚鼠和恒河猴;BCG为Pasteur株1173P2;攻击用菌种为结核杆菌H37Rv.直肠免疫小鼠、豚鼠及恒河猴时分别接种2×109、2×1010和6×1010活菌单位的BCG;皮下注射免疫小鼠时接种100 μl BCG(含108活菌单位);皮内注射免疫豚鼠和恒河猴时分别接种5×106和1×109活菌单位的BCG.在两条途径免疫后不同时间,取豚鼠和恒河猴脾细胞在96孔微孔板培养,用3H TdR掺入法测定对PPD刺激的增殖反应.
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免疫途径及载体对乙肝病毒DNA疫苗免疫效果影响的研究(摘要)
目的探讨DNA载体结构及接种途径对DNA疫苗免疫效果的影响。方法分别构建插入HBV表面抗原编码基因的表达载体pcDNA1.1/SA(无抗性基因)和pcDNAI/Amp/SA(含氨苄青霉素抗性基因),肌注小鼠后比较其诱生特异性免疫应答的能力;同时比较不同接种途径(肌内、皮内、皮肤划痕)及CpG免疫刺激元件(ISS)对DNA疫苗诱生免疫效果的影响。结果pcDNAI/Amp/SA的免疫效果优于pcDNA1.1/SA。pcDNA1.1/SA的免疫效果可被ISS增强,而pcDNAI/Amp/SA诱生特异性免疫应答的能力则可被ISS抑制;诱生免疫应答的能力以肌肉注射强,皮内注射免疫其次,皮下划痕法较弱。结论不同HBsAg表达载体诱生免疫应答的能力不尽相同;CpG免疫刺激元件在决定DNA疫苗免疫原性中起重要作用,可增强不含相应结构DNA疫苗的免疫效果;皮内注射可诱发与肌内接种相似的免疫应答,是一种简便、有效的免疫接种途径。
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鼻粘膜免疫的研究进展
大部分病毒、细菌引起的感染发生在胃肠道、呼吸道及生殖道等粘膜表面,疫苗注射免疫虽然可产生较强的系统免疫反应,但对粘膜感染无保护作用.
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SARS病毒N蛋白真核表达质粒的构建及其诱导的体液免疫应答
构建SARS病毒核衣壳蛋白(N)的真核表达质粒,并研究其在小鼠体内诱导的体液免疫应答.采用PCR方法体外扩增SARS病毒N蛋白基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-N重组质粒;大量制备该重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,间接ELISA法测定免疫鼠IgG抗体效价.成功构建了重组表达质粒pVAC-N,免疫小鼠后可诱导产生出特异性的IgG抗体.构建的真核表达质粒pVAC-N能诱导小鼠产生特异性抗体,为SARS疫苗的进一步研究打下基础.
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重组弓形虫GRA4的原核表达与纯化
构建能在pET原核系统中高效表达的弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化.采用PCR方法自pMD1 8-GRA4(pGEX)重组子中扩增GRA4基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-23a(+),转化E.coliBL21(DE3),以His·BindTM柱亲和层析纯化表达产物;用此纯化重组蛋白加CFA经皮下注射免疫小鼠三次,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度.成功构建了重组表达质粒pET-GRA4,SDS-PAGE显示其表达产物约为40kD,主要以包涵体的形式存在,经亲和纯化后的pET-GRA4重组蛋白产量大、纯度高,能被兔抗弓形虫免疫血清所识别;免疫小鼠后亦可诱导产生出高滴度的特异性IgG抗体.利用pET原核系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究奠定了基础.
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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究
用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性作用.大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照.于末次免疫4周后每组各取5只作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFN-γ及IL-4的含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),其余的作攻毒试验后观察小鼠存活情况.脾淋巴细胞增殖各组间无显著差异(P>0.05);T细胞亚群分析,pVAC-GRA4组CD3+CD4+T细胞无明显改变(P>0.05),CD3+CD8+T细胞数明显增加(与pVAC对照组比P<0.05,与空白对照组比P<0.01),其CD3+CD4+/CD3+CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);免疫鼠细胞因子IFN-γ及IL-4检测,pVAC-GRA4免疫组IFN-γ比对照组略高,但差异不显著(P>0.05),而IL-4的检测值各组间无明显变化(P>0.05);pVAC-GRA4组虽可诱导产生GRA4蛋白抗原特异性的IgG抗体,但抗体滴度不高;抗攻击感染结果,pVAC-GRA4免疫组小鼠的存活率明显高于两个对照组,其死亡小鼠的平均存活天数与空白对照组相比,差异显著(P<0.05).用pVAC-GRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫RH强毒株攻击感染的部分保护性作用.
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幽门螺杆菌感染免疫防治的研究进展
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)是革兰氏阴性菌,它是全世界普遍感染人类的细菌之一,感染后不予治疗将导致长期甚至终生在胃内定植,并能引起许多相关的疾病,如慢性胃炎、消化性溃疡、胃腺癌、胃B细胞淋巴瘤等[1].目前的抗Hp治疗包括抗分泌加抗生素.这些治疗在80%~90%的病人中有效,但由于联合疗法费用高,病人难以接受,从而导致病人不配合治疗,且易产生耐药株等问题.要解决这些问题,预防性疫苗看起来是适当的方法[2].Minoura等[3]将妊娠C57BL/6母鼠实验性感染Hp,在产后2周几乎所有小鼠都有Hp感染.认为Hp感染大多数发生在儿童时期,感染的母亲被认为是主要的传染源.Eisenberg等[4]用单剂量疫苗和完全弗氏佐剂或疫苗和不完全弗氏佐剂皮下注射免疫新生期小鼠获得与成年鼠相似的部分免疫保护,这些研究表明有效的疫苗应用于新生儿可预防围产期感染Hp.众所周知,大多数疫苗在出生后一年里接种,这个时期被认为是免疫特权期,故发展预防性Hp疫苗对控制Hp感染,具有十分广阔的前途.
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黏膜免疫系统相关免疫细胞、免疫分子及淋巴细胞归巢研究进展
黏膜是病原菌重要的入侵门户,通过黏膜免疫可以从感染的源头上阻止病原菌的侵入.早在20世纪80年代,随着生物工程技术、分子生物学、药物投递系统及黏膜免疫调节理论的发展,以及对注射疫苗的不易接受性,人们对黏膜免疫的兴趣陡然增加.本世纪初WHO提出将采取更有效的免疫方法来减少注射免疫所带来的器材污染、费用高昂、容易耐受等问题[1].
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注射免疫接种疫苗致婴儿死亡1例
患儿,男,1岁,既往体健,按免疫接种程序需注射吸附无细胞百白破联合疫苗和重组乙型肝炎疫苗(酵母).2006年5月28日在镇卫生院门诊注射疫苗(这两种疫苗均系第3次注射,每次间隔1月),右上臂皮下注射无细胞百白破联合疫苗0.5 mL(武汉生物制品研究所,批号为20050521-3,有效期至2007年5月),左臂肌肉注射重组乙型肝炎疫苗(酵母)0.5 mL(深圳康泰生物制品有限公司,批号为20060101-6,有效期至2009年1月).次日患儿左臂出现红色丘疹,精神欠佳,体温38℃,轻度腹泻,给予输液治疗.
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EHF疫苗不同途径免疫后血清及黏膜抗体应答情况
目的探讨EHF疫苗经不同剂量和途径免疫后血清IgG及黏膜IgA产生情况,以探讨合适的免疫剂量和接种途径.方法以不同剂量EHF双价灭活疫苗分别经皮下和灌胃免疫小鼠,共3次(第0、5、10天),末次接种后5 d收集血清和小肠冲洗液,用间接免疫荧光法(IFA)检测血清EHF IgG抗体和小肠冲洗液IgA抗体.结果皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,灌胃免疫未见抗体产生,1.4 TCID50的EHF疫苗剂量在皮下注射组血清IgG和小肠冲洗液IgA有100%阳性率.结论 EHF疫苗皮下注射能诱导血清特异性IgG和黏膜IgA的产生,1.4 TCID50的剂量为较佳剂量.