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习惯性流产患者的抗弓形虫IgG抗体检测
弓形虫是一种人畜共患寄生虫,人群平均感染率为4%~9%.孕妇受弓形虫侵袭时,约有40%的可能传播给胎儿,造成胎儿的畸形、缺陷、先天愚型、小样儿、流产、早产、死胎等,因此,弓形虫是围产期医学中一个重要的原虫病[1].为了探讨弓形虫感染与习惯性流产的关系,我们应用ELISA法对192名习惯性流产患者血清中抗弓形虫IgG抗体水平进行了检测.
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弓形虫感染孕妇血清IL-12和IL-18含量测定
在机体抵抗弓形虫感染过程中,血液细胞因子的作用日益受到人们的重视.为探讨白介素12(IL-12)和白介素18(IL-18)在孕妇弓形虫感染孕妇血清中的表达水平及相互关系,了解患者免疫功能状态,以便为弓形虫感染孕妇的诊断和临床治疗提供参考,作者对弓形虫感染孕妇血清中IL-12和IL-18的含量变化进行了检测.
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家蝇蛹抗弓形虫抗菌肽的分离纯化
目的 从家蝇蛹血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇蛹大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和AKTATM purifier层析等步骤,将家蝇蛹抗菌肽进行分离纯化,采用血细胞计数法和MTT比色法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽.结果 经Resource S阳离子柱层析,测定280 nm处紫外吸收值,在保留体积为9.4 ml处出现1个紫外吸收峰,经检测对弓形虫速殖子有杀伤作用,再将其用于Superdex G75凝胶柱层析后,测定280 nm处紫外吸收值,出现6个紫外吸收峰,发现第6个峰具有抗弓形虫作用.结论 家蝇蛹血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽.
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家蝇幼虫抗菌肽对弓形虫速殖子DNA的损伤作用
目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽,观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽,采用流式细胞术(FCM)分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响.结果 通过DNA含量直方图可以看出,实验组的速殖子数少于对照组,且两组分布参数存在较明显差异.正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少,抗菌肽组则相反,处于M1期的较M2期的多,且M1峰值明显前移.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫.
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青蒿素对大鼠血管平滑肌肌张力的影响
青蒿素(artemisinin)是从菊科植物黄花蒿中提取分离到的一种具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物.实验表明,该药具有抗疟、抗孕、抗纤维化、抗血吸虫、抗弓形虫、抗心律失常和肿瘤毒性等作用[1,2].
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细胞免疫在弓形虫感染中的作用
弓形虫感染早期首先激活的是先天性免疫反应,如:NK和Mψ细胞对弓形虫非特异性的杀伤作用,但重要而有力的抗弓形虫效应来自于细胞免疫,体液免疫起一定的协同作用.
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肠上皮内淋巴细胞抗弓形虫感染作用
肠道上皮层是胃肠道内外环境的分界面,肠道相关淋巴组织(gut-associated lymphoid tissue,GALT)是抗一系列感染因子,包括口服获得性寄生虫--弓形虫的一道免疫防御屏障[1],肠黏膜主要的T细胞群是肠上皮内淋巴细胞(intraepithelial lymphocyte,IEL).
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家蝇幼虫抗弓形虫抗菌肽分离纯化
目的 从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化具有抗弓形虫作用的抗菌肽.方法 通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,将家蝇幼虫抗菌肽进行分离纯化,采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法和血细胞计数法筛选对弓形虫速殖子有抑制作用的抗菌肽.结果 经Resource S阳离子柱和Superdex G75凝胶柱层析后,筛选出2种对弓形虫速殖子有杀伤作用的抗菌肽.结论 家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,而且不止一种,但其效果有所不同.
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CD4+T细胞亚群在弓形虫感染中的作用
弓形虫是一种专性细胞内寄生的机会致病原虫,对中间宿主的选择极不严格,可以导致世界性分布的人兽共患病,对人类健康和畜牧业的发展造成严重威胁,全面了解弓形虫感染的致病机理,寻找预防和控制感染的有效途径尤为重要.弓形虫感染后,细胞免疫与疾病的转归密切相关,参与细胞免疫的细胞有T淋巴细胞、自然杀伤细胞、巨噬细胞等.T细胞按其CD分子表型和功能的不同可分为CD4+T细胞和CD8+T细胞,CD4+T细胞可以通过分泌多种细胞因子在抗弓形虫免疫中发挥重要作用.本文就CD4+T细胞及其分泌的细胞因子在感染中的作用进行叙述.
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由抗独特型抗体的SAG2内影像引起的小鼠抗弓形虫的保护性免疫
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扁桃酸治疗小鼠急性弓形虫病的效果
目前对弓形虫病的治疗仍以乙胺嘧啶和磺胺嘧啶联合应用为主,但其毒副作用严重,且复发率较高[1].因此,寻找高效低毒的抗弓形虫药物是亟待解决的问题.扁桃酸体外抗弓形虫的研究已有报道[2].本实验详细观察扁桃酸从不同途径给药对小鼠急性弓形虫病的治疗作用.
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孕期弓形虫感染的诊断、治疗和预防
据统计全球约有10亿人被弓形虫感染,我为的近年调查表明人群中弓形虫血清阳性率约5%,因此感染人数可能约有6000万.所幸的是极大多数免疫功能正常的成人或儿童被弓形虫感染后常无症状或仅有轻微症状,且多能自愈并获永久免疫力.但先天感染的胎儿、儿童以及免疫缺陷者被感染后,则预后极为严重.为此弓形虫病防治的重点对象理应是免疫缺陷者和尚无抗弓形虫免疫性的孕妇.对免疫缺陷者弓形虫病的严重性已为大家所认识,但对重点监护弓形虫血清学阴性孕妇的重要性以及如何正确处理,尚缺乏足够的认识,有的甚至误导而给病家带来不应有的严重损失.为此,笔者述以供参考.
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婴儿期持续性黄疸、肝脏肿大、谷氨酰转肽酶降低
1病史资料
患儿,女,1个月10 d。因“皮肤黄染1月余,腹胀15 d”入院。患儿于生后第1天起即发现皮肤、颜面黄染,持续至今未退,病程中无加重或减轻,近15 d来吐奶、呛奶加重,伴腹胀,外院行肝功能检查示:血总胆红素(TBIL)46.8μmol/L,直接胆红素(DBIL)20μmol/L,丙氨酸氨基转移酶(ALT)54 U/L,门冬氨酸氨基转移酶(AST)92 U/L。起病后精神、饮食一般,大便约5次/d,为浅黄-白色稀便,小便深黄色。以“婴儿肝炎综合征”收入院。患儿系G1P1,足月顺产,出生体质量2000 g,母乳喂养,父母非近亲结婚,否认家族遗传病史及传染病史。入院查体:体温37℃,脉搏136次/min,呼吸48次/min,体质量2.5 kg,头围34 cm,神志清。全身皮肤中度黄染,前囟1 cm×1 cm,平软。巩膜明显黄染,双侧瞳孔等大等圆,直径2 m m,对光反射灵敏。双肺呼吸音清,未闻及明显干湿性啰音,心音有力,心率136次/min,律齐,未闻及明显病理性杂音,腹膨隆,腹壁静脉显露,肝右肋下3 cm,质中,脾左肋下2 cm,质中,肠鸣音正常。实验室检查:血常规白细胞计数(WBC)12.1×109/L,中性粒细胞百分比38.4%,淋巴细胞百分比41.2%,血红蛋白(Hb)82.2 g/L,血小板计数(PLT)308×109/L;尿常规未见异常;粪常规淡黄色,糊状,红细胞、白细胞阴性,脂肪球(+);ALT 57 U/L,AST 101 U/L,白蛋白28.9 g/L,TBIL 99.1μmol/L,DBIL 76.20μmol/L,碱性磷酸酶385 U/L,谷氨酰转肽酶(γ-GT)19 U/L,钾离子6 mmol/L,钠离子135.1 mmol/L,氯离子102.4 mmol/L,钙离子1.73 mmol/L,肌酐31μmol/L,总胆汁酸87.6μmol/L,丙酮酸8.96 mg/L,乳酸4.68 mmol/L,血氨108μmol/L,血糖2.49 mmol/L,血甲胎蛋白>50000 ng/ml;凝血酶原时间18.2 s,凝血酶原活动度53.0%,国际标准化比值1.53,纤维蛋白原2.9 g/L,活化部分凝血活酶时间93.8 s,凝血酶时间13.8 s。血气分析pH值7.210,二氧化碳分压34.1 mmHg,氧分压53.5 mmHg,实际碳酸氢根13.3 mmol/L,标准碳酸氢根14.0 mmol/L,全血剩余碱-13.40 mmol/L,细胞外液剩余碱-14.5 mmol/L,二氧化碳总量14.4 mmol/L,氧饱和度81.2%;血免疫球蛋白G(IgG)3.45 g/L,IgA 0.24 g/L,IgM 0.50 g/L,补体C30.61 g/L,补体C40.15 g/L;C反应蛋白(CRP)<3.36 mg/L;红细胞沉降率(ESR)14 mm/h;HBsAg(-);输血全套(-);抗巨细胞病毒-IgG(+),抗巨细胞病毒-IgM(-),抗单纯疱疹病毒-I型-IgG(+),抗单纯疱疹病毒-I型-IgM(-),抗风疹病毒-IgG(+),抗风疹病毒-IgM(-),抗弓形虫-IgG(-),抗弓形虫-IgM(-);尿巨细胞病毒培养阴性;淋巴细胞亚群,总T淋巴细胞64.9%,总B淋巴细胞23.4%,辅助/诱导性T淋巴细胞47%,抑制/细胞毒性T淋巴细胞13%,自然杀伤细胞13%, Th/Ts 3.64。心电图正常;超声心动图未见异常;磁共振胆道成像(MRCP),肝脾体积稍增大,其内未见明显异常信号,胆总管、肝总管及其分支未见明显扩张,胆囊形态、大小、位置正常;腹部超声:肝脏切面形态正常,实质光点分布尚均匀,肝内外胆管不扩张,脾厚2.2厘米,内未见异常回声;肝胆核素显像:肝脏摄取功能受损,胆道排泄障碍,肠道内未见放射性物质;十二指肠引流胆汁成分分析:总胆红素140.2μmol/L 直接胆红素80.6μmol/L,总胆固醇0.31 U/L,总胆汁酸266.7 U/L,淀粉酶416 U/L,脂肪酶18647.0 U/L。 -
抗弓形虫药物及机理研究进展
弓形虫病(Toxoplasmosis)是一种危害十分严重的人兽共患寄生虫病,分布广泛,呈世界性分布,可在人、牛、羊、猪、鸡、猫等多种动物之间传播,给人类健康和畜牧业发展带来了严重的危害.新血清学调查表明,全世界有30%的人群弓形虫感染呈阳性[1],我国弓形虫血清学阳性率为7.88%,其中贵州省高达16.81%[2].孕妇患弓形虫病可能会导致流产、死胎,并有30%~46%的概率将弓形虫病传染给胎儿[3],导致胎儿先天性异常.
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抗弓形虫核酸疫苗的研究进展
弓形虫是一种呈世界性分布的机会性致病原虫,能感染包括人体在内的190多种哺乳动物和鸟类.据估计,全世界成年人中,弓形虫感染者约占33%.尽管绝大多数弓形虫感染者为隐性,不表现临床症状,但往往是免疫功能低下人群的重要并发症,有时甚至是致死病因.
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抗弓形虫特异性IgE检测及其意义
弓形虫是广泛存在于人类和动物体内的细胞内寄生原虫,呈世界性分布.孕妇感染弓形虫可以直接影响胎儿生长发育,因此在优生优育中防治弓形虫感染有着十分重要的意义.目前弓形虫的血清学检测多为抗弓形虫IgG和IgM抗体.我们对不同组的孕妇进行了抗弓形虫特异性Ig E的检测,对抗弓形虫特异性IgE的临床意义作初步探讨.
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阿奇霉素、复方新诺明和干扰素合治弓形虫病协同作用的观察
早在1988年Chang H.R等就开始体外观察阿奇霉素抗弓形虫的作用〔1〕,随之Huskinson(1991)和 Derouin(1992))进一步证实了本药对各型弓形虫滋养体和包囊均有杀灭作用〔2,3〕,且与乙胺嘧啶或磺胺合用有很好的协同作用。我国在1998年由沙红报道了首例用阿奇霉素治疗弓形虫病的急性病例〔4〕。何爱珍等1999年报道了阿奇霉素与干扰素联合治疗的结果〔5〕。几年来我所采用了阿奇霉素、SMZco、IFN加VBco和VE等治疗284例弓形虫病,现报告如下。
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婴儿弓形虫病8例
弓形虫是一种人兽共患病原体,是导致胎儿宫内感染的重要生物学因素之一。我科近几年来共收治了弓形虫检查阳性的新生儿及小婴儿共8例。 本组男5例,女3例,年龄在出生<28天~3个月。患儿母亲孕期有养猫狗史6例,流产史2例。入院诊断:脑炎脑病4例,重症肺炎3例,硬肿症、婴儿肝炎1例,其中发热5例,体温不升2例,抽搐、痉挛4例,经常呕吐5例,咳嗽、呼吸困难4例,黄疸3例,肝大5例,脾大2例。所有病例检测血清弓形虫抗体IgM和/或IgG均阳性,肝功能异常3例,2例流产史母亲弓形虫抗体均阳性。肺CT平扫4例,3例见广泛性脑白质低密度影,1例周围脑室扩大,脑积水。所有患儿经磺胺抗弓形虫等综合治疗,治愈5例,好转2例,死亡1例。随访出现脑瘫、癫痫各1例。
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重组弓形虫GRA4的原核表达与纯化
构建能在pET原核系统中高效表达的弓形虫致密颗粒蛋白GRA4基因的重组表达质粒,并对其表达产物进行纯化.采用PCR方法自pMD1 8-GRA4(pGEX)重组子中扩增GRA4基因片段,定向克隆入原核表达载体pET-23a(+),转化E.coliBL21(DE3),以His·BindTM柱亲和层析纯化表达产物;用此纯化重组蛋白加CFA经皮下注射免疫小鼠三次,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度.成功构建了重组表达质粒pET-GRA4,SDS-PAGE显示其表达产物约为40kD,主要以包涵体的形式存在,经亲和纯化后的pET-GRA4重组蛋白产量大、纯度高,能被兔抗弓形虫免疫血清所识别;免疫小鼠后亦可诱导产生出高滴度的特异性IgG抗体.利用pET原核系统成功表达和纯化了弓形虫GRA4重组蛋白,为弓形虫病诊断抗原和疫苗的研究奠定了基础.
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弓形虫有效抗原表位的筛选及其对小鼠免疫保护性的研究
利用噬菌体随机肽库技术筛选弓形虫抗原的有效表位,并探讨其免疫保护效果.用纯化的弓形虫免疫兔血清IgG对噬菌体12肽库进行三轮筛选,对获得的目的噬菌体用间接ELISA和Dot-ELISA检测其特异性,并对其中的某些克隆进行Western-blot分析和序列测定;用混和噬菌体克隆及强阳性表位克隆免疫BABL/c小鼠,间接ELISA法测定其特异性抗体滴度,攻击感染后观察小鼠存活情况.经三轮筛选,特异性噬菌体得到富集,随机挑取18个克隆经间接ELISA和Dot-ELISA鉴定,有16个克隆能与弓形虫免疫兔血清IgG呈特异性反应.Western-blot分析显示P2克隆能被兔抗弓形虫血清所识别,具有类似于弓形虫抗原的免疫原性,其序列为5′-CTT CAG TTG GAT CGG GCT CCG TTTTGG AAT CAG GGT-3′,与GenBank的弓形虫已知序列无一级结构的同源性;与原肽库对照组相比,P2实验组和P总实验组免疫小鼠均能诱导出较高滴度的IgG抗体,抗攻击感染后小鼠的存活率及存活时间也均高于对照组.利用噬菌体随机肽库技术获得了弓形虫抗原的有效模拟表位,这些表位能诱导对弓形虫的部分保护作用.