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1-12 盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验
目的检测盐酸西替利嗪对鼠伤寒沙门氏菌的诱变性.方法用鼠伤寒沙门氏菌诱变性试验标准平皿掺入法,采用TA97、TA98、TA100和TA102组氨酸缺陷型鼠伤寒沙门氏菌,菌株经鉴定合格,在±S9mix条件下测试.盐酸西替利嗪5 000.0μg/皿浓度抑菌,因此,高浓度为1 000.0μg/皿.结果阳性对照敌克松在-S9mix,二氨基芴、1,8-二羟蒽醌在+S9mix条件下,能明显增加测试菌株的回变菌落数,均高于阴性对照的2倍以上,说明测试系统可靠.盐酸西替利嗪0.1、1.0、10.0、100.0和1 000.0μg/皿各浓度对4株测试菌株回变菌落数均未超过阴性对照组2倍.结论盐酸西替利嗪在0.1~1 000.0μg/皿浓度范围内对鼠伤寒沙门氏菌无诱变性.
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丹参酸乙的抗氧化作用对大鼠肝星状细胞增生的影响
目的:研究丹参酸乙(salvianolic acid B,SAB)的抗氧化作用对大鼠肝星状细胞(hepatic stallate cells,HSC)增生周期的影响.方法:采用原位灌注法消化大鼠肝脏,108g@L-1nycodenz密度梯度离心,分离肝星状细胞,分别以不同浓度的SAB或MDA/SAB处理细胞,3H-TdR掺入法观察细胞的增生能力,流式细胞术分析细胞周期各时相变化及凋亡情况.结果:1和10 tanol@L1SAB可显著抑制HSC的增生(2862±123M&2988±407 vs 4986±727,P<0.05,P<0.01),这种作用主要是抑制了细胞周期过程中G期向S期的过渡;1和10 pmol@L1SAB均可抑制MDA刺激的HSC增生(3067±73l&3042±321vs4007±587,P<0.05,P<0.01);两组剂量的SAB均不促进HSC的凋亡.结论:丹参酸乙可抑制体外培养HSC的增生,这种抑制作用与SAB的抗氧化作用有一定的关系.
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复方利肝冲剂药物血清对肝星状细胞NF-KB结合活性的抑制作用
目的:研究复方利肝冲剂对肝星状细胞NF-κB结合活性的影响,探讨复方利肝中剂抗肝纤维化的主要作用机制.方法:复方利肝冲剂药物血清与鼠肝星状细胞共孵育48h后,NF-kB结合活性的检测采用凝胶电泳移动抑制法,细胞培养液中细胞因子的检测采用ELISA去,细胞凋亡和细胞增殖分别采用流式细胞术和3H-TdR掺入法检测结果:复方利肝中剂药物血清使长外培养的鼠肝星状细胞NFkB结合活性比无药血清对照组显著减弱(图1),细胞培养液中的IL-6和sJCAM水平降低(1.56±0.42ng·L-1vs3.64±0.58ng·L-1.P<0.05;3 82±0.98ng·L-1vs12.64±1.22ng·L-1,P<0.01)星状细胞凋亡增加24.8%± 3.60%vs6.6%± 1.2%,P<0.01,增殖减少2623±654/孔vs5061±346/孔,P<0.01.结论:复方利肝中剂显著抑制体外培养的肝星状细胞NF-κB结合活性,可能为其抗纤维化的重要机制之一.
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bFGF对人肝癌细胞系Bel-7402的生长调控
目的:探讨bFGF是否通过PI3K/PKB途径调节p21WAP1的表达.方法:32P掺入法检测PKB酶活性,RT-PCR、Western blot检测不同处理组Bel-7402细胞的p21WAF1表达,流式细胞术分析细胞周期.结果:25 μg/LbFGF刺激细胞10 min,就可使胞液和膜性PKB酶活性达高峰.p21WAF1mRNA表达水平在1 h达高峰,比对照升高了5.5倍.p21WAF1蛋白表达在2 h达高峰,比对照升高了2.2倍.wortmannin预处理后,PKB活性在各时间点均明显降低(P<0.05),p21WAF1mRNA表达及p21WAF1蛋白表达无明显变化.流式细胞术分析显示,bFGF处理组与对照组相比G1期细胞减少(0.65±0.01→0.49±0.02,P<0.01),S期细胞增多(0.14±0.01→0.28±0.01,P<0.01),worrtmannin能抑制此促增生作用(G1:0.58±0.01;S:0.22±0.01,P<0.01).结论:PI3K/PKB途径可介导bFGF对Bel-7402细胞的促增生作用,但是bFGF对p21WAF1表达的调节作用不依赖PI3K/PKB途径.
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γ干扰素对培养的人甲状腺细胞HLA-DR抗原基因表达的影响
MHC Ⅱ类抗原HLA-DR在致自身免疫性甲状腺病(AITD)中起着非常重要的作用,γ干扰素(IFNγ)在调控自身免疫性甲状腺病中的作用日益受到重视,同时它对细胞的生长起一定的作用,其作用机制未明.本研究运用Northern blot杂交技术、3H-TdR掺入法及cAMP测定法,从细胞学角度分别研究IFNγ对人甲状腺细胞HLA-DR的表达和细胞生长状态的影响,以及IFNγ对细胞cAMP的影响,为阐明IFNγ在Graves病中的作用提供理论依据.一、材料与方法1.细胞培养:(1)标本来源: Graves病甲状腺组织取自我院外科6例甲状腺次全切除术患者,正常甲状腺组织取自甲状腺腺瘤周边正常的甲状腺组织(8例).试验分组为正常甲状腺细胞组和Graves病甲状腺细胞组,各组再分对照组和IFNγ组.
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抗辐射微球菌KD8301和KH3111的特性
抗辐射菌Dr对γ射线辐射、紫外线照射、化学制剂均具有很强的辐射抗性,采用集落法、3H-TdR掺入法,测试Dr KD8301、KH3111和E.Coli JM109的剂量效应曲线,分析它们的辐射耐受性.目前已进行了大量而极重要的研究,普遍认为Dr的辐射耐受性缘自于该菌属具有高水平的耐辐射基因.笔者首先对Dr菌KD8301,KH3111的抗辐射特性进行研究,确定其抗辐射的程度,根据剂量-效应曲线计算出几个主要的参数值Do、Dq等,以分析抗辐射特性和主要参数之间的相互关系.
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MTT比色法改进的研究
Mosmann于1983年首创MTT比色法用于检测IL-2的生物学活性[1] .MTT比色法操作简便,比3H-TdR掺入法便于开展,原方法测定因素复杂,虽然多家已做了一定的改进[2,3] ,尚有不足之处,使MTT比色法的应用受到多种非处理因素的影响和局限而失去应有的价值.因此,对MTT比色法进行相应的改进,以求大限度地去除非处理因素的影响,提高MTT比色法的灵敏度和稳定性,扩大它的应用范围.
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软肝冲剂对大鼠肝星状细胞增殖及分泌TGFβ1影响的血清药理学研究
软肝冲剂是我院30年来防治肝硬化的协定处方,已进行的实验研究证实其具有抗鸭乙型肝炎肝纤维化的作用.为进一步从细胞分子水平揭示其抗肝纤维化的机理,我们通过建立大鼠肝星状细胞(HSC)体外培养体系,用3H-TdR掺入法测定HSC的增殖,用细胞抑制MTT比色法测定总转化生长因子β1(TGFβ1)的活性来进行软肝冲剂对大鼠HSC增殖和分泌TGFβ1影响的血清药理学研究,现报告如下.
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直肠接种卡介苗可诱导出与注射接种相似的免疫应答和保护作用
本文通过直肠途径接种卡介苗(BCG),并与肠胃外途径接种进行比较对结核分枝杆菌(结核杆菌)的免疫应答及保护作用.实验选用动物为BALB/c小鼠、远交系Hartley豚鼠和恒河猴;BCG为Pasteur株1173P2;攻击用菌种为结核杆菌H37Rv.直肠免疫小鼠、豚鼠及恒河猴时分别接种2×109、2×1010和6×1010活菌单位的BCG;皮下注射免疫小鼠时接种100 μl BCG(含108活菌单位);皮内注射免疫豚鼠和恒河猴时分别接种5×106和1×109活菌单位的BCG.在两条途径免疫后不同时间,取豚鼠和恒河猴脾细胞在96孔微孔板培养,用3H TdR掺入法测定对PPD刺激的增殖反应.
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氢化可的松对淋巴细胞转化的抑制作用及意义
目的:研究不同浓度GC对淋转的抑制作用,及GC的竞争性拮抗剂RU38486对其的影响.方法:取献血员的静脉血淋巴细胞悬液,分别与不同浓度的皮质醇(F)及RU38486孵育,测定淋转率(用3H-TdR掺入法).结果:当加入0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5 mol/L F时,淋转率(%)分别为60±5、62±4、53±5、51±4、48±5、45±4、44±5,抑制率(%)分别为0、12±3、15±3、20±2、25±3、26.6±3;加入GC 0、10-9、10-8、10-6、10-5 mol/L RU38486后,10-8 mol/L F的淋转抑制率(%)分别为15±3、12±2、8±2、5±2、3±1,10-6 mol/L F的淋转抑制率(%)分别为25±3、20±4、13±3、10±3、7±2.结论:F对淋转有明显的抑制作用,其特点为:(1)生理浓度10-9 mol/L即有明显抑制作用;(2)抑制作用具有剂量-效应关系;(3)抑制作用有饱和性;(4)GC的竞争性抑制剂RU38486可逆转其抑制效应.以上几点表明F对淋转有抑制作用,且是由GR介导的.
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全反式维甲酸对基因免疫应签的调节作用(摘要)
目的研究全反式维甲酸(ATRA)对TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞免疫与体液免疫应答的调节作用.方法肌肉注射重组质粒TR421-hCGβDNA(每只鼠50 μ/100μl)初次免疫小鼠,以灌胃的方式给予ATRA,并以灌溶剂和TR421质粒免疫为对照;3周与6周后经同样的方式加强免疫各组小鼠,采用ELISA方法对基因免疫小鼠血清中IgG抗体水平进行动态观察,分析小鼠血清中IgG抗体亚类;3H-TdR掺入法测定特异性细胞增殖和细胞杀伤功能.结果ELISA结果表明,TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生较高的抗hCGβ抗体水平,ATRA增强TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生的抗hCGβ特异性IgG抗体水平并且伴随IgG2a/IgG1显著性降低;TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生较强的淋巴细胞增殖活性和CTL活性,ATRA抑制TR421-hCGβ质粒基因免疫诱生的特异性细胞增殖和细胞杀伤功能.结论ATRA促进基因免疫诱生的TH2免疫应答,抑制TH1型免疫应答,为改变基因免疫诱生的特异性免疫应答类型提供了一条新的途径.
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寻常型银屑病患者外周血单一核细胞增殖活性与尿新蝶呤关系
有学者认为银屑病是细胞免疫异常而导致表皮细胞过度增殖性疾病[1]。新蝶呤是细胞免疫反应终产物[2],是体内“淋巴细胞—巨噬细胞”轴所介导的免疫系统激活程度标志物[3]。为了探讨银屑病患者外周血单一核细胞(PBMC)增殖活性与新蝶呤关系,我们采用3H-胸腺嘧啶脱氧核苷(3H-TdR)掺入法测定PBMC增殖活性,同时测定尿中新蝶呤浓度,观察新蝶呤与PBMC增殖活性的关系。一、材料与方法(一)病例:寻常型银屑病患者31例,其中男20例,女11例;年龄5~58岁,平均(32.8±12.6)岁;进行期26例,静止期5例,病程1个月至31年。
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白血病细胞增殖动力学两项指标的对比研究
采用\+3H-TdR掺入法研究细胞增殖动力学历史悠久,实验结果可靠。用核仁组成区银染法(AgNOR银染法)研究细胞增殖情况也已开展,两种方法是否有可比性的研究报告不多,现将我科研究的初步结果报告如下。1 材料和方法1.1 \+3H-TdR掺入法取骨髓1ml或外周血2ml,置肝素抗凝小瓶内,室温自然沉淀30min~1h,取富含白细胞的上层液体,用含10%新生小牛血清的RPMI1640培养液稀释至细胞数1 ×10\+6 /ml ,每例测3孔,取平均值。在5%CO\-2 简易培养箱内37℃培养2h,然后每孔加\+3H-TdR1uci,继续培养4h 。终止培养,立即用冷生理盐水冲洗,离心,后置闪烁杯中用双道液闪仪测cpm值。
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生长抑素对K562细胞的调控作用
生长抑素是一类广泛存在于人体不同组织器官的多肽类激素,研究发现生长抑素及其类似物不仅能抑制多种激素的分泌,还能抑制神经内分泌肿瘤和普通实体肿瘤的增殖.本研究采用3H-TdR掺入法和液体闪烁技术研究八肽生长抑素(奥曲肽,octreotide,SMS)对K562细胞增殖的影响,以探讨生长抑素对白血病细胞的调控作用.
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婴儿手术后细胞免疫的变化
近年来,一些研究表明,成人和儿童在麻醉和手术后,产生免疫功能抑制.本文应用经PHA刺激的3H-胸腺嘧啶核苷掺入法,了解淋巴细胞转化状况,以探讨在麻醉下手术对婴儿细胞免疫的影响,并结合本组资料,对预防术后感染略加讨论.
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血管平滑肌细胞增殖与迁移的机制研究
目的:血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖与迁移在动脉粥样硬化(AS)的早期、中期或AS进展期或血管事件的发病机制中起着关键性作用.方法:采用改良的Boyden小室法检测VSMCs的迁移效应;以MTT法、[3H]-Tdr掺入法、[3H]-脯氨酸标记法和VSMCs计数评价VSMCs的增殖效应;将培养的VSMCs分为5组;2%胎牛血清(2%FCS)组、AngⅡ组(其浓度为10-10~10-6mol/L)、 Losartan组(其浓度为10-7~10-5 mol/L)、 MCP-1 mcAb组(终浓度为10 μg/mL)和阳性对照组(含5%的酵母多糖活化血清).
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不同tau亚型对神经细胞增殖的影响及机制研究
目的:研究了不同tau亚型对神经细胞增殖的影响及机制。方法:采用脂质体法分别将6种表达tau亚型的质粒瞬时转染N2a细胞,pEGFP空载体为对照。48 h后Western blot检测转染效率。48 h后用CCK-8检测细胞活性,BrdU掺入法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期。结果:与对照质粒比,表达1N3R-tau降低细胞活性,其BrdU阳性细胞数显著减少,提示1N3R-tau亚型可抑制细胞增殖。进一步的研究显示,表达1N3R-tau亚型诱导细胞周期S期阻滞,促使Cyclin E从胞核向胞浆转移。结论:过表达1N3R-tau亚型通过诱导cyclin E从胞核向胞浆转移,使细胞出现S期阻滞,从而抑制细胞增殖。
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CaSR在oxLDL诱导的A7 r5细胞增殖及迁移中的作用
目的:探讨钙敏感受体(calcium-sensing receptor,CaSR)在氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,oxLDL)诱导的大鼠胸主动脉平滑肌细胞(A7r5细胞)增殖及迁移中的作用及信号机制。方法:BrdU掺入法检测细胞增殖;伤口愈合实验及Transwell迁移分析检测细胞迁移情况;Western blot方法检测CaSR、PCNA、ERK MAPK通路及PI3K/AKT通路的蛋白表达。结果:(1)小剂量(10 mg/L)oxLDL 作用A7r5细胞24 h促进细胞的增殖和迁移;(2)oxLDL增加A7r5细胞的CaSR表达;(3)CaSR 拮抗剂NPS2390抑制了oxLDL 的作用,而激动剂GdCl3进一步增强了oxLDL 的作用;(4)oxLDL 可促进p-AKT、p-ERK蛋白表达;(5)PI3K/AKT通路抑制剂LY294002、ERK MAPK通路抑制剂PD98059能够抑制oxLDL 诱导的细胞增殖和迁移效应;(6)NPS2390抑制了oxLDL诱导的p-AKT和p-ERK蛋白表达,而GdCl3作用相反。结论:(1)oxLDL诱导A7r5细胞增殖及迁移效应;(2)CaSR参与oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用;(3)CaSR 通过活化PI3K/AKT通路及ERK MAPK 信号通路参与oxLDL诱导的A7r5细胞增殖及迁移作用。
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125I-UdR掺入法测定淋巴细胞增殖效应
本文通过 125I- UdR掺入法 , 对小鼠 T、 B淋巴细胞的体外增殖效应进行实验 , 分析了不同制 样所获得的结果 , 并在同等条件下与 3H- TdR(胸腺嘧啶核苷 )掺入法进行了比较 , 现报道如下 :
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3H-TdR掺入法测定T细胞功能成败因素分析
T细胞功能测定,常用T细胞增殖试验,其原理是:T细胞表面含有有丝分裂原受体,能接受植物血凝素(PHA)、刀豆蛋白A(CanA)和美州商陆(PWM)等有丝分裂原的刺激,转化成为淋巴母细胞.