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中药诱生细胞因子水平与中晚期肿瘤患者治疗及预后关系的探讨
扶正培本是中医药防治肿瘤的基本法则,现代医学认为主要是对机体细胞免疫功能的调节,具有双向调节和保持平衡的作用.近年来,中药诱生细胞因子的研究引起了人们的重视.临床实验研究表明,中晚期肿瘤患者普遍存在细胞免疫功能受损,可能与TH细胞数量减少或功能不足有关,并与机体免疫调节因子紊乱不可分割.本文拟就中晚期肿瘤患者治疗及预后与免疫调节因子的关系进行探讨.
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一类潜在的新型佐剂--含CpG基序的寡核苷酸
DNA是生命的遗传物质,已是不可争论的事实,可是DNA作为信号分子的观点就不容易被理解.相继有文献报道了细菌DNA,而非脊椎动物DNA,具有免疫激活的效果[1-4].含有CpG基序的寡核苷酸(ODN)具有以下免疫效果:诱导B细胞增殖、分化,免疫球蛋白诱生和分泌,抗诱生的细胞凋亡[5,6];诱导单核细胞分泌IL-12以及其他的细胞因子[7,8];并且活化自然杀伤(NK)细胞的裂解活性和干扰素(IFN-γ)分泌[2,4,9-11].研究人员推测:针对CpG ODN所产生的迅速的免疫激活反应,可能是由于宿主识别微生物分子特异的结构模式,而唤醒了机体先天性的免疫保护机制.由于CpG ODN特异的免疫激活机制,引起了研究人员的极大兴趣,取得了许多新的研究进展,显示出CpG ODN作为一类新型的免疫佐剂的潜在可能性.
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百日咳的免疫及预防
自然感染百日咳和百日咳菌体疫苗(WPV)免疫后,都主要诱生抗凝集原(AGG)的抗体,而百日咳无细胞疫苗(APV)免疫后主要诱生抗百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、69kD蛋白(PRN)、菌毛蛋白(FIM)2/3的抗体,但其保护机制及免疫持久性仍是疑问.近年来国外对自然感染和百日咳疫苗免疫后体液免疫和细胞免疫的免疫保护作用进行了广泛研究.
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二 干扰素的诱生和作用机制
1概述50年前Issacs和Lindenmann在研究病毒干扰时发现了干扰素.半个世纪以来,干扰素研究始终是现代分子生物学的一个前沿领域.对此,我们可以从几个方面来认识.
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艾灸对小鼠巨噬细胞IL-12mRNA表达的影响
为了验证IL-12在艾灸前后的变化及探讨IL-12在艾灸抑瘤中的作用,我们观察了艾灸对小鼠腹腔巨噬细胞IL-12的诱生能力及IL-12的mRNA表达.
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小鼠骨髓源性树突状细胞的体外诱导
分离树突状细胞(DC)的原理是依据DC的低密度和半黏附特性,DC缺乏Fc受体,可对获得的DC进一步纯化[1].这种方法获取的DC数量有限.细胞因子诱生法是目前体外扩增DC常用的方法.
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淋病奈瑟菌NspA基因疫苗诱导小鼠特异性体液免疫应答
1999年Martin等首先克隆了淋病奈瑟菌表面蛋白A(Neisseria surface protein A,NspA)基因,发现其在细胞表面持续表达,菌株之间NspA氨基酸序列的同源性高达98%,提示NspA可能是研制淋病疫苗的理想抗原.我室已成功构建NspA真核表达载体pcNspA,本文研究了pcNspA基因免疫在小鼠体内诱生特异性抗体的作用.
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一种双抗体夹心ELISA检测热休克融合蛋白方法的建立
MUC1蛋白在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌等多种肿瘤细胞都呈现高水平表达.MUC1蛋白的表位肽VNTR,是诱生MUC1特异性免疫应答的靶点;采用MUC1 VNTR多肽研制出的生物制剂能刺激小鼠抑制表达MUC1肿瘤细胞的生长[1].
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用Calcein释放实验检测HBs DNA疫苗诱生的特异性CTL活性
Calcein释放实验的基本原理为用荧光染料Calcein AM标记靶细胞.脂溶性的Calcein AM进入细胞后转变为水溶性,从而可潴留在细胞内而使细胞质染色,细胞杀伤后水溶性的Calcein可从细胞内释放出来,因此可用靶细胞释出的Calcein荧光值反映杀伤率.Lichtenfels R等报道该方法安全简易,与51 Cr释放法比较符合,可能替代51 Cr释放实验的方法.我们建立了用Calcein AM标记靶细胞检测CTL活性的方法,并对经不同途径接种HBs DNA疫苗的BALB/c小鼠针对HBs的特异性CTL进行了检测.
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氩氦刀冻融的癌细胞激发骨髓树突状细胞的免疫效应
氩氦刀冻融可以杀灭肿瘤细胞,也是一种免疫治疗方法.抗原呈递能力强的树突状细胞(DCs)是机体免疫应答的重要启动和调节因素,经肿瘤抗原致敏的DCs通过细胞毒T淋巴细胞(CTLs)有效激发特异性抗瘤免疫.本实验通过体外观察氩氦刀冻融的肺癌细胞对人骨髓DCs诱生的免疫效应.
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内毒素解毒物质研究进展
内毒素是G-细菌细胞壁外膜的LPS成分,可激活单核/巨噬细胞、肝Kupffer细胞、血管内皮细胞等,并诱生TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8等炎性细胞因子及氧自由基等化学介质的释放,诱发全身炎症反应综合征(包括感染性休克)和肝脏等组织器官的严重损伤[1].人体内也有多种蛋白质分子是人或动物体内天然存在的内毒素解毒物质,能直接或间接地拮抗LPS的毒性作用,具有十分重要的免疫防御意义.本文对相关研究概况介绍如下.
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白介素-18的研究进展
白介素-18(interleukin-18,IL-18)是1995年Okamura等[1]从热灭活痊疮丙酸杆菌和脂多糖共处理过的小鼠肝脏提取物中纯化出来的物质,起初被命名为干扰素γ诱生因子(interferon-γinducing factor,IGIF),其结构与IL-1β相似,也曾被命名为IL-1γ,但后来发现它不与IL-1受体起作用,因而被认为是一个新的细胞因子.
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抑制NO诱生对BCG免疫性肝损伤中CYP1A2表达的影响
目的:研究卡介苗(BCG)所致小鼠免疫性肝损伤中,一氧化氮(NO)诱生对肝脏细胞色素P450药物代谢酶系CYP1A2亚型表达的影响.方法:采用尾静脉注射BCG诱发小鼠产生免疫性肝损伤,HE染色法观察肝脏病理组织学变化,采用免疫组化法测定肝组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及其CYP1A2的蛋白表达,采用图像梯度灰度扫描法对肝脏病理损伤与iNOS形成进行半定量相关性分析.结果:尾静脉注射BCG14d后,可致小鼠肝脏形成大量肉芽肿,iNOS蛋白呈团块状棕色强阳性表达,表达部位与肉芽肿部位相一致,CYP1A2蛋白表达减少;应用选择性iNOS抑制剂氨基胍抑制NO合成,可逆转BCG所致CYP1A2蛋白表达的下调.结论:BCG免疫刺激条件下,iNOS诱生参与了CYP450药物代谢酶系1A2亚型表达下调机制.
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胚胎干细胞诱生的胰岛素分泌细胞分泌胰岛素的研究
目的:研究小鼠胚胎干细胞ES-D3诱生的胰岛素分泌细胞(IPCs)分泌胰岛素的能力及其所分泌的胰岛素的活性.方法:将ES-D3细胞培养于经处理的鼠胚成纤维细胞滋养层上保持未分化状态扩增,对数生长期时转入无血清含bFGF的DMEM液进行诱导,隔天换液,21 d后,采用DTZ染色、免疫细胞化学染色和ELISA等方法检测胰岛素的生成与分泌情况;用RT-PCR法检测PDX-1、Insulinl、Insulin2和Glut2等胰岛素分泌细胞相关基因mRNA的表达,并通过动物实验研究生成的IPCs所分泌的胰岛素的降糖活性.结果:在诱导21 d,DTZ染色法观察到被DTZ染成洋红色的IPCs;免疫细胞化学染色法显示诱导体系中有胰岛素特异性免疫反应阳性的细胞群;ELISA法测定结果表明IPCs受高糖刺激后分泌胰岛素,动物实验证明所分泌的胰岛素具有降糖活性;RT-PCR法检测到有Insulin2和PDX-1 mRNA的表达,Insulinl呈弱表达,Glut2不表达.结论:小鼠胚胎干细胞ES-D3诱生的IPCs能够合成并分泌胰岛素,而且分泌的胰岛素具有降糖活性.
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融合表达HBsAg/HBcAg的重组质粒诱导的小鼠免疫应答
目的:探讨融合表达HBsAg/ABcAg的重组质粒的免疫诱生效果方法:从乙肝患者的血清中提取HBV DNA,采用pCR技术扩增HBV的S和C基因并拼接成SC片段.构建融合表达质粒pcDNA3.1-SC,以100μg肌肉接种BALB/c小鼠,2,4 wk后各加强1次.采用ELISA法检测小鼠血清抗-HBs和抗-HBc,LDH释放法检测体外CTL活性.结果:接种后3,5,8,12 wk,小鼠血清抗-HBs阳性率分别达到50%,75%,100%和50%,抗-HBs滴度在第8 wk达到峰值.而抗-HBc阳转率低于25%,抗体高滴度低于1:5.小鼠接种后5 wk时的特异性CTL活性为46.9±1.8%(效/靶比100:1).结论:融合表达质粒pcDNA3.1-SC能够同时诱生针对HBsAg/HBcAg的特异性细胞免疫和体液免疫应答,提示研制乙肝的免疫预防和治疗性基因疫苗的可能性.
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免疫性肝损伤中一氧化氮诱生对CYP2E1表达及代谢活性的影响
目的:研究BCG诱发啮齿类免疫性肝损伤过程中NO诱生对CYP2E1表达及代谢活性的影响.方法:采用尾静脉注射BCG诱发小鼠及大鼠产生免疫性肝损伤,紫外分光光度法测定肝微粒体中CYP450全酶含量,免疫组化法测定肝组织CYP2E1蛋白表达,HPLC法测定经CYP2E1代谢的探针药物氯唑沙宗血药浓度经时变化.结果:BCG刺激可致肝组织炎性细胞浸润形成大量肉芽肿,肝微粒体CYP450全酶含量降低,肝脏CYP2E1蛋白表达下调,CYP2E1代谢底物氯唑沙宗血药浓度-时间曲线右移.选择性iNOS抑制剂氨基胍可逆转BCG所致肝脏CYP450全酶含量降低,增加CYP2E1蛋白表达,增强CYP2E1对探针药物氯唑沙宗的代谢活性.结论:NO诱生机制参与了BCG免疫性肝损伤中CYP450全酶含量降低,CYP2E1表达下调及代谢活性的下降.
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食管癌细胞RNA致敏树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫
目的:观察人食管癌细胞株RNA致敏的树突状细胞(DC)所诱导的特异性抗肿瘤免疫效应,探讨肿瘤细胞RNA直接致敏DC进行食管癌生物治疗的可能性.方法:食管癌细胞株T.Tn体外培养,提取RNA;正常人外周血,进行体外DC的培养扩增;食管癌RNA直接致敏DC,MTT法检测食管癌RNA活化DC所诱生的淋巴细胞对食管癌T.Tn、视网膜母细胞瘤SoRb-70的体外杀伤效应.结果:正常人外周血来源的DC,经食管癌T.Tn细胞株RNA直接致敏后,成功诱导特异性抗肿瘤免疫反应,T.Tn RNA组CTL在靶效比为20:1时对T.Tn,SoRb-70的杀伤率分别为85.8%、1.9%,而对照组对这两种细胞的杀伤率分别为1.0%和0.5%.结论:肿瘤RNA致敏DC可以诱导特异性抗肿瘤免疫,是一种有前景的食管癌治疗手段,有进一步研究的价值.
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结肠灌洗联合善宁治疗重症急性胰腺炎犬对血浆内毒素水平及肠道细菌易位的影响
重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)是临床常见的急重症,常伴有明显的全身炎症反应及并发多器官损伤.在SAP早期,胰酶的活化、炎症介质细胞因子和氧自由基的诱生以及机体高凝状态引发的全身炎症反应综合征(SIRS)是造成人体器官损害和死亡的第一个"高峰",而来自肠道细菌的严重感染和内毒素血症对细胞因子的诱生导致了后期病理生理的恶性循环,引起发热、休克、DIC等一系列临床症状,形成第二个死亡"高峰"[1].本实验在犬SAP模型上探讨结肠灌洗对血浆内毒素水平及肠道细菌易位的影响.
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他汀诱生血红素氧化酶-1:一个保护血管的新机制
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吸烟大鼠肺组织和肺泡巨噬细胞一氧化氮合酶的表达及其与肺泡Ⅱ型上皮细胞Fas/FasL系统表达的关系
吸烟可引起呼吸道慢性炎症,使气道中炎症细胞增加,特别是肺泡巨噬细胞(AM)明显增加,它可产生和释放许多细胞介质和酶引起呼吸道及肺泡组织结构损伤[1].Fas/FasL是细胞凋亡的重要信号通路之一,炎症时Fas抗原表达上调与靶细胞上配体FasL结合形成复合体而诱导靶细胞凋亡[2].我们就不同时期吸烟大鼠肺组织中原生型一氧化氮合酶(cNOS)和AM诱生一氧化氮合酶(iNOS)表达的变化来探讨其对肺泡Ⅱ型上皮细胞Fas/FasL系统表达的影响.