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卡介苗免疫治疗应用基础与临床研究进展
自从Robert Koch使用Mtb培养滤液疫苗(旧结核菌素)治疗人类结核病出现"郭霍现象"( Koch phenomenon)、许多患者临床表现恶化、少数患者死亡之后,结核病疫苗治疗研究受到重创,直到化疗药物的出现人们仍然未找到有效的免疫治疗方法.化疗药物的治疗效果和结核病控制策略的成功曾经使人们欣喜若狂,但20世纪80年代后结核病低流行率的西方国家结核病重新抬头和上升,随后全球耐多药结核病和广泛耐药结核病流行形势严峻[1],人们发现,化疗和管理还不能解决结核病治疗的全部问题,结核病的免疫治疗再次成为人们研究的热点[ 2].卡介苗(BCG)曾在人类抗结核病的斗争中发挥了重要的免疫保护作用,至今仍是我国预防儿童结核病的重要武器之一.由于BCG在结核病预防中的肯定作用[1-4],笔者从1988年以来一直致力于结核病化疗同时加用BCG免疫治疗研究.
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酒泉地区婴幼儿轮状病毒感染性腹泻的分子流行病学研究
A组轮状病毒(rotavirus,RV)是婴幼儿腹泻重要的病毒病原,在发展中国家更是婴幼儿死亡的主要原因之一.RV感染在5岁以下儿童中几乎无一幸免,因RV感染死亡的人数占该年龄组死亡人数的6%[1].由于其抗原成分复杂、型别繁多,且各型之间的交叉免疫保护作用差,至今尚无可供使用的十分有效的疫苗.为全面了解我国河西走廊轮状病毒的流行情况、病毒型别及其组合,从2001年11月至2002年12月间笔者首次对酒泉地区婴幼儿腹泻的病原学进行了连续观察,探讨A组轮状病毒在酒泉地区的流行特点.
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Fas配体表达与胃癌病理生物学行为的关系
Fas配体(FasL)是肿瘤坏死家族成员之一[1].Fas/FasL系统的生物学功能主要包括:获得免疫耐受、促使免疫应答的终止、在某些器官维持免疫优势和对同体移植器官有免疫保护作用.目前,胃癌仍是中国乃至全世界的多发肿瘤之一[2],但构成胃癌生物学行为的分子机制仍不清楚.本文拟研究FasL表达与胃癌生物学行为的关系,以探讨其在胃癌演进中的作用,为临床诊断和治疗提供理论依据.
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百日咳的免疫及预防
自然感染百日咳和百日咳菌体疫苗(WPV)免疫后,都主要诱生抗凝集原(AGG)的抗体,而百日咳无细胞疫苗(APV)免疫后主要诱生抗百日咳毒素(PT)、丝状血凝素(FHA)、69kD蛋白(PRN)、菌毛蛋白(FIM)2/3的抗体,但其保护机制及免疫持久性仍是疑问.近年来国外对自然感染和百日咳疫苗免疫后体液免疫和细胞免疫的免疫保护作用进行了广泛研究.
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弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗的研制
目的 研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治.方法 收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗.应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性. 结果 以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒.测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白.应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义(P<0.001);实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应. 结论 该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值.
关键词: 刚地弓形虫 棒状体蛋白2(ROP2) 基因重组 核酸疫苗 免疫保护作用 -
血吸虫谷胱甘肽硫转移酶的研究进展
血吸虫谷胱甘肽硫转移酶(GST)是一组以谷胱甘肽为共同底物的具有解毒功能的同工酶,在血吸虫生长过程中起关键性的作用,是近来较受关注的一种血吸虫抗原.其中日本血吸虫和曼氏血吸虫体内的GST(SjGST和SmGST)是当前研究较深入的血吸虫候选疫苗,二者的同源性很高[1],构建的疫苗免疫小鼠和猪等都收到了较好的效果,除产生抗感染的免疫保护作用外还具有降低虫荷数及雌虫生殖率等作用,有些疫苗已进入临床试验阶段[M][2,3[M]].对于GST疫苗产生的保护性免疫效果已有较深的研究,故在此不再赘述.然而GST在虫体的具体位置,GST的理化性质及刺激机体产生抗体机制,GST的损害和抑制对血吸虫生理功能产生的具体影响,GST疫苗与某些药物联合使用产生的治疗效果等仍然有待进一步的研究.本文综述了GST以上诸方面的研究进展.
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幽门螺杆菌GroEL蛋白重组表达及表达产物小鼠免疫保护作用
目的 检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异,确定重组表达的GroEL蛋白(r-GroEL)抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性.方法 采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列.构建幽门螺杆菌groEL基因pET42a-E.coli BL21DE3原核表达系统,采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统确定rGroEL表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用ELISA和Western blot检测rGroEL的抗原性和免疫反应性,采用幽门螺杆菌全菌为包被抗原的ELISA确定GroEL膜定位.采用幽门螺杆菌小鼠感染模型了解rGroEL免疫保护作用.结果 35株幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列相似性高达99.4%~ 100%.rGroEL表达量可达细菌总蛋白的56%,SDS-PAGE后提纯的rGroEL在凝胶中显示为单一的条带.rGroEL可诱导家兔和小鼠产生高效价IgG抗体,同时也能被幽门螺杆菌全菌抗体(Hp-IgG)或rGroEL-IgG识别并与之结合.GroEL是幽门螺杆菌表面蛋白抗原.50、100或200 μg rGroEL免疫可分别使50.0% (6/12)、75.0% (9/12)和91.7% (11/12)小鼠免于幽门 螺杆菌SS1株的感染,200 μg rGroEL免疫保护率(91.7%)显著高于50μg rGroEL(50.0%)( P<0.05).结论 幽门螺杆菌GroEL蛋白是序列保守、具有良好免疫原性和免疫保护性的表面抗原,可作为基因工程疫苗候选抗原.
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新型隐球菌甘露糖蛋白及TLR-9配体CpG-ODN对树突状细胞的激活作用
新型隐球菌病越来越引起医学界的关注.目前还没有一种针对新型隐球菌的人体疫苗.鉴别可作为候选疫苗的有免疫保护作用的隐球菌抗原已成为必要.鼠模型显示机体对新型隐球菌感染的防御主要由细胞免疫介导.其中CD4+TH1细胞起着积极的调节作用,而TH2细胞则起着消极的调节作用.CpG的寡聚核苷酸(CpG-ODN)在体内可作为佐剂介导TH1型免疫反应.为了探讨CpG-ODN在抗新型隐球菌免疫反应中的作用,我们将新型隐球菌和CpG-ODN接种于实验鼠,取气管旁淋巴节细胞与经甘露糖蛋白(mannoprotein,MP)刺激过的DC共培养可诱导淋巴细胞产生IFN-γ.实验结果提示隐球菌的MP通过DC诱导了TH1型反应并作为抗原激活了新型隐球菌特异的TH1细胞.
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问号钩端螺旋体病人血清中LipL21抗体检测
寻找钩体属特异性保护抗原,对于研制通用型钩体疫苗及实验室诊断试剂盒均有重要价值.Cullen等[1]首先报告了致病性问号钩体均具有属特异性lipL21脂蛋白基因.我们也曾证实我国15群15型问号钩体参考标准株均含有序列保守的lipL21基因[2].已知钩体病免疫保护作用主要依赖血清抗体为主的体液免疫[3].我们采用显微镜凝集试验(MAT)检测了156份钩体病人血清的凝集效价,并建立rLipL21-IgM/IgG-ELISAs对血清标本中LipL21的IgG和IgM型抗体进行了检测.
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抗伤寒沙门菌SOD血清的制备及其免疫保护作用的研究
目的 制备抗伤寒沙门菌Fe-SOD血清,研究其免疫保护作用,探讨SOD与沙门菌毒力的关系.方法 用纯化的伤寒沙门菌(Stw1)Fe-SOD免疫家兔制备兔抗Fe-SOD血清.利用ELISA法检测抗血清的效价.免疫电泳、双向琼脂扩散试验和抗体对酶活性抑制试验分析抗血清的特性.用不同浓度的抗血清预先处理Stw1,然后进行小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬杀菌试验,并利用鼠伤寒沙门菌感染小鼠模型证明抗SOD血清的被动免疫保护作用.结果 抗血清的ELISA效价为1∶10240,免疫电泳结果显示纯化的Fe-SOD及伤寒沙门菌无细胞溶解物与抗Fe-SOD血清在相同位置各形成一条沉淀线.双向琼脂扩散试验结果显示该抗血清与牛红细胞SOD不形成沉淀线,抗血清对酶活性抑制试验结果显示抗血清可抑制伤寒沙门菌及鼠伤寒沙门菌无细胞溶解物中部分SOD活性,对牛红细胞SOD的抑制率较低.小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的吞噬杀菌试验结果显示,经中浓度的抗血清处理的细菌在60min、120min时和经高浓度抗血清处理的细菌在30min、60min及120min时CFU值明显低于对照组(P<0.01).经抗血清处理过的5LD50鼠伤寒沙门菌攻击的小鼠3d和7d的存活率分别为90%和60%,均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).结论 抗伤寒沙门菌SOD血清可促进小鼠腹腔吞噬细胞对伤寒沙门菌的杀灭,也能提高鼠伤寒沙门菌攻击小鼠的存活率,说明此抗血清具有免疫保护作用,提示SOD可能是沙门菌共同的保护性抗原,间接说明了伤寒沙门菌的SOD与其毒力有关.
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检测肺炎衣原体血清IgM抗体ELISA的建立和应用
特异性抗体测定是目前诊断肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae,C.pn)感染较敏感的方法.主要外膜蛋白(MOMP)是C.pn重要的抗原成分,具有良好的免疫原性,与C.pn的感染密切相关,其特异性抗体具有免疫保护作用[1].机体感染C.pn后体内可出现特异性的IgM抗体,检测该IgM抗体可作为判断C.pn感染的标志.本研究利用特异性的MOMP抗原,建立检测血清中C.pn特异性IgM抗体的ELISA[2],以351例病原学确诊的临床血清标本和11例其他病原体感染的肺炎患者血清标本为对照,对其灵敏度和特异性进行了评价,现报告如下.
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抗幽门螺杆菌牛初乳体外调理杀伤研究
免疫牛初乳是通过接种弱毒性的病原性微生物,刺激母牛机体发生免疫应答而分泌的乳汁,不仅含有高滴度的特异性抗体,还具有许多非抗体功能因子等,免疫乳被证实具有被动免疫保护作用,是目前国内外研究的热点.
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人破伤风免疫球蛋白、破伤风抗毒素和破伤风类毒素临床应用的认识误区
破伤风是由破伤风梭菌侵入人体伤口,在厌氧环境生长繁殖,产生外毒素所致的一种急性特异性感染,发作后病死率高达20%以上.但无论采用被动免疫还是主动免疫,只要使机体血清的破伤破抗体含量达0.01~0.1 IU/ml,即可获得免疫保护作用[1-6].人破伤风免疫球蛋白(TIG)、破伤风抗毒素(TAT)和破伤风类毒素(TT)预防和治疗破伤风的疗效已得以普遍认可,但国内仍存在一些认识误区现介绍如下.
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调节性T 细胞在糖尿病中的免疫保护作用及治疗进展
调节性T 细胞(regulatory T cells,Tregs)为一类特殊的T 淋 巴细胞亚群,因能够有效抑制自体免疫活性、预防人类的自体免 疫性疾病而受到广泛关注.Tregs 通过对其他免疫细胞的负调 节发挥维持免疫稳态的作用.已知Tregs 主要分为两类,天然的 Tregs(nTregs)以及外周抗原诱导的Tregs(iTregs).nTreg 是源自 胸腺的CD4 +CD25 +T 细胞,大约占外周CD4+T 细胞的5% ~ 10%[1] ,主要通过细胞间相互接触发挥免疫调节作用.iTregs 为 外周CD4 +CD25 -Treg 细胞由小剂量抗原或免疫抑制性细胞因 子诱导而成,是具有免疫活性的Foxp3+iTregs[2] ,包括Tr1、Th3 等细胞,主要通过分泌IL-10 和TGF-β发挥免疫负调控作用.
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重组BCG疫苗在传染病防治中的应用
卡介苗(Bacille Calmette-Guérin,BCG)作为预防结核病的重要手段,已证明其对人体安全,且接种效果不受母体抗体的影响,成为WHO推荐的两种新生的活疫苗之一.BCG本身是强免疫佐剂,临床上常用于肿瘤治疗.近年来国内外学者以BCG为疫苗载体,将具有免疫保护作用的外源基因转入BCG[1],希望开发在BCG中表达保护性抗原或免疫因子的新一代活疫苗,以达到增强BCG免疫原性和一苗多用的目的.本文就重组BCG疫苗在传染病防治中的应用作一综述.
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表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染
目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylorr)尿素酶B亚单位(UreB)与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用.方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与GeneBank中相关序列进行同源性比较.pTrc99A-ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blotting进行鉴定,薄层扫描分析蛋白含量.实验小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A-ureB的SL3261组、携带pTrc99A-ureB/hlyE的SL3261组.免疫后4 wk,予Hpylori107CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击).攻击4 wk后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察H pylori定植情况.结果:核苷酸序列测定及同源性分析证实,原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE中所含的H pylori-ureB及hlyE基因与GeneBank中的H pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42%(1 663/1 707)、99.78%(910/912).重组减毒沙门氏菌可表达约100ku的融合蛋白UreB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15%;表达的融合蛋白能与小鼠抗H pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性.动物实验证实,疫苗组同空白对照组和SL3261组相比,H pylori定植密度明显下降,有显著性差异(P<0.05).表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比,H pylori定植密度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论:重组疫苗菌对小鼠H pylori感染具有一定免疫预防作用,hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果.
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卡介苗接种对大鼠外周血中CD+4CD+8双阳T淋巴细胞的影响
国内外细胞免疫学的基础研究已经证实哺乳动物外周血中存在CD+4CD+8 双阳(DP)T淋巴细胞,并证实其在胞内感染性病原所致疾病中有重要免疫保护作用[1-4].笔者曾在结核病患者外周血T淋巴细胞亚群分析中偶然发现DP T淋巴细胞与抗结核保护性免疫力有相关性[4].为了进一步明确DP细胞与抗结核保护性免疫的相关性,我们观察了卡介苗(BCG)接种对大鼠外周血中T淋巴细胞亚群的影响.
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辅助肝在肝肠联合移植中对肠的免疫保护作用
近年来一些研究表明[1~4],移植肝对同时移植的其它脏器如肾脏、心脏具有一定的免疫保护作用,可避免或减弱排斥反应,提高移植物的存活率.有鉴于此,我所近为一例短肠综合征伴TPN(totalparenteral nutrition,TPN)相关的肝功能损害的病人施行了国内首例减体积辅助肝、小肠联合移植术.
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BALB/C小鼠4T1乳腺癌细胞混合肽诱导特异性免疫应答的研究
本研究采用细胞冻融法获取BALB/C小鼠4T1乳腺癌细胞抗原肽,在体外构建热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)抗原肽复合物(HSP70-peptids complex,HSP70-PC)并观察该复合物对BABL/C小鼠脾细胞的激活与增殖作用及增殖后脾细胞对4T1细胞的杀伤作用;并进行体内实验观察HSP70-PC对BALB/C小鼠的免疫保护作用.目的在于为乳腺癌的免疫治疗探索一条新途径.
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《中华肿瘤杂志》1999年度优秀论文评选结果
继首次优秀论文评选活动之后,本刊1999年度优秀论文揭晓。有9篇论文获优秀论文奖,6篇论文获提名奖。 获优秀论文奖的论文如下: 食管癌前病变阻断治疗的远期效果(中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院,丁镇伟、高峰、林培中等);中国1990~1992年原发性肝癌死亡调查分析(中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院,张思维、李连弟、鲁凤珠等);c-erbB-2癌基因特异性核酶的体外切割作用(第四军医大学西京医院全军消化疾病研究所,毕锋、张学庸、樊代明等);Genistein抑制乳腺癌细胞生长的机制(上海医科大学肿瘤医院外科分子生物实验室,邵志敏、沈镇宙);应用mRNA差异显示方法克隆维甲酸诱导的人肺腺癌GLC-82细胞分化相关基因(中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院分子肿瘤国家重点实验室,孟祥文、王丽华等);人类错配基因在HNPCC家系中的突变研究(浙江医科大学肿瘤研究所,袁瑛、黄建、郑树);肝动脉化疗栓塞结合外放射治疗肝癌的研究(上海医科大学肿瘤医院,郭伟剑、宋明志、于尔辛等);β-榄香烯诱导的抗肿瘤免疫保护作用机理初探(上海医科大学附属肿瘤医院肝癌研究所,吴伟忠、刘康达、汤晓雷等);中国高发区肝细胞癌p53基因热点突变的规律性(中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院,明利华、袁宝珠、Thorgeirsson等)。 获提名奖的论文如下: VEGF的单抗制备及胃癌细胞MGC803表达VEGF的鉴定(北京市肿瘤研究所北京医科大学临床肿瘤学院,田学军、吴健、孟麟等);一个具有肿瘤转移抑制基因活性的人DNA序列(军事医学科学院基础医学研究所,葛学铭、陆应麟、付生法等);三磷酸苷对人胃癌细胞恶性表型的去恶化作用(北京医科大学临床肿瘤学院,郝纯毅、吕桂芝、蔡险峰等);MAL基因在人食管癌中表达显著下调(中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院分子肿瘤学重点实验室,许智雄、王明荣、蔡岩等);细胞图像分析预测食管上皮增生转归的研究(中国医学科学院肿瘤研究所肿瘤医院,周彬、丁镇伟、郭黎平等);基于97分期的非小细胞肺癌术后分期和生存研究(中山医科大学肿瘤医院胸科,吴一龙、黄植蕃、戎铁华等) 我们谨向以上作者表示祝贺,并将向获优秀论文奖作者颁发证书。本刊编辑部