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汉坦病毒核蛋白的重组表达及其免疫印迹法在肾综合征出血热血清抗体检测中的应用
目的 应用基因工程技术,在昆虫细胞中表达汉坦病毒(HV)S基因,表达产物作为诊断抗原,用于检测血清中抗HV特异性抗体IgG.方法 PCR扩增HV-Z10株N蛋白(NP)编码基因,基因工程方法构建NP编码基因昆虫表达系统rBAC-Z10S-TN.间接荧光法了解重组NP(rNP)表达及与特异性免疫反应情况,SDS-PAGE观察重组蛋白表达情况.建立免疫印迹法检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清样品,并与常规间接免疫荧光法进行比较.结果 rBAC-Z10S-TN高效表达rNP,SDS-PAGE显示rNP的蛋白表达带,此抗原仅与HFRS患者血清起反应.经双盲试验,两法检测血清143份,HFRS阳性符合率为97.67％.结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效真核表达系统.所建立的免疫印迹法可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法.
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rTpN17和rTpN47及其融合蛋白酶联免疫吸附试验检测梅毒血清标本的效果
目的 构建梅毒螺旋体tpn17、tpn47基因及tpn17-tpn47融合基因原核表达系统,建立基于rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47的ELISAs并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价.方法 采用常规分子生物学方法扩增并克隆梅毒螺旋体tpn17和tpn47基因,以连接引物PCR构建tpn17-tpn47人工融合基因,建立上述目的 基因原核表达系统.采用SDS-PAGE检测目的 重组蛋白rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯上述目的 重组蛋白,Western blot检测其免疫性.分别以rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47为包被抗原,建立相应ELISAs检测健康人群、类风湿关节炎(RA)和系统性红斑狼疮(SLE)患者及梅毒患者血清标本中梅毒抗体并与现行TRUST和TPHA进行比较.结果 克隆的tpn17、tpn47基因及构建的tpn17-tpn47融合基因与GenBank中相关序列相似性为100%.rTpN17、rTpN47和rTpN17-TpN47表达量分别为细菌总蛋白的37.2%、23.3%和29.8%,其提纯物电泳后均显示单一条带,并均能与梅毒抗体阳性血清发生明显的结合反应.rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA和rTpN17-TpN47-ELISA对所有健康人血清、RA和SLE患者血清标本的检测结果均为阴性,对梅毒患者血清标本检测阳性率分别为84.4%、82.3%和98.1%,其中rTpN17-ELISA和rTpN47-ELISA检测阳性率低于TPHA(P＜0.01),rTpN17-TpN47-ELISA检测阳性率相似(P＞0.05),但均高于TRUST(71.4%).结论 研究中建立的rTpN17-ELISA、rTpN47-ELISA,尤其是rTpN17-TpN47-ELISA,有望成为快速、简便、安全的梅毒患者血清学筛查方法.
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问号钩端螺旋体属特异性LipL41s抗原膜定位及其患者血清抗体检测
目的 确定问号钩端螺旋体(钩体)属特异性脂蛋白抗原LipL41s膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型.方法 采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区钩体病患者血清标本.IPTG诱导重组原核系统表达目的蛋白rLipL41/1和rLipL41/2,Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组表达产物.采用Western blot检测感染不同血清群问号钩体病患者血清与rLipL41s的免疫反应性.采用胶体金免疫电镜技术,对LipL41s进行膜定位.建立基于rLipL41s的ELISA,检测钩体病患者血清中特异性抗体水平及其类型.结果 黄疸出血群是四川地区主要的优势钩体血清群.不同血清群问号钩体病患者血清均能有效识别LipL41s.LipL41s是位于钩体外膜表面的蛋白分子.156例MAT阳性钩体病患者血清标本中,rLipL41/1和rLipL41/2特异性IgM阳性率分别为84.6%～87.8%和78.2%～83.3%,特异性IgG阳性率分别为69.2%～81.4%和75.0%～80.1%.结论 LipL41s是钩体表面蛋白抗原.自然感染钩体时,LipL41/1和LipL41/2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体,且两者之间有广泛的抗原交叉反应.rLipL41/1和rLipL41/2可作为研制通用型钩体基因工程疫苗和检测试剂盒的候选抗原.
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汉坦病毒N蛋白的重组表达及其用于IgM直接捕捉ELISA的建立和应用
目的 克隆并表达汉坦病毒(HV)Z10株(HV-Z10)N蛋白(NP)编码基因,建立基于辣根过氧化酶(HRP)标记重组NP(rNP)的rNP-IgM直接捕捉ELISA,检测肾综合征出血热(HFRS)患者血清并评价其检测效果.方法 PCR扩增HV-Z10株NP编码基因,基因工程方法构建NP编码基因原核表达系统pET28a-Z10N-E.coli BL21DE3.SDS-PAGE了解rNP表达情况,离子交换法和Ni-NTA亲和层析法提纯rNP.Western blot检测rNP的特异性免疫反应性.建立HRP标记rNP-IgM直接捕捉ELISA检测HFRS患者血清样品,并与常规HV-IgM间接捕捉ELISA进行比较.结果 pET28a-Z10N-E.coli BL21DE3高效表达rNP.提纯rNP SDS-PAGE显示单一蛋白条带,HV-IgG能有效识别rNP并与之结合.94.73%(90/95)HFRS患者血清样品rNP-IgM直接捕捉ELISA检测结果阳性,HV-IgM间接捕捉ELISA阳性率为92.63%(88/95).两种IgM捕捉ELISAs检测的HFRS患者血清样品A450值分布及对多份不同稀释度血清检测的A450均值变化均相似.结论 成功构建了HV-Z10株NP编码基因高效原核表达系统.所建立的rNP-IgM直接捕捉ELISA可作为HFRS简便、安全、敏感、特异的血清学诊断新方法.
关键词： 汉坦病毒 N蛋白 重组表达 IgM捕捉ELISA -
人膜联蛋白V的重组表达与细胞凋亡显像
移植肿瘤模型的研究表明,化疗和放疗对肿瘤的杀伤效应是通过对细胞凋亡过程的迅速诱导来实现的[1].
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自制汉坦病毒N蛋白IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒的初步评价
目的 初步评价应用自制辣根过氧化物酶(HRP)标记汉坦病毒(HV)重组N蛋白(rNP)的rNP-IgM直接捕捉ELISA诊断试剂盒.方法 考核该试剂盒的特异性和稳定性;比较其与同类商品试剂盒的临床检测结果,以评估检测血清抗HV-IgM的敏感性.结果 (1)该试剂盒仅与抗HV-IgM阳性血清发生反应,而与抗水痘病毒-IgM(抗VZV-IgM)、抗流行性乙型脑炎病毒-IgM(抗JEV-IgM)、抗登革热病毒-IgM(抗DV-IgM)、抗手足口EV71病毒-IgM(抗EV71-IgM)阳性血清均无反应;试剂盒放置37℃ 3 d,检测血清抗HV-IgM的活性,无明显降低.(2)在120例临床疑似.肾综合征出血热的144份血清中,2种试剂盒仅对12例的12份血清抗HV-IgM检测结果不一致,其中8例的首份血清,该试剂盒阳性,商品试剂盒阴性(第2份血清2种试剂盒均阳性);3例的首份血清(未采到第26血清),该试剂盒为临界值,商品试剂盒阴性;另1例的首份血清该试剂盒阳性,商品试剂盒阴性(2种试剂盒第2份血清和第3份血清均阳性).结论 实验室研制的捕获法ELISA抗HV-IgM诊断试剂盒具有良好的特异性、稳定性和敏感性,适于HV感染的临床诊断和流行病学监测.
关键词： 汉坦病毒 N蛋白 重组表达 IgM捕捉ELISA -
人谷草转氨酶的基因改造及高效重组表达
目的构建人谷草转氨酶（AST）高效重组表达体系。方法优化编码人 AST的核苷酸密码子，合成人 AST新的基因，并将其克隆至 pRSF-Duet表达载体中，转化大肠杆菌 BL21，以异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白的表达，并通过改变诱导剂浓度、振摇速度及诱导温度优化表达条件，以产生可溶性蛋白。可溶性蛋白经镍离子柱亲和层析及分子筛层析纯化，以 SDS-PAGE电泳及蛋白质免疫印迹鉴定蛋白的性质，对重组蛋白的活性及在血清基质中的稳定性进行检测。结果经过优化的 AST密码子在大肠杆菌中的使用频率均在10%以上；重组蛋白存在于上清和沉淀中，经表达优化，在 IPTG终浓度为2 mmol/L、25℃、150 r/min振摇8 h诱导条件下，可增加可溶性蛋白的产率，纯化后的目的蛋白经电泳及免疫印迹鉴定为谷草转氨酶，活性可达136000 U/L，且在含有蛋白酶抑制剂的血清中稳定存在。结论通过密码子优化，成功构建了重组 AST的高效表达系统，重组蛋白可以达到作为参考物质原料的要求。
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人博卡病毒外壳蛋白(VP3)的重组表达及间接ELISA检测方法的建立
人博卡病毒(Human Bocavirus)是2005年Tobias Allander等从小儿下呼吸道感染分泌物分离到的新细小病毒[1],我们曾报道中国分离的人博卡病毒(WLL-1株)的全基因组序列[2,3].
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问号钩端螺旋体鞘磷脂酶类溶血素基因功能分析及其感染细胞后转录水平变化
目的 了解问号钩端螺旋体(简称钩体)鞘磷脂酶类溶血素基因sph1～sph4产物溶血活性及其感染细胞后转录水平的变化.方法 以致病性问号钩体黄疸出血群赖型赖株、波摩那群波摩那型罗株和非致病性双曲钩体三宝垄群Patoc型Patoc Ⅰ株基因组DNA为模板,采用PCR扩增全长sph1～spl4基因片段,扩增产物T-A克隆后测序.构建sph1～sph4基因原核表达系统,采用SDS-PAGE检测目的 重组蛋白rSph1～rSph4的表达情况,Ni-NTA亲和层析柱提纯rSph1～rSpM.采用绵羊血平板对rSph1～rSph4溶血活性进行鉴定,实时荧光定量RT-PCR检测问号钩体赖株感染J774A.1细胞前后sph1～sph4基因转录水平的变化.结果 问号钩体赖株和罗株基因组DNA中均能扩增sph1～sph4基因,双曲钩体Patoc Ⅰ株则否.与报道的相应基因序列比较,所克隆的sph1～sph4基因核苷酸序列相似性均为100%.所构建的原核表达系统能分别表达目的蕈组蛋白rSph1～rSph4.rSph1～rSph4均有溶血活性,其中以rSph2溶血活性强.问号钩体赖株感染J774A.1细胞后,sph1～sph4基因转录水平均上调,其中sph2和sph4基因mRNA水平上调更为明显.结论 sph1～sph4基因仅存在于致病性问号钩体中,其表达产物有溶血活性.问号钩体赖株感染细胞后sph1～sph4基因转录水平的上调,提示此类鞘磷脂酶类溶血素可能在问号钩体感染宿主过程中有重要作用.
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VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析
通过阻断肿瘤血管新生的相关因子与受体的结合抑制肿瘤血管的形成,已成为近年肿瘤治疗的重要研究策略.VEGF和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是促进血管内皮细胞生长重要的因子.本研究前期工作中已通过筛选噬菌体随机肽库,获得阳性克隆之一7P419(所带肽序列为GWYYDAX,X代表一特定氨基酸),该短肽具有明显的抑制VEGF的活性.本文将7P419与硫氧还蛋白Trx融合表达,检测该融合蛋白的抑制效果,并与人工合成肽7P419比较.
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问号钩端螺旋体脂蛋白LipL32膜定位及其免疫应答
目的 确定问号钩端螺旋体(简称钩体)属特异性脂蛋白抗原LipL32膜定位及其自然抗体应答情况和抗体类型.方法 IPTG诱导目的 重组蛋白rLipL32-1和rLipL32-2表达,Ni-NTA亲和层析法提纯rLipL32.采用显微镜凝集试验(MAT)检测四川地区钩体患者血清标本及rLipL32兔抗血清与我国问号钩体参考标准株的交叉凝集情况.采用胶体金免疫电镜技术对LipL32进行膜定位.建立基于rLipL32的ELISA,检测钩体患者血清中特异性抗体类型及其水平.结果 黄疸出血群是四川地区主要的优势钩体血清群.rLipL32兔抗血清均能与我国问号钩体参考标准株发生MAT效价为1∶80～1∶320的交叉凝集反应.LipL32是位于钩体外膜表面的蛋白质分子.156例MAT阳性钩体患者血清标本中,rLipL32-1和rLipL32-2特异性IgM阳性率分别为91.0%～92.9%和90.4%～92.3%,特异性IgG阳性率分别为99.4%和97.4%～98.1%.结论 LipL32是问号钩体属特异性表面蛋白抗原.自然感染钩体时,LipL32-1和LipL32-2可诱导机体产生IgM和IgG两类血清抗体.rLipL32-1和rLipL32-2可作为研制检测试剂盒的候选抗原.
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我国主要问号钩端螺旋体血清群lipL21基因序列及其产物免疫反应性分析
目的 分析我国15群15型问号钩端螺旋体(简称钩体)参考标准株外膜脂蛋白lipL21基因序列,构建该基因原核表达系统并鉴定表达产物的免疫原性,了解lipL21基因自然表达状况.方法 高保真PCR扩增上述问号钩体株及双曲钩体Patoc型PatocⅠ株基因组DNA中全长lipL21基因片段,T-A克隆后测序并构建其原核表达系统.分别用钩体TR/PatocⅠ和rLipL21兔抗血清为一抗的Western blot鉴定目的重组蛋白rLipL21的免疫原性,显微镜凝集试验(MAT)检测rLipL21兔抗血清的交叉凝集效价.以盐变-去垢剂处理法提取钩体外膜蛋白,用SDS-PAGE和免疫印迹法检测上述钩体株lipL21基因自然表达情况.结果 上述钩体株均存在序列高度保守的lipL21基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别为98.75%～99.82%和99.46%～100%.rLipL21能与TR/PatocⅠ及rLipL21兔抗血清发生结合反应.rLipL21免疫家兔能产生抗体,该抗体对上述15株问号钩体MAT效价为1:16～1:128.问号钩体外膜标本中均可检出LipL21,双曲钩体则否.结论 我国钩体群参考标准株均含有序列保守的lipL21基因并自然表达于外膜,双曲钩体PatocⅠ株虽含有lipL21基因但未表达.rLipL21具有良好的抗原性和免疫反应性,有可能作为新型钩体疫苗或检测试剂盒的候选属特异性表面抗原之一.
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幽门螺杆菌GroEL蛋白重组表达及表达产物小鼠免疫保护作用
目的 检测幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列差异,确定重组表达的GroEL蛋白(r-GroEL)抗原性、免疫反应性以及对幽门螺杆菌感染小鼠的免疫保护性.方法 采用PCR及测序法了解幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列.构建幽门螺杆菌groEL基因pET42a-E.coli BL21DE3原核表达系统,采用SDS-PAGE及凝胶图像分析系统确定rGroEL表达量,Ni-NTA亲和层析法提纯rGroEL.采用ELISA和Western blot检测rGroEL的抗原性和免疫反应性,采用幽门螺杆菌全菌为包被抗原的ELISA确定GroEL膜定位.采用幽门螺杆菌小鼠感染模型了解rGroEL免疫保护作用.结果 35株幽门螺杆菌临床菌株groEL基因序列相似性高达99.4％～ 100％.rGroEL表达量可达细菌总蛋白的56％,SDS-PAGE后提纯的rGroEL在凝胶中显示为单一的条带.rGroEL可诱导家兔和小鼠产生高效价IgG抗体,同时也能被幽门螺杆菌全菌抗体(Hp-IgG)或rGroEL-IgG识别并与之结合.GroEL是幽门螺杆菌表面蛋白抗原.50、100或200 μg rGroEL免疫可分别使50.0％ (6/12)、75.0％ (9/12)和91.7％ (11/12)小鼠免于幽门 螺杆菌SS1株的感染,200 μg rGroEL免疫保护率(91.7％)显著高于50μg rGroEL(50.0％)( P＜0.05).结论 幽门螺杆菌GroEL蛋白是序列保守、具有良好免疫原性和免疫保护性的表面抗原,可作为基因工程疫苗候选抗原.
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甲型副伤寒沙门菌 h1 a-spaO 融合基因构建及其表达产物免疫保护作用
目的：构建甲型副伤寒沙门菌h1a-spaO融合基因及其原核表达系统，确定重组表达产物rH1a-SpaO免疫保护作用。方法采用柔性肽序列连接引物PCR构建并扩增h1a与spaO基因的融合基因h1a-spaO，T-A克隆后测序。采用常规基因工程方法构建h1a-spaO融合基因原核表达系统，SDS-PAGE检测其rH1a-SpaO表达情况。采用Western blot鉴定rH1a-SpaO抗原性和免疫反应性，微量肥达试验确定rH1a-SpaO抗血清凝集甲型副伤寒沙门菌的能力。采用小鼠感染模型了解rH1a-SpaO对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的保护作用并与等量单一重组表达蛋白H1a（ rH1a）及SpaO （rSpaO）比较。结果所构建的h1a-spaO融合基因与单一h1a或spaO基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。 h1a-spaO融合基因原核表达系统能高效表达rH1a-SpaO。 rH1a-SpaO能与rH1a或rSpaO抗血清结合， rH1a-SpaO抗血清也能识别rH1a和rSpaO并经H抗原凝集甲型副伤寒沙门菌。100μg rH1a-SpaO 对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率（93．3％）明显高于等量 rH1a （60．0％）及rSpaO（53．3％）（P＜0．05）。结论重组融合蛋白抗原rH1a-SpaO免疫保护作用较等量单一rH1a或rSpaO更强，可作为甲型副伤寒两价基因工程疫苗或伤寒/副伤寒荚膜多糖-蛋白结合疫苗的有效抗原。
关键词： 甲型副伤寒沙门菌 h1a-spaO融合基因 重组表达 免疫原性 免疫保护性 -
创伤弧菌溶细胞素体外诱导人脐静脉内皮细胞凋亡及其在细胞中的定位
目的 了解创伤弧菌溶细胞素(Vibrio vulnifru,cytolysin,WC)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡作用及其机制.方法 采用PCR扩增创伤弧菌GTC333株VVC编码基因vvhA,T-A克隆后测序并构建vvhA基因原核表达系统E.coli BL21DE3pET-42a-vvhA.采用Ni-NTA亲和层析法提纯目的 重组蛋白rVVC,SDS-PAGE联合Bio-Rad凝胶图像分析系统确定rVVC表达量及提取物纯度.采用溶血试验检测rVVC溶解兔红细胞的活性.2,4-二硝基苯肼比色法和四苯硼钠比色法分别测定rVVC作用的HUVEC培养物上清中乳酸脱氢酶(LDH)和K+含量.采用流式细胞术检测rVVC诱导HUVEC凋亡的作用.将FITC标记rVVC,采用激光共聚焦技术对HUVEC中的FITC标记rVVC进行定位.结果 与GenBank中相关序列比较,所克隆的vvhA基因核苷酸和氨基酸序列相似性分别为96.09%和98.26%.1μg/ml的rVVC即可溶解兔红细胞(P<0.01).10 μg/ml的rVVC可引起HUVEC培养物上清中K+含量明显增高(P<0.01),但LDH含量无明显改变(P>0.05).1～100μg/ml的rVVC作用2 h可使HUVEC凋亡.在FITC标记rVVC作用HUVEC 5～240 min内,rVVC逐渐从细胞膜表面向膜内侧和胞浆内移行,作用30 min时多数rVVC进入细胞.结论 rVVC具有溶细胞素活性.VVC可进入HUVEC,诱导细胞凋亡是其损伤HUVEC的主要机制.
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甲型副伤寒杆菌ompA基因分布及重组表达产物的免疫学鉴定
目的 构建甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统,确定其重组表达产物rOmpA免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率.方法 采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因,T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量,采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性.采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率.采用小鼠感染模型,了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65%.rOmpA能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生免疫反应(Western blot),并可在家兔中诱导产生抗体.94.9%(93/98)甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因.100 μg和200 μg rOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%(5/12)和58.3%(7/12).rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1:5～1:40.结论 ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛.rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可考虑为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.
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甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因构建及其表达产物免疫保护作用
目的 构建甲型副伤寒沙门菌spaO-ompA融合基因及其原核表达系统,确定重组表达产物rSpaO-OmpA免疫保护作用.方法 采用柔性肽序列连接spaO与ompA基因,构建spaO-ompA人工融合基因及其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测目的重组表达产物rSpaO-OmpA表达情况及其产量.采用免疫扩散法、微量肥达和Western blot法鉴定rSpaO-OmpA 抗原性和免疫反应性.采用小鼠感染模型了解rSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌致死性感染的免疫保护作用,实验中采用重组表达的SpaO( rSpaO)及OmpA(rOmpA)作为对照.结果 所构建的spaO-ompA融合基因与spaO或ompA单基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％.所构建的原核表达系统E.coli BL21 DE3pET42a-spaO-ompA能高效表达重组融合蛋白rSpaO-OmpA.rSpaO-OmpA能与甲型副伤寒沙门菌全菌抗血清结合并产生阳性杂交信号,免疫家兔后可产生特异性抗体.100 μg或200 μgrSpaO-OmpA对甲型副伤寒沙门菌感染小鼠的免疫保护率分别为66.7％ (8/12)和83.3％ (10/12),明显高于等量rSpaO及rOmpA( P＜0.05).rSpaO-OmpA免疫小鼠血清与不同副伤寒沙门菌H抗原的凝集效价为1∶5 ～ 1∶40、与rSpaO和rOmpA及rSpaO-OmpA免疫双扩散效价为1∶1 ～1∶16.结论 人工融合重组抗原rSpaO-OmpA免疫原性和免疫保护作用较等量rSpaO或rOmpA更强.
关键词： 甲型副伤寒沙门菌 spaO-ompA 融合基因 重组表达 免疫原性 免疫保护性 -
SARS-CoV核衣壳蛋白重组表达及单克隆抗体特性鉴定
SARS-CoV具有与其他冠状病毒相类似的结构.在有关动物冠状病毒的研究中发现,N蛋白是病毒主要的免疫原蛋白和良好病毒抗体检测抗原.在所有冠状病毒的结构蛋白中,无论从mRNA水平还是蛋白表达水平,N蛋白是病毒在整个感染过程中含量丰富的蛋白.
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不同Alloferon-1体外抗病毒效果
Alloferon-1是Chemysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481.53的新型抗菌肽,动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性.人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin-Ⅱ的生物学活性与大然产物相同.本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAllofemn-1-EK,同时人工合成了sAIlofemn-1和sAlloferon-1-EK,比较重组及人工合成的3种AIIofemn-1体外抗病毒活性,以期为抗病毒新药研发提供实验依据.
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三种常见人呼吸道腺病毒六邻体蛋白的克隆、表达及抗原性分析
目的：克隆、表达常见的人呼吸道腺病毒的主要中和抗原六邻体蛋白，分析重组表达产物的抗原性和免疫原性。方法分别PCR扩增克隆人3型、4型、7型腺病毒完整的六邻体蛋白基因，测序和序列比对并与GenBank上人腺病毒的六邻体蛋白进行同源性比对；对其主要的抗原区进行克隆、表达和纯化，表达产物免疫动物，ELISA和Western blot实验对表达产物的抗原性和免疫原性及其交叉反应进行分析。结果国内首次报道1株人4型腺病毒的六邻体基因序列，与GenBank中的NHRC3分离株核酸及氨基酸的同源性均大于99％；3种腺病毒包含全部高变区的六邻体部分区段在大肠杆菌中成功表达并纯化，重组蛋白可以被不同型别的人腺病毒免疫血清识别，重组蛋白免疫小鼠血清可以识别不同型别的人腺病毒，而型间反应有显著差异，预测了3种腺病毒六邻体型、型间特异性表位。结论成功表达人3型、4型、7型腺病毒六邻体蛋白主要抗原区，重组表达产物有强免疫原性，包含型间、型特异性抗原表位。
