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干扰素抵抗与JAK/STAT信号通道系统
干扰素(interfferon,IFN)是人体受到病毒或双股RNA刺激物的刺激产生免疫应答,由细胞合成及分泌的一族蛋白质类,可作用于其它细胞干扰病毒的复制.1957年Isaacs和Lindenmann发现IFN并证实其有抗病毒活性,近来还发现IFN具有抑制某些细胞生长、免疫调节抑制和杀伤肿瘤细胞、影响细胞分化和机体的发育等作用.目前IFN是国内外慢性乙型肝炎与丙型肝炎抗病毒治疗主要药物,然而慢性乙肝患者采用IFN治疗后出现持续性反应率不高,HBeAg阴转率约为30%[1],IFN与利巴韦林联合治疗慢性丙型肝炎持续反应率也仅仅约为54%～56%[2].IFN疗效主要和机体免疫耐受、病毒基因变异、细胞内病毒基因整合、IFN抗体产生等有关,IFN抵抗(IFN resis-tance)出现的原因包括了宿主、病毒和IFN三方面因素,目前IFN抵抗的机制尚未完全明了.
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α-干扰素的不良反应
干扰素(Interferon,INF)是一种具有广谱抗病毒活性的多功能蛋白质,包括α、β、γ干扰素,其中α-干扰素已被广泛地用于慢性病毒性肝炎的抗病毒治疗,且疗效确切.但其不良反应也不容忽视.在临床治疗初期会出现流感样反应、外周血象异常、中枢神经系统反应等[1].-INF F对慢性病毒性肝炎为乙肝、丙肝需进行长达6月或更长时间的治疗,已有各种较严重的不良反应的报道,如严重抑郁症合并自杀企图、糖尿病、甲状腺疾病、间质性肺炎、眼底出血、自身免疫疾病的诱发、严重肾功能障碍等[2].日本一项对使用干扰素治疗肝病患者的不良反应的监测统计显示,除流感样反应外其它不良反应的发生率约为11.6%[3].
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卡拉胶海藻多糖硫酸酯化技术研究
多糖的抗病毒活性与多糖的分子量大小、硫酸根含量以及空间构象有较大联系,本文对微波辐射制备不同分子量卡拉胶多糖及硫酸酯化修饰技术进行了研究.1材料与方法1.1材料标准多糖(Dextran Standard 270000、80000、12000、5000、1000和DextranBlue),卡拉胶,真空反应器,纳滤系统,凝胶色谱柱.1.2实验方法1.2.1微波辐射制备卡拉胶多糖取一定量卡拉胶加水搅匀,80℃保温15min,使其充分溶解:然后加入一定量H2SO4,750W微波处理10～30min;料液先用碱调节至pH4.5,冷却后调至pH6.0.
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乙型肝炎病毒基因型对阿德福韦酯抗病毒疗效的影响
目前治疗慢性乙型肝炎重要和有效的方法是通过抗乙型肝炎病毒(HBV)药物抑制病毒复制[1].核苷(酸)类似物具有高效、低毒、服用方便等特点,在临床上得以广泛应用[2].阿德福韦酯是一种新型核苷(酸)类抗病毒药物,临床研究表明阿德福韦酯对HBV野生株以及对拉米夫定及其他抗HBV药物出现耐受变异株的HBV均有很强的抗病毒活性.探讨HBV基因型和抗病毒疗效的相关性及其机制,对于指导临床选择有效抗病毒药物、预测抗病毒疗效具有重要的参考价值和理论意义.笔者观察了不同HBV基因型对阿德福韦酯抗HBV疗效的影响,现将结果报告如下.
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灵芝体外抑制猴免疫缺陷病毒作用的研究
目的:对灵芝孢子水提物(AEGLS)进行体外抗猴免疫缺陷病毒(SIV)活性分析并对其作用机制进行初步研究.方法:300 TCID50的SIV病毒稀释液和AEGLS稀释液同时加入到CEM × 174细胞(CEM T淋巴细胞和174 B淋巴细胞杂交细胞)中培养4d后计数合胞体数量并进行统计,研究AEGLS抗SIV活性.利用不同加药时间点实验、作用阶段分析实验、Western blot对其作用机制进行初步分析.结果:AEGLS具有良好的抗SIV活性,其半数抑制浓度IC50为(466.62 ±20.21) mg·L-1,并且其细胞毒性较低,半数细胞毒性浓度CC50为(3.13±0.11) g·L-1,选择指数为6.71.抗SIV机制研究显示AEGLS主要作用在SIV病毒感染的早期阶段,与抑制SIV病毒的吸附或者穿透细胞有关,Western blot实验显示AEGLS能降低SIV衣壳蛋白P27( SIV P27)的表达水平.结论:AEGLS具有良好的抗SIV作用,其主要作用在SIV病毒感染的早期阶段,与抑制SIV病毒的吸附或者穿透细胞有关,并且能降低SlY P27农壳蛋白的表达水平.
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荆芥化学成分的研究
荆芥为唇型科植物荆芥Schizonepeta tenuifolia Briq.的干燥地上部分,是一味常用解表中药,具有解表散风,透疹等功能,用于感冒,头痛,风疹,麻疹,疮疡初起[1].目前关于其化学成分有单萜、黄酮的报道[2,3].作者在对银翘散抗流感病毒有效部位群的研究中发现,荆芥对该有效部位群贡献较大,因此对它的化学成分进行了深入的研究,并从中分离鉴定了8个化合物,其中化合物2,7为首次从荆芥中分离鉴定.这些化合物中,熊果酸,反式桂皮酸有抑菌抗病毒活性,同时还有保肝利胆的作用;熊果酸,反式桂皮酸,β-谷甾醇具有抗炎活性[46].这些活性成分与荆芥的功效相关联.
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猪骨髓基质抗原2基因的克隆、表达及生物学活性研究
研究目的是克隆猪骨髓基质抗原2 (Bonc marrow stromal antigen 2,BST- 2)基因并进行真核表达,获得具有抗病毒活性的重组BST-2蛋白.研究通过RT-PCR从猪瘟弱毒疫苗和聚肌胞(Poly Ⅰ:C)刺激的猪肾细胞(PK-15)中扩增出猪BST-2 cDNA,克隆至真核表达载体pcDNA3.1/V5-His,构建重组表达质粒pcDNA-BST-2,转染HEK293T细胞,纯化BST-2蛋白并经Bradford法定量,Western blot检测,研究BST-2抗病毒生物学活性.酶切鉴定和核酸序列测定证实pcDNA-BST-2真核表达质粒构建成功,转染HEK293T细胞后,经间接免疫荧光能够检测到绿色荧光.生物学活性测定重组BST-2蛋白具有一定的抗水泡性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus,VSV)、H9禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)及猪繁殖与呼吸综合症病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的活性.结果表明,重组BST-2具有一定抗病毒生物功能,为进一步研究重组BST 2蛋白的活性以及BST-2抗病毒药物研究奠定了基础.
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氧氟沙星、叠氮胸苷单独及与干扰素合用对黄病毒增殖的影响
选用氧氟沙星(OFLX)和叠氮胸苷(AZT)单独投入及与IFN并用，观察其抗病毒活性结果如下： 1 材料和方法 1.1 病毒和细胞所用黄病毒为乙型脑炎病毒JEV的JaGAr-01株。细胞是人肝癌细胞株HepG2。细胞培养所用培养液为DMEM加10％胎牛血清(FCS)。 1.2 感染病毒病毒感染剂量为l0 m.o.i(multiplicityinfection)，37℃吸附60min，在5％CO2孵箱中培养。将各种浓度的药物添加至含病毒的细胞培养液中，24h后采取培养上清液，测定病毒的含量。 1.3 病毒滴定用空斑形成方法。将含有病毒的培养上清液按比例稀释，在24孔培养板内单层培养的仓鼠肾细胞株BHK上，添加0.6％的甲基纤维素液和含有1％FCS的MEM培养液，3d后用甲醇固定，l％结晶紫染色，计算空斑数。
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苏拉明对流行性乙型脑炎病毒E及NS3蛋白质合成的影响
苏拉明作为抗非洲锥虫药1920年应用于临床,其药理作用机制目前还不十分清楚.为探明苏拉明对流行性乙型脑炎病毒(乙脑病毒)有否抗病毒活性及对宿主细胞的影响,我们进行了初步研究,结果报道如下.
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抗生素"17997"对单纯疱疹病毒抑制效果的实验观察
"17997"是从我国云南省土壤中分离到的一株放线菌产生的抗生素,在抗病毒药物筛选中发现其具有广谱抗病毒作用.抗生素"17997"为非核苷类化合物,体内外抗病毒活性强,有剂量反应关系.在对细胞无毒浓度下可显著抑制单纯疱疹病毒(HSV)1、2型、人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)、水疱性口炎病毒及柯萨奇病毒B3,IC50在μmol/L水平.本实验运用光镜和电镜观察不同时间给予抗病毒抗生素"17997"对HSV-1的抑制作用,为临床合理应用提供实验室依据,为进一步探索其可能的作用机制提供线索.
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鼠IFN-λ2 CHO细胞系建立及生物学活性的研究
目的 稳定表达鼠IFN-λ2并对其生物学活性进行研究.方法 用水疱口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)刺激小鼠脾脏细胞,克隆mIFN-λ2全长基因,构建真核表达载体PCAGG-EGFP-mIFN-λ2,并在CHO细胞稳定表达,且在小鼠黑色素瘤B16细胞上进行抗病毒活性测定;构建MDBK-Mxp-Luc细胞系诱导Mx1抗病毒蛋白产生.结果 pMD18-T-mIFN-λ2双酶切鉴定,出现582 bp大小的条带,成功构建了PCAGG-EGFP-mIFN-λ2真核表达载体;稳定表达mIFN-λ2 CHO的细胞株分泌的上清中mIFN-λ2蛋白在B16细胞上的抗病毒活性为10~4 AU/ml;mIFN-λ2蛋白诱导鼠Mx1抗病毒蛋白的表达,9～12 h达高峰,24 h后消失(P<0.05).结论 建立了稳定表达mIFN-λ2的CHO细胞株,其分泌型mIFN-λ2蛋白具有明显的抗病毒活性,且与诱导Mx1抗病毒蛋白密切相关.
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不同Alloferon-1体外抗病毒效果
Alloferon-1是Chemysh等于2002报道的一种由13个氨基酸组成、相对分子质量为1481.53的新型抗菌肽,动物实验证实该抗菌肽有较强的抗流感病毒和抗白血病细胞的活性.人工合成或重组表达的抗菌肽Magainin-Ⅱ的生物学活性与大然产物相同.本研究中构建了串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统得到rAllofemn-1-EK,同时人工合成了sAIlofemn-1和sAlloferon-1-EK,比较重组及人工合成的3种AIIofemn-1体外抗病毒活性,以期为抗病毒新药研发提供实验依据.
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猪干扰素-γ基因在大肠杆菌中的克隆表达及其活性测定
目的 在大肠杆菌中高效表达重组猪干扰素γ(porcine interferon gamma,poIFN-γ),并对其抗病毒活性进行初步研究.方法 选择大肠杆菌偏爱密码子人工合成了猪干扰素-γ成熟蛋白编码基因,克隆至原核表达载体pQE30中,IPTG诱导表达,表达产物经变性、复性、纯化后,测定其抗病毒活性.结果 目的蛋白以包涵体的形式在大肠杆菌中获得高表达,表达量占总菌体蛋白的84.5%,纯化后的纯度达到95%以上,在PK15细胞上抗滤泡性口炎病毒比活性为6.2×105U/mg.结论 PoIFN-γ基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达产物具有抗病毒活性.
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表达人干扰素α-2b基因重组乳杆菌的鉴定及其抗病毒活性的动态研究
目的:进一步鉴定表达人干扰素α-2b的重组乳杆茵DM8909/pSC111AE-IFN-α-2b,考察重组茵的培养条件及其表达产物动态的抗病毒活性.方法:在LRS培养基培养重组菌株DM8909/pSC111AE-IFN-α-2b并诱导表达,用Western印迹鉴定培养上清中的表达产物,对重组菌株在LRS培养基中的不同时间的D600、pH值、活菌数、表达产物抗病毒活性进行动态观察.结果:Western印迹鉴定证实了重组茵上清中的IFN-α-2b.重组菌培养18 h后pH值由6.5开始下降,56 h后降至3.5;细菌于培养21 h进入对数期,32 h进入稳定期;培养24～32 h上清中干扰素抗病毒活性为4.08×105U/ml.结论:重组乳杆菌DM8909/pSC111AE-IFN-α-2b可表达IFN-α-2b于培养上清,培养24～32 h上清中干扰素含量高,可用于预防及治疗病毒感染的进一步研究.
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基于假病毒筛选抗病毒药物的研究进展
假病毒是一种整合其他病毒囊膜糖蛋白所形成的具有外源性病毒囊膜、而自身基因组仍保持着源病毒基因组特性的一类病毒。假病毒因丧失了病毒的自我复制能力，具有安全性高等优点，已被广泛用于包括HIV、H5N1、HCV等病毒的研究。本文介绍了基于假病毒技术进行研究的优势及局限性，还通过总结大量研究成果阐明了利用假病毒技术进行药物筛选的可行性与有效性。假病毒药物筛选平台作为一种新型、安全、可靠的实验手段，将为抗病毒药物的研究做出更多的贡献。
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基于神经氨酸酶活性检测的板蓝根品质的生物评价
采用流感病毒神经氨酸酶(NA)体外活性荧光检测法测定板蓝根的NA抑制生物活性.并建立板蓝根抗病毒生物效价检测方法.研究表明板蓝根具有抑制NA的活性,IC50=(0.90±O.20)mg·mL-1(相当于生药),其量效曲线形状与阳性对照药磷酸奥司他韦相似,提示二者对NA的抑制可能具有相同的作用方式.采用"质反应平行线,法设计和优化的板蓝根抗病毒生物效价检测方法,重复性较好(RSD=5.78%),实际样品检测结果均能通过可靠检验(偏离直线P>0.05、偏离平行P>0.05).研究结果表明,所建立的生物效价检测方法可以作为板蓝根品质生物评价的方法之一.
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二甲苯酮类非核苷类逆转录酶抑制剂的体外抗HIV-1活性
本文评价了5个二甲苯酮类非核苷类逆转录酶抑制剂(DY1203、DY1204、DY1119、DY1208和DY1209)的体外抗HIV-1药效学.采用MTT法检测了5个化合物对人T淋巴细胞系(C8166、MT-4、H9)和PBMC的毒性作用;p24抗原ELISA方法测定了化合物对1株HIV-1实验株、4株耐药株和3株临床株的抗病毒活性;HIV逆转录酶试剂盒检测了化合物体外对HIV-1重组逆转录酶的抑制活性.结果表明,5个化合物中,DY1203和DY1204对不同细胞的毒性均很小(CC50＞ 200 μg·mL-1).DY1119、DY1208和DY1209具有显著的抗病毒活性,对实验株HIV-1ⅢB、NRTI耐药株HIV-174v、PI耐药株HIV-1RF/V82F/184V、FI耐药株HIV-1NL4-3gp41 (36G)N42S和临床分离株(HIV-1KM018、HIV-1TC-1、HIV-1 wan)均有很强的抑制作用,而NNRTI耐药株HIV-1A17对其有不同程度耐药.5个化合物对HIV-1重组逆转录酶有不同程度的抑制效应,其中DY1208有显著的抗HIV-1活性和较高的治疗指数,安全性高,有望成为新的抗HIV-1先导化合物.
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阿兹夫定体外抗登革病毒活性研究
本文通过检测化合物对登革Ⅱ型重组病毒(DENV-Ⅱ Luc+)表达海肾荧光素酶活性的影响,进行化合物筛选,发现阿兹夫定 (azvudine, FNC)、盐酸阿兹夫定(hydrochloride salt of azvudine, FNC-HCl)和三磷酸酯阿兹夫定(triphosphate azvudine, FNC-TP)能够抑制DENV-Ⅱ Luc+的复制,并研究其体外抗登革病毒(dengue virus, DENV)活性.首先通过噬斑法检测FNC、FNC-HCl和FNC-TP对DENV的抑制活性;并通过蛋白印迹实验检测3种化合物对DENV-Ⅱ囊膜蛋白E (envelope protein E)表达的影响,后通过实时定量PCR检测化合物对DENV-Ⅱ病毒RNA的抑制作用.结果显示,FNC、FNC-HCl和FNC-TP抑制DENV复制的半数有效浓度(EC50)在0.54～25.42 μmol·L-1之间,阳性药物利巴韦林抑制DENV-Ⅱ的EC50为40.78 ± 1.02 μmol·L-1.蛋白印迹实验及定量结果显示,3种化合物均能抑制DENV-Ⅱ囊膜蛋白E的表达,并且显著地抑制DENV-Ⅱ病毒RNA的复制.通过MTT法检测发现FNC、FNC-HCl和FNC-TP的细胞毒性很小,半数细胞毒性浓度(CC50)均大于3 000.00 μmol·L-1.本研究表明FNC、FNC-HCl和FNC-TP在细胞水平、蛋白水平及RNA水平均能抑制DENV的复制,且抑制作用优于利巴韦林,有望成为抗登革病毒的候选药物.
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异叶青兰提取物抗病毒作用及挥发油成分分析
目的:探讨藏药异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抗腺病毒(ADV)、流感甲型病毒A/汉防/359/95 (H3N2)及单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)的作用.方法:细胞病变法测定提取物的半数有毒浓度及对病毒的半数效应浓度,以治疗系数(TI)为指标评价药效.采用气相色谱-质谱联用分析挥发油成分.结果:石油醚提取物抗A/汉防/359/95(TI=12.99)、抗单纯疱疹病毒Ⅱ(TI =6.48)活性强.挥发油抗腺病毒(TI=7.77)活性强.挥发油对单纯疱疹病毒Ⅱ型有较强的直接灭活作用(TI=3.1).挥发油主要成分为桉油精(22.18％),桃金娘烯醇(11.28％),顺式松油醇(11.11％)等.结论:异叶青兰挥发油、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物具有一定的抗腺病毒、流感甲型病毒A/汉防/359/95 (H3N2)及单纯疱疹病毒Ⅱ型的作用.
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抗HIV抑制剂cyanovirin-N的研究进展
Cyanovirin-N( CV-N)是一种天然蛋白,由蓝细菌合成分泌,低浓度(0.1～36.8 nmol· L-1)能有效抑制HIV感染免疫细胞,高浓度(45 ～ 400 nmol·L -1)对正常细胞无直接的毒副作用.CV-N是作用于吸附过程的HIV抑制剂并且作为局部用(阴道、直肠等)抗HIV药物正处于临床前开发阶段.本文对Cyanorivin-N的理化性质、结构和抗病毒作用机制等进行了概述.
关键词： cyanovirin-N 获得性免疫缺陷综合征 抗病毒活性
