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囊虫病和棘球蚴病免疫接种的研究进展
虽然世界各地采取服用抗蠕虫药和改变人们行为的方法来防治囊虫病和球蚴病,并取得了一定的效果,但疫苗的研究仍是必要的,它有可能在防治工作中起到非常重要的作用.作者在本文主要介绍在绵羊中抗棘球蚴病和在绵羊牛和猪体中预防囊虫病的一些有实用值的疫苗.有资料表明,重组疫苗对动物实验感染的保护率可高达80%以上,这些有潜力的疫苗在动物身上的成功,对于人体用疫苗预防囊虫病和棘蚴病的研究工作受到很大鼓舞.
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乙型肝炎病毒基因重组疫苗应用于母婴传播的免疫效果
作者对我国研制的哺乳动物细胞中高效表达的基因工程疫苗(CHO疫苗)阻断母婴传播的初步结果报道如下.
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乙型肝炎病毒基因重组疫苗阻断母婴传播的进一步观察
"七五"和"八五"计划期间,我国对第一代乙型肝炎(乙肝)疫苗(血源疫苗)的新生儿免疫效果进行了近期和远期效果考核,均证明效果良好."九五"期间又对第二代乙肝疫苗(基因工程疫苗)效果进行考核,以后取代血源疫苗.本文报道对我国研制的在哺乳动物细胞中高效表达的基因工程疫苗(CHO疫苗)阻断母婴传播的初步结果.
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重组酵母乙型肝炎疫苗免疫4年的效果观察
在基因重组疫苗中,重组酵母乙型肝炎疫苗(YDV)以其安全有效及生产质量和数量的绝对优势,为人们所信赖.但由于YDV使用时间较短,对其用于人群的免疫持久性尚不清楚,直接影响免疫策略的制定及控制乙型肝炎(乙肝)的效果.为观察、了解国产YDV的中、长期保护效果,为有效控制乙肝制定科学、有力的免疫策略提供依据,进行了本研究.
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乙型肝炎疫苗接种无应答解决对策
已正式批准使用的乙型肝炎(乙肝)疫苗,包括早期的血源疫苗和目前普遍使用的重组疫苗,按常规方案实施一个免疫程序后确有一定比例的接种者表面抗体(抗-HBs)滴度不能达到保护水平(即10 IU/L),在健康人群中该比例波动在2%~15%之间.这些所谓无应答者对乙肝病毒(HBV)仍然易感,一旦感染仍可发病或成为病毒携带者.乙肝疫苗接种无应答是个体内、外部多种因素共同作用的结果,内部因素(包括遗传因素)决定了个体对疫苗应答能力低下,而外部因素即疫苗接种又未打破这一状态[1].基于原因与机制的探讨,目前主要试图通过以下3种途径来解决这一问题.
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T4噬菌体表面展示技术的研究进展
噬菌体表面展示技术(phage display)是由Smith于1985年首先建立起来的一种新的生物技术[1],它能将表达的外源多肽或蛋白以融合蛋白的形式展示在噬菌体的表面,保持相对独立的空间构象和原有的生物活性[2].常用的噬菌体表面展示系统主要有丝状噬菌体、λ噬菌体及T4噬菌体展示系统等.虽然它们都具有噬菌体展示系统的优点,但对于丝状噬菌体来说,它不能展示那些难以分泌的肽和蛋白质,而且它的N端可融合外源多肽的容量有限,较大蛋白的融合会造成空间障碍,影响噬菌体的装配,使其失去感染力.而对于λ噬菌体,大分子蛋白的融合会抑制噬菌体的组装,使其生长受到影响,因此这两种噬菌体更适用于构建短肽库和cDNA表达文库[3],而不适于构建重组疫苗和表达分子量大具有完整结构域的蛋白质[4,5].
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表达流行性感冒病毒血凝素蛋白的重组腺病毒的构建
用RT-PCR方法扩增流感病毒血凝素基因,将其克隆到5型腺病毒载体质粒pAd5C中.用此质粒与EcoRI酶切回收的5型腺病毒基因组大片段共转染293细胞,通过PCR初步筛选得到重组病毒.SDS-PAGE电泳、Western blot证明重组病毒能表达流感病毒的血凝素蛋白.此重组病毒经滴鼻免疫Balb/C小鼠,ELISA实验证明能诱导小鼠产生针对流感病毒的循环抗体IgG和分泌型抗体IgA.本实验证明,利用E3区缺失的5型腺病毒载体可以用来表达流感病毒血凝素抗原,重组抗原具有良好的免疫原性,有可能发展成为基因工程流感疫苗.
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人类寄生虫重组疫苗研究进展
随着医学技术的不断发展,疫苗从问世到现在一直被认为是控制,预防和消除感染性疾病中有效的措施之一.由于寄生虫独特的生物学特性,相对病毒和细菌而言它们更复杂,它们有着更丰富的基因组,多阶段的生活史和抗原的多样性,所以针对寄生虫病疫苗一直处于在研阶段.本文通过检索近几年国内外学者针对疟原虫、阿米巴、弓形虫、隐孢子虫等寄生虫病疫苗新的研究成果,总结了其中有可能成为新型候选疫苗位点的研究进展.
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MPT64--卡介苗重组疫苗的构建
全球有三分之一的人口约20亿感染过结核分枝杆菌,其中1600万人处于活跃期,每年有约1000万新感染者.由于用药的不规范,耐药和耐多药结核病显著增多,增加了治疗的难度;流动人口的增加使结核病的传播机会增加;而艾滋病与结核病合并感染,使问题变的更为严峻.当前预防结核病的卡介苗效果在不同地区有很大差异,改进疫苗的要求提到日程.MPT64是结核分枝杆菌分泌蛋白中含量较多的一种,具有免疫保护力,是亚单位疫苗和核酸疫苗的候选者之一.
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重组幽门螺杆菌疫苗口服免疫BALB/c小鼠的研究
目的研究重组幽门螺杆菌疫苗口服免疫BALB/c小鼠后免疫保护效果和维持时间,并初步探讨其免疫机制. 方法 ELISA检测特异性抗体水平;同时ELISPOT检测派伊尔结特异性抗体分泌细胞;RT-PCR显示T淋巴细胞IFN-γ、IL-4 mRNA表达差异;以培养、组织切片、尿素酶试验结果判断攻毒保护率. 结果 (1) 疫苗组在胃、肠、气管冲洗液和血清产生高水平抗体;(2) 疫苗组小鼠派伊尔结特异性抗体分泌细胞显著升高(P=0);(3) 抗原刺激后,免疫组T淋巴细胞的IFN-γ、IL-4 mRNA表达量升高;(4) 免疫组攻毒保护率为86.7%~92.8%,且至少维持30周. 结论重组幽门螺杆菌疫苗口服免疫小鼠后有良好的预防Hp感染作用;疫苗诱导的可能是TH1/TH2型免疫应答.
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更正
本刊2015年第35卷第3期发表的论文《鼻咽癌特异性减毒重组疫苗Lmdd-LMP2 A的构建及其抑瘤效应的研究》,第二作者陈小琴的工作单位应为:南京医科大学附属南京儿童医院检验科。
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抗病毒治疗在阻断艾滋病传播流行中的作用
据2009 年,卫生部和联合国艾滋病规划署、世界卫生组织联合评估报告:我国艾滋病疫情持续上升,流行模式呈多样化[1] .从1981 年艾滋病首次被发现至今的30 年间,人类在艾滋病疫苗、健康教育与行为干预、抗病毒治疗等领域都取得了很多进展.2007 年,随着被认为有希望的艾滋病疫苗研究,Merck 公司以细胞免疫为主的腺病毒重组疫苗Ⅱb 期临床实验宣告失败,整个艾滋病疫苗研究领域进入了低谷,在短期内看不到疫苗研制成功的希望[2-3] .
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乙型肝炎病毒核心DNA疫苗研究进展
第一代乙型肝炎疫苗是从乙型肝炎表面抗原(HBsAg)无症状携带者血清中分离HBsAg颗粒,经灭活后制成的乙型肝炎血源疫苗;第二代乙型肝炎疫苗即为HBsAg基因重组疫苗,该疫苗可诱导体液免疫应答产生中和抗体,但不能诱导细胞免疫应答,主要用于预防,而不是用于治疗.目前,国内外正在研究和开发第三代乙型肝炎疫苗,即乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗(也称核酸疫苗),目的是既可用于预防,又可用于慢性乙型肝炎的治疗.
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表达ureB/hlyE融合蛋白的重组减毒鼠伤寒沙门疫苗菌预防幽门螺旋杆菌感染
目的:建立表达幽门螺杆菌(H pylorr)尿素酶B亚单位(UreB)与血溶素E(hlyE)融合蛋白的减毒沙门疫苗菌,并利用H pylori小鼠感染模型,研究该疫苗菌对H pylori感染的免疫保护作用.方法:利用分子克隆技术构建携带ureB/hlyE融合基因的重组原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE,经PCR及酶切鉴定后测定其基因序列,并与GeneBank中相关序列进行同源性比较.pTrc99A-ureB/hlyE转化减毒伤寒沙门菌SL3261,培养后筛选阳性菌落,抽提质粒进行PCR及酶切鉴定.表达的UreB/hlyE融合蛋白SDS-PAGE电泳和Western-blotting进行鉴定,薄层扫描分析蛋白含量.实验小鼠随机分成4组,分别灌胃给予生理盐水组、减毒鼠伤寒沙门菌SL3261组、携带pTrc99A-ureB的SL3261组、携带pTrc99A-ureB/hlyE的SL3261组.免疫后4 wk,予Hpylori107CFU/只进行攻击(生理盐水组不攻击).攻击4 wk后处死动物,取胃组织分别行改良Giemsa染色及定量细菌培养,观察H pylori定植情况.结果:核苷酸序列测定及同源性分析证实,原核表达质粒pTrc99A-ureB/hlyE中所含的H pylori-ureB及hlyE基因与GeneBank中的H pylori-ureB和hlyE基因同源性分别为97.42%(1 663/1 707)、99.78%(910/912).重组减毒沙门氏菌可表达约100ku的融合蛋白UreB/hlyE,含量占全菌体蛋白含量的15%;表达的融合蛋白能与小鼠抗H pylori血清特异性反应,具有良好的免疫原性.动物实验证实,疫苗组同空白对照组和SL3261组相比,H pylori定植密度明显下降,有显著性差异(P<0.05).表达UreB/hly蛋白的疫苗株组同表达UreB蛋白的疫苗株相比,H pylori定植密度明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论:重组疫苗菌对小鼠H pylori感染具有一定免疫预防作用,hlyE可以增强疫苗株的免疫保护效果.
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乙型肝炎病毒HBsAg重组疫苗与表面抗原DNA疫苗诱导H-2b小鼠免疫应答的实验研究
目的:观察重组乙肝疫苗及乙型肝炎病毒(HBV)表面抗原DNA疫苗接种后,C57BL/6(H2b)小鼠的免疫应答.方法:构建质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S.转染COS7细胞系进行表达.将C57BL/6小鼠分为5组,分别接种质粒pVR1012-L,pVR1012-M,pVR1012-S,pVR1012 100μg及重组乙肝疫苗1μg.ELISA法检测小鼠血清抗-HBs.结果:DNA疫苗在转染细胞中可表达HBsAg.血清抗-HBs在第一次接种重组乙肝疫苗后即可检出,而在DNA疫苗组则未检出.此后重组疫苗组诱导的抗-HBs的滴度与DNA疫苗组相似.结论:HBV表面抗原DNA疫苗在H-2b小鼠试验中有体液免疫原性.
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人源性大肠癌抗原基因的SEREX筛选
目的:寻找人源性大肠癌相关抗原基因.方法:构建3个以入Tripl Ex2噬菌体作载体的大肠癌抗原cDNA表达文库,用自体或异体大肠癌患者血清应用SEREX方法进行免疫筛选.用平板法扩增阳性克隆噬菌体,提取纯化DNA,用SfiI酶切和PCR鉴定插入片段的大小.结果:构建成3个大肠癌抗原cDNA噬菌体表达文库,滴度分别为2.39×106nfu/L,2.07×106nfu/L和1.86×106nfu/L,插入片段长度为0.5-4kb,平均分别为1.4kb,1.6kb和1.3kb.筛选发现4个阳性克隆,插入cDNA片段大小分别为2.4 kb,1.8 kb,2.3 kb和2.2 kb.结论:用SEREX方法筛选大肠癌抗原cDNA表达文库,可获得有价值的大肠癌的重组抗原基因克隆,将有利于大肠癌的早期诊断和重组疫苗的研究.
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重组戊型肝炎疫苗的免疫原性试验
目的研究重组戊型肝炎疫苗的免疫原性.方法通过对小鼠、新西兰兔的多点皮内注射及肌肉注射,然后测定其抗体效价,研究重组戊型肝炎疫苗的性能.结果小鼠在免疫7d后开始产生抗体,两周抗体阳性率为80%,四周抗体阳性率达100%.新西兰兔从第二周后开始产生抗体,第三周达到高峰,抗血清在1∶6400稀释度的阳性率达40%.结论重组戊型肝炎疫苗免疫动物具有良好的免疫原性,为进一步研究开发戊肝疫苗对人体的免疫提供了基础.
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福氏志贺菌IpaC基因-双歧杆菌重组活疫苗的构建与研究
目的 构建重组福氏志贺菌IpaC-双歧杆菌融合基因活疫苗.方法 通过PCR法获取福氏志贺菌(2457T)的侵袭性基因IpaC,经连接酶连接到pET32a从而构建pET32a-ipaC重组表达质粒,用电穿孔法导入双歧杆菌进行表达,用Western Blot鉴定表达的融合蛋白.结果 PCR成功扩增出约31 kbp的IpaC基因,双切酶证实Ipac基因成功连接到pET32a中,并且成功导入双歧杆菌,顺利表达出占细菌蛋白的6.1%左右可溶性融合蛋白,经镍离子柱纯化采用Western Blot分析,结果出现在63 KDa处,说明该蛋白是所要表达的融合蛋白.结论 pET32a-ipaC重组表达质粒导入双歧杆菌后,可以有效表达毒力蛋白IpaC,为下一步研究重组活疫苗在动物体内免疫原性奠定基础.
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轴突生长抑制因子重组疫苗预防免疫减轻阿尔茨海默症模型小鼠行为学损伤
目的 研究轴突生长抑制因子重组DNA疫苗对转基因阿尔茨海默症小鼠的预防治疗.方法 轴突生长抑制因子重组DNA疫苗肌肉注射APP/PS1双转阿尔茨海默症模型小鼠.设野生对照组、模型对照组、空载体对照组、疫苗组.水迷宫实验检测小鼠行为学差别.结果 疫苗组小鼠在4.5月龄水迷宫实验中学习记忆能力较模型对照及空载体对照组有显著差异(P<0.05).结论 肌肉注射轴突生长抑制因子DNA重组疫苗能够改善小鼠学习记忆能力.
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人用植物疫苗的研究进展
目前基因重组疫苗产品的宿主载体通常为细菌、酵母和哺乳动物细胞[1].随着基因工程技术的快速发展,植物转基因技术的日趋成熟,植物已成为基因重组生物制品的重要表达载体.