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IpaC文献资料
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福氏志贺菌IpaC基因-双歧杆菌重组活疫苗的构建与研究
目的 构建重组福氏志贺菌IpaC-双歧杆菌融合基因活疫苗.方法 通过PCR法获取福氏志贺菌(2457T)的侵袭性基因IpaC,经连接酶连接到pET32a从而构建pET32a-ipaC重组表达质粒,用电穿孔法导入双歧杆菌进行表达,用Western Blot鉴定表达的融合蛋白.结果 PCR成功扩增出约31 kbp的IpaC基因,双切酶证实Ipac基因成功连接到pET32a中,并且成功导入双歧杆菌,顺利表达出占细菌蛋白的6.1％左右可溶性融合蛋白,经镍离子柱纯化采用Western Blot分析,结果出现在63 KDa处,说明该蛋白是所要表达的融合蛋白.结论 pET32a-ipaC重组表达质粒导入双歧杆菌后,可以有效表达毒力蛋白IpaC,为下一步研究重组活疫苗在动物体内免疫原性奠定基础.
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痢疾志贺菌侵袭素IpaC的原核表达及纯化复性
目的 为进一步研究痢疾志贺菌侵袭素IpaC蛋白的侵袭活性,必须先获得IpaC重组融合蛋白.方法 将IpaC基因亚克隆至表达载体pET-24α(+)中,转化至E.coli BL21 (DE3)表达宿主菌中,采用IPTG优化诱导表达,然后纯化复性重组蛋白.结果 重组蛋白佳表达条件为0.50 mmol/L IPTG、30℃诱导6h,获得分子量约为33 kDa的IpaC重组蛋白.Western blotting证实了重组蛋白的特异性.IpaC重组蛋白主要以包涵体形式在宿主菌中表达,通过纯化后得到单一的目的蛋白.结论 成功构建IpaC原核表达体系,并获得了蛋白的高效表达及优化.初步建立了IpaC重组蛋白的纯化方案.为进一步研究IpaC的侵袭性作用奠定了基础.
