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孕酮依赖性糖蛋白与生殖
人子宫内膜在月经周期中的周期性变化主要受下丘脑-垂体-卵巢轴的调节,同时子宫内膜自身也分泌一些蛋白及多肽类物质参与调节.孕酮依赖性糖蛋白(glycodelin)是子宫内膜分泌多的分泌蛋白之一,80~90年代初对该蛋白的结构、功能、生物学效应以及应用曾进行了大量的研究.近年来由于胚胎植入领域出现了新的理论,例如植入窗的新概念,故glycodelin又重新受到关注.现就glycodelin在生殖内分泌方面的研究成果作一综述.
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高敏感度酶联免疫吸附测定法检测分泌蛋白MPB64对于活动性肺结核诊断的价值
目的 评价以结核分枝杆菌(MTB)分泌蛋白MPB64为检测抗原的高敏感度酶联免疫吸附测定法(high sensitivityenzyme-linked immunosorbent assay,HI-ELISA)用于检测痰液中MTB的价值.方法 选取97份储存的疑似肺结核患者的痰标本,分别进行BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960培养”)、MTB/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测系统(Gene Xpert MTB/RIF,简称“Xpert检测”)和HI-ELISA检测,通过与MGIT960培养比较来评价HI-ELISA的诊断效能.结果 本研究97份痰标本中,MGIT 960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为36.08%(35/97)、32.99%(32/97);与MGIT 960培养比较,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为88.57%(31/35)、98.39%(61/62)、94.85%(92/97).在Xpert检测阳性的66份痰标本中,MGIT960培养、HI-ELISA检测MTB的阳性率分别为51.51%(34/66)、48.48%(32/66);与MGIT 960培养相比,HI-ELISA的检测敏感度、特异度、总体符合率分别为91.18%(31/34)、96.88%(31/32)、93.93%(62/66).Xpert检测MTB为阴性的31份痰标本中,仅有1份标本的MGIT 960培养阳性而HI-ELISA未能检测到MTB,其他30份标本检测结果全部相符,符合率为96.77%(30/31).结论 HI-ELISA可以特异性检测MTB活菌,对活动性肺结核的诊断及治疗评价有很高的应用价值.
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结核分枝杆菌重组MPT64蛋白对豚鼠淋巴细胞增殖反应的影响
结核分枝杆菌在生长过程中分泌许多蛋白到细胞外,它们在结核病人的免疫反应中起重要作用.结核分枝杆菌MPT64属结核分枝杆菌分泌蛋白[1],国内外研究[2,3]表明了天然和重组的MPT64蛋白能引起结核分枝杆菌致敏豚鼠产生强烈的迟发型超敏反应,是引起人体对结核分枝杆菌保护性免疫反应的重要抗原之一.
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猪链球菌分泌蛋白的免疫蛋白质组学研究
目的 寻找猪链球菌(S.suis)SC84菌株分泌蛋白中具有抗原活性的蛋白,为S.suis特异诊断抗原和新的疫苗候选抗原的筛选提供线索.方法 采用免疫蛋白质组学和介质辅助激光解吸电离飞行时问质谱(MALDI-TOF MS)技术,分析和鉴定S.suisSC84菌株分泌蛋白中能与感染病例恢复期血清发生免疫杂交的蛋白点.结果 在S.suis SC84菌株分泌蛋白的免疫杂交膜上,共发现14个具有抗原活性的蛋白点,其中11个点可以在考马斯蓝染色胶上找到匹配点.11个蛋白点经质谱鉴定,分属于8种蛋白,全部定位于胞壁或胞外.其中溶菌酶释放蛋白、溶血素、细胞外因子为S.suis 已知的抗原蛋白;5'-核苷酸酶、ribonucleases G和E、金属内肽酶等为新发现的具有抗原活性的蛋白;所有的蛋白均能在测序菌株S.suis 05ZYH33基因组中找到相应的编码基因.结论 在S.suis 分泌蛋白中发现了新的具有抗原活性的蛋白,可能作为S.suis特异诊断抗原和疫苗候选抗原,用于诊断试剂和疫苗的研究.
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联体共生模型在衰老研究中的应用
联体共生(parabiosis)模型早在1863年被制作成功,并在1972年首次将有年龄差别的该模型(heterochronic parabiosis)引入对于寿命的研究.近年来,该模型在衰老研究领域取得了不少进展,并在神经系统、肌组织、骨组织和胰腺组织等方面取得了一些有意义的结论.本文将2011年以来基于有年龄差别的该模型在衰老研究中的应用做一综述,总结该领域的研究进展,梳理潜在的药物靶点,归纳研究的热点和焦点问题,并对该领域今后的发展方向做一展望,试图探索出研究的新思路.
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C9orf47-1重组蛋白的克隆表达及其对HepG2细胞周期的调控作用
目的 克隆表达C9orf47 1蛋白,探索其可能的生物学功能. 方法 构建C9orf47-1原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;纯化目的蛋白,制备兔源多克隆抗体;采用生物信息学软件对C9orf47 1蛋白进行生物信息学分析;采用Western blot检测其在HepG2、L02、LX2和Jurkat细胞系的表达情况,及重组蛋白对HepG2细胞内质网应激的影响;采用流式细胞术检测其对HepG2细胞周期的影响. 结果 PCR扩增获得序列完全正确的C9orf47-1基因片段,构建的C9orf47-1原核表达载体能在大肠埃希菌中以包涵体的形式表达C9orf47-1重组蛋白;重组蛋白经Ni NTA纯化后免疫大耳白兔,获得的多克隆抗体效价高达1∶640 000,并识别C9orf47-1蛋白;C9orf47-1蛋白在4种细胞系中均有表达,其中在HepG2和Jurkat中的表达量高于L02和LX2;重组蛋白未引起HepG2细胞的内质网应激,但可引起细胞周期的变化:延长G1、G2期,缩短S期(P<0.05). 结论 C9orf47-1重组蛋白具有抗原性,该蛋白对肝细胞周期(G2/S)有一定的阻滞作用.
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CC10蛋白功能及在疾病中的作用研究进展
Clara细胞是一种分布于哺乳动物肺脏末端细支气管的非纤毛、非浆液分泌上皮细胞,具有多种生物学功能.在气管支气管树分叉处的Clara细胞是支气管上皮细胞的祖细胞,有助于损伤后上皮再生[1-2].Clara细胞10-kD蛋白(clara cell 10-kD protein,CC10)是Clara细胞分泌的一种分子量为10-kD的分泌蛋白.其通过抑制磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)活性发挥抗炎和免疫调节活性[3-4].CC10初因出现在兔生殖管道着床期,被称为子宫球蛋白( uteroglobin,blastokinin).除此之外,CC10还有多种别名,如CCSP (Clara cell secretory protein)、CC16 (Clara cell 16-kD protein)、 UP-1 (urine protein 1)、CCPBP ( Clara cell phospholipid-binding protein)、 SCGB 1A1(Secretoglobin family 1A member 1 )等.
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趋化因子受体CCR7及其配体在肿瘤侵袭和转移中的研究进展
趋化因子是一组由组织细胞和炎性细胞产生的、能够趋化细胞定向移动的小分子分泌蛋白,由70至100个氨基酸组成.迄今已发现50余种人的趋化因子,且在趋化因子中都有4个保守的半胱氨酸(C).
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5种沙眼衣原体分泌蛋白对小鼠巨噬细胞和树突状细胞吞噬功能的影响
目的 探索5种沙眼衣原体分泌蛋白在体外对小鼠巨噬细胞和树突状细胞吞噬功能的影响.方法 原核表达蛋白GST-CT311、GST-GIgA、GST-cHtrA、GST-OmcBc和GST-Pgp3中,同时表达了衣原体膜蛋白GST-IncA作为对照,经谷胱甘肽巯基转移酶( GST)磁珠纯化、PreScission蛋白酶切除GST标签后得到蛋白CT311、GIgA、cHtrA、OmcBc、Pgp3以及IncA.取C3H/HeJ小鼠骨髓细胞制备巨噬细胞和树突状细胞,分别用100 μg/ml和500 μg/ml的蛋白质预处理巨噬细胞和树突状细胞,4 h后加入荧光珠,1 h后固定细胞,直接免疫荧光法计数每100个细胞吞噬荧光珠的平均数量(吞噬量)及每100个细胞中吞噬的细胞百分比(吞噬率).结果 高、低浓度蛋白质组对巨噬细胞及树突状细胞的吞噬率均无明显影响;与无处理组相比,LPS以及低浓度(100 μg/ml)的各蛋白组对巨噬细胞和树突状细胞的吞噬量无明显影响;高浓度组(500 μg/ml)的Pgp3、cHtrA及CT311预处理的巨噬细胞和树突状细胞吞噬量明显升高,GIgA、OmcBc以及IncA对巨噬细胞和树突状细胞的吞噬量无明显影响.结论 在体外,沙眼衣原体分泌蛋白Pgp3、cHtrA及CT311可以促进巨噬细胞和树突状细胞的吞噬功能,这可能有助于沙眼衣原体在宿主体内的播散感染.
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幽门螺杆菌VacA毒素的初步纯化
早期发现幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)液体培养上清中含有导致哺乳动物上皮细胞产生空泡的物质,后来证实是由一种相对分子质量(Mr)约为87000或95000的Hp分泌蛋白引起,因而命名为致空泡变性细胞毒素(VacA).
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MPT64--卡介苗重组疫苗的构建
全球有三分之一的人口约20亿感染过结核分枝杆菌,其中1600万人处于活跃期,每年有约1000万新感染者.由于用药的不规范,耐药和耐多药结核病显著增多,增加了治疗的难度;流动人口的增加使结核病的传播机会增加;而艾滋病与结核病合并感染,使问题变的更为严峻.当前预防结核病的卡介苗效果在不同地区有很大差异,改进疫苗的要求提到日程.MPT64是结核分枝杆菌分泌蛋白中含量较多的一种,具有免疫保护力,是亚单位疫苗和核酸疫苗的候选者之一.
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肾胺酶——心肾关系的新标志
新的研究发现,肾脏产生一种新型的蛋白质--肾胺酶(renalase),一种依赖于黄素腺嘌呤二核苷酸的胺氧化酶,由肾脏分泌入血,通过降解儿茶酚胺调节心脏功能和血压.肾脏疾病与心血管疾病密切相关,因此肾胺酶越来越受到人们的关注.笔者总结了近几年有关肾胺酶的研究,对该酶的结构及其作用机制进行简单综述,并提出其发展前景.
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肿瘤分泌蛋白的临床研究进展
蛋白质作为生命功能的执行者,在内质网上合成后,运输至高尔基体内进一步加工和分选,然后被运送到相应的细胞器中,或被分泌到细胞外发挥功能,该过程称为细胞分泌,其中分泌到细胞膜外的蛋白质称为分泌性蛋白或分泌蛋白.分泌性蛋白占人类蛋白质组的十分之一,其中细胞蛋白的20%~25%是可分泌蛋白.
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酵母双杂交技术筛选Hcbp6结合的肝细胞蛋白编码基因
目的:Hcbp6是与核心蛋白相结合的未知功能蛋白基因,为了初步提示他的生物学功能和在细胞中的存在形式,采用酵母双杂交体系寻找与他相互作用的肝细胞蛋白,探讨Hcbp6的生物功能.方法:应用酵母双杂交系统3,构建Hcbp6诱饵质粒并转化酵母AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,在涂有x-α-gal营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)上筛选生长.挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒,转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析.结果:筛选出4种与Hcbp6特异性相互作用的蛋白,包括Paralemmin(PALM)、Ran结合蛋白2(Ranbp2)、跨膜运输蛋白21(Tmp21)和血清白蛋白.结论:推测该蛋白可能为一分泌性蛋白,或与分泌蛋白的形成有关,进一步的生物学功能的研究需要更多的实验加以探讨.
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C7orf69基因的克隆表达及生物信息学分析
目的:体外克隆表达并纯化C7orf69重组蛋白,对C7orf69蛋白进行生物信息学分析。方法 PCR扩增C7orf69目的基因片段,构建原核表达载体,转化BL21,IPTG诱导目的蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定,Ni-NTA纯化目的蛋白。结果扩增获得序列完全正确的C7orf69基因片段(自然变异体),重组蛋白以包涵体的形式高效表达,在非变性条件下获得较高纯度的重组蛋白。生物信息学软件预测C7orf69蛋白(含信号肽)含有PKC、CK2磷酸化位点和N-十四烷基化位点。结论成功的对分泌蛋白C7orf69进行了基因克隆、表达与初步纯化,为其进一步的功能研究奠定了坚实的基础。
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脂肪组织分泌功能研究新进展
长期以来,脂肪组织一直被认为是仅供能量贮备的终末分化器官.然而,随着瘦素(leptin)、脂肪源性的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、脂联素(adiponectin)和抵抗素(resistin)等的发现,脂肪组织的分泌功能及其在肥胖、胰岛素抵抗(IR)和2型糖尿病(T2DM)发病机制中的作用已倍受关注.鉴于上述多种脂肪细胞因子的相继发现,已有学者提出脂肪组织是一个内分泌器官[1].为全面了解脂肪组织的分泌功能,我们率先以cDNA微阵列技术建立了人腹腔内脏脂肪组织的基因表达谱.首次发现60种分泌蛋白和88种受体蛋白在内脏脂肪组织表达,并鉴定出脂肪组织内的8个新的自分泌或旁分泌系统[2].脂肪组织表达的众多分泌蛋白中,多数是通过自分泌或旁分泌的方式发挥作用.本文主要就部分脂肪细胞因子的研究热点及重要进展作一阐述.
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分泌蛋白MPT64鉴定结核分枝杆菌复合群的应用研究
v、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌为阳性,24株非MTB均为阴性;mpt64基因扩增的结果与ELISA法检测结果完全相符.ELISA法检测MTB临床分离株的敏感度为97.3%(110/113),57株非MTB均未检出MPT64蛋白,检测特异度为100.0%.基因扩增MTB中2株为阴性,非MTB均为阴性.结论 采用ELISA法检测分泌蛋白MPT64来鉴定MTB复合群,是一种准确、快速和简便的方法,值得临床推广应用.
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表达Ag85B-ESAT6的重组卡介苗在小鼠体内诱导的免疫应答及保护力
超表达分泌蛋白Ag85B的重组卡介苗免疫豚鼠获得的保护效力超过卡介苗[1],这为研究新型结核病疫苗提供了思路.为了全面评估我们构建的融合表达Ag85B与ESAT6的重组卡介苗免疫学特性,我们进一步研究了该菌株在小鼠体内诱发的免疫应答水平及其对结核分枝杆菌毒株感染的保护力.
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结核分支杆菌重组ESAT6蛋白抗原诱发豚鼠迟发型超敏反应的研究
结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)含多种蛋白成分,与多种分支杆菌存在交叉,尤其在鉴别结核分支杆菌感染和卡介苗接种阳转者上有一定的困难.所以PPD作为结核病诊断试剂有其局限性.现已发现结核分支杆菌Ag85、MPT64、38 000、MPT63、ESAT6等抗原,均能诱发豚鼠发生迟发性超敏反应(DTH).具有高特异性的新的诊断试剂或许就存在它们或它们的组合中.ESAT6蛋白是结核分支杆菌生长中的一种小相对分子质量分泌蛋白,它能诱发结核分支杆菌感染的豚鼠发生很强的DTH反应,大部分BCG在减毒过程中丢失了编码该蛋白的基因,且该基因只在少数分支杆菌中存在,特异性较强,用于皮肤试验有其自身的优点.
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支气管哮喘患者诱导痰中Clara细胞分泌蛋白的表达
支气管哮喘(简称哮喘)是一种慢性气道炎症,同时也有抗炎机制起作用.其中支气管无纤毛上皮Clara细胞分泌蛋白CC16即具较强的抗炎及免疫调节作用,与多种呼吸系统疾病有关.我们通过测定哮喘诱导痰中CC16 mRNA表达,探讨其在哮喘中的作用.