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二甲基胂酸致小鼠肺肿瘤促进作用中诱发氧化应激
目的 研究无机砷在体内甲基化代谢的主要产物二甲基胂酸(dimethylarsinic acid,DMA)在致肺肿瘤促进作用过程中是否诱发氧化应激.方法 应用免疫组织化学方法和免疫电子显微镜胶体金染色法,检测400 ppm DMA经饮水给药0～25周,小鼠肺组织中脂质过氧化的主要代谢产物4-羟烯酸(4-hydroxy-2-nonenal,4HNE)的表达及定位.结果 DMA给药25周,肺组织的姬姆(HE)染色与对照组比较未观察到明显的形态学改变.免疫组织化学方法检测到肺终末细支气管上皮细胞胞浆中有棕色颗粒的4HNE阳性染色,染色细胞数明显高于对照组(P＜0.05).从DMA给药8周开始4HNE阳性染色细胞数随给药时间延长而增多,并且与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).免疫电子显微镜胶体金染色法观察到肺终末细支气管上皮细胞中呈阳性染色的为无纤毛的Clara细胞.DMA给药导致小鼠肺Clara细胞发生滑面内质网扩张、增生及核周水肿等超微结构的形态学改变.结论 口服DMA诱发氧化应激,并且在DMA诱发肿瘤促进作用过程中一直起着十分重要的作用.我们首次指出,口服DMA致小鼠肺肿瘤促进作用过程中,DMA诱发的氧化应激特异地发生在肺肿瘤的靶细胞Clara细胞.
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二甲基胂酸致小鼠肺肿瘤促进作用过程中诱发肺CLARA细胞氧化应激
目的二甲基胂酸(dimethylarsinic acid,DMA)是无机砷在体内甲基化代谢的主要产物,在DMA致肺肿瘤促进作用过程中是否诱发氧化应激.
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Clara细胞分泌蛋白
Clara细胞分泌蛋白(CCSP)是Clara细胞主要的分泌物,由二条相同肽链反向排列连接而成.CCSP作为肺上皮特异性蛋白,已成为肺上皮屏障损伤的外周标志.CCSP具有抗炎、抗氧化、免疫调节、肿瘤抑制等多种生物活性.CCSP的异常与新生儿呼吸窘迫综合征、急性呼吸窘迫综合征、哮喘、慢性阻塞性肺疾病等多种肺部疾病的发生发展有关.阐明CCSP的生理功能及作用机制,将为肺部疾病的防治提供新的启示.
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CC10蛋白功能及在疾病中的作用研究进展
Clara细胞是一种分布于哺乳动物肺脏末端细支气管的非纤毛、非浆液分泌上皮细胞,具有多种生物学功能.在气管支气管树分叉处的Clara细胞是支气管上皮细胞的祖细胞,有助于损伤后上皮再生[1-2].Clara细胞10-kD蛋白(clara cell 10-kD protein,CC10)是Clara细胞分泌的一种分子量为10-kD的分泌蛋白.其通过抑制磷脂酶A2(phospholipase A2,PLA2)活性发挥抗炎和免疫调节活性[3-4].CC10初因出现在兔生殖管道着床期,被称为子宫球蛋白( uteroglobin,blastokinin).除此之外,CC10还有多种别名,如CCSP (Clara cell secretory protein)、CC16 (Clara cell 16-kD protein)、 UP-1 (urine protein 1)、CCPBP ( Clara cell phospholipid-binding protein)、 SCGB 1A1(Secretoglobin family 1A member 1 )等.
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吸烟者Clara细胞形态和功能的改变
目的:观察吸烟者小气道中Clara细胞形态和功能的改变,了解Clara细胞在吸烟所致肺部损伤中的作用.方法:收集手术肺组织标本54例,免疫组织化学法观察小气道中Clara细胞分布及所占比例,RNA酶保护实验测定肺组织中Clara细胞16 kD特异性分泌蛋白(CC16)mRNA表达并用Western法测定CC16蛋白水平.结果:终末及呼吸性细支气管中,Clara细胞占上皮细胞的比例在吸烟组较非吸烟组减低(终末细支气管11.7%、18.8%;呼吸性细支气管15.27%、25.32%,P<0.01).戒烟组较吸烟组回升(分别为19.41%、13.2%,P<0.05).吸烟组杯状细胞增生明显,P<0.01.呼吸性细支气管中,戒烟组杯状细胞增生明显减轻,P<0.01.吸烟组肺组织中CC16 mRNA表达(0.29±0.02、0.51±0.06,P<0.01)及蛋白水平(0.87±0.12、1.78±0.31,P<0.01)均下降,戒烟组有所恢复,但无显著性差异.结论:吸烟破坏Clara细胞,使其分泌蛋白CC16表达减少,戒烟可使Clara细胞的破坏部分恢复.Clara细胞数目减少与功能的变化削弱人体保护机制,导致肺损伤.其改变可能是吸烟所致肺部疾病形成的机制之一.
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慢性阻塞性肺疾病患者Clara细胞形态和功能的改变
目的探讨Clara细胞在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病中的作用.方法收集COPD患者肺手术标本13例,并收集年龄、吸烟指数(吸烟支数/天×年)相近的非COPD患者13例肺标本,免疫组化法观察小气道中Clara细胞所占比例及分布,RNA酶保护实验测定肺组织中CC16 mRNA表达水平,Westem法测定CC16蛋白水平.结果COPD组呼吸性细支气管中Clara细胞数目低于非COPD组(P＜0.05),肺组织中CC 16 mRNA的表达低于非COPD组(P＜0.05),CC16蛋白水平在两组中差异无显著性.结论Clara细胞的数目与功能的变化可能是COPD形成的机制之一.
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大鼠哮喘模型Clara细胞及其分泌蛋白的表达
目的观察大鼠哮喘模型Clara细胞及其分泌蛋白(CCSP)的表达.方法 SD大鼠24只,分为哮喘模型组和健康对照组.哮喘模型组大鼠用卵白蛋白(OVA)致敏激发建立大鼠哮喘模型.用逆转录-聚合酶链反应、斑点免疫印迹、免疫组化及图像分析方法检测2组大鼠肺组织CCSP mRNA表达、支气管肺泡灌洗液(BALF)中CCSP蛋白水平、细小支气管Clara细胞比率及气道形态学参数.结果哮喘模型组大鼠OVA激发2周的支气管总管壁面积、内壁面积及平滑肌面积均较健康对照组和哮喘模型组OVA激发1周时的增加(P<0.01),并与CCSP及其mRNA呈负相关(r分别为-0.59、-0.72、-0.65、-0.63、-0.78及-0.73,P<0.01).哮喘模型组大鼠细支气管、终末细支气管及呼吸性细支气管Clara细胞数量减少(P<0.01 或0.05).哮喘模型组大鼠肺组织CCSP mRNA表达较健康对照组降低,BALF中CCSP 蛋白含量降低.结论 CCSP mRNA表达降低,Clara细胞数量减少.
关键词： 哮喘 Clara细胞 Clara细胞分泌蛋白 -
地塞米松对豚鼠哮喘模型Clara细胞的影响
目的 观察糖皮质激素对豚鼠支气管哮喘(简称哮喘)模型肺组织Clara细胞的影响.方法 以29只健康豚鼠为实验动物,随机分为三组:正常对照组、过敏性哮喘组和地塞米松(DXM)预处理组.用卵白蛋白致敏、雾化建立豚鼠哮喘模型,用免疫组化的方法观察肺组织中Clara细胞,即Clara细胞蛋白10(CC10)阳性细胞及光镜下观察肺组织的病理学变化.结果 过敏性哮喘组豚鼠,肺组织免疫组化CC10的表达较正常对照组和DXM预处理组减少,而且与正常对照组和DXM预处理比较,均有显著性差异(P＜0.05).讨论哮喘时肺组织中Clara细胞的数目减少,提示Clara细胞及CC10参与了哮喘的发病,它是其中一种重要的内源性的抗炎因子,糖皮质激素可增加CC10的表达,其抗炎作用可能部分是通过上调CC10在肺组织中的含量而实现的.
关键词： 哮喘 Clara细胞 Clara细胞蛋白10 地塞米松 -
Clara细胞、Clara细胞分泌蛋白在哮喘发病机制中的作用
Clara细胞是一种无纤毛上皮细胞,主要分布于终末细支气管和呼吸性细支气管上皮;Clara细胞具有活跃的增殖分化特性,参与支气管上皮损伤的修复过程.Clara细胞分泌蛋白(CCSP)是Clara细胞主要的分泌产物,具有抗炎、抗纤维化的生物学特性.而支气管哮喘是一种慢性呼吸道炎症性疾病,本文就近年来Clara细胞、CCSP与哮喘发病机制关系的研究进展简要综述.
关键词： 哮喘 儿童 Clara细胞 Clara细胞分泌蛋白 -
不同药物对COPD大鼠Clara细胞和CC16表达的影响
目的 观察N-乙酰半胱氨酸 (NAC)、红霉素和地塞米松干预对大鼠慢性阻塞性肺疾病 (COPD) 模型Clara细胞数量及其分泌蛋白CC16表达的影响.方法 单纯熏香烟法建立Wistar大鼠COPD模型.将大鼠随机分为正常对照组、COPD组、NAC组、红霉素组和地塞米松组,每组10只.免疫组织化学方法检测各组大鼠肺组织Clara细胞数量.酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液 (BALF) 和血清中CC16含量.RT-PCR法检测各组大鼠肺组织中CC16 mRNA的含量.结果 COPD组大鼠终末细支管上皮Clara细胞占上皮细胞的百分比明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.01);NAC组和红霉素组Clara细胞百分比与COPD组相比有所增加(分别为P＜0.01,P＜0.05);而地塞米松组与COPD组无统计学差异(P＜0.05).COPD组大鼠BALF和血清中CC16蛋白水平(A)明显低于对照组,差异有显著性(P＜0.01);NAC组及红霉素组BALF和血清中CC16蛋白水平明显高于COPD组,差异也有显著性(P＜0.05);而地塞米松组大鼠BALF和血清中CC16蛋白水平与COPD组比较差异无显著性(P＜0.05).COPD组大鼠肺组织中CC16 mRNA的含量明显低于对照组,NAC干预组和红霉素组明显高于COPD组(分别为P＜0.01,P＜0.05),而地塞米松组与COPD组比较差异无显著性(P＜0.05).结论 被动吸烟所致COPD大鼠的慢性气道炎症可导致Clara细胞数量及CC16的合成及分泌量减少,NAC和红霉素可能通过促进CC16的合成和分泌抑制气道炎症反应,地塞米松对CC16的合成及分泌量未见明显影响.
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实验动物呼吸系统主要器官比较组织学研究
目的 比较实验动物呼吸系统主要器官的组织学特征,为制定实验动物病理检测标准、以及毒理学、新药安全性评价提供依据.方法 选取实验动物质量国家检测标准检测合格的恒河猴30只、昆明小鼠20只、SD大鼠20只、日本大耳白兔18只、比格犬16只、树鼩20只.除昆明小鼠采用颈椎脱臼致死外,其余动物麻醉后放血处死和病理解剖,对气管、肺脏进行病理大体检查和取材,常规病理制片,进行HE染色、特殊染色和免疫组化染色,显微镜下观察气管、肺脏的组织结构和细胞结构异同.结果 (1)实验动物气管上皮杯状细胞有差异:恒河猴、比格犬、日本大耳白兔杯状细胞较多,大鼠、小鼠、树鼩则较少或无.上皮分泌的黏液类型以中性黏液为主,比格犬杯状细胞分泌的黏液类型有中性黏液和酸性黏液.(2)实验动物黏膜下腺泡分布有差异:比格犬黏膜下层的腺泡多,恒河猴、大鼠、小鼠、树鼩腺泡数量偏少,日本大耳白兔黏膜下层的混合腺泡少.(3)实验动物的肺内支气管分支有差异:比格犬、恒河猴、日本大耳白兔由叶支气管、段支气管、小支气管、细支气管、终末细支气管和呼吸性细支气管组成,树鼩、大鼠、小鼠只由细支气管、终末细支气管和呼吸性细支气管组成.(4)实验动物细支气管组织结构有差异:恒河猴、比格犬的细支气管平滑肌为完整环形平滑肌层,没有缺失,而大鼠、小鼠、树鼩及日本大耳白兔的细支气管平滑肌薄或缺失.恒河猴、树鼩、大鼠细支气管有少量杯状细胞,其余实验动物均无杯状细胞.(5)实验动物Clara细胞形态有差异:比格犬Clara细胞呈立方形,其余动物呈柱状.结论 实验动物呼吸系统组织结构的质是相同的,差异在于量的不同.研究人员在制定病理学检测标准、实验研究、药物安全性评价时应予充分考虑.
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被动吸烟对大鼠肺组织Clara细胞及CC16的影响
目的 研究被动吸烟不同时间大鼠肺组织Clara细胞及其分泌蛋白CC16的变化,以探讨被动吸烟与肺部慢性炎症性疾病发生的关系.方法 将Wistar雄性大鼠随机分为被动吸烟1、2、3月组和正常对照组,每组10只.进行HE染色,观察实验组大鼠肺组织光镜表现,以透射电镜观察其Clara细胞的超微结构.以RT-PCR法检测各组大鼠肺组织CC16mRNA的表达水平,以免疫组织化学法检测肺组织Clara细胞数量,以酶联免疫吸附法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中CC16含量.结果 被动吸烟3月组大鼠终末细支管上皮Clara细胞超微结构有显著改变;HE染色见肺泡壁变薄,相互融合成肺大泡.随着被动吸烟时间的延长,大鼠肺组织CC16 mRNA的表达、Clara细胞的数量及BALF中CC16的含量逐渐降低.被动吸烟2月和3月组大鼠肺组织CC16 mRNA的表达、Clara细胞的数量及BALF中CC16的含量与正常对照组比较,差异有统计学意义(P均＜0.01).被动吸烟1月组大鼠肺组织CC16 mRNA的表达、Clara细胞的数量及BALF中CC16的含量与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在一定吸烟量条件下,随暴露时间延长,Clara细胞数量及CC16的合成及分泌量减少,这可能与肺部慢性炎症性疾病的发生发展有一定的关系.
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生长激素对急性肺损伤大鼠Clara细胞的影响
目的 探讨应激反应期生长激素(Gh)对急性肺损伤(ALI)大鼠Clara细胞的影响.方法 将112只雄性SD大鼠随机均分为ALI组和重组人生长激素(rhGh)组,两组大鼠根据致伤与否及致伤后的观察时间不同又随机均分为0、0.5、1、2、4、6和24 h共7个亚组.通过免疫组织化学染色、透射电镜分析,观察ALI大鼠Clara细胞数量和形态学方面的变化.结果 静脉注射内毒素脂多糖(LPS)后0.5 h ALI组大鼠开始出现ALI病理改变,随着时间的延长,肺损伤程度逐渐加重,于6 h达重,6 h后逐渐恢复.rhGh组大鼠静脉注射LPS后肺部病理变化趋势与ALI组大鼠相似,但各时间点肺损伤程度进一步加重.LPS致伤后1 h ALI组大鼠Clara细胞数量开始明显减少,6 h达少,24 h逐渐恢复,差异有统计学意义(P均＜0.01).与ALI组同期比较,LPS致伤后rhGh组大鼠Clara细胞数均有不同程度减少,以24 h减少更明显.LPS致伤后24 h,ALI组大鼠Clara细胞的超微结构明显受损,rhGh组大鼠Clara细胞超微结构损害较ALI组更为严重.结论 应激反应期应用rhGh可加重内毒素血症所致ALI大鼠Clara细胞受损.
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Clara细胞与哮喘
Clara细胞是衬覆于远端细支气管的非纤毛上皮细胞,其形态结构在不同种属动物间变异较大.Clara细胞具有分泌、增殖分化、生物转化等多种生物学特性.近年来的研究显示,Clara细胞的主要分泌物为Clara细胞10kD蛋白,具有抗炎和免疫调节功能,Cara细胞是修复受损气道上皮的重要前体细胞.Clara细胞的功能异常参与哮喘的发生发展过程.
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PM2.5暴露对呼吸系统黏液纤毛清除系统的影响
气道黏液纤毛清除系统是呼吸道重要的防御机制之一,在抵御外来微生物和有害刺激入侵中起重要作用.PM25暴露可破坏呼吸系统的防御功能,引起黏液纤毛清除系统损伤,黏液分泌增加及清除功能障碍,导致气道黏液阻塞,参与多种呼吸系统疾病的发生发展.本文就PM2.5暴露对气道黏液纤毛清除系统的影响作一综述.
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右美托咪定预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤时Clara细胞分泌蛋白表达的影响
目的 评价右美托咪定预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤时Clara细胞分泌蛋白(CC16)表达的影响.方法 健康Wistar大鼠112只,雌雄不拘,8~12周龄,体重250~350 g,采用随机数字表法分为2组(n=56):急性肺损伤组(ALI组)和右美托咪定预先给药组(DEX组).经1 min静脉注射LPS 5 mg∕kg制备内毒素性急性肺损伤模型.DEX组于注射LPS前10 min时经10 min静脉输注右美托咪定10 μg∕kg.分别于注射LPS前10 min和注射LPS后0.5、1、2、4、6、24 h时处死8只大鼠,取肺组织,光镜下观察病理学结果,透射电镜下观察Clara细胞超微结构,采用免疫组化法测定细支气管 CC16表达.结果 与注射LPS前10 min时比较,ALI组注射LPS后1、2、4、6和24 h时、DEX组注射LPS后1、2、4和6 h时细支气管CC16表达下调(P<0.01),注射LPS后肺小动脉充血、肺泡隔水肿,红细胞渗出和炎性细胞浸润,细支气管Clara细胞减少,胞质内分泌颗粒减少,线粒体肿胀变形;与ALI组比较,DEX组注射 LPS后1、2、4、6和24 h时细支气管 CC16表达上调(P<0.01),肺组织病理学损伤减轻,Clara细胞数增多.结论 右美托咪定预先给药减轻大鼠内毒素性急性肺损伤的机制可能与上调CC16的表达有关.
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去除脂肪型脂肪酸结合蛋白4阳性干细胞可影响肺部无纤毛(clara)细胞的增殖与自我更新
背景:近年来关于脂肪型脂肪酸结合蛋白4(fatty acid-binding protein 4,FABP4)的研究已经很多,但肺中FABP4的表达情况与功能仍不明确.目的:探究FABP4在肺中的表达情况和功能.方法:利用FABP4 Cre;Rosa26-tdTomato小鼠示踪红色荧光蛋白表达以及免疫荧光染色共定位系统性地研究了FABP4在肺中的表达情况,并构建FABP4 Cre;iDTR转基因小鼠通过注射白喉毒素特异性去除肺部表达FABP4的细胞,初步探究FABP4在肺中的功能.结果与结论:FABP4能标记成年小鼠肺部的巨噬细胞、无纤毛(clara)细胞、Ⅱ型肺泡细胞、PDGFRα和vimentin阳性间质细胞,但不能标记平滑肌细胞和纤毛(ciliated)细胞.另外,当去除肺部表达FABP4阳性细胞时会出现小鼠无纤毛(clara)细胞及纤毛(ciliated)细胞比例减少的表型,推测可能是去除了FABP4阳性干细胞特性细胞后影响了肺部无纤毛(clara)细胞的增殖与自我更新.该研究比较全面地揭示了FABP4在小鼠肺中的表达情况,并初步探究了FABP4在肺中的作用,为肺的免疫反应及稳态维持等相关研究奠定了一定的基础,并可能成为肺部疾病治疗的潜在靶点.
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慢性阻塞性肺病大鼠气道Clara细胞结构及分泌蛋白表达的变化
目的：探讨烟草雾吸入诱导的慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠气道Clara细胞及其分泌蛋白（CC10）表达的变化。方法采用自制的染毒箱，使大鼠吸入烟草雾制作COPD模型，对Clara细胞进行电镜及免疫组化观察，并测定大鼠气道阻力及呼吸系统总顺应性。结果 COPD大鼠终末及呼吸性细支气管Clara细胞数量减少，胞质内滑面内质网扩张；终末及呼吸性细支气管上皮细胞CC10表达减少；呼吸功能检查显示气道阻力增加、呼吸系统总顺应性下降；气道上皮细胞CC10阳性细胞百分率与气道阻力呈负相关。 COPD大鼠终末及呼吸性细支气管上皮细胞 Clara细胞数量减少，气道上皮细胞CC10表达减少，CC10阳性细胞百分率与气道阻力呈负相关、与动态顺应性呈正相关。结论 Clara细胞及 CC10表达减少，这可能与大鼠气道阻力增加及呼吸系统总顺应性下降有关。
关键词： 慢性阻塞性肺疾病(COPD) Clara细胞 大鼠模型 -
红霉素对支气管哮喘大鼠Clara细胞及CC16表达的影响
目的 探讨红霉素对支气管哮喘(简称哮喘)大鼠模型肺组织Clara细胞数量和Clara细胞分泌蛋白-16(CC16)表达的影响.方法 用卵白蛋白(OVA)致敏、激发建立大鼠哮喘模型,随机分为正常对照组、哮喘组、红霉索组、地塞米松组.收集肺泡灌洗液(BALF)进行细胞计数及分类,光镜下观察肺组织病理学变化；ELISA方法检测BALF中CC16含量,用免疫组化的方法检测肺组织中Clara细胞表达变化.结果 与正常对照组相比,哮喘组大鼠支气管及血管周围、肺间质内有嗜酸性粒细胞(EOS)及其他炎性细胞浸润,黏液腺增生,黏膜皱折增多,黏膜上皮细胞脱落,可见气道黏液栓,而红霉素组和地塞米松组上述现象明显减轻.肺组织Clara细胞计数显示,哮喘组大鼠终末及呼吸性细支气管上皮Clara细胞数明显少于正常对照组,而红霉素组和地塞米松组较哮喘组均有所增加(P＜0.05).哮喘组EOS百分比(EOS％)显著高于对照组(P＜0.01),红霉素组和地塞米松组的EOS％均低于哮喘组(P＜0.01).BALF中CC16含量,哮喘组明显低于正常对照组(P＜0.01),而红霉索组和地塞米松组均高于哮喘组(P＜0.05).结论 哮喘时肺组织中Clara细胞及CC16的表达减少,红霉素可通过上调肺组织中Clara 细胞及CC16的表达来发挥抗炎作用.
关键词： 哮喘 Clara细胞 Clara细胞分泌蛋白-16 红霉素 -
N-乙酰半胱氨酸对哮喘小鼠Clara细胞及CC16的影响
目的:观察抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预对小鼠支气管哮喘模型Clara细胞数量及其分泌蛋白CC16表达的影响.方法:卵蛋白(OVA)致敏、滴鼻激发建立BALB/c小鼠哮喘模型.将小鼠随机分为对照组、哮喘组、NAC干预组,每组10只.应用免疫组化方法检测各组小鼠肺组织Clara细胞数量及细胞内CC16含量.Western印迹法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中CC16含量.结果:哮喘组小鼠终末及呼吸性细支气管上皮Clara细胞分别占上皮细胞的(58.05±3.75)%及(63.70±1.79)%,与对照组的(74.54±5.81)%及(78.46±1.68)%相比差异有显著性(P＜0.01);NAC干预组为(62.74±1.72)%和(67.47±3.53)%,与哮喘组相比有所增加(P＜0.05).同时,哮喘组Clara细胞内CC16含量较对照组明显减少(P<0.01);NAC干预后,促进了CC16的合成(P＜0.05).哮喘组小鼠BALF中CC16蛋白水平为(35.6±4.0),与对照组的(54.7±5.0)比较差异有显著性(P＜0.01);NAC干预组CC16蛋白水平为(44.1±3.2),与哮喘组比较差异也有显著性(P＜0.05).NAC干预组BALF细胞总数及嗜酸粒细胞比例较哮喘组均下降,气道炎症较哮喘组减轻.结论:哮喘小鼠的气道炎症可导致Clara细胞数量及CC16的合成及分泌量减少,抗氧化剂NAC可通过促进CC16的合成和分泌抑制气道炎症反应.
