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一种磁珠纯化分选系统的结构与原理
本文介绍了一种磁珠纯化分选系统内部的结构设计.该系统不仅可以用于细菌的分选,还能够用于基因、蛋白、细胞等物质的纯化分选,应用范围极广.该系统满足了自动化、通量高、工作体积范围大的研究和实验要求.
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BD FACSJazz 分选型流式细胞仪操作技巧及维护方法
流式细胞仪是集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术为一体的新型高科技仪器,能够同时对细胞多种生物物理、生物化学方面的指标快速、准确定性和定量分析,而分选型流式细胞仪可以在分析的基础上对目的细胞进行分离[1,6]。基于流式细胞仪的强大功能,已被广泛应用于免疫学、血液学、肿瘤学等领域[2]。正因为流式细胞仪是大型高精密仪器,故在操作人员、日常维护以及故障处理方面经验要求较高。[3~4]。
关键词: BD FACSJazz 分选 流式细胞仪 操作 维护 -
明天的无线世界:英国通信部关于未来通信技术的报告(医疗部分选译)
装在汽车上的新无线技术装置可以避免车辆碰撞;新的无线装置可以提醒病人服药;无线食物扫描器可以改变我们食物采购的方式……这是英国通信部2008年5月7日出版的2008技术研究报告中提到的关于未来无线技术应用状况的部分内容.
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妊娠诱导的调节性T细胞对na?ve T细胞抑制作用的体外研究
目的研究调节性T细胞( Treg)及妊娠诱导的调节性T细胞( piTreg)对na?ve T细胞增殖的体外抑制,评价其抑制率的差异。方法对孕12.5 d(E12.5d)异基因交配孕鼠C57/B6(♀)× BALB/c(♂)的piTreg和未孕雌鼠C57/B6鼠的 Treg 进行流式细胞术检测,观察piTreg 和Treg 在CD4+T细胞中比例及其胞内Foxp3表达变化;采用羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯( CFSE )标记的na?ve T作为效应细胞和丝裂霉素C灭活的CD4-T细胞作为刺激细胞的单向混合淋巴细胞培养体系,比较piTreg和Treg对效应细胞的体外抑制强度。结果 piTreg水平明显高于Treg(P<0.001),且这些细胞均表达高水平的Foxp3;piTreg 在体外实验中对na?ve T细胞的抑制效应明显高于Treg ( P<0.006),并受其细胞数量的影响。结论妊娠诱导的调节性T细胞较来自于非孕鼠的Treg对na?ve T细胞有更明显的抑制作用,这一现象很可能是由妊娠中父系抗原刺激诱导的CD4+CD25+Treg活性差异造成。
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内体及其功能研究进展
内体(endosome)是真核细胞中膜包裹的囊泡结构,主要参与以蛋白质为主的大分子的分选、运输和降解,是细胞膜泡运输过程中内膜系统的重要成分之一.自1983年被首次定义以来,内体的关注度日益增强,本文就内体的分类、生成及功能作一综述.一、内体的分类内体通常分为早期内体( early endosome)、晚期内体( late endosome)和循环内体(recycling endosome).
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三种特异性抗体结合流式细胞术分选母血中胎儿细胞方法的评价
研究证实母血中的游离胎儿细胞可用于无创性单基因病产前诊断[1,2].胎儿细胞仍是检测胎儿染色体异常的惟一来源[3],虽然母血中胎儿有核红细胞(FNRBC)数量很少,但其特异性形态在正常人外周血中极罕见,并可携带完整的胎儿基因.因此,建立富集母血中胎儿细胞的方法则是无创性产前诊断的关键.本研究用3种FNRBC特异性抗体和流式细胞术分选胎儿细胞,并通过计算FNRBC准确率和特异性,以评价分选母血中胎儿细胞的适宜方法.
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再谈流式细胞术之广泛应用
流式细胞术(Flow cytometry, FCM)是一种对处在液体中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数快速定量分析和分选的技术.作者曾撰文对它的概念、工作原理、基本技术和基本临床应用做过简单介绍[1],作者将对其作用及应用作进一步详细介绍.
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肿瘤分泌蛋白的临床研究进展
蛋白质作为生命功能的执行者,在内质网上合成后,运输至高尔基体内进一步加工和分选,然后被运送到相应的细胞器中,或被分泌到细胞外发挥功能,该过程称为细胞分泌,其中分泌到细胞膜外的蛋白质称为分泌性蛋白或分泌蛋白.分泌性蛋白占人类蛋白质组的十分之一,其中细胞蛋白的20%~25%是可分泌蛋白.
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采用多功能流式细胞术分析分选造血干细胞和髓系定向分化祖细胞
目的 探讨富集纯化造血干细胞(HSC)和髓系定向分化祖细胞的新实验方案.方法 根据造血干细胞和定向分化祖细胞在发育过程中表达某些特异性分化抗原的特性,通过免疫磁珠分选技术结合四色和六色流式细胞术分析14只健康小鼠的骨髓造血干细胞、造血祖细胞及定向分化祖细胞系列的表达,并对其进行分选,以进一步通过集落细胞培养和传代试验对分选后细胞的活性进行检测.结果 经上述实验方案分析,14只健康小鼠骨髓造血祖细胞(HPC)的表达率约为HSC的10倍;但其牛成活性远不如造血干细胞,共同髓系祖细胞(CMP)的传代能力仅为HSC的1/2,且次级分化的粒系单核系祖细胞(GMP)和红系巨核系祖细胞(MEP)的生成活性更弱,其传代次数为零.结论 通过多色流式细胞术实验方案可以分析纯化HSC和髓系定向分化祖细胞的表达,并精确计数HSC和祖细胞.
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体外侵袭和化疗干预富集PANC1中CD24+ CD44+细胞群的初步研究
肿瘤由异质性的肿瘤细胞组成,其中包含一个在肿瘤发生、发展、侵袭转移和耐药中起关键作用的亚群--肿瘤干细胞[1].近年根据肿瘤干细胞理论分选到了胰腺癌干细胞(CD24+ CD44+ ESA+)[2],而且从胰腺癌细胞系PANC1中分离的CDD24+ CD44+ 细胞具有高致瘤性[3].本实验探讨从胰腺癌细胞系PANC1中富集CD24+ CD44+细胞的方法,为进一步研究这种细胞的生物学特性提供足量的细胞.
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应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究
由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少,Hahn, Holzgreve[1]和Bianchi等[2]报道,孕妇每毫升外周血中仅有1~2个完整胎儿细胞.所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记,并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术,是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的佳手段[3].但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体,故不同学者选用的标记性抗体也有所不同.本研究采用荧光激活细胞分离技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS ),通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体(transferrin receptor, CD71)单标记染色和胎儿血红蛋白(fetal haemoglobin,HbF)单标记染色与双标记染色情况的比较,探讨CD71 与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值.
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自体造血干细胞移植治疗小儿晚期神经母细胞瘤
神经母细胞瘤(NB)是小儿常见的恶性实体肿瘤,占小儿恶性肿瘤的8%~10%.晚期NB因诊断时多伴有转移,故恶性度极高,预后很差.大剂量化疗联合APBSCT是治疗小儿晚期实体肿瘤的重要方法,能改善患者的长期生存,但复发率仍高.本文就其治疗小儿高危NB的临床进展包括移植前预处理、移植物分选净化处理、多次移植的可行性及移植相关进展综述如下.
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循环肿瘤细胞微流控芯片分选及临床应用
目的 循环肿瘤细胞是自肿瘤原发灶或转移灶脱落进入外周血液循环的肿瘤细胞,是肿瘤转移的标志.本研究拟建立一种基于细胞大小差异的楔形结构微流控芯片,实现快速进行循环肿瘤细胞分选和富集,并在临床应用中进行验证.方法 采用基于细胞尺寸的楔形结构微流控芯片,结合细胞免疫荧光染色法,检测外周血液内循环肿瘤细胞.采用已知的肿瘤细胞,确定芯片对肿瘤细胞的捕获效率.选择武汉大学中南医院经组织细胞学检查确诊的癌症患者(肝癌、肺癌、胃癌、结直肠癌、宫颈癌)105例作为研究对象,同期经健康体检确认为无肿瘤和其他疾病的30名体检者作为对照组,通过外周血液检测进行比较分析.结果 楔形结构的微流控芯片对血液中循环肿瘤细胞系的捕获效率为80.0%.癌症患者外周血循环肿瘤细胞总检出率为53.3%(56/105),对照组循环肿瘤细胞检出率为3.3%(1/30),两者之间的差异有统计学意义,P<0.05.结论 楔形结构的微流控芯片技术基本实现了对外周血循环肿瘤细胞的捕获和鉴定,在临床上具有很高的应用价值.
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Cad11高和低表达肾癌细胞分选与Cad11对肾癌细胞迁移作用的影响
目的 分选Ⅱ型成骨细胞型钙黏附蛋白(cadherin-11,Cad11)高和低表达的肾癌细胞786-O细胞群,并证实Cad11在肾癌细胞786-O中的迁移作用.方法 将质粒pBMN-Ⅰ-GFP-Cad11转染于Phoenix细胞进行包装,之后感染786-O细胞,流式细胞仪分选后扩大培养建立786-LG细胞.将786-LG细胞经Cad11抗体2C7孵育后用BSA封闭,洗涤后加入标记APC的二抗,同时以786-LG细胞(未经任何处理)和786-LG细胞(只加入标记APC的二抗处理)作为阴性对照确定分选门,绿色荧光通道和红色荧光通道进行双参数分析,流式细胞仪分选技术筛选Cad11高和低表达的786-O肾癌细胞群,蛋白质印迹法检测分选细胞Cad11的表达.786-Cad11+和786-Cad11-细胞血清饥饿24 h后接种于内室(细胞数为1×104),每组设3个复孔,Transwell细胞迁移实验和细胞结晶紫染色计数穿过小室的细胞数目,以穿过膜的细胞数目评估Cad11对其肾癌细胞786-O的迁移作用.结果 成功构建786-LG细胞.流式细胞仪检测结果显示,786-LG细胞中Cad11阳性细胞亚群占细胞总数的75.98%.Cad11细胞群分选后,GFP+/APC+双阳性细胞和GFP+/APC-单阳性细胞分别占细胞总数的28.0%和20.1%.蛋白质印迹法检测结果表明,Cad11相对表达量786-LG细胞为0.25±0.02,786-Cad11+细胞为0.60±0.03,786-Cad11-细胞为0.10±0.01,差异有统计学意义,F=132.32,P<0.001.与786-LG细胞相比,两个细胞亚群786-Cad11+和786-Cad11-中Cad11蛋白的表达量均有明显变化,前者蛋白表达量升高至2.41倍(P=0.007),后者蛋白表达量降低至0.41倍(P=0.004),差异均有统计学意义.Transwell迁移实验结果表明,786-LG细胞迁移数目为114.33±4.09,786-Cad11+细胞迁移数目为139.00±5.19,786-Cad11-细胞迁移数目为77.67±3.71,差异有统计学意义,F=49.65,P=0.000 2.结论 成功建立了高和低表达Cad11的786-O细胞模型,并证实Cad11的表达与肾癌细胞的迁移密切相关.
关键词: Ⅱ型成骨细胞型钙黏附蛋白 分选 肾癌细胞 迁移 -
流式细胞仪在睾丸生精过程研究中的应用
流式细胞仪在生殖研究中起着重要的作用.简要介绍流式细胞仪的基本原理以及流式技术对生精细胞的检测,分析流式技术在生殖毒理、睾丸肿瘤、放射线损伤和生精细胞凋亡中的运用,阐述流式细胞仪对各级生精细胞的分选.
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具有自动装片与分选功能的医用胶片报告打印一体机的设计
目的:设计具有自动装片与分选功能的医用胶片报告打印一体机,改变传统的胶片报告发放模式,解决自助式打印机存在的不足.方法:该打印机基于ARM系统设计,通过Android Studio平台开发应用程序,整体由打印模块、封装模块、分选模块和控制模块组成.在医院建有影像归档和通信系统(picture archiving and communication systems,PACS)与放射科信息系统(radiology information system,RIS)的基础上,由影像技师提交胶片打印任务,医师提交诊断报告打印任务,当两者匹配完成后,由该打印机依次完成胶片和报告的集中打印、封装、分选工作,工作人员只需将分选好的片袋配送到相应部门即可.结果:该打印机解决了住院患者取片难的问题,实现了自助式胶片打印机的任务分流,避免了胶片与报告的错发,提高了工作效率.结论:该一体式打印机大大地减轻了装片和分选的工作量,使放射科的工作流程更加合理化.
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《国务院关于切实加强艾滋病防治工作的通知》部分选载
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白血病细胞系K562侧群细胞的分选及其初步研究
近年来对干细胞和肿瘤研究的深入,已表明干细胞自我更新和肿瘤的生成有惊人的相似之处,而且肿瘤中某些数量极少的细胞具有干细胞特性,提出了肿瘤干细胞学说[2],认为肿瘤干细胞是肿瘤的转移、复发和耐药的根源.
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胃癌干细胞样细胞的初步分选与鉴定
目的 研究胃癌干细胞样细胞的初步分选与鉴定.方法 选取20例胃癌患者和15例正常者组织细胞采用流式细胞分离纯化、22CKK-8细胞生长曲线测定、流式细胞仪检测的方式对其进行临床检测和分析.结果 CD44+、CD24+细胞在胃癌组织中的比率组间比较差异有统计学意义(P<0.05),在胃癌与正常胃组织中抗原荧光表达量组间比较差异有统计学意义(P<0.05);细胞体外生长曲线差异有统计学意义(P<0.05);CD44+、CD24+细胞凋亡率显著低于Total组(P<0.01),其增殖指数与Total组比较差异无统计学意义(P>0.05),S和G2/M期较Total细胞轻度增加,G0/G1轻度减少.结论 CD44+、CD24+细胞群可能在胃肿瘤的发生、发展中起重要作用,其可能富含胃癌干细胞样细胞;CD44、CD24可能是胃癌细胞的干细胞标志物.
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关于肺脏的宿主防御机制
肺脏宿主防御机制的进步包括它们分子生物学的起源,转基因鼠的应用,重组蛋白和精确的表面标志,它使得在组织样中,允许更精确的细胞分选和对效应细胞的识别.使用微数列和差异显示的新的基因发现技术,更有可能加速这一领域的进步.