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广东五邑地区中国型Gγ(Aγδβ)0地中海贫血发病及红细胞相关参数变化研究
目的 探讨广东五邑地区人群中国型Gγ(Aγδβ)0地中海贫血的检出率及相关红细胞参数的改变.方法 纳入2014年1月至2016年8月,广东省江门市中心医院就诊的8 103例患者的血液样本,采用Gap-PCR法、反向斑点杂交法进行地中海贫血基因检测,对其分布状况及细胞学参数进行分析.结果 在8 103例样本中共检测出中国型“γ(Aγδβ)0地中海贫血杂合子12例;中国型“γ(Aγδβ)0地中海贫血纯合子1例,总检出率0.16％;与对照组比较,中国型“γ(Aγδβ)0地中海贫血患者血液学结果显示红细胞平均体积(MCV)及红细胞平均Hb含量(MCH)均降低,HbF升高,HbA2无差别.结论 广东五邑地区中国型“γ(Aγδβ)0发病率不容忽视,其杂合子临床症状较轻,但当是纯合子时表现为重型地中海贫血.在遗传咨询中临床医生需提高警惕.
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补气益精生血方药治疗儿童β地中海贫血随机对照研究
目的 评价补气益精生血方药对儿童β地中海贫血的临床疗效.方法 采用随机对照双盲双模拟临床研究,将64例β地中海贫血患儿随机分为中药组和对照组,中药组口服黄芪、党参及龟甲颗粒,对照组口服安慰剂颗粒,疗程12周.观察治疗前后血红蛋白(Hb)、红细胞、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)、胎儿血红蛋白比例(HbF)等血液学指标及中医四诊症状.结果 疗程结束时,中间型患儿中药组Hb为(9.02±0.98) g/dL,对照组为(7.27±0.95)g/dL,组间比较差异有统计学意义(t=6.729,P=0.003);中药组HbF较治疗前显著升高(t=-3.341,P=0.011),RBC、MCH及中医四诊症状均有一定改善;中药组总有效率为59.1％(13/21),对照组为4.5％(1/21),中药组显著优于对照组(P＜0.01).重型患儿有类似疗效,但逊于中间型患儿.结论 补气益精生血方药治疗儿童β地中海贫血具有较好疗效.
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β地中海贫血的珠蛋白基因诱导疗法
珠蛋白基因诱导疗法是目前针对β地中海贫血一种仍在不断探索中的新型治疗手段.本文对β地中海贫血珠蛋白基因诱导治疗的具体原理及目前的γ珠蛋白基因诱导药物作一综述.
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中间型β地中海贫血家系基因分子生物学特征分析
目的 分析在中国人群中发现的中间型β地中海贫血家系的分子生物学特征.方法 表型检测采用标准的血液学分析技术测量RBC参数,采用高效液相色谱方法检测Hb组分.采用反向斑点杂交技术诊断β地中海贫血基因突变,利用跨越断裂点PCR技术(gap-PCR)扩增断裂点基因序列并进行测序分析.结果 先证者Hb浓度为86 g/L,属中间型地中海贫血表型.先证者父亲呈典型的小细胞低色素改变,平均红细胞容积(MCV)为63.7 fl,平均红细胞血红蛋白量(MCH)为20.4 pg,均降低;血红蛋白A2(HbA2)增加,属地中海贫血杂合子表型.而先证者母亲、外祖母和妹妹的MCV及MCH均正常,但胎儿血红蛋白(HbF)较高,HbF分别为28.3%、21.1%及33.7%,属于胎儿血红蛋白持存综合征(HPFH)杂合子表型.进一步的基因分析表明,先证者为β441-42/HPFH-6基因型的中间型地中海贫血患儿,其父母基因型分别为β41-42/βN和HPFH-6杂合子.其外祖母和妹妹均为HPFH-6杂合子.结论 发现1例β41-42/HPFH-6中间型地中海贫血病例,可为产前诊断提供可借鉴的临床经验.
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应用新型抗胎儿血红蛋白抗体富集母体循环中胎儿有核红细胞
目的 利用多肽合成技术制备抗胎儿血红蛋白(fetal hem-oglobin,HBF)γ链的抗体,探讨其用于检测孕妇外周血中胎儿有核红细胞(nucleated red blood cell,NRBC)进行无创性产前基因诊断的可行性.方法 针对胎儿血红蛋白的特异性抗原表位,选定第69～78位HbF-γ特异的11个氨基酸残基的肽段为免疫原,将人工合成的胎儿血红蛋白γ链的多肽与载体蛋白(KLH)偶联,佐剂乳化后免疫羊,制备羊抗人胎儿血红蛋白的抗血清,经蛋白G纯化,HbF特异性抗体标记、识别、显微操作法富集32例孕周为22～39周的孕妇外周血中的胎儿有核红细胞,引物延伸预扩增后,利用9个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)的复合扩增方法对富集的阳性细胞进行扩增,用于孕妇外周血中富集的HbF阳性细胞胎儿来源的遗传学鉴定.结果 经HbF多克隆抗体标记,32名孕妇外周血中均发现与HbF呈阳性反应的胎儿NRBC,并具有鲜明的形态学特征,光学显微镜下可见NRBC细胞质呈棕黄色,核浆比例较低,苏木素复染后胞核呈蓝色,明显区别于其他细胞,每份样本出现NRBC 0.6～1.8个/ml,共计183个,平均为1.3个/ml,经STR多态性基因位点鉴定,准确率为90.6%.结论 利用多肽合成技术制备的抗胎儿血红蛋白γ链的抗体能有效识别母血中的胎儿有核红细胞,可应用于无创性产前基因诊断,具备良好的应用前景.
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异常血红蛋白合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症患者一例的基因分析
目的 对1例异常血红蛋白合并遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(HPFH)患者进行基因分析.方法 患者男,26岁,2010年9月到广州金域医学检验中心进行体检,经血液学分析、血红蛋白电泳、红细胞渗透脆性分析后,疑为异常血红蛋白合并HPFH病患者.应用常规血液学检查、碱性琼脂糖凝胶血红蛋白电泳对先证者进行表型分析；通过对HBB基因直接测序检测异常血红蛋白的突变类型；应用多重连接酶依赖探针扩增技术(MLPA)检测整个β-珠蛋白基因簇有无缺失及缺失的大致范围；应用跨越断裂点聚合酶链反应(gap-PCR)进行跨越断裂点PCR扩增,对此扩增产物进行基因测序分析,并将其结果与参考序列NC_000011.9进行比对,判断具体的断裂位点.结果 通过对HBB基因进行直接测序,发现该异常血红蛋白为Ta-Li( HBB:c.250G＞T),通过MLPA结合gap-PCR以及对产物进行基因测序,发现患者存在β-珠蛋白基因的大片段缺失,缺失范围为NC_000011.9:g.5222878_5250288del,即患者的基因型为异常血红蛋白Ta-Li合并东南亚型遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症(SEA-HPFH).结论 联合应用MLPA、gap-PCR和基因测序技术可能有助于明确先证者的基因型.
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六例胎母输血综合征的早期识别及治疗
目的 探讨胎母输血综合征(fetomaternal hemorrhage,FMH)早期的识别方法及诊断处理原则.方法 对北京市海淀区妇幼保健院2007年7月至2015年3月发生的6例胎母输血综合征的临床资料进行回顾性分析及相关文献复习.结果 5例表现为胎动减少或消失;6例中4例胎心监护出现正弦波形,1例基线变异缺失、延长减速,1例出现轻度变异减速.所有病例母血中胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)均高于正常值,4例母血中甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)高于同孕周非FMH病例.2例生物物理评分7分,其中1例胎儿大脑中动脉血流峰速(MCA-PSV)增加.3例产前诊断FMH.新生儿窒息2例,均表现窒息复苏不满意、新生儿贫血,经输血治疗后迅速好转.1例新生儿死亡,5例活产新生儿随访至今生长发育、智力与同龄儿相比无差异.2例患者再次妊娠分娩,新生儿均未出现胎母输血综合征.结论 FMH早期无特异性临床表现,严重时可出现胎动减少、胎心监护出现正弦波形、胎儿MCA-PSV增加,母血HbF、AFP高于正常;终止妊娠方式以剖宫产为宜,早期诊断及时终止妊娠可以改善新生儿预后.
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应用转铁蛋白受体和胎儿血红蛋白标记染色方法分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究
由于孕妇外周血中胎儿细胞的含量极少,Hahn, Holzgreve[1]和Bianchi等[2]报道,孕妇每毫升外周血中仅有1～2个完整胎儿细胞.所以采用特异性单克隆抗体对胎儿细胞进行标记,并结合流式细胞仪进行高效富集分选的技术,是分离、纯化孕妇外周血中胎儿细胞的佳手段[3].但因目前尚未发现识别胎儿细胞的特异性抗体,故不同学者选用的标记性抗体也有所不同.本研究采用荧光激活细胞分离技术(fluorescence-activated cell sorting,FACS ),通过对孕妇外周血及未孕妇女外周血中转铁蛋白受体(transferrin receptor, CD71)单标记染色和胎儿血红蛋白(fetal haemoglobin,HbF)单标记染色与双标记染色情况的比较,探讨CD71 与HbF染色法分选胎儿有核红细胞的价值.
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婴儿慢性粒细胞白血病一例
患儿男,4个月.出生54 d后因肝脾肿大(体检时发现)曾住某医院治疗.当时入院体检:肝右肋下4 cm,剑下3 cm,质软,边锐,表面光滑;脾左肋下3 cm.血红蛋白96 g/L,白细胞74×109/L,血小板60 ×109/L;血红蛋白电泳:胎儿血红蛋白(HbF)不增高.
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15号染色体短臂缺失性婴儿型慢性粒细胞白血病一例
患儿男,7个月.主因"皮疹2个月,面色苍白1个月"于2002年5月20日入院.体检:生命体征平稳,贫血貌,面部及双上肢散在红色斑疹,压之不退色.咽充血,双肺未闻及干湿啰音,心率116次/min,律齐.腹软,肝肋下8 cm,质韧,脾肋下Ⅰ线13 cm,Ⅲ线5 cm,质韧.实验室检查:白细胞计数14.18×109/L,血红蛋白78.1 g/L,网织红细胞计数0.017,血小板计数48.8×109/L.碱性磷酸酶阳性率9%.血红蛋白电泳:胎儿血红蛋白(HbF)0.077、成人血红蛋白(HbA)0.89、HbA2 0.03.胸骨骨髓涂片见骨髓增生Ⅱ～Ⅲ级,粒∶红=3∶1,原始粒细胞为0.04,早幼粒细胞为0.05,中幼粒细胞为0.18,部分中幼粒细胞胞体大,颗粒稍多,晚幼粒细胞为0.10,杆状核细胞为0.09,分叶核细胞为0.05.杆状嗜酸性细胞为0.02,分叶嗜酸性细胞为0.01,中幼嗜碱性细胞为0.01.早幼红以下各期细胞可见,偶见幼红巨幼粒变,胞浆空泡,成熟红细胞大小不等.淋巴细胞为0.30,均为成熟淋巴细胞.颗粒巨核细胞4个,血小板少.
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益髓生血灵治疗β-地中海贫血78例
目的观察中药益髓生血灵治疗β-地中海贫血(β-地贫)的临床疗效.方法重型β-地贫40例,中间型β-地贫38例,益髓生血灵每日3次,每次10 g,3个月为1疗程,治疗前后检测血红蛋白(Hb)、红细胞(RBC)、网织红细胞(Ret)和胎儿血红蛋白(HbF).结果重型β-地贫35例有效,中间型β-地贫37例有效.治疗前后患者Hb、RBC、Ret和HbF差异均有统计学意义(P<0.001).结论益髓生血灵治疗β-地贫有较好疗效.
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孕妇外周血胎儿ε血红蛋白基因mRNA的表达及与孕龄的相关性
目的 探讨孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA的表达水平及其与孕龄的相关性.方法 选择2008年10月—2009年11月在潍坊市人民医院行产前检查的7～16周正常单胎妊娠孕妇30例,常规方法提取全血总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法扩增胎儿ε血红蛋白基因片段,琼脂糖凝胶电泳,并扫描成像,用ImageJ软件对电泳条带进行图像分析,测定电泳条带的灰度值,计算孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA的浓度,并分析其与孕龄之间的相关性.结果 30例样品RNA质量浓度值为0.98～3.19 g/L,平均(1.87±0.76) g/L;光密度平均比值为1.79,7例阳性,23例阴性.孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA浓度为0.537～1.790 μg/ml,中位数为1.241 μg/ml.孕妇外周血中胎儿ε血红蛋白基因mRNA的浓度与孕龄呈负相关(r=-0.750,P=0.026).结论 孕妇外周血中存在胎儿ε血红蛋白基因mRNA且其含量在7～16周与孕龄呈负相关,利用孕妇外周血中胎儿RNA进行无创性产前诊断具有可行性.
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孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因的检测
目的探索检测孕妇外周血中胎儿γ血红蛋白基因表达的方法.方法提取孕妇全血mRNA,经体外逆转录后,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,应用ε/γ特异引物引导扩增胎儿ε/γ血红蛋白基因,以NdeⅡ酶切后,经琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像系统下观察. 结果成功自孕妇外周血中扩增出胎儿ε/γ血红蛋白基因,ε/γ基因被NdeⅡ酶切成三个γ基因片断,大小分别为191、57和26 bp. 结论孕妇全血中微量的胎儿mRNA已基本满足体外逆转录及扩增的要求,胎儿γ血红蛋白基因的检测可为无创伤性产前诊断的发展奠定基础.
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胎儿血红蛋白用于分选孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究
目的研究胎儿血红蛋白(HbF)对单个核细胞的标记情况,并用于孕妇外周血中胎儿有核红细胞(NRBCs)的分选,同时探讨NRBCs的比例与孕周的关系.方法2003-10-2004-04深圳市人民医院选用胎儿特异性抗体HbF对90例正常孕妇外周血、15例未孕妇女和15例胎儿脐血单个核细胞进行标记,并结合流式细胞技术(FACS)对胎儿有核红细胞进行分选.结果孕8～41周的孕妇外周血中HbF阳性标记率为(4.62±3.42)%,与未孕组及胎儿脐血组比较,差异均有极显著性意义(P＜0.01).经流式细胞仪分选出的孕妇外周血中的胎儿NRBCs数在孕12～18周、19～23周高,分别为412.4±135.5和454.2±153.4.结论早、中、晚期孕妇外周血中均存在胎儿有核红细胞,单抗HbF可以有效地进行识别,利用该细胞进行无创伤性产前诊断的佳时间宜在妊娠12～23周左右.
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母血清学指标α1微球蛋白、胎儿血红蛋白对于预测子痫前期的临床意义
目的 探讨母血清α1微球蛋白(AIM)、胎儿血红蛋白(HbF)在妊娠早中期对于子痫前期的预测价值.方法 选取在医院建卡产检的单胎初产妇346例,妊娠12 ～ 15+6周,知情同意留取血液学标本;采用动态散射比浊法检测α1微球蛋白浓度、毛细管电泳法检测胎儿血红蛋白的比例,并评估两者对早期预测子痫前期的临床意义.结果 轻度子痫前期38例,重度子痫前期29例,妊娠期高血压40例,正常妊娠孕妇239例.子痫前期患者AIM、HbF％水平均高于正常孕妇组,差异有统计学意义(P＜0.05);重度子痫前期患者AIM、HbF％水平高于轻度子痫前期组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 AIM、HbF％对于早期预测子痫前期的敏感度、特异性均较高,并对疾病的发展及预后评估有一定价值,可联合作为早期诊断子痫前期的指标.
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血清α1微球蛋白、胎儿血红蛋白对子痫前期发病预测价值
目的 探讨血清α1微球蛋白、胎儿血红蛋白对子痫前期发病的预测价值.方法 选取2013年10月-2015年2月在医院立卡产检的无妊娠合并症、并发症的单胎初产妇346例作为研究对象,其中正常对照组239例,妊娠期高血压组40例,轻度子痫前期组38例及重度子痫前期组29例.对所有产妇进行血清α1微球蛋白、胎儿血红蛋白检测,观察4组产妇的检测结果.结果 正常对照组及妊娠期高血压组产妇的血清α1微球蛋白水平及胎儿血红蛋白水平(HbF％)相比差异无统计学意义(P＞0.05);轻度子痫前期组及重度子痫前期组产妇的血清α1微球蛋白水平及胎儿HbF％较妊娠期高血压组显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05);与轻度子痫前期组相比,重度子痫前期组产妇的血清α1微球蛋白水平及胎儿HbF％显著提高,差异有统计学意义(P＜0.05).4组产妇妊娠22 ～26周时的子宫动脉(左、右)RI值、胎儿的大脑中动脉RI、胎儿脐血流S/D值、早产率及阿氏评分差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 血清α1微球蛋白、胎儿血红蛋白对子痫前期发病具有重要预测价值,值得深入研究.
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双抗体夹心ELISA检测人胎儿血红蛋白体系的建立
目的 建立一种定量检测人胎儿血红蛋白(HbF)的双抗体夹心ELISA方法.方法 用抗人HbF单抗作为捕获抗体,加入待测抗原,检测抗体为兔抗人HbF多克隆抗体,后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG.结果 本检测体系灵敏度约为0.039 μg/ml,测量范围0.039-24.66 μg/ml,特异性强,重复性好,100份血标本的检测结果与高效液相色谱法结果符合率高.结论 建立了一种可用于检测人外周血HbF的双抗体夹心ELISA方法,有望为临床上诊断某些与HbF有关的疾病提供帮助.
关键词： 胎儿血红蛋白 双抗体夹心ELISA 多克隆抗体 -
人胎儿血红蛋白的检测及其临床意义
人血红蛋白疾病及其机制探索是生物学与医学重要的研究与应用课题,近年进展迅速.其中人胎儿血红蛋白(human Fetal heamoglobin,HbF)的意义已远超出了胎儿期红细胞及新生儿期红细胞等范畴.许多血液系统疾病和恶性肿瘤在发生发展的过程中会伴随有HbF水平的变化,因此HbF检测可作为许多疾病的辅助诊断和疾病预后判断的指标.
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影响胎儿血红蛋白表达水平的分子因素
胎儿血红蛋白(fetal hemoglobin,HbF)是在胎儿期间大量存在的血红蛋白,成年人体内含量极少,低于1％.但是不少成年人的HbF表达水平较高.根据一系列的研究表明,HbF表达水平增高的分子机制主要是β珠蛋白基因簇自身变异和其他基因的影响.了解这些分子因素,可为阐明HbF的内在调控机制提供新的线索,并有助于开发新的地中海贫血治疗方法.
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流式细胞术检测胎儿红细胞的影响因素探讨
目的 探讨流式细胞术检测胎儿红细胞的影响因素.方法 45名健康产妇脐血样本分别用同血型健康人外周血调整为5种浓度,使用抗胎儿血红蛋白(HbF)单克隆抗体,用直接标记和间接标记2种方法分别测定HbF阳性细胞比例,将样本放置24 h、48 h和72 h后再次测定.结果 以Fetal Cell Count TM Kit II双色标记碳酸酐酶和HbF抗体[碳酸酐酶-异硫氰酸荧光素(CA-FITC)、HbF-藻红蛋白(PE)]为标准,5种浓度的直接标记结果均高于间接标记(P<0.05),阳性细胞数低时差异有统计学意义(P<0.01).样本放置48 h直接标记结果未见明显下降,间接标记结果下降明显,放置72 h直接标记结果也有明显下降(P<0.05).结论 利用流式细胞仪检测母血中胎儿红细胞含量受到标记方法、样本放置时间等因素的影响.较好的方法是采用直接标记法,染色完毕立即检测,好不要超过3 d,样本必须避光保存.
