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  • 热应激对鲤鱼血清组织HSP 70诱导的影响

    作者:徐镜波;盛连喜;郑永晨;王云彪;于文广

    为了探讨热应激过程中热应激蛋白(heat stress proteins,HSPs)的诱导合成与机制,建立了鲤鱼血清组织HSP 70的双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法(ELISA).

  • 抗日本血吸虫SEA特异性IgY应用于循环抗原检测的研究

    作者:楼涤;陆绍红;陈睿;童群波;丁建祖;卓敏敏

    本研究应用抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)的鸡卵黄免疫球蛋白(IgY)建立敏感、特异的检测循环抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验( ELISA).用SEA皮下多点注射法免疫海蓝鸡,水稀释法制备IgY抗体,以辣根过氧化物酶标记纯化的IgY抗体(IgY-E)和兔抗IgG抗体(IgG-E)分别作为检测抗体,IgY抗体和兔抗IgG抗体分别作为捕捉抗体,组合建立4种双抗体夹心酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测循环抗原,分析各种方法检测SEA的灵敏度,并平行检测急性日本血吸虫病人血清6份、慢性日本血吸虫病人血清29份、华支睾阳性者血清9份、卫氏并殖吸虫阳性者血清15份、弓形虫阳性病人血清7份、正常体检者血清118份.结果显示,以IgY为捕捉抗体或检测抗体,可检测到浓度为7.5 ng/mL的SEA,灵敏度是基于IgG的夹心ELISA的4倍.4种夹心ELISA法检测急血病人血清阳性率均为100%,检测正常人血清的特异性为99.1%;与弓形虫、华支睾吸虫阳性者血清无交叉反应;而检测慢血病人血清和并殖吸虫阳性者血清时,以IgY为捕捉抗体的2种ELISA( IgY+ IgY-E、IgY+ IgG-E)阳性率均分别为79.3%、6.7%;而IgG为捕捉抗体时,以IgY为检测抗体(IgG+ IgY-E)时的阳性率分别为75.8%、6.7%,以IgG为检测抗体( IgG+ IgG-E)时的阳性率分别为72.4%、13.3%,以IgY作为捕捉抗体的检测效果优于IgG.基于IgY抗体的双抗体夹心ELISA检测循环抗原具有良好的敏感性和特异性,可用于日本血吸虫病的免疫诊断.

  • 现场应用粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染的效果评价

    作者:焦伟;柴君杰;伊斯拉音;付承;张松;徐世东;安赛尔

    目的评价粪抗原检测法在包虫病流行病学监测中的实际应用价值.方法家犬在采集粪便后,进行槟榔碱导泻,应用粪抗原检测法检测粪样中的细粒棘球绦虫抗原,并与槟榔碱导泻法的驱虫结果比较,同时分析犬肠道中寄生的其它蠕虫对粪抗原检测结果的影响.结果在294只槟榔碱导泻成功的家犬中,45只检出细粒棘球绦虫,粪抗原阳性犬共46只.二者的符合率为97.8%.在249只未检出细粒棘球绦虫的家犬中,粪抗原阳性者1只.结论粪抗原检测法诊断犬细粒棘球绦虫感染具有较高的敏感性和特异性.可作为包虫病常规监测方法推广应用.

  • 双抗体夹心ELISA定量检测狂犬病病毒糖蛋白方法的建立及初步应用

    作者:孙宏宇;王化磊;金宏丽;李岭;闫飞虎;曹增国;冯娜;王铁成;徐盾

    目的 定量检测狂犬病病毒病毒样颗粒糖蛋白含量. 方法 以狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体作为捕获抗体,狂犬病病毒多克隆抗体作为检测抗体,标准品为以细胞半数感染量(TCID50)准确定量的狂犬病病毒SRV9毒株病毒液,建立检测狂犬病病毒糖蛋白(RABV-GP)含量的双抗体夹心ELISA检测方法,对各反应条件进行优化并分析其特异性、重复性和灵敏度. 结果 双抗体夹心ELISA定量检测方法佳工作条件为:狂犬病病毒糖蛋白蛋白单克隆抗体包被浓度为2.5 μg/ml,4℃包被过夜;1% BSA,37℃封闭2h;狂犬病病毒多克隆抗体1∶200稀释,37℃孵育1.5h;酶标二抗1∶5 000稀释,37℃孵育1 h;TMB室温避光显色30 min. 结论 该方法可特异性定量检测狂犬病病毒,与犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬传染性肝炎病毒均不发生反应.该方法线性检测范围为1×104~1.0×107 TCID50/ml,平均批内变异系数小于6%,平均批间变异系数小于8%.

  • 检测基孔肯雅病毒抗原方法的建立与初步评价

    作者:邢骁跃;芜为;张硕;张全福;李川;梁米芳;李建东;李德新

    目的 建立基孔肯雅病毒抗原检测方法.方法 利用重组杆状病毒表达的基孔肯雅病毒全部结构蛋白组成的病毒样颗粒免疫小鼠和兔,制备了基孔肯雅病毒特异性多克隆抗体,建立了检测基孔肯雅病毒抗原双抗体夹心ELISA方法.优化了抗体使用浓度和ELISA反应条件,以灭活基孔肯雅病毒为阳性参考品评价了该方法的检测限和重复性.结果 利用10份模拟阳性血清、90份阴性血清、40份其他病毒感染者急性期血清初步评价该方法的特异性、灵敏性.结果显示特异性为100%,检出限约为10TCID50,板间变异系数小于10%,板内变异系数小于5%.结论 双抗体夹心ELISA方法可以用于检测急性期血清样本中基孔肯雅病毒抗原,为基孔肯雅热的病原学诊断提供了新的手段.

  • 肠道病毒71抗原ELISA检测方法构建及其应用

    作者:韩金乐;贾继宗;李川;杨亮;何德磊;李娟;由鹏飞;叶祥忠;李益民

    目的 建立肠道病毒71型(EV71)抗原的ELISA检测方法.用于EV71的抗原定量、TCID50试验及EV71免疫原性与免疫保护性的关系分析.方法 以高亲和力的EV71中和单抗K8G2和Y8H2-HRP构建检测EV71抗原的双抗体夹心ELISA方法.比较本方法与显微镜观察法检测的EV71 TCID50.分析EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平的关系.结果 本试剂定量检测抗原的线性范围为0.125 ~4.0 U/ml,R2 =0.9911,试剂不与EV71之外的受试物反应,试剂的回收率为0.89 ~ 1.16,变异系数小于15%,37℃9 d的热回收率大于85%.本法与显微镜观察法检测的EV71 TCID50的相关系数r=0.990.21株EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平的相关系数r=0.930.结论 构建了EV71抗原ELISA检测试剂,可用于EV71的抗原含量检测、TCID50分析,为特异比活与免疫血清中和性关系研究提供了一些有价值的信息.

  • 应用双抗体夹心ELISA检测产志贺毒素大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素

    作者:史凤娟;曾晓燕;宋路;史智扬;郭喜玲;焦永军

    目的:构建双抗体夹心ELISA检测Ⅱ型志贺毒素( StxⅡ),以利于产志贺毒素大肠杆菌( STEC)感染的临床快速诊断。方法应用业已制备的StxⅡ特异性杂交瘤细胞株,筛选、鉴定佳抗体配对,构建双抗体夹心ELISA检测体系,对16株STEC临床分离株培养上清中StxⅡ进行检测,并对该体系的特异性和敏感性进行评价。结果从获得的多株单抗分子中,成功筛选出佳配对抗体S2D8和S2C6,构建基于S2D8/S2C6的双抗体夹心ELISA检测体系,该体系对StxⅡ纯品的检测底限是4 ng/ml,并成功从STEC培养上清中检测出StxⅡ及其变种,而与StxⅠ不结合。其检测效能与商业化胶体金试剂一致,显示出良好的敏感性和特异性。结论 S2 D8/S2 C6单抗的双抗体夹心法ELISA检测试剂的制备为基于毒素分子作为靶分子的STEC 免疫诊断、治疗研究提供基础资料。

  • PEG修饰长效干扰素血清定量检测方法的建立及评价

    作者:陈曦;盛艾娟;贾敏;王美霞;茹莉莉;李星;牛春;刘金毅

    目的:建立PEG-IIFNm血清定量检测方法,用于人体药代动力学研究。方法采用鼠单抗为包被抗体,生物素标记兔多抗为捕获抗体,辣根酶标记亲和素显色,检测血清中不同浓度的PEG-IIFNm,评价该方法的特异性、灵敏度、准确度和精密度。结果建立双抗体夹心定量检测方法,血清中药物浓度的定量检测范围为0.25~10 ng/ml,相关系数R2=0.999,检测准确度为80.0%~92.0%,批内和批间差均<10%,与市售其他PEG修饰干扰素无交叉反应。结论已建立血清PEG-IIFNm药物浓度双抗体夹心定量检测方法,灵敏度、特异性、精密度以及准确性符合临床药代动力学研究要求。

  • 抗猪鼻支原体单克隆抗体的研制及双抗体夹心ELISA检测法的建立

    作者:刘星;张丽芳;杨玉萍;李红

    目的 制备多种抗猪鼻支原体的单克隆抗体,建立双抗体夹心ELISA方法用于该病原体的检测.方法 用猪鼻支原体CVCC361免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术和酶联免疫吸附实验筛选出抗该病原体的单克隆抗体;运用免疫双向扩散试验、Westem blotting确定IgG亚类及针对抗原的相对分子质量;筛选出配对抗体,建立双抗体夹心ELISA的检测方法,并评价其灵敏度和特异性.结果 共筛选出17株单克隆抗体,抗体亚类分别为ISG1、IsG2、 IgG2b、IgG3,免疫印迹结果表明单抗ZBI、ZB2及ZB16与相对分子质量为35×103的抗原有特异性结合,而ZB3和ZBl0与相对分子质量为70 × 103的抗原有特异性结合.确定了2个配对抗体(ZBI-ZBI-HRP和ZB1-ZB2-HRP),可检出小抗原量为30ng/mL,检出猪鼻支原体活菌8.34×102CFU/mL,与人呼吸道常见的致病菌及支原体均无非特异性反应.结论 筛选的单克隆抗体具有较高的特异性和敏感性,应用双抗体夹心ELISA方法可用于猪鼻支原体的检测.

  • 水痘-带状疱疹病毒抗原的ELISA定量检测方法的建立

    作者:周钦;贾继宗;刘剑;陈丽宏;杨连威;曾丽文;韩金乐;叶祥忠;李益民

    目的:建立水痘-带状疱疹病毒(VZV)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于质控VZV灭活疫苗研发和生产中抗原含量.方法:以VZV中和单抗5F6C8为包被抗体、8H5D1为酶标抗体,构建定量检测VZV抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对本方法的特异性、灵敏度、准确性、线性和稳定性等性能进行分析.结果:建立的双抗体夹心定量检测VZV抗原的ELISA方法,线性范围为0.4 μg~13 μg/ml,相关系数为R2=0.994,定量限度为0.4.μg/ml;变异系数CV< 15%、准确性回收率介于87.5% ~ 111.6%之间,稳定性37℃6天的回收率>80%.与VZV以外的相关病毒样本没有交叉反应.结论:构建的VZV抗原ELISA定量检测方法的各项性能符合定量检测需要,可用于VZV灭活疫苗的研发和生产过程的抗原含量检测.

  • CYFRA21-1双抗体夹心酶联免疫检测方法的研制

    作者:张慧茹;翟晋豫;王雪琴;刘珍;王云龙;米海

    目的:建立人血清CYFRA21-1双抗体夹心酶联免疫检测方法。方法:以高碘酸钠法标记4株自制的CY-FRA21-1单克隆抗体,从中筛选配对抗体,建立双抗体夹心ELISA检测方法,并对其特异性、稳定性和灵敏度进行评价。结果:在4株单克隆抗体中筛选出1对配对抗体:2 F9株做包被抗体、6 F11株做酶标抗体。以0.50μg/ml的包被浓度、1∶6000的酶标抗体稀释度建立双抗体夹心检测方法。标准曲线在0.7~25 ng/ml范围内成线性关系,相关性为99.08%,低检测限为0.6668 ng/ml,回收率为98.14%;与血清类似物的交叉性反应低于0.1%;批内(n=10)、批间(n=5)精密度分别为6.8%和11.4%,与国外试剂盒检测对比的相关性为91.42%。结论:成功地建立了双抗体夹心ELISA检测人血清CYFRA21-1的方法,为后续的检测试剂盒的生产奠定基础。

  • 柯萨奇病毒A组16型抗原的ELISA定量检测方法建立

    作者:贾继宗;韩金乐;杨亮;李川;何德磊;张娜;陈芹芹;叶祥忠;李益民

    目的:建立柯萨奇病毒A组16型(CA16)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于CA16灭活疫苗的研发和生产过程的抗原定量检测.方法:以CA16中和单抗T26H12为包被抗体、NA14B9为标酶抗体,构建定量检测CA16抗原的双抗体夹心ELISA方法,并对方法的特异性、灵敏度、精密度、准确性、线性和稳定性进行分析.结果:建立了双抗体夹心定量检测CA16抗原的ELISA方法.方法的线性相关系数R2=0.998,线性范围为8~128 ng/ml,定量限度为8 ng/ml;变异系数CV<15%;回收率介于87.0%~113.8%之间;37℃6天的回收率>80%;与CA16以外的其他样本没有交叉反应.结论:构建的CA16抗原ELISA定量检测方法的各项性能符合定量检测需要,可用于CA16疫苗的研发和生产过程的抗原活性的定量检测.

  • 双抗体夹心ELISA检测人胎儿血红蛋白体系的建立

    作者:李雪丽;文李艳;冯善伟;钟梅;刘艳君;富宁

    目的 建立一种定量检测人胎儿血红蛋白(HbF)的双抗体夹心ELISA方法.方法 用抗人HbF单抗作为捕获抗体,加入待测抗原,检测抗体为兔抗人HbF多克隆抗体,后加入辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG.结果 本检测体系灵敏度约为0.039 μg/ml,测量范围0.039-24.66 μg/ml,特异性强,重复性好,100份血标本的检测结果与高效液相色谱法结果符合率高.结论 建立了一种可用于检测人外周血HbF的双抗体夹心ELISA方法,有望为临床上诊断某些与HbF有关的疾病提供帮助.

  • 牛血清IgG双抗体夹心ELISA定量检测方法的建立及应用

    作者:赵风强;张明祥;韩金乐;苏玉坡;谢鹤;胡腾月;贾继宗;叶祥忠

    目的 建立牛血清IgG(bovine immunoglobulin G,BIgG)抗原的双抗体夹心ELISA定量检测方法.方法 用BIgG-Fc免疫BALB/c小鼠,制备抗BIgG单抗,确定包被抗体及酶标抗体后,建立定量检测BIgG抗原的双抗体夹心ELISA方法,并验证该方法的准确度、精密度、稳定性、特异性,确定该方法的线性范围和定量限度.应用建立的方法检测不同厂家、不同批次牛血清及纯化EV71样品中BIgG抗原残留量.结果 建立了以3EI2D2为包被单抗(8.0 μg/ml,100μl/孔),4A2GIBI-HRP为酶标抗体(1∶1000稀释,100μl/孔)定量检测BIgG的双抗体夹心ELISA方法,该方法的线性范围为0.3~9.6 ng/ml,R2>0.99,定量限度为0.3 ng/ml;回收率在94.1%~108.5%之间,同一实验者重复检测和不同实验者检测的变异系数均<10%;37℃放置3和6d的稳定性均>90%;该试剂样品与BIgG可发生特异性反应,与其他动物源血清无交叉反应.9批牛血清中BIgG含量均存在差异;精纯样品较粗纯样品BSA和BIgG均明显去除,但BIgG占牛血清残留量(BSA+ BIgG)的比例却明显上升.结论 建立的BIgG抗原的双抗体夹心ELISA方法符合定量检测需要,可用于牛血清的质量质控及残留量检测.

  • 猪弓形虫循环抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

    作者:寇金华;杨正涛;刘维建;高珺珊;李建华;张西臣;宫鹏涛

    目的 建立一种检测猪血清中弓形虫循环抗原(circulating antigen,CAg)的双抗体夹心ELISA法.方法 利用抗弓形虫表面抗原3(surface antigen 3,SAG3)的单克隆抗体Anti-A-SAG3-7作为捕获抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记抗弓形虫SAG3的单克隆抗体Anti-A-SAG3-23作为检测抗体,建立双抗体夹心ELISA法,并对方法的捕获抗体(1∶400~1∶6400倍比稀释)、检测抗体(1∶400~1∶12800倍比稀释)、血清稀释度(1∶10~1∶80倍比稀释)及封闭液的种类(5%脱脂奶粉、10%胎牛血清、5% BSA、1% BSA)进行优化,同时验证该方法的敏感性、特异性及精密性.采用优化后的方法对广东和吉林地区的各94份猪血清样本进行检测.结果 双抗体夹心ELISA法的佳检测条件为:捕获抗体Anti-A-SAG3-7及检测抗体HRP-Anti-A-SAG3-23稀释度均为1∶3200,封闭液为1% BSA,血清稀释度为1∶80.该方法检测两份猪囊虫阳性血清无交叉反应,灵敏度达1∶640,批内及批间的变异系数(CV)均<11%.广东和吉林地区各94份样品的阳性率分别为20.2%(19/94)和11.7%(11/94).结论 该方法具有良好的特异性、敏感性及精密性,可用于猪弓形虫CAg的检测.

  • 四价脑膜炎球菌多糖疫苗中结合物多糖抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

    作者:朱涛;邓捷;邓新;邵忠琦;毛慧华;宇学峰

    目的 建立一种检测A、C、W135和Y群四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群多糖蛋白结合物的双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行验证.方法 以白喉类毒素无毒变异体(CRM197)特异性单抗为包被抗体,HRP标记的脑膜炎球菌A、C、W135和Y群多糖特异性单抗为捕获抗体,建立可定量检测脑膜炎球菌各血清群结合物多糖含量的双抗体夹心ELISA法,确定方法的佳线性范围和检测限,并对方法的特异性、准确性和重复性进行验证.结果 定量检测A群脑膜炎球菌结合物(GAMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为3.75~120 ng/ml,检测限为3.75 ng/ml;定量检测C群脑膜炎球菌结合物(GCMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~30 ng/ml,检测限为0.938 ng/ml;定量检测W135群脑膜炎球菌结合物(GWMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为7.5~240 ng/ml,检测限为7.5 ng/ml;定量检测Y群脑膜炎球菌结合物(GYMP-CRM197)多糖抗原含量的双抗体夹心ELISA法的线性范围为1.875~60 ng/ ml,检测限为0.938 ng/ml.A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法均能特异性地检测相应的结合物多糖抗原含量,而不与其他群的结合物多糖抗原发生交叉反应;A、C、W135、Y群双抗体夹心ELISA法的回收率均在80%~120%之间,检测相应的结合抗原样品时,变异系数(CV)均小于15%.结论 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较强,准确性较高,重复性良好,可用于四价脑膜炎球菌多糖疫苗中各血清群结合物多糖抗原的定量检测.

  • 犬粪便中细粒棘球绦虫抗原双抗体夹心ELISA检测方法的建立及应用

    作者:刘原源;黄书晨;高珺珊;王晓岑;宫鹏涛;张壮志;李建华;杨举;李赫

    目的 建立简便、特异的检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行验证及初步应用.方法 以细粒棘球绦虫EdiagA864蛋白为抗原,免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体;利用HRP标记兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体,通过溶解、超声方法处理犬粪便样品;以抗细粒棘球绦虫单克隆抗体2D12作为捕获抗体,HRP标记的兔抗细粒棘球绦虫EdiagA864多克隆抗体为检测抗体,通过棋盘法确定抗体佳包被浓度、佳封闭剂、待检粪样佳稀释比例及酶标抗体佳浓度.应用建立的双抗体夹心ELISA法对来自长春地区的64份犬粪便样品及来自新疆的8份犬粪便阳性样品进行检测.结果 兔抗EdiagA864多克隆抗体的效价为105.建立的双抗体夹心ELISA法的佳检测条件为:抗体包被浓度为1∶50,封闭剂为1% BSA,粪液稀释度为1∶5,酶标二抗稀释度为1:800.建立的双抗体夹心ELISA法与犬贾第虫和犬蛔虫阳性样品均无交叉反应;检测不同稀释度的粪便液,当稀释至1∶20时,P/N仍大于2;检测6份阳性样品与4份阴性样品的批间和批内变异系数均小于8.用建立的方法检测8份阳性样品的结果均为阳性,64份待检样品的结果均为阴性.结论 建立的双抗夹心ELISA方法特异性较强,敏感性较高,重复性较好,为细粒棘球绦虫流行病学调查及诊断提供了一种更简便、快速、特异的免疫学检测方法.

  • WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法的建立及其临床应用

    作者:张囡;李茜;郭长福;黎维勇;孙可芳;胡豫;张爱华

    目的 建立WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,并进行初步临床应用.方法 建立双抗体夹心ELISA法,定量检测血清中WuTac浓度,筛选佳抗体包被浓度和酶标抗体稀释度,绘制标准曲线,并对该方法进行验证;应用该方法对36名健康志愿者单次注射不同剂量WuTac(0.05、0.1和0.2 mg/kg)前后14个时间点的临床血清标本进行检测.结果 佳抗体包被浓度为0.2 μg/ml,佳酶标抗体稀释度为1:15 000,标准曲线的线性相关系数r≥0.99,线性范围为3.9~125 ng/ml.高浓度WuTac标准品的变异系数小于15%;准确性为99.05%±5.00%(92.43%~110.02%);特异性良好.临床血清检测结果表明,WuTac在0.05~0.2 mg/kg范围内呈线性药代动力学特征.结论 已建立了WuTac血药浓度双抗体夹心定量ELISA检测方法,该方法的灵敏度、精密性和准确性均符合我国生物制品药代动力学研究的要求.

  • EV71抗原ELISA定量检测方法的建立

    作者:贾卉;蔡芳;高强;张建三;井申荣

    目的 建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,用于EV71灭活疫苗生产过程中抗原含量的检测.方法 采用EV71全病毒免疫,制备抗EV71单克隆抗体及多克隆抗体,以抗EV71多克隆抗体作为包被抗体,经HRP标记的抗EV71单克隆抗体作为酶标抗体,建立双抗体夹心ELISA法,检测样品中EV71抗原含量,并对该方法进行验证及应用.结果 所建立的方法线性范围为5~80 U/ml,R~2=0.994,线性关系良好,定量限度为5 U/ml;检测不同浓度的EV71抗原内部参考品,回收率为88%~119.0%;变异系数均小于15%;与甲肝病毒收获液、乙脑病毒灭活液、H5N1流感病毒裂解疫苗原液、小牛血清、人白蛋白、Veto细胞、MEM培养基及CoxA16收获液均无交叉反应;检测EV71灭活疫苗原液纯化过程样品的抗原含量,能有效反映抗原纯化趋势;检测铝吸附疫苗成品解离后抗原含量,准确性较高.结论 已建立了EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法,该方法线性好,特异性强,灵敏度高,准确性及重复性良好,可用于EV71疫苗生产过程中及终产品的抗原定量检测.

  • 羊布鲁菌双抗体夹心ELISA检测方法的建立及验证

    作者:梅建军;王兴龙;李晓燕;刘锴;任林柱;贾剑锋;张琴

    目的 建立羊布鲁菌双抗体夹心ELISA检测方法,并进行验证.方法 应用针对羊布鲁菌O链M抗原的种特异性单克隆抗体,建立检测羊布鲁菌抗原的双抗体夹心ELISA方法,并进行重复性、特异性、敏感性验证及初步应用.结果 经验证,该方法重复性好,特异性强,低检出限为3.0×103 CFU/ml,与平板凝集试验的符合率为100%.结论 已建立了特异、敏感的检测羊布鲁菌的双抗体夹心ELISA方法.

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