首页 > 文献资料
-
食源性产志贺毒素大肠杆菌的分离及菌株特征分析
目的 了解不同食品中产志贺毒素大肠杆菌的流行情况、菌株特征及潜在致病性.方法 对我国不同地区采集的355份食品样品进行产志贺毒素大肠杆菌分离鉴定,对菌株进行stx1/stx2基因分型、eae等毒力基因检测,并对菌株进行多位点序列分型(MLST)分析.结果 355份样品中44份smx2基因阳性,共分离出11株非O157产志贺毒素大肠杆菌,其中3株携带stx2a亚型,3株携带stx2e亚型,1株携带stx2b亚型,4株不能分型;5株携带ehxA、saa毒力基因,2株携带subA基因,1株携带katP基因;MLST将11株菌分为7个不同的ST型,存在与溶血性尿毒综合症患者肠出血性大肠杆菌分离株(HUS-associated enterohemorrhagic E.coli,HUSEC)及主要流行血清群产志贺毒素大肠杆菌亲缘关系较近的ST型别.结论 我国食品中存在一定程度的非O157产志贺毒素大肠杆菌污染,部分菌株具有潜在致病性,应加强对食品中STEC的监测.
-
武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌污染状况分析
目的 对武汉市部分菜场肉类食品中产志贺毒素大肠杆菌(STEC)污染状况进行分析.方法 2011年7月至2012年10月期间,从武汉市汉口30个菜场和超市共采集样品196份,其中猪肉102份,牛肉60份,禽类34份.通过选择性增菌,提取DNA,PCR扩增stx1、stx2、rfbO157、wzyO157基因,分析食品中产志贺毒素大肠杆菌的污染状况.结果 猪肉、牛肉、禽类食品中非O157型STEC的阳性检出率分别为18.6％、48.4％和2.9％;O157型STEC的阳性检出率分别为13.6％(猪肉)、6.7％(牛肉)和2.9％(禽类).菜场样品STEC检出率(35.8％)略高于超市样品(32.4％).结论 武汉市肉类食品中STEC检出率较高,应定期跟踪监测,了解菌株流行和毒力变化状况.
-
山东省微山县动物粪便中产志贺毒素大肠埃希菌血清型鉴定及耐药性分析
目的：分析山东省微山县动物粪便中的产志贺毒素大肠埃希菌（STEC）的血清型及耐药状况。方法于2015年9月，采集山东省微山县共500份新鲜动物粪便样本（猪粪便145份，牛粪便140份，羊粪便130份，鸡粪便61份，鸭粪便10份，狗粪便8份，鹅粪便6份），从中共分离出16株STEC。采用血清凝集试验对STEC分离株进行血清分型，采用抗菌药物敏感性试验探讨其药敏性及耐药性。采用PCR方法检测四环素类耐药基因（tetA、tetB、tetC、tetD）以及β-内酰胺类耐药基因（blaSHV-1、blaCTX-M、blaTEM）共7种耐药基因。结果16株STEC中，13株来自猪粪便样本，2株来自牛粪便样本，1株来自羊粪便样本。O157：H7型STEC为2株，非O157型STEC为14株；非O157型STEC的血清型分布较为分散。在检测的16种抗生素中，对萘啶酸、磺胺异唑、复方磺胺甲唑、强力霉素、阿奇霉素、四环素、链霉素、氯霉素等8种抗菌药的耐药率分别为12/16、11/16、11/16、9/16、9/16、9/16、8/16、8/16，对萘啶酸耐药率高（12/16），其次为磺胺异唑和复方磺胺甲唑（11/16、11/16），对头孢吡肟、亚胺培南均不耐药。16株STEC中15株出现了多重耐药性，其中三重耐药菌株5株，四重、五重耐药菌株各4株，六重、七重耐药菌株各1株。16株分离菌株中共检测出3种耐药基因，分别为tetA、tetB、tetC。结论从微山县分离出的STEC菌株血清型多样且分布较为分散，对常见抗生素具有多重耐药性，血清型复杂性及出现多重耐药性可能与菌株变异有关。
-
山东省动物粪便中非O157产志贺毒素大肠埃希菌菌株特征及耐药性分析
目的 分析山东省动物粪便中非O157产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的菌株特征及耐药状况.方法 于2015—2016年,采用方便抽样方法在山东省微山县、莱州市共采集1022份新鲜动物粪便标本,共分离到24株非O157 STEC.通过血清凝集实验进行血清分型,采用微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验,后采用双纸片协同试验进行超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)检测.采用PCR方法检测耐药基因.采用PFGE进行分子分型并采用多位点序列分型(MLST)确定等位基因谱及菌株序列型.使用CLC Sequence Viewer及Conting Express生物信息软件分析不同ST序列群及菌株间的进化关系.结果 24株非O157型STEC菌株中23株来自猪粪,1株来自牛粪;毒力基因均为stx 2型;对磺胺异(恶)唑耐药的菌株较多,为22株,对复方磺胺异(恶)唑和萘啶酸耐药的菌株均为18株,对氯霉素耐药菌株为13株,对四环素耐药菌株为19株.存在多重耐药现象,耐药谱为:磺胺异(恶)唑-四环素-复方磺胺异(恶)唑-萘啶酸-氯霉素,对头孢吡肟和亚胺培南均为敏感.ESBLs确证实验表明,有4株非O157型STEC产ESBLs.PCR检测7种耐药基因,4种四环素类耐药基因(tetA、tetB、tetC、tetD)均有检出, ESBLs类耐药基因(blaSHV-1、bla CTX-M、bla TEM)均为阴性.24株菌分成15个PFGE型别,其聚类结果比较分散,无优势PFGE型别.MLST型别有11种,其中ST540、ST5133型别的菌株多,各为4株菌,聚类为1个MLST基因组.结论 山东省部分地区在动物粪便中检出的非O157 STEC血清型比较分散,对常见的抗生素耐药率比较高,具有明显的分子多态性,应重点加强对这类菌株的监测和管理.
-
应用双抗体夹心ELISA检测产志贺毒素大肠杆菌Ⅱ型志贺毒素
目的：构建双抗体夹心ELISA检测Ⅱ型志贺毒素( StxⅡ),以利于产志贺毒素大肠杆菌( STEC)感染的临床快速诊断。方法应用业已制备的StxⅡ特异性杂交瘤细胞株,筛选、鉴定佳抗体配对,构建双抗体夹心ELISA检测体系,对16株STEC临床分离株培养上清中StxⅡ进行检测,并对该体系的特异性和敏感性进行评价。结果从获得的多株单抗分子中,成功筛选出佳配对抗体S2D8和S2C6,构建基于S2D8/S2C6的双抗体夹心ELISA检测体系,该体系对StxⅡ纯品的检测底限是4 ng/ml,并成功从STEC培养上清中检测出StxⅡ及其变种,而与StxⅠ不结合。其检测效能与商业化胶体金试剂一致,显示出良好的敏感性和特异性。结论 S2 D8/S2 C6单抗的双抗体夹心法ELISA检测试剂的制备为基于毒素分子作为靶分子的STEC 免疫诊断、治疗研究提供基础资料。
关键词： 产志贺毒素大肠杆菌 Ⅱ型志贺毒素 单克隆抗体 双抗体夹心ELISA -
产志贺毒素大肠杆菌O157:H-研究进展
产志贺毒素(Shiga toxin,Stx)大肠杆菌(shiga toxin-producing E.coli,STEC)能引起出血性肠炎(hemorrhagiccolitis,HC)、溶血性尿毒综合症(hemo1ytic uremic syndrome,HUS) .
-
牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌分离株的多位点序列分型研究
目的 对牦牛携带的产志贺毒素大肠杆菌(Shiga toxin-producing Escherichia coli,STEC)进行多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)分析,了解菌株的遗传进化关系及致病潜力.方法 根据E.coli MLST数据库(http://mlst.ucc.ie/mlst/dbs/Ecoli)提供的MLST方案,对青海玉树牦牛中分离的54株STEC分离株的7个管家基因进行PCR扩增并测序,通过序列比对确定其等位基因及菌株序列型(Sequence type,ST),并使用BioNumeries软件构建小生成树(Minimum spanning tree,MST),分析牦牛ST型与HUSEC及人源主要流行血清群STEC菌株ST型间的进化关系.结果 54株牦牛STEC菌株呈现高度遗传多态性,可分为31个ST型别,其中包括7个新的等位基因型和17个新的ST型,并存在与HUSEC及主要流行血清群STEC亲缘关系相同或相近的ST型别.结论 青藏高原牦牛携带的STEC具有遗传多样性及一定的特异性,部分菌株具有对人致病的潜力.
-
产志贺毒素大肠杆菌O138 stx2e基因的克隆与序列分析
目的构建产志贺毒素大肠杆菌O138 stx2e基因重组质粒,并比较不同型Stx之间的区别.方法根据GenBank发表的stx2e序列设计了一对特异性引物,用PCR的方法扩增从临床分离到的产志贺毒素大肠杆菌O138的stx2e基因,将其克隆到pGEM-T载体中,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经酶切和PCR鉴定,而后进行测序.并利用DNASIS序列分析软件对GenBank报道的O22菌株和噬菌体P27的stx2e和O138菌株的stx2e基因序列进行了比较分析,并对O138的stx2e氨基酸残基序列与stx1、stx2和O22菌株stx2e序列进行比较.结果所克隆的O138的stx2e与O22菌株和噬菌体P27的stx2e在碱基序列上同源性达到99.6%,O138的Stx2e与O22的Stx2e在氨基酸水平上其序列完全相同.Stx2e与stx2的同源性在85%以上,而stx2e与stx1的同源性只有42%左右.结论克隆了stx2e基因,为研究stx2e的结构和功能奠定了基础.
-
产志贺毒素大肠杆菌的分子生物学检测方法研究
[目的]建立快速准确检测食品中产志贺毒素大肠杆菌的分子生物学方法.[方法]针对产志贺毒素大肠杆菌(STEC)的stx1、stx2、eaeA、hlyA 4种毒力基因,设计了4对特异性引物.[结果]采用多重PCR(multiplexPCR)方法,得到614bp、779bp、450bp和300bp 4条片断.[结论]实验结果表明,本文建立的mPCR方法较常规的大肠杆菌检测方法简便、快速、灵敏度高,灵敏度可达15cfu/mL.
