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活的非可培养文献资料
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活的非可培养状态副溶血性弧菌实时荧光逆转录PCR检测方法的建立及其毒力研究
目的 建立检测活的非可培养(VBNC)状态副溶血性弧菌的荧光逆转录PCR方法并研究其毒力基因表达.方法 将副溶血性弧菌AS079菌株添加到陈化海水中,4℃冰箱内培养,使其进入VBNC状态,针对其管家基因、鉴定基因和毒力基因分别设计实时荧光逆转录PCR引物,通过不同的PCR反应程序和引物浓度组合试验,摸索佳反应体系条件,用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力研究.结果 用所建立的检测VBNC状态副溶血性弧菌的实时荧光逆转录PCR方法,对接种于陈化海水培养的不同时期的AS079副溶血性弧菌进行荧光定量逆转录PCR扩增,结果显示,随着培养时间的延长,毒力基因tdh2和鉴定基因toxR表达水平持续下降,但即使细菌进入VBNC状态,这两个基因也能够得到很好的扩增,说明以toxR基因和tdh2基因对进入VBNC状态的副溶血性弧菌进行检测和毒力研究方法可行.灵敏度试验表明,鉴定基因toxR的低检测限可达到48 cfu/ml,研究毒力基因tdh2的表达需要细菌浓度至少为4.8×102cfu/ml,同时试验证明此方法与其他相近食源性致病菌无交叉反应.结论 该实时荧光逆转录PCR方法检测快速、特异性强、敏感度高,适用于VBNC状态副溶血性弧菌的检测和毒力分析.
关键词： 副溶血性弧菌 活的非可培养 实时荧光逆转录PCR 毒力基因 食源性致病菌 -
活的非可培养状态下的粪肠球菌的研究进展
活的非可培养(VBNC)状态是细菌在不利的环境条件下的一种生理状态，进入VBNC的细菌其生物学特性将发生一系列的变化，无法用常规的培养方法进行检测。对这一生存方式的研究，将对传统的微生物学研究产生深远的影响。本文就粪肠球菌在VBNC状态的诱导、粪肠球菌进入VBNC状态的生物学特性变化、粪肠球菌进入VBNC状态的检测、VBNC细菌的复苏等研究进展作一综述。
