055副溶血性弧菌溶血素基因及其检测的研究进展

副溶血性弧菌是一种重要的食源性致病菌,可引起急性胃肠炎和原发性败血症.副溶血性弧菌能够产生3类溶血素,包括不耐热溶血素(TLH)、耐热直接溶血素(TDH)和TDH相关溶血素(TRH).TLH、TDH和TRH分别由tlh、tdh和trh基因编码.副溶血性弧菌溶血素基因的检测通常采用PCR和核酸杂交,复合PCR和实时荧光定量PCR是未来检测技术应用的趋势.

108 检测海产品中副溶血性弧菌的改良法

浙江省舟山市海产品中副溶血性弧菌的定量检测

目的 调查舟山市海产品中副溶血性弧菌(VP)的污染情况.方法 分3个季度,从舟山市不同的农贸市场采购鱼类、虾类等海产品作为检测对象,采用稀释培养计数(MPN)法对其中所含的VP进行定量检测,同时对分离到的VP进行毒力基因检测.结果 不同月份VP在鱼、虾等海产品中的含量呈明显的波动.分离到的33株VP中有2株副溶血性弧菌耐热溶血素阳性.结论 舟山市海产品中VP污染严重,应引起足够的重视.

一起O3:K6型副溶血性弧菌引起的食物中毒病原学检测

目的 检测食物中毒患者粪便或肛拭子、剩余食物、调味品、食物加工环节涂抹物分离的病原菌的生物学特性,确定食物中毒的病原.方法 参照GB/T4789--2003方法,对检出的副溶血性弧菌(vP)做血清分型、耐药性、种属特异基因和毒力基因[tdh(耐热溶血素)和砌(耐热相关溶血素)]检测.结果 从153份粪便或肛拭子样品中检出74株VP,并从调味品和加工环节涂抹物及垃圾桶内的剩余食物(猪头肉)中各检出1株VP,血清型均为03:K6型,神奈川溶血阳性(KP),77株VP聚合酶链反应(PCR)扩增都出现相同VP种属特异基因(320 bp)条带,77株副VP毒力基因复合PCR结果,tdh(434 bp)阳性,trh(250 bp)阴性.结论 本次食物中毒是由具较强毒力的03:K6型VP污染引起的.

一起副溶血性弧菌引起的食物中毒

2003年7月20日,据报告某单位有数人因在酒店用餐后发生腹泻,腹泻物多为黄色水样便.我们赶赴现场,进行流行病学调查和实验室检验,采集酒店内墩板刀具等涂抹样4份、熟食2份、活扇贝1份以及现症病人肛拭4份进行分离培养.活扇贝1份和2份病人肛拭中检出副溶血性弧菌.

贝类水产中副溶血性弧菌菌型分布研究

目的 了解贝类水产中副溶血性弧菌(VP)的菌型构成及其特点.方法 按照GB/T 4789.7标准处理贝类标本,每份VP阳性标本挑取10个克隆,并对其进行血清分型,以PCR法检测tdh、trh、GS-PCR和f237噬菌体的携带情况,并据此对阳性标本中的VP进行菌型区分,分析各菌型在相应标本中的构成.结果 75份贝类水产中18份(24.0％)检出VP,5.6％携带trh阳性VP(O4∶ KUT),未检出tdh阳性菌株.18份VP阳性标本共获得180株VP克隆,共可分为42种菌型.检出3株O3∶K6和1株O1∶K33 GS-PCR阳性菌株,均为非流行株.不同标本中菌型数不完全相同,多可检出9种,平均每份VP阳性标本含6.1种菌型.检出47个(26.1％)克隆株携带f237的orf8完全缺失变种.结论 f237 orf8完全缺失变种噬菌体在贝类中具有广泛的分布.贝类中VP种群构成复杂,常携带多个菌型.临床常见菌型在贝类中不具优势,食品中VP的检测应充分考虑血清分型、基因分型的作用.

北京市西城区引起感染性腹泻主要肠道病原对头孢菌素耐药状况分析

目的 结合流行病学资料了解和分析北京市西城区主要肠道病原对头孢类抗生素的耐药状况.方法 收集2008-2011年本地区引起感染性腹泻主要肠道病原187株,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测超广谱β-内酰胺酶类(extended spectrumβ-lactamaseas,ESBLs)耐药基因,明确基因型,阳性产物在GenBank上进行比对确定亚型;按照Kirby-Bauer法进行药物敏感性试验,测定对8种头孢类抗生素耐药情况.结果 187株肠道病原中,34株检出携带ESBLs耐药基因,其中志贺菌中检出33株,沙门菌中检出1株.18株病原携带OXA-1亚型耐药基因,11株病原携带CTX-M-14亚型,另有5株病原携带有2种ESBLs耐药基因;药敏结果显示,肠道病原对头孢噻吩耐药率高,为40％.对1种以上头孢类抗生素耐药的肠道病原中,志贺菌耐药率为81％,副溶血性弧菌耐药率为46％,沙门菌耐药率为33％;结合流行病学资料发现,20～29岁年龄组耐药菌株检出率高,为27％,其次为≥40岁组和＜10岁组,检出率分别为23％和21％.结论 本地区主要肠道病原中志贺菌耐头孢类抗生素水平高,检出携带ESBLs耐药基因菌株多;ESBLs耐药基因以OXA-1亚型和CTX-M-14亚型为主;耐药菌株以20～29岁年龄组检出率高.

一起食源性疾病暴发中的副溶血性弧菌病原学分析

目的 分析2016年夏季宁波市一起食源性疾病暴发中副溶血性弧菌的病原学特征.方法 采用血清凝集方法对所有分离菌株进行血清学分型.采用PulseNet China网络实验室的标准方法,对所有分离菌株进行脉冲场凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis,PFGE)分型,采用BioNumerics软件对菌株PFGE指纹图谱进行聚类分析;实时荧光PCR方法用于检测菌株的tdh、trh和tlh基因,MIC法检测菌株对10种抗生素的耐药性.结果 从腹泻患者粪便标本共分离到8株副溶血性弧菌.血清学分型鉴定为2株O3∶K6型,6株O4∶ KUT型.所有菌株经SfgiⅠ、NotⅠ酶切后分别分为3个和4个PFGE带型.VPAN 11.ZJNB002/VPAS12.ZJNB002带型为优势型,共4株细菌.副溶血性弧菌对10种选定的抗生素均敏感.结论 这是一起由混合血清型,并对应多种PFGE带型的多克隆副溶血性弧菌引起的食源性疾病暴发事件,应提高对多克隆副溶血性弧菌引起的混合感染性食物中毒的认识水平,防止漏检.未发现菌株对10种选定的抗生素产生耐药.

多菌型副溶血性弧菌共感染引起集中事件调查分析

目的 分析一起副溶血性弧菌(VP)集中感染事件的菌株特征,明确该起感染事件的性质.方法在2017年9月,广西某乡镇发生一起疑似食源性疾病暴发,现场采集13例患者肛拭子,分离到10株VP,利用O和K诊断血清对分离株进行玻片凝集实验分型,采用TaqMan水解探针荧光PCR检测分离株毒力相关tlh、tdh、trh和ORF8基因,并分别用Not Ⅰ和Sfi Ⅰ两种酶进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,导入Bionumerics 6.6软件进行聚类分析.结果 10株VP有5种血清型,6株为O3∶K6,其余4株血清型分别为O4∶K8、O1∶KUT、O2∶KUT和O10∶K19.所有菌株tlh基因均呈阳性,而trh基因呈阴性;6 株O3∶K6 血清型菌株和1 株O4∶K8 血清型菌株tdh基因均呈阳性;其余3株tdh基因呈阴性.经Bionumerics 6.6软件聚类分析,Not Ⅰ和Sfi Ⅰ酶切PFGE有8种型别,同为O3∶K6血清型的6株菌可分为4种型别.综合以上3个指标进行分析,该事件分离的10株菌中仅2株菌完全相同.结论该起集中暴发事件由多种血清、不同PFGE型别的致病和非致病性VP多菌型共感染引起.

基于腹泻多病原监测研究副溶血性弧菌的感染状况和疾病负担

目的 了解上海市青浦区副溶血性弧菌腹泻病感染状况和疾病负担.方法 2015年1月至2016年12月,选择上海市青浦区某三级医院所有初诊疑似细菌性腹泻病例为研究对象,采集粪便标本进行肠道多病原分离,对实验室诊断为副溶血性弧菌的食源性腹泻病例通过入户调查方式了解其医疗费用.结果 6 129例腹泻患者中,确诊为细菌性腹泻患者1 092例(17.82％,1092/6 129),其中646例检出副溶血性弧菌,分离率为1 0.54％,578例为单一感染(9.43％),68例为混合感染(1.10％);95.50％的副溶血性弧菌菌株携有直接溶血素基因(tdh);流行峰值7-8月,病例以40～60岁年龄组和农民较常见;混合感染以感染副溶血性弧菌和沙门菌常见,与单一感染相比,发热率差异有统计学意义(x2=8.003,P＜0.05).副溶血性弧菌阳性病例直接医疗费用为(338.75±191.45)元,直接非医疗费用(59.83 ±74.94)元;农村患者的直接医疗费用和间接非医疗费用均高于城市(P＜0.05);治疗中抗生素使用比率较高,且使用抗生素的直接医疗费用高于不使用抗生素组(t =2.531,P＜0.05).结论 副溶血性弧菌腹泻病例症状较轻,发病率较高,存在一定混合感染;农民的疾病负担较重.应强化重点人群卫生知识宣传,提倡就近治疗和优化诊疗方式,以降低经济负担.

浙江省宁波地区腹泻患者中副溶血性弧菌检测与分析

目的 了解腹泻患者中副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)携带、消长情况,建立分子溯源方法,发现流行优势型,分析疾病诱发因素,为控制副溶血性弧菌引起的食物中毒提供依据.方法 腹泻患者中副溶血性弧菌分离采用筛检法;采用API生化鉴定系统进行菌株鉴定;用血清凝集试验对菌株进行血清分群;药敏试验采用K-B法;利用脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electrophoresis,PFGE)进行分子分型;聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)检测细菌毒力基因.结果 从6216份腹泻患者标本中检出副溶血性弧菌901株,占检出致病菌的63.45％.副溶血性弧菌生物学性状典型,对氨苄西林等青霉素类抗生素的耐药率高,但对其他大多数抗生素敏感.480株副溶血性弧菌分成6个血清群,O:3血清群占72.71％,为流行优势群.根据PFGE图谱带型变化可分为19个不同的型别,其中食物中毒来源的菌株PFGE带型集中.tdh毒力基因阳性的副溶血性弧菌396株,阳性率为70.71％;trh毒力基因阳性的副溶血性弧菌79株,阳性率为14.11％;tdh、trh毒力基因均阳性的副溶血性弧菌18株,阳性率为3.21％;tdh阳性的副溶血性弧菌中有365株神奈川试验阳性,占73.14％.结论 宁波地区腹泻患者由副溶血性弧菌引起的比例较高,O3血清群为优势血清群.PFGE分型方法准确性、特异性高、重复性好、结果容易判读,分型效果更为明显,食物中毒来源的菌株带型集中,可用于确定菌株间的聚集性关系,提示传染源和传播途径,明确食物中毒是否为同一起暴发事件.患者中分离到的副溶血性弧菌大多数为带毒株,具有致病能力,与海产品和环境株不同,可用β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素作为临床治疗用药.

一起副溶血性弧菌引起食物中毒的调查报告

2007年某宾馆接待大型会议,参会代表在同一餐厅就餐后陆续出现261例以恶心、呕吐、腹痛、腹泻等胃肠道症状为主的病例,根据流行病学调查和实验室检测结果,确定为一起由副溶血性弧菌污染而导致的集体性细菌性食物中毒.

副溶血性弧菌病原学和分子流行病学流行特征研究进展

副溶血性弧菌是导致我国细菌性食物中毒事件的首要原因.临床分离株和环境分离株的病原学特征有着明显的差异.临床分离株以O3∶K6血清型为主,tdh和(或)trh基因携带率较高,一般在80％以上,脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因图谱具有明显的优势图谱,并且与血清分型具有一致性.而环境分离株(包括食品)多无优势血清型和优势PFGE图谱,tdh和(或)trh基因携带率远低于临床分离株,多在6％以下.各地临床分离株的耐药性差异较大,但对氨苄西林等早期药物耐药率均较高.环境分离株较临床分离株的耐药性更为严重和复杂.

一起由副溶血性弧菌引起食物中毒的调查报告

2006年7月27日接到辖区某医院"有多名腹痛、腹泻、呕吐伴发热症状患者就诊"的报告,区疾控中心和监督所相关人员立即赶赴现场进行调查处理,现将结果报告如下.

一起副溶血性弧菌引起的食物中毒调查

目的 查明本起食物中毒的病因,为今后预防和控制类似事件提供借鉴.方法 根据流行病学调查、临床表现、实验室检验和食物中毒诊断标准进行分析.结果 在10例患者、3名厨工肛拭样品、菜墩涂抹样品及8份剩余食物样品中检出生物学性状一致的副溶血性弧菌.结论 这是一起副溶血性弧菌引起的食物中毒.

浙江省湖州市南浔区一起农村婚宴引起的副溶血性弧菌食物中毒调查分析

对在浙江省湖州市南浔区双林镇一起农村婚宴中发生食物中毒的17例病例进行现场流行病学调查,采集留样食物样品、水样、患者排泄物、肛拭子检测分析,在16例病例肛拭子、1例病例粪便和大龙虾、老虎斑鱼、银杏鱼、莴笋中分离培养出副溶血性弧菌阳性,经血清分型,均为O3:K6型,生物学特性一致.应探讨在新形势下农村家宴监管的有效方式,从而防止和减少农村家宴食物中毒发生.

一起多血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒脉冲场凝胶电泳分析

目的 对一起食物中毒检出的3种血清型副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP),采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析,以明确其传染源.方法 参照WS 271-2007等标准,进行副溶血性弧菌分离、生化和血清学鉴定、KP试验、药敏试验、毒力基因检测、PFGE分子分型,利用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行聚类分析.结果 17份样品均检出副溶血性弧菌,血清型可分3个型别,以O3∶K6为优势血清型,占70.59％,O2∶K3和O2∶K28两血清型所占比例不一.PFGE分子分型,按100％相似度可分6个基因型别,XC12001型为优势型别,占58.82％,XC12002～XC12006型所占比例不一,聚类分析显示XC12001和XC 12002型、XC12004和XC12005型相似度较高.17株副溶血性弧菌药敏结果基本一致,对氨苄西林和阿莫西林耐药率高达100％.10株O3∶K6型副溶血性弧菌只携带tdh毒力基因,其余菌株tdh、trh1、trh2毒力基因全部阴性.结论 此起食物中毒是以O3∶K6血清型为主的不同克隆群副溶血性弧菌混合感染所致,PFGE可有效应用于食物中毒溯源分析及分子流行病学研究.

一起由两种血清型副溶血性弧菌引起的食物中毒调查

2009年8月,杭州市江干区报告了一起跨省旅游团的食物中毒,32名游客有10人发病,罹患率为31.2%.采集的10份病例肛拭,均检出04; K8血清型副溶血性弧菌,其中5份肛拭同时检出03; K6血清型副溶血性弧菌.两种血清型的副溶血性弧菌tdh毒力基因均为阳性.脉冲场凝胶电泳分型显示,同一血清型的菌株为高度相似克隆,同一样本不同血清型的菌株为不同克隆.

副溶血性弧菌快速检测方法研究

目的 以检测toxR基因作为副溶血性弧菌种水平上的特异性基因鉴定,建立一种快速、准确、简便的副溶血性弧菌(VP)筛选方法.方法 根据toxR基因序列设计合成引物,扩增被检VP所含的相应基因.分别用标准株及地方株做对照,同时与常规鉴定方法比较.结果 对浙江省2005年收集的286株来自临床病人和海产品的可疑VP鉴定,用常规方法鉴定出VP占总数的62.24%;用toxR基因检测,鉴定率占所有菌株的61.54%;两者差异无统计学意义(x2=0.03,P＞0.05),对40份海产品增菌液直接检测toxR基因与常规增菌分离鉴定法,均有37份标本检出VP,检出率为92.5%.结论 该检测方法快捷、特异性好、敏感性高,可以作为VP快速筛选方法.

一起副溶血性弧菌引起食物中毒实验室溯源检测

目的 分析一起食物中毒中分离的副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)的血清群分布、毒力基因携带情况及分子分型特征,为溯源提供依据.方法 血清凝集试验检测菌株血清型别,多重PCR方法检测Vp三种毒力基因tdh(耐热直接溶血素),trh(相对耐热直接溶血素)与tlh(不耐热溶血素)的携带情况.肠道细菌重复基因间共同序列(enterobacterial repetitive intergenic consensus sequence,ERIC)PCR分型技术分析不同来源菌株基因型特征.结果 24株分离株中主要血清群为O3:K6(33.3％),均携带tlh 基因、均不携带trh基因.66.7％ (16/24)的菌株携带tdh基因,O3:K6血清群菌株均携带tdh基因.ERIC PCR分型分为3个克隆群:E1群包括4株O1,2株O2,O4、O5各1株,E2群包括3株O1,2株O5,O2、O4、O10各1株；E3群包括8株O3.结论 该起食物中毒是由多种型别Vp引起.主要血清群为O3:K6,在食品与患者中都分离出该血清群的菌株,经ERIC分型,这些菌株来自同一个克隆群.除O3血清群外,从食品、加工存放食品的器具及患者中分离出其他不同血清群Vp,经ERIC分型,不同血清群分为2大克隆群,提示此次食物中毒的传染源可能与食品、加工存放食品器具污染Vp相关.