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082脉冲场凝胶电泳技术及其在致病菌研究中的应用
脉冲场凝胶电泳是在琼脂糖凝胶电泳的基础上,外加正交的变脉冲电场,使超过50kb,甚至是几千kb以上的DNA分子也得到有效分离的一种方法.该法应用于分子流行病学中,通过观察电泳条带的差异,为确定菌株之间的亲缘关系提供了可靠的技术手段.目前已被广泛应用于食源性疾病溯源、致病菌毒力基因研究、医院内感染流行监测、耐药性研究等多方面,推动了分子流行病学及基础科学的发展.
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食用苜蓿嫩芽致Kottbus血清型沙门氏菌感染暴发
2001年3月12日,加利福尼亚卫生局(CDHS)对一组沙门氏菌Kottbus血清型分离物用脉冲凝聚胶电泳(PFGE)进行了鉴定,2月1日-5月1日,确定了来自加利福尼亚州几个县的23例和亚利桑那州1例Kottbus型沙门氏菌感染病人,本文概括了这次暴发的调查结果.
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电泳分离血清蛋白实验探讨
本文重点对醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白实验的电泳条件及透明液等部分作了一些改进,使实验结果较以前清晰,区带明显.
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实验性精索静脉曲张大鼠附睾分泌蛋白的鉴定研究
目的研究精索静脉曲张对附睾合成与分泌蛋白的影响,鉴定病理状况下附睾特异改变的蛋白成分. 方法部分结扎左肾静脉建立实验性左侧精索静脉曲张大鼠动物模型.用SDS-PAGE和双向电泳分离左附睾尾匀浆上清中的蛋白质组分,切下稳定出现改变的蛋白质所在的条带或斑点,进行胶内胰蛋白酶消化,酶解得到的终肽混合物进行肽质量指纹谱测定.通过检索互联网上的蛋白质数据库确定该蛋白的可能成分. 结果与对照动物相比,实验性左侧精索静脉曲张大鼠左附睾尾匀浆上清中一分子量约20×103、等电点约5.5的蛋白成分明显增加.经质谱分析结合网上数据库检索表明,该蛋白是附睾视黄酸结合蛋白. 结论实验性左侧精索静脉曲张导致大鼠附睾中视黄酸结合蛋白含量升高,这一改变对精子在附睾中成熟及精子功能的影响有待进一步研究.
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肠炎沙门氏菌脉冲场凝胶电泳分型研究
目的为研究肠炎沙门氏菌菌株间的关系,特建立了分子流行病学研究方法-脉冲场凝胶电泳分型方法,并对从食品中分离的肠炎沙门氏菌进行了分型研究.方法1991～2001年间,从河南、黑龙江等省份采集食品样品,分离出肠炎沙门氏菌,挑取单个菌落增菌,用溶菌酶、蛋白酶K和TE缓冲液依次提取菌体DNA后,用限制性内切酶XbaΙ消化胶块,然后在CHEFMapper仪上进行脉冲场凝胶电泳,电泳条件:0.5×TBE缓冲液、14℃、1%琼脂糖、脉冲时间5s～45s、26h、6V/cm.应用λ噬菌体DNA作为脉冲场凝胶分子量标准.结果从鸡肉、牛肉、熟肉及蔬菜中分离出30株肠炎沙门氏菌,其中18株来自河南省,绝大多数菌株(22株)分离于2001年.对所得菌株进行脉冲场凝胶电泳后,结果显示30株肠炎沙门氏菌分为A、B两个型,两型图谱之间有8个条带的差异.A型菌株有19株,占全部菌株的63.3%,B型菌株有11株,占36.7%.A型之内又可以分出2个亚型,其中A1型占78.9%,A2亚型与A1亚型相比的差别在于,A2型在50kb处有一条带缺失.在菌株分型与采集时间和采集地点之间没有相关性,但所有从鸡肉中分离到的菌株均为A1型,提示了某种有待进一步研究的流行病学趋势.结论在研究肠炎沙门氏菌不同菌株之间的分子流行病学关系方面,脉冲场凝胶电泳是一种有效的方法.
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LDH电泳区带扫描积分对肝病的诊断价值
目的:探讨乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的扫描积分对肝病的诊断价值.方法:利用REP高压快速电泳法对临床确诊的266例各类肝病患者进行LDH同工酶检测,经扫描后计算各种肝病的每种同工酶区带的扫描积分均值,且与正常对照组比较,同时探讨LDH总活性与扫描积分的相关性.结果:电泳扫描积分与LDH总活性成正相关,即LDH活性越高,其扫描积分就越大,同时对所得数据经相应的t检验或t'检验显示:各种肝病中LDH5的扫描积分均值与对照组比较均明显增加,具有高度显著性差异(P值均＜0.01).其它LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、同工酶的扫描积分在各种肝病中也有不同程度的增高或降低,这种改变比同工酶的百分数的变化更为明显.结论:LDH同工酶的扫描积分对各种肝脏疾病的诊断和鉴别诊断具有十分重要的意义.
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毛细管电泳法分析贝类食品中的软骨藻酸
为监测贝类食品的食用安全,建立了毛细管电泳/紫外检测法定量测定贝类食品中软骨藻酸的分析方法.结果表明:软骨藻酸在0.2～50 μg/mL范围内具有良好的线性关系,相关系数r=0.9990;RSD＝2.56%;方法检出限为0.034 μg/g.在3个水平上对实际样品进行标准添加,回收率分别为96.80%、97.10%和96.85%.该方法简单、灵敏、高效、成本低,对记忆损失性贝类毒素的检测和监控具有重要意义.
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单核细胞增生李斯特菌的毒力基因检测及PFGE分型的研究
目的 了解福建省食品中单核细胞增生李斯特菌携带hly、plcA、plcB和prfA毒力基因的情况及脉冲场凝胶电泳(PFGE)的分型情况.方法 将hly、plcA、plcB和prfA基因作为靶序列选取4对引物,通过聚合酶链反应(PCR)检测61株单核细胞增生李斯特菌和2株可疑单核细胞增生李斯特菌的毒力基因,用PulseNet单核细胞增生李斯特菌标准方法进行7株单核细胞增生李斯特菌的PFGE分子分型.结果 61株单核细胞增生李斯特菌毒力基因为hly+、plcA+、plcB+和prfA+,2株可疑单核细胞增生李斯特菌的毒力基因分别为hly-、plcA+、plcB-、PrfA-和hly-、plcA-、plcB-、prfA-.7株单核细胞增生李斯特菌的PFGE分为5个型.结论 实验结果表明福建省食品中分离到的单核细胞增生李斯特菌均含有hly、plcA、plcB和prfA基因,属于致病株.对2株可疑单核细胞增生李斯特菌进行了进一步的鉴定,排除了单核细胞增生李斯特菌,该毒力基因检测方法可用于可疑单核细胞增生李斯特菌的进一步鉴别.7株菌中有两对2株PFGE型别一致,一致的菌株来自不同年份不同销售地点的同一品牌,应用PFGE方法可以进一步调查该厂冻鸡肉中单核细胞增生李斯特菌的传播途径和污染源.
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六种血清型沙门菌PFGE指纹图谱研究
目的 用PFGE方法绘制不同血清型的沙门菌指纹图谱,并且进行同源性分析.方法 首先将从食品中检测出6中不同血清型的沙门菌菌株制成琼脂模块,再提取菌株的DNA,用限制性内切酶Xba Ⅰ对细菌DNA进行酶切,用Bio-rad CHEP MAPPER绘制出菌株的PFGE指纹图谱,后用Quantity OneTM图像分析软件进行同源性分析.结果 所有的菌株的同源性均用相似性系数(矩阵)和百分数表示.结论 用PFGE绘制菌株的指纹图再用Quantity OneTM图像分析软件进行分析,是确定食源性致病菌沙门菌同源性的一种有效的方法.
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中国食源性鼠伤寒沙门菌株耐药谱及PFGE分型研究
目的 了解掌握中国食品中鼠伤寒沙门菌的耐药状况,并对2002-2005年国家食源性疾病监测网分离的23株鼠伤寒沙门菌进行耐药性监测及PFGE分型研究. 方法 利用血清学方法对2002-2005年食源性疾病监测网分离的沙门菌进行分型,并运用CLSI(Clinical and Laboratory Standards Institute)推荐的纸片法对鼠伤寒沙门菌株进行耐药性检测,采用脉冲场凝胶电泳法(PFGE)进行PFGE分型. 结果 发现15株多重耐药鼠伤寒沙门菌,其中耐4～5种抗生素的6株(40%),耐6-9种抗生素的5株(33.3%),耐10种抗生素的4株(26.7%);可分为16个PFGE型,其中5个PFGE型的菌株数超过1株. 结论 我国食源性鼠伤寒沙门菌分离株的多重耐药性严重,PFGE分型方法对鼠伤寒沙门菌的分型能力较好,同-PFGE型菌株的耐药谱非常接近.
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中国部分食品中肠炎沙门菌分离株的PFGE分子型别分析研究
目的 研究中国食品中肠炎沙门菌分离株的分子谱别.方法 用脉冲场凝胶电泳分型技术对从中国11个省市食品中分离的51株肠炎沙门菌进行分子分型.结果 肠炎沙门菌经2种内切酶Xba I、Spe I处理后,均分为11个不同的带型.两种内切酶的分型结果不相同,但其中有部分交叉.2种内切酶的PFGE分型都有2个主要的带型,分别涵盖了分离株的70%,并在两型之间有部分兼容性.通过双酶系统的双重分型,还可以将其中的型别进一步区分为亚型.在各地区之间菌株的型别分布无明显规律,在各种食品之间菌株的型别分布,SpeI酶切后的结果更有规律.分离自羊肉中的4株菌经XbaI、Spe I酶切表现为同-PFGE型别,在Xba I分型结果中为XF型,在Spe I分型结果中为SE型,揭示了一定的亲缘关系.结论 脉冲场凝胶电泳分型技术是肠炎沙门菌分子分型的有效手段.
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红细胞平均体积降低血液学分析的临床意义
1 940名健康人体检的血常规,发现有200人(10.3%)红细胞平均体积(MCV)降低(低于80.0fl),此200人做血清铁(SF)定量测定、血红蛋白(Hb)电泳、6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性与6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶活性比值(G6PD/6PGD)测定,同时观察红细胞分布宽度(RDW-CV),报告如下.
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氨基酸碘对白色念珠菌的杀菌机理研究
目的 研究氨基酸碘杀菌效果及其作用机理,为其应用于实践提供依据.方法 采用悬液定量杀菌试验,透射电镜和生化检测等方法进行了实验室观察.结果 含有效碘200 mg/L的氨基酸碘溶液作用3～20 min,对悬液内白色念珠菌的平均杀灭率范围为99.91%～99.96%;含有效碘400 mg/L该消毒液作用3 min,对白色念珠菌的杀灭率可达到100%.经氨基酸碘处理的白色念珠菌外层质膜电子密度明显降低,继而菌体形态可出现轻度不规则,细胞质中细胞器和核质结构形态混乱.氨基酸碘作用可使白色念珠菌膜蛋白含量减少,细菌碱性磷酸酶和琥珀酸脱氢酶渗出,且琥珀酸脱氢酶活性有所抑制;细菌核酸无降解发生,但有少量交联物生成.结论 氨基酸碘对白色念珠菌杀灭作用较强.氨基酸碘可使细菌膜通透性明显增加,膜结构蛋白降解,胞质及蛋白酶渗出,琥珀酸脱氢酶活性显著降低,少量细菌核酸发生交联反应.
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多位点序列分型和脉冲场凝胶电泳技术在肠炎沙门菌暴发事件病原学鉴定中的应用
目的 探讨脉冲场凝胶电泳(pulse-field gel electrophoresis,PFGE)和多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)技术在沙门菌鉴定中的应用价值.方法 对分离自一起食物中毒事件中的27株沙门菌,用肠杆菌科鉴定系统API 20E和ATB ID 32E进行生化鉴定并血清分型,以脉冲场凝胶电泳(PF-GE)和多位点序列分型(MLST)进行分子分型.结果 27株沙门菌的生化鉴定结果为沙门菌属细菌,其中25株血清分型结果为肠炎沙门菌,抗原模式(9,12:g,m);其余两株菌H相抗原除g和m因子凝集阳性外,d因子也有凝集反应.PFGE结果显示27株菌株中26株的带型完全一致,另1株与其他26株仅有1条条带的差异,相似度为96.3％.27株菌的MLST型别均为ST11型,提示为肠炎沙门菌.结论 分子分型技术,特别是MLST技术有助于沙门菌的辅助鉴定.
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临床电泳分析仪的发展与应用现状
本文简介了临床电冰分析仪的基本组成与分类,国内外临床电泳分析仪及其临床应用的进展,并针对其目前现状与将来的发展趋势进行了展望.
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蓝谱Loopamp?军团菌检测试剂盒
本试剂盒可快速、简单、高灵敏度、高特异性的检测出环境水样中的军团菌属，针对军团菌属保守的16SsRNA基因设计特异性LAPM?反应引物。该试剂盒包含前处理试剂，经过简单的核酸提取即可用于LAMP?反应，能在1小时内完成检测，反应结果无需电泳，加入荧光染料即可通过肉眼直接观察反应结果。
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蓝谱Loopamp?沙门氏菌检测试剂盒
针对沙门氏菌属的保守基因invA进行定性检测，特异性检测食品中的存在的沙门氏菌。该试剂盒包含前处理试剂，增菌后进行简单的核酸提取即可用于LAMP?反应，可在1小时内完成检测，反应结果无需电泳，加入荧光染料即可通过肉眼观察反应结果。具备简单、快速、高灵敏度和高特异性等优点。
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4种电泳及轻链定量在多发性骨髓瘤诊断中的应用
目的 探讨4种电泳筛查多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)及其分型的价值.方法 收集我中心164例MM患者作为病例组(MM患者组),同时收集45例健康体检者作为对照组(非MM组),所有研究对象均采集血液和尿液.用血清蛋白电泳(serum protein electrophoresis,SPE)和高分辨尿蛋白电泳(high resolution urinary protein electrophoresis,HR)分别对所有研究对象的血液和尿液样本进行M蛋白筛查,然后用血清免疫固定电泳(immunofixation electrophoresis,IFE)和尿本周氏蛋白电泳(Bence-Jones protein electrophoresis,B-J)对所有研究对象进行分型;并用罗氏生化仪检测所有研究对象的血清总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、球蛋白(globulin,GLOB)、免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)及轻链定量,并计算轻链比值.结果 SPE和HR对164例MM患者M蛋白的检出率分别为92.68％和59.76％,IFE和B-J的检出率分别为98.17％和59.76％.45例非MM组经4种电泳均未检出M蛋白.与非MM组相比较,MM患者组的TP、GLOB、轻链κ、λ含量显著升高,差异有统计学意义(t=34.968,38.231;F=72.811,58.611;P<0.05).轻链型患者HR、B-J的阳性率明显高于IgA型患者、IgG和IgM型患者,差异具有统计学差异(χ2=6.870,13.236,19.725;P<0.05).结论 IFE是MM诊断敏感的检测方法,使用多种电泳方法结合免疫球蛋白及轻链定量同时检测,可以明确分型,有效避免漏诊、误诊,为临床全面评估病情提供依据.
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日本血吸虫成虫性别差异蛋白的筛选及鉴定
目的 筛选和鉴定日本血吸虫成虫性别差异蛋白.方法 自日本血吸虫(Schistosomajaponicum,S.japonicum)尾蚴感染的2只家兔颈动脉灌注生理盐水冲虫,分别收集雌雄成虫各约200条.提取雌、雄成虫的水溶性和脂溶性蛋白各300μg,采用双向凝胶电泳技术分别进行分离.银染后扫描成像,用ImageMaster Platinum 2D 5.0软件进行分析,筛选差异蛋白,并予质谱鉴定.结果 雌虫和雄虫的水溶性蛋白分别检出(255±10)、(224±12)个蛋白点,疏水蛋白分别检出(200±11)、(132±8)个蛋白点;鉴定的6个差异蛋白质中,5个雌性表达上调的差异蛋白为硫氧还蛋白,铁蛋白-1重链,泛素结合酶样蛋白Mms2-泛素复合体可溶性结构B链,热休克蛋白10和胞浆脂肪酸结合蛋白突变体H,1个雄性表达上调的差异蛋白为48 kDa组胺受体亚基肽4.结论 获得了日本血吸虫成虫性别差异蛋白质.
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2009—2010年山东省食品中单核细胞增生李斯特菌的耐药性和分子分型研究
目的 了解山东省单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)耐药及分子分型特点,并探讨耐药表型与PFGE基因组型之间的关系.方法 从2009-2010年山东省6个城市的生畜禽肉、熟肉制品、水产品等食品中采集80株单增李斯特菌,采用微量肉汤稀释法测定其抗生素敏感性,采用PFGE进行分子分型,并对耐药谱与PFGE型别关系进行分析.结果 16.25％(13/80)的菌株存在耐药,其中,业胺培南的耐药率高(12.50％,10/80),其次是四环素和强力霉素(3.75％,3/80；2.50％,2/80).耐药分型可将80株菌分为9个型别.PFGE将80株菌分为34个带型,以17型和29型为主.A型耐药谱分布范围较广,出现在79.41％ (27/34)的PFGE型别中.结论 2009-2010年山东省单增李斯特菌存在较为严重的耐药现象,单增李斯特菌的PFGE分型与其药敏分型无对应关系.
