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甲型流行性感冒病毒NS蛋白研究进展
甲型流行性感冒(流感)病毒基因组由8个分节段的负链RNA组成,共编码10种蛋白,其中在病毒复制的早期即有NP蛋白和NS1蛋白的大量表达,提示这两种蛋白在病毒复制过程中及与细胞蛋白的相互作用中发挥着重要的功能.RNA第8节段编码两种蛋白,即非结构蛋白1(NS1)和2(NS2).
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尿CYFRA21-1的测定及其与膀胱癌相互关系的探讨
CYFRA21-1是从癌症患者血清中发现的细胞角蛋白19片段,是一种酸性细胞蛋白,相对分子量为4000道尔顿,单抗BM19-21和KS19-1能特异性识别该片段;它由MCF-7免疫小白鼠而获得,反应于简单的上皮细胞,免疫组化证明CK19位于单层和复层上皮肿瘤细胞的细胞浆内[1];细胞死亡时它以溶解片段的形式释放于血清内.CYFRA21-1主要用于非小细胞肺癌的诊断,这已成共识.既然CK19源于上皮肿瘤细胞,那么95%以上是上皮性肿瘤的膀胱癌会不会有所表现呢?据国外报道,血清CYFRA21-1的测定由于灵敏度低,特异性差而未被用于膀胱癌的诊断.鉴于此,本文对正常人、膀胱癌患者及其它泌尿系疾病患者三组尿CYFRA21-1的样本进行了测定,并对其相互关系作了探讨,现报道如下.
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体外诱导的皮肤源性神经干细胞在大鼠受损伤脊髓内的存活和分化
为寻找新的神经干细胞来源用于治疗急性脊髓损伤的实验研究,本实验采用绿色荧光大鼠(GFP转基因鼠)有毛皮肤在体外经剪碎,胰酶消化,过滤细胞,无血清培养液培养分离细胞,用表皮生长因子和成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,去除生长因子后用含血清培养液培养细胞等过程,采用神经上皮于细胞蛋白(nestin)、微管相关蛋白(MAP2)、神经丝蛋白(NF-200)和胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)抗体免疫细胞化学染色法对培养细胞的分化状况进行鉴定.
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第三相蛋白分离结合水平双相凝胶电泳对福赛类杆菌蛋白分离影响的研究
福赛类杆菌菌株(Bacteroides forsythus ATCC43037)在以TSB为基础培养基中加入酵母提取物,氯化血红素,维生素K3,DTT及NAM,37℃厌氧(80% N2,10% H2,10% CO2)培养7 d,超声波破碎细胞,然后用ReadyPrep TM Sequential Extraction试剂盒按说明书对超声破碎细菌全细胞蛋白进行分步系列提取.
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内皮细胞蛋白C受体基因多态性与湖北地区汉族人群冠状动脉粥样硬化性心脏病的相关性研究
蛋白C系统是人体三大抗凝系统中主要组成成分之一,内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)是1994年发现的该系统的一个新成员,主要表达于大血管的内皮细胞上.
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子痫前期患者血浆中可溶性内皮细胞蛋白C受体与血管性血友病因子及可溶性血栓调节蛋白的水平变化
子痫前期( pre-eclampsia,PE)是妊娠期高血压疾病的一种,属于妊娠期妇女所特有,发病率约2%~8%,一般发生于妊娠20周以后,临床表现为高血压、蛋白尿、浮肿,严重时出现抽搐、昏迷、甚至母婴死亡,是孕产妇及围生儿死亡的重要原因[1]。迄今,PE的病因与发病机制尚未完全阐明。研究发现,不同程度的胎盘微血栓形成是PE常见的病理改变之一[2-3]。在这些病理改变中,血管内皮细胞激活或损伤与PE的发病关系密切[4]。同时,还表现为血小板激活、凝血与纤维蛋白溶解功能紊乱、机体处于高凝状态或血栓前状态[5-6]。为进一步明确血管内皮细胞功能变化在PE发病中的意义,筛选PE早期诊断指标,从而更有效地防治妊娠期高血压疾病,本研究对PE患者血浆可溶性内皮细胞蛋白C受体( soluble endothelial protein C receptor,sEPCR)、血管性血友病因子( von willebrand factor antigen,vWF:Ag)和可溶性血栓调节蛋白( soluble thrombomodulin,sTM)等指标进行了检测和分析。
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肿瘤分泌蛋白的临床研究进展
蛋白质作为生命功能的执行者,在内质网上合成后,运输至高尔基体内进一步加工和分选,然后被运送到相应的细胞器中,或被分泌到细胞外发挥功能,该过程称为细胞分泌,其中分泌到细胞膜外的蛋白质称为分泌性蛋白或分泌蛋白.分泌性蛋白占人类蛋白质组的十分之一,其中细胞蛋白的20%~25%是可分泌蛋白.
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口蹄疫病毒致病分子机制
在病毒感染引起机体发病的过程中,既有病毒与细胞间的相互作用,又有病毒侵入细胞后的一系列反应,包括病毒与细胞间吸附、病毒粒子释放、病毒核酸在细胞内复制等过程.从理论上讲,口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)的任何一种结构蛋白和非结构蛋白、病毒BNA元件、参与病毒复制过程的宿主细胞蛋白和内膜(包括FMDV细胞受体)都可以被认为是毒力因子.这些因子缺陷或者缺乏,将可能引起病毒致病力的变化.
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肿瘤标志物的蛋白质组学
随着蛋白质组学概念的提出及其技术的不断发展,人们可以从细胞蛋白整体水平研究肿瘤的发病机制,寻找肿瘤诊断和预后的特异性标志.蛋白质组学表达模式研究的技术包括用于蛋白质分离的双向凝胶电泳,用于鉴定的质谱分析及用于蛋白质对比研究的数据库,这些技术正应用于肿瘤标志物的寻找和鉴定.人们已在肾细胞癌中找到相关的诊断标志,并建立了膀胱癌相关蛋白数据库;在肝癌研究中也发现了大量可能用于早期诊断和肿瘤分型的蛋白;在肺癌早期可检测"恶性"蛋白信号,预测肿瘤发生和观察化疗效果;在卵巢肿瘤中联合应用筛选的肿瘤标志和CA125可明显提高肿瘤的检出率;另外蛋白质组学方法在乳腺癌、结肠癌、白血病等疾病研究中的应用也日益广泛.尽管这项技术仍有不足,但他在不断完善,使我们能发现更多敏感、特异的肿瘤标志物.
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胃癌相关蛋白GCRG213在胃癌细胞中特异性表达
目的:观察来源于胃癌高表达基因GCRG213抗体在两种不同细胞的表达情况,评价GCRG213抗体的肿瘤特异性.方法:应用免疫印迹方法对GCRG21 3抗体在胃癌细胞SGC-7901和胃上皮细胞HFE-145的表达进行比较分析.结果:GCRG213抗体与胃癌SGC-7901细胞蛋白免疫结合后在相应大小位置有一清晰的特异性条带,而与胃上皮H FE-145细胞蛋白免疫结合后则无特异性条带出现,GCRG213抗体与两种细胞蛋白的结合存在明显差异.结论:GCRG213抗体具有很强的肿瘤特异性.
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白细胞中与NS5ATP5蛋白结合的蛋白基因的筛选与克隆
目的:采用酵母双杂交体系寻找与NS5ATP5相互作用的白细胞蛋白,以探讨NS5ATP5的生物功能.方法:应用酵母双杂交系统3,构建NS5ATP5诱饵质粒,转化酵母AH109,与含人白细胞cDNA文库质粒的酵母Y187进行配合,于涂有x-α-gal营养缺陷型培养基上筛选生长.挑选蓝色克隆,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌提取质粒DNA后进行测序,然后进行生物信息学分析.结果:筛选出10个与NS5ATP5特异性相互作用的克隆,其中1个为金属硫蛋白,1个为热休克蛋白HSP60,1个为主要组织相容性复合体Ⅱ淋巴细胞抗原DQB,5个为人类重排免疫球蛋白λ-轻链,2个是未知功能基因.结论:初步克隆了NS5ATP5与白细胞结合蛋白基因,对NS5ATP5的功能研究有一定的提示作用;为以后研究这些能与NS5ATP5相互作用的基因在白细胞中的生理功能奠定了基础.
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线粒体自噬参与Ox-LDL诱导的THP-1来源泡沫发生发展过程
目的:探索线粒体自噬在泡沫细胞形成过程中的作用。
方法:不同剂量ox-LDL(25μg/ml、50μg/ml 或100μg/ml)分别与THP-M共孵育6、12、24、36、48、60、72 h,油红染色观察THP-M细胞内脂质沉积量,并提取细胞蛋白利用Western blot检测不同阶段泡沫细胞中LC3Ⅱ,Beclin-1, P62和Parkin蛋白的表达量,观察线粒体自噬的变化情况;然后,利用Parkin siRNA干扰Parkin蛋白的表达,ox-LDL(50μg/ml)与THP-M共孵育48 h,通过JC-1 indicator,荧光共定位、western blot、油红染色以及电镜观察Parkin蛋白表达量的变化对线粒体自噬、泡沫细胞形成的影响。 -
经皮肺穿刺伞状电极射频治疗周围型肺癌36例
我院自1999年12月以来,用伞状射频针在高频交流电场作用下,应用癌细胞蛋白固化坏死,周围微血管凝固,停止供血法,治疗原发性周围型肺癌36例,并随访、观察疗效.
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慢性阻塞性肺疾病患者第一秒用力呼气容积随时间的变化
背景和目的:COPD的一个重要特征是FEV1下降速度增快,但在确诊的COPD患者中,有关FEV1下降速度变异性和决定因素的数据却较少.该研究目的旨在评价COPD患者FEV1下降速度的变异性及其在亚组中的差异,并探讨生物标志物(IL-6、IL-8、纤维蛋白原、C反应蛋白、肿瘤坏死因子-α、表面活性蛋白D、Clara细胞蛋白16等)对FEV1变化速度的预测价值.
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系统性红斑狼疮可溶性内皮细胞蛋白C受体的研究
系统性红斑狼疮(SLE)是一种原因未明的自身免疫性疾病.其病理标志是反复发作的广泛的血管损害.SLE的血管损害分为两大类:炎症性和非炎症性(即血栓性),在临床上表现为大小血管血栓形成,局部缺血坏死及血管炎,许多患者同时具有这两种血管损害,其形成的确切机制尚不明确.新近发现的血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)在体内抗凝和炎症反应方面起着重要作用.国外文献初步报道可溶性EPCR(sEPCR)在SLE患者血浆中呈高水平表达[1],但其在SLE中的作用及意义尚未明确,为此我们检测了55例SLE患者血浆sEPCR水平,并进一步分析其临床意义.
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无细胞蛋白合成系统在病毒蛋白表达及应用中的研究进展
基因工程诞生于20世纪70年代,利用基因工程手段表达各种具有重要研究及应用价值的功能蛋白是基因工程的重要内容,其为疾病的诊断、治疗以及基因功能与作用机制的研究均提供了有效方法。目前基因工程表达系统可分为细胞内表达系统和无细胞合成系统两大类。本文就无细胞蛋白合成系统在表达病毒蛋白以及在病毒学领域中应用的研究进展作一简要综述。
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低剂量辐射诱导蛋白对紫外线、电离辐射细胞损伤的保护作用
本研究通过直接提取低剂量辐射(LDR)诱导蛋白并观察其对紫外线、电离辐射所造成细胞损伤的保护作用。 一、实验方法 昆明小鼠随机分成非照射组和照射组,分别在20℃~24℃条件下接受0 cGy及10 cGy的γ射线照射,照射后2 h颈椎脱臼致死,无菌条件下取出脾脏,制成单细胞悬液,加蒸馏水以溶解红细胞,离心后按每6×107脾细胞2 ml比例加入含PMSF 4℃0.01 mol/L PBS,在冰浴下超声破碎脾脏细胞,破碎液在高速冷冻离心机上离心,上清液即为小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液,4℃冷藏待用。 取小鼠新鲜脾脏,制成RPMI 1640单细胞悬液,培养瓶培养细胞,各培养瓶装含10%小牛血清之RPMI 1640培养基2 ml,脾细胞悬液0.2 ml(脾细胞2×106个),接受UV(照射2 min,实测紫外线辐照强度为460 μW/cm2)或电离辐射损害(4 Gy)后分3组培养,分别加0.01 mol/L PBS、小鼠脾脏细胞蛋白提取液及含有LDR诱导蛋白的提取液0.1 ml,加3H-TdR20 μl,培养6 h、细胞收获、制膜后测放射线强度。
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环己酰亚胺及其衍生物的抗病毒活性研究
环己酰亚胺能抑制大多真核细胞的蛋白合成,常作为生化研究试剂被广泛使用.本文对其抗病毒活性进行了较系统研究,结果显示,环己酰亚胺体外对人类免疫缺陷病毒、流感病毒、柯萨奇病毒、肠道病毒、单纯疱疹病毒及人巨细胞病毒等多种RNA病毒和DNA病毒显示出很强的抑制作用.尤其是对目前临床上尚缺乏有效治疗药物的柯萨奇病毒B及肠道病毒EV71的强抑制作用令人关注.本文对环己酰亚胺的结构修饰及其构效关系进行了初步探讨,环己酰亚胺分子结构中的C-2'羟基和C-2"羰基为抗病毒活性必需基团,对C-2'羟基和C-2"羰基的修饰均导致其抗病毒活性的降低或消失.
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以iTRAQ技术分析金雀异黄酮作用大鼠肝星状细胞差异表达的蛋白
目的:分析金雀异黄酮作用大鼠肝星状细胞(HSC-T6)后差异表达的蛋白质,以探讨金雀异黄酮抗肝纤维化的作用机制.方法:以金雀异黄酮作用HSC-T6细胞后,提取细胞总蛋白,采用同位素标记的iTRAQ技术结合高效液相色谱-电喷雾串联质谱(LC-ESI-MS/MS)的定量蛋白质组学方法,分析和鉴定差异表达的蛋白质,运用生物信息学分析差异表达的蛋白质功能.结果:质谱共分析鉴定到685种蛋白质.3次实验鉴定到的差异蛋白质数量分别为79,88,75个,在3次重复实验均鉴定到的差异蛋白为44个,其中上调蛋白19个,下调蛋白25个.对这些差异蛋白进行功能分析,发现参与翻译后修饰、转录、重组和信号传导等过程.结论:iTRAQ联合LC-ESI-MS/MS技术能高通量筛选金雀异黄酮抗纤维化作用的蛋白质.金雀异黄酮的抗纤维化作用,可能是通过对蛋白质调控表达来实现.
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核因子-κB与创伤性脑水肿治疗策略
近年研究证明,脑外伤是在原发伤基础上继发性生化级联反应带来的严重后果.主要有以下几个理论:(1)兴奋毒性理论,即创伤后兴奋性氨基酸(EAAs)增多,EAAs神经毒性被认为是许多神经疾病的终共同通路.(2)信号传导理论,①细胞内信号传导,如Ca2+超载、cAMP/cGMP降低、激酶类活性增高、细胞蛋白酶类下降、应激基因与早期反应基因增加;②细胞外信号传导,如细胞因子、黏附分子、一氧化氮、自由基、生长因子等的变化.