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浅析免疫检测技术在食品检验中的应用
免疫检测技术的应用原理
免疫学是一门以抗原抗体的特异性识别与结合反应为基础的学科,其中,把能够对动物机体中的免疫系统产生刺激作用并使其产生免疫效应的物质叫做抗原,免疫效应的结果就是促进淋巴细胞和抗体地生成。对于抗原物质来说,应该具备的特性就是高分子量,异物性以及复杂的分子结构。食品或者食物中的酶,核酸,蛋白质,多糖等均属于优质的抗原,将像药物残留,真菌毒素,激素等小分子物质与蛋白质等大分子载体进行相互结合,就能够成功制成人工性质的抗原。由此看来,食品中近似所有的物质能够作为抗原来使用,当食品中的抗体与抗原产生特异性结合时,就能精确地对所需检测物进行定量定性的分析与测定。 -
尿CYFRA21-1的测定及其与膀胱癌相互关系的探讨
CYFRA21-1是从癌症患者血清中发现的细胞角蛋白19片段,是一种酸性细胞蛋白,相对分子量为4000道尔顿,单抗BM19-21和KS19-1能特异性识别该片段;它由MCF-7免疫小白鼠而获得,反应于简单的上皮细胞,免疫组化证明CK19位于单层和复层上皮肿瘤细胞的细胞浆内[1];细胞死亡时它以溶解片段的形式释放于血清内.CYFRA21-1主要用于非小细胞肺癌的诊断,这已成共识.既然CK19源于上皮肿瘤细胞,那么95%以上是上皮性肿瘤的膀胱癌会不会有所表现呢?据国外报道,血清CYFRA21-1的测定由于灵敏度低,特异性差而未被用于膀胱癌的诊断.鉴于此,本文对正常人、膀胱癌患者及其它泌尿系疾病患者三组尿CYFRA21-1的样本进行了测定,并对其相互关系作了探讨,现报道如下.
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重组腺病毒载体靶向性策略的研究进展
近年来,研究者致力于突破基因治疗的瓶颈,极大推动了基因治疗的发展。载体系统是基因治疗的基础,截止2013年7月,在“Gene Therapy Clinical Trial Worldwide”网站登记注册的基因治疗方案中,重组腺病毒载体占476项(23.5%)。在6个亚群(A-F)、50多种血清型的腺病毒载体中,5型腺病毒(adenovirus type 5,Ad5)可特异性识别并结合多种正常组织高表达的柯萨奇病毒-腺病毒受体(coxsackie-adenovirus receptor,CAR)从而进入细胞发挥作用,基因转导效率高,因此,Ad5是目前应用广泛的腺病毒载体。
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T细胞抗原受体复合体信号转导及其与疾病关系的研究进展
T细胞抗原受体(TCR)是由TCRαβ或TCRγδ组成的异源二聚体,它与CD3分子组成跨膜蛋白复合体结构.抗原在诱导幼稚T细胞或记忆性T细胞进行增殖进而分化成效应细胞时,需要有两个信号刺激,第一信号来自TCR与抗原的特异性结合,第二信号来自抗原提呈细胞(antigen presenting cell,APC)表面的协同刺激因子与T细胞表面相应受体的相互作用.TCR通过胞外部分可变区(V区)的互补决定区(CDR)特异性识别结合抗原;胞内部分在CD3、CD4/CD8和CD28等分子的辅助下,将胞外刺激信号经磷脂酶C(PLC)-γ活化途径和促分裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinaes,MAPK)活化途径传递至胞内,使转录因子活化,这一过程称为T细胞活化的信号转导.而这一过程可使T细胞活化而发挥其生物学作用.TCR/CD3复合体介导的信号转导是T细胞活化并发生抗原特异性免疫反应的重要途径,很多疾病的发生都与其信号转导异常有关,因此更深入地了解T细胞信号转导的分子机制显得尤为重要.本文对TCR介导的信号转导途径作了较为系统地阐述,并简要介绍了其异常与几种重要疾病的关系.
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协同刺激分子B7-H3在消化系统疾病中的研究进展
T细胞介导的免疫应答在机体特异性识别和清除内、外源性抗原过程中起重要作用,T 细胞的活化增殖分化有赖于双重信号,其中抗原递呈细胞上的 MHC-抗原肽复合体与 TCR特异性结合传递第一信号,而 B7-CD28等共刺激家族传递第二信号,由此决定了 T细胞的状态是增强、抑制、弱化或者演变为无反应状态。共刺激分子如 B7-CD28家族对 T细胞的正负调节作用已成为研究的热点领域。B7家族成员包括:B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、B7h(CD75)、PD-L1(CD274)、PD-L2(CD273)、B7-H3(CD276)、B7x (B7-H4)等[1]。B7-H3是 B7家族的新成员,然而其受体及生物学作用尚未明确。B7-H3在多种消化系统组织细胞中均有表达,且与疾病的临床病理预后呈正或负相关。研究 B7-H3的结构、免疫学功能及其在消化系统疾病中的作用,为消化系统疾病的诊断与治疗提供新的标志物和潜在的治疗靶点。
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TCR基因修饰T细胞研究进展
过继细胞免疫治疗(adoptive cellular immunotherapy,ACT)是将对抗原特异识别的细胞经体外扩增后输注入患者体内,使其被动获得特异性识别抗原能力的一种免疫疗法.该疗法在白血病、转移性黑色素瘤[1-2]、移植相关的恶性肿瘤、巨细胞病毒感染、EB病毒感染[3]等疾病中已取得了鼓舞人心的治疗效果.
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Toll样受体2/4在心脏疾病中的作用研究进展
Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)是固有免疫系统中特异的Ⅰ型跨膜受体及病原模式识别受体[1].TLR能特异性识别病原体相关分子模式(pathogen associated molecular pattern,PAMP),通过激活细胞信号转导途径,激活机体固有的免疫反应,构成机体抵御病原微生物的第一道防线,而且TLR还能调节适应性免疫,是连接固有免疫和适应性免疫的桥梁.TLRs不仅表达于免疫细胞,而且也表达于心肌细胞,与心脏疾病的发生发展密切相关.其中研究得较为成熟的是TLR2和TLR4,大量研究显示TLR2/4介导了各种急性心肌损伤和慢性心脏病的发生发展,本文就TLR2/4在脓毒性心肌病、心肌缺血再灌注损伤、心肌缺血预处理、慢性心力衰竭和心肌重塑中的研究进展进行综述.
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O139群霍乱弧菌Ⅰ类整合子结构分析
O139群霍乱弧菌是一种引起严重腹泻的肠道病原菌.随着对常用抗菌药物耐药的霍乱弧菌出现,研究其耐药机制和传播也变得重要.Ⅰ类整合子是细菌获得和传播耐药基因的重要机制,携带位点特异性的重组酶系统,可特异性识别耐药基因盒结构,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子,转移到细菌基因组其他位点上或通过质粒等在细菌之间扩散.本科在2005年分离的1株O139群霍乱弧菌NB05030中检出发现携带aadA2耐药基因盒的Ⅰ类整合子结构.
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双抗体夹心酶联免疫吸附法检测IgG0的研究及应用
类风湿关节炎(RA)患者IgG分子糖链末端2个半乳糖缺失(称为IgG0)[1],缺失后,N-乙酰葡萄糖(GlcNAc)暴露.本研究用特异性识别GlcNAc的蘑菇凝集素(PVL),建立一种检测IgG0的双抗体夹心酶联免疫吸附试剂(ELISA)检测法,并对正常人和RA患者进行检测.
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乳杆菌细胞壁表面黏附相关蛋白的提取和鉴定
目的:提取和鉴定参与乳杆菌黏附肠上皮样细胞以及粘蛋白受体的细胞壁表面蛋白.方法:采用HRP标记的粘蛋白受体以及NHS-Biotin标记的HT-29细胞与提取的乳杆菌JCM1081的细胞壁表面蛋白进行蛋白印迹,对参与黏附的细胞壁表面蛋白进行初步鉴定.结果:Western blot结果显示Mr29000和Mr14000的两种细胞壁表面蛋白在与粘蛋白受体和HT-29细胞的杂交中都出现了强阳性.结论:存在于乳杆菌JCM1081细胞壁表面的Mr29 000和Mr14 000的两种蛋白能够特异性识别粘蛋白受体和细胞膜受体,并与之结合,为乳杆菌JCM1081的黏附相关蛋白.
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微小RNA心肌缺血后心脏保护机制的研究进展
微小RNA(microRNA,miRNA)是一类含约22个核苷酸的非编码小分子单链RNA,其序列高度保守,可以在转录后水平特异性识别靶基因的3′非翻译区(3′UTR)上的相应靶位点,通过抑制或降解特定的靶基因而发挥调节蛋白质合成的作用[1].自从1993年第一个miRNA lin-4被发现以来,短短十几年间已经有近千种miRNA陆续被发现.大量研究表明,其几乎参与人类生命活动及疾病进程各个方面的调控[2].特别是近些年来,随着冠心病的发病率及死亡率日趋升高,miRNA在心血管疾病的病理生理过程中的调控机制已成为当前研究的热点,尤其在心肌缺血再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury)的心肌保护机制方面,其可能发挥非常关键的作用,正成为各国学者研究的主要方向.
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核转录因子-圈套抑制血管内皮细胞炎性反应的实验研究
炎症介质过度释放贯穿全身炎症反应综合征(SIRS)、多脏器功能障碍综合征(MODS)始终,是病情恶化的首要原因.核转录因子κB(NF-κB)在炎症介质的调节中起主要作用[1].临床上多种手段可以抑制NF-κB的活性[2].但特异性差,副作用多.NF-κB能特异性识别并结合目的基因上的κB序列 [1,2],利用这个特性,合成一包含κB序列的双链寡聚脱氧核苷酸(dsODNs)并转入靶细胞核,竞争性结合核内激活的NF-κB,可以阻断其促炎症反应活性[3,4].这一策略也被称为decoy.在此我们以脂多糖(LPS)激活人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)NF-κB活性,观察NF-κB-decoy对NF-κB活性的影响,探索一种抑制SIRS、MODS发病过程中炎症过度激活的分子策略.
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多发性硬化中的表位扩展现象初步研究
多发性硬化(MS)是针对中枢神经系统白质的自身免疫性脱髓鞘性疾病.至今对其反复复发缓解的机制所知甚少.我们通过检测MS患者不同时期的系列血清标本对神经髓鞘类抗原的特异性识别反应谱,以探索MS患者的抗原表位扩展(epitope spreading)及与病情的关系.
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分泌性靶向促凋亡分子基因构建、表达及其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤作用
为建立更敏感而特异的用于肿瘤基因治疗新策略,本研究将一段信号肽、抗肿瘤表面抗原HER2的抗体、具有膜转位作用的肽段和几种促凋亡分子融合,构建了几种靶向促凋亡蛋白.体内外实验研究证实,这种重组分子表达分泌后,能够特异性识别和内化进入HER2阳性肿瘤细胞,继而带有部分PEA Ⅱ转膜结构域的促凋亡蛋白转位进入胞质,诱导细胞凋亡,实现特异性杀伤HER2阳性肿瘤细胞和抑制HER2阳性肿瘤生长的作用.
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Toll样受体与动脉粥样硬化
研究表明,伴有免疫反应的炎症过程贯穿于动脉粥样硬化的始终[1].炎性细胞如T淋巴细胞和巨噬细胞在动脉粥样硬化病变的进程中扮演了重要角色.血管内皮细胞、平滑肌细胞及外膜的成纤维细胞和肥大细胞均可作为免疫细胞产生促炎细胞因子.在动脉粥样硬化疾病的发生和发展中,修饰的低密度脂蛋白(LDL)和感染源的作用比较明确,但免疫反应在其中的作用及其机制尚不完全清楚.已知人类具有天然和获得性两个免疫识别系统来抵御潜在的有害物质.获得性免疫系统特异性识别环境中存在的独特抗原决定簇.天然免疫是机体抵御微生物的第一道屏障,识别被称为病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns, PAMP)的高度保守抗原域[2].Toll样受体(Toll-like receptor, TLR)识别种类繁多的PAMP,属于模式识别受体.大量证据表明TLR在动脉粥样硬化中起着重要作用.本文就近年来TLR与动脉粥样硬化的相关研究作一综述.
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槲皮素分子印迹聚合物的合成及表征
目的 利用分子印迹技术制备槲皮素分子印迹聚合物(MIPs).方法 以槲皮素为模板分子,丙烯酰胺为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂,偶氮二异丁腈为引发剂,分别在无水乙醇和四氢呋喃为致孔剂的作用下,采用沉淀聚合法、本体聚合法制备槲皮素MIPs;利用紫外光谱、红外光谱选择模板分子与功能单体间的佳配比;通过扫描电镜(SEM)考察了MIPs的微观结构.采用平衡和等温吸附实验对2种方法制备的MIPs的吸附平衡时间和大吸附量进行考察,并对特异性吸附能力进行研究.结果 沉淀聚合法制备的槲皮素MIPs具有均匀规则的球状结构,在吸附动力学和等温吸附实验中发现有较快的吸附速度和较大的吸附量,在芦丁和槲皮素的选择性吸附过程中聚合物对槲皮素具有较高的特异性识别能力.结论 沉淀聚合法制备的MIPs以吸附量大、选择性强,为中药黄酮类复杂化学成分的分离、富集提供一种新的研究方法,同时也为其他中药化学成分的研究提供借鉴.
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造血干细胞移植后移植物抗宿主病患者CD158的表达
杀伤细胞抑制物受体(Killer cell inhibitor receptors,KIR)主要表达于NK和T细胞表面,可与靶细胞MHCⅠ类分子特异性识别并产生负性信号,抑制对靶细胞的细胞毒活性[1,2].已在小鼠和人同种造血干细胞移植(HSCT)中观察到NK细胞、T细胞表达KIR与移植物抗宿主病(GVHD)有关[3,4].外周血造血干细胞移植(PBSCT)和脐血移植(UBCT)中,尽管是供受者间HLA全相合(-A、-B、-DR、-DQ),GVHD仍是同种HSCT的主要障碍.
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T细胞分化过程中的基因调控与自身免疫病
组成免疫系统的细胞来自骨髓中具有自我更新能力的造血干细胞(HSC).虽然成熟T细胞在胸腺产生,但从根本上说它们来源于造血干细胞.通过接受分化信号,HSC定向分化为淋巴和髓系细胞.T细胞是适应性免疫的重要组成部分,每个T细胞能表达特异性识别非自身抗原决定簇的抗原受体,不同T细胞克隆数量足以识别任何分子.这一识别系统所需的多样性来自抗原受体位点的T细胞受体(TCR)基因重排.
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CD146在肾脏疾病中的研究进展
CD146是近年来发现的一种具有跨膜结构的细胞黏附分子,属于免疫球蛋白超家族成员[1].CD146初是用一株特异性识别人黑色素瘤细胞的单克隆抗体从人黑色素瘤cDNA文库筛选克隆到的[2],后又通过对纯化的黑素瘤相关抗原A32和内皮相关抗原S-Endo-1进行氨基酸序列分析亦确定为同一分子.CD146作为钙离子非依赖性细胞黏附分子,它能促进肿瘤生长、血行转移,是肿瘤进展和转移的标志物[3~5].
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分子印迹技术在医药学中的应用进展
分子印迹技术(molecular imprinting technique,MIT)的思想早起源于20 世纪40 年代的免疫学,是模仿"抗原-抗体"识别原理制造一种针对目标分子的"印迹材料",用于特异性识别目标分子.即以待测目标分子为模板,通过交联剂与功能单体进行聚合制备,得到单体-模板分子复合物,然后通过物理或化学手段除去目标分子, 便得到分子印迹聚合物(molecular imprinted polymers,MIP),在这种聚合物中形成了与模板分子在空间和结合位点上相匹配的具有多重作用位点的空间立体构型.利用这种空间构型能够选择/识别模板分子.