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鲍曼不动杆菌Ⅰ类整合子和ISCR1的检测及其结构分析
目的 了解鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子与ISCR1分布情况及其所携带耐药基因的种类,从而分析其结构及其与耐药性的关系. 方法 采用煮沸法提取鲍曼不动杆菌基因组DNA,设计引物进行PCR反应,扩增产物用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测并记录结果,根据Ⅰ类整合子可变区扩增产物图谱进行RFLP分型,后进行产物的序列分析. 结果 PCR扩增51株鲍曼不动杆菌,Ⅰ类整合酶基因intⅠ扩增阳性45株,其中包括可变区阳性32株.并且Ⅰ类整合子的可变区扩增出的目的片段大小各不相同,有28株扩增片段约为2.3 kb,2株扩增片段约为2.4 kb,2株扩增片段为3kb; ISCR1扩增阳性22株,其下游扩增阳性5株,扩增片段大小约为3 kb.同时携带Ⅰ类整合子和ISCR1扩增阳性菌目的片段大小约为2 kb.酶切图谱显示,大小为2.3 kb的Ⅰ类整合子可变区产物为同一带型;序列分析显示,大小不同的Ⅰ类整合子的可变区各片段所含的基因盒各不相同;耐药基因序列分析显示,5株ISCR1的下游扩增片段为qnrA1-am-pR.同时显示Ⅰ类整合子和ISCR1两种元件以串联的形式存在于鲍曼不动杆菌中. 结论 Ⅰ类整合子与ISCR1大多以串联形式同时存在于骨髓炎患者感染的鲍曼不动杆菌中,该结构对耐药基因在不同鲍曼不动杆菌菌株间的水平传播可能起介导作用.
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分析9年不动杆菌院内感染的耐药性变化及其与Ⅰ类整合子的相关性
目的 了解我院9年间鲍曼不动杆菌和洛菲不动杆菌的耐药性变化,并探讨其耐药性与Ⅰ类整合子的相关性.方法 收集2001年1月至2009年12月我院分离培养的不动杆菌共1552株,采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行检验及耐药分析.采用PCR检测60株鲍曼不动杆菌和30株洛菲不动杆菌的Ⅰ类整合子,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药性的相关性.结果 1552株不动杆菌中以鲍曼不动杆菌1360株(87.6%),洛菲不动杆菌 154株(9.9%)为主.药敏结果显示不动杆菌的耐药率总体呈逐年上升的趋势.PCR检测结果显示38株(63.3%)鲍曼不动杆菌和17株(56.7%)洛菲不动杆菌为Ⅰ类整合子阳性,Ⅰ类整合子阳性菌株的耐药率及多重耐药(multidrug resistance,MDR)率显著高于Ⅰ类整合子阴性菌株,且差异均有统计学意义(P均<0.05).结论 经验性用药或抗生素滥用导致了9年间不动杆菌的耐药率呈逐年上升的趋势.Ⅰ类整合子在不动杆菌的耐药率及MDR率升高中起重要作用.
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一株携带突变cmlA1基因绿脓假单胞菌流行株的检测
本研究对5株临床分离的Ⅰ类整合子阳性绿脓假单胞菌的耐药基因盒进行检测,分析其耐药基因及同源性.分析绿脓假单胞菌在医院的传播及整合子在细菌耐药中的作用.收搞日期:2006-01-28)
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绿脓假单胞菌抗氯己定-磺胺耐药基因的初步研究
近年来绿脓假单胞菌(Pa)已成为医院感染的重要病原菌,对常用抗菌药物的耐药性在逐年上升,且多重耐药严重.据文献报道在肠杆菌科细菌的耐药机制中,Ⅰ类整合子起着非常重要的作用,它的3'保守端有消毒剂氯己定(chlorhexidine)的耐药基因(qacE△1)和磺胺耐药基因(sulⅠ) .为防细菌定植和细菌生物膜形成,目前临床所使用的Ⅱ代导管均覆有氯己定-磺胺.为了解医院感染Pa中是否存在氯己定和-磺胺类耐药基因,我们对临床分离的39株Pa进行了qacE△1与 sulⅠ基因检测.
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O139群霍乱弧菌Ⅰ类整合子结构分析
O139群霍乱弧菌是一种引起严重腹泻的肠道病原菌.随着对常用抗菌药物耐药的霍乱弧菌出现,研究其耐药机制和传播也变得重要.Ⅰ类整合子是细菌获得和传播耐药基因的重要机制,携带位点特异性的重组酶系统,可特异性识别耐药基因盒结构,并将其整合在其中,形成各种组合的多重耐药整合子,转移到细菌基因组其他位点上或通过质粒等在细菌之间扩散.本科在2005年分离的1株O139群霍乱弧菌NB05030中检出发现携带aadA2耐药基因盒的Ⅰ类整合子结构.
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临床分离铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌中Ⅰ类整合子流行性调查与分析
南京医科大学第一附属医院检验科的顾兵硕士、童明庆教授和潘世扬教授等调查了中国南京地区临床分离的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)和鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii,AB)中整合子的流行情况,并发现了5种新型的整合子(integron)可变区耐药基因组合形式.
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鲍曼不动杆菌流行株Ⅰ类整合子RFLP分析及耐药基因盒研究
鲍曼不动杆菌是引起医院感染的一种重要致病菌,随着抗菌药物以及免疫抑制剂的广泛使用,其引起的感染在临床上越来越常见,鲍曼不动杆菌的耐药机制复杂,包括基因突变、外膜孔蛋白改变、灭活酶以及药物外排系统等.近年来国内外大量的文献都表明细菌的多药耐药与整合子有关[1].为了解中山大学附属第一医院鲍曼不动杆菌整合子阳性菌株的耐药基因盒的结构及其与抗菌药物之间的关系,笔者用限制片段长度多态性PCR(RFLP-PCR)扩增法对26株Ⅰ类整合子保守区扩增阳性的鲍曼不动杆菌扩增其高变区,分析了鲍曼不动杆菌整合子中所携带的耐药基因的种类,报道如下.
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铜绿假单胞菌群体感应QS系统对Ⅰ类整合子intI1基因调控作用的初步研究
目的 研究铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子阳性株群体感应系统基因lasR与Ⅰ类整合子整合酶基因intI1表达水平的相关性,初步探讨群体感应系统对Ⅰ类整合子的调控机制.方法 通过荧光定量RT-PCR方法检测铜绿假单胞菌群体QS信号分子受体基因lasR和Ⅰ类整合子整合酶基因intI1在生物被膜中与阿奇霉素菌液中mRNA的表达水平,分析两基因表达的相关性.结果 铜绿假单胞菌群体感应系统lasR基因及Ⅰ类整合子intI1基因表达水平在生物被膜中均较在阿奇霉素菌液中升高(P＜0.05),且两者表达水平呈正相关性(r=0.565,P＜0.05).结论 铜绿假单胞菌群lasR和intI1基因表达呈正相关,且阿奇霉素对Ⅰ类整合子intI1基因表达抑制作用明显,提示intI1基因表达可能与群体感应系统的调控作用有关.
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肺炎克雷伯菌中Ⅰ类整合子与qacE△1-sul1基因的研究
目的 了解医院产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1耐消毒剂基因的携带情况.方法 收集临床住院患者分离出的产ESBLs肺炎克雷伯菌108株；采用K-B法测定抗菌药物的敏感性；聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因.结果 Ⅰ类整合子基因总检出率为53.70％,qacE△1 -sul1基因总检出率为63.89％;产ESBLs肺炎克雷伯株Ⅰ类整合子阳性株除对氨苄西林和哌拉西林的耐药率与Ⅰ类整合子阴性株差异无统计学意义以外,对其他抗菌药物的耐药率均明显高于整合子阴性株,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 医院产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子和qacE△ 1-sulⅠ耐消毒剂基因携带率均较高,应进一步加强Ⅰ类整合子和耐消毒剂基因菌株的流行病学监测,并根据耐消毒剂状况,在消毒剂的使用上作出相应的调整.
关键词： 肺炎克雷伯菌 Ⅰ类整合子 qacE△1-sul1基因 -
大肠埃希菌Ⅰ类整合子与多药耐药的相关性探讨
目的 探讨临床分离多药耐药大肠埃希菌(ECO)的Ⅰ类整合子流行分布及与多药耐药之间可能存在的关系.方法 采用纸片扩散法(K-B法)检测71株大肠埃希菌对3类4种常用抗菌药物的药敏率;PCR方法检测Ⅰ类整合子3个不同部位的基因.结果 71株大肠埃希菌耐庆大霉素47株为66.20%、耐左氧氟沙星45株为63.38%、耐头孢噻肟42株为59.15%、耐头孢他啶13株为18.31%,多药耐药率为32.39%;Ⅰ类整合子的总检出率为88.73%,整合子阳性与阴性株对庆大霉素、左氧氟沙星、头孢噻肟的药敏分布差异有统计学意义(P＜0.05),多药耐药菌株中Ⅰ类整合子基因的阳性率为100.0%,耐多药菌株与全敏感菌株差异有统计学意义(P＜0.05).结论大肠埃希菌的Ⅰ类整合子的检出率高,且与其多药耐药性密切相关.
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鲍氏不动杆菌新型整合子、Ⅰ类整合子遗传标记研究
目的 了解医院ICU临床分离鲍氏不动杆菌(ABA)的新型整合子、Ⅰ类整合子遗传标记存在状况,探讨ABA多药耐药机制.方法 收集20株分离自2007年10月-2008年7月ICU患者临床标本的ABA,采用纸片扩散法测定32种抗菌药物的敏感性;采用PCR法检测新型整合子遗传标记(tnpU基因),Ⅰ类整合子遗传标记(qacE△1-sull基因),PCR阳性产物为PCR直接全自动荧光法测序.结果 tnpU基因检测到11株,阳性率55.0%;qacE△1-sull基因检测到15株,阳性率75.0%.结论 ABA存在严重的对β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等抗菌药物多药耐药状况,与细菌转座子和整合子携带率高有关;氯己定预防术后医院感染需要重新评估.
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多药耐药鲍氏不动杆菌Ⅰ类整合子遗传标记研究
目的 了解多药耐药鲍氏不动杆菌(MDR-ABA)Ⅰ类整合子遗传标记(qacE△1-sull基因)存在状况.方法 采用PCR检测62株MDR-ABA Ⅰ类整合子遗传标记(qacE△1-sull基因).结果 62株MDR-ABAqacE△1-sull基因阳性36株,阳性率58.1%;任取1个qacE△1-sull基因PCR阳性产物进行DNA测序,经BLASTn比对,与美国GenBank已登录的136条相同.结论 MDR-ABA存在严重的β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素和复方新诺明等多药耐药状况与Ⅰ类整合子遗传标记携带率高有关;氯己定等消毒剂预防术后医院感染需要重新评估.
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390株肠球菌耐药性及Ⅰ类整合子的检测
目的调查390株肠球菌耐药性及Ⅰ类整合子的携带率,以利于临床治疗用药. 方法根据 NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,应用WHONET5软件进行统计分析;采用PCR方法进行Ⅰ类整合子的检测以及滤膜接合法进行质粒接合转移试验;联合药敏试验采用棋盘法. 结果粪肠球菌对氨苄西林、青霉素、氯霉素、左氧氟沙星MIC50和MIC90分别为4、16μg/ml;8、16μg/ml;16、64μg/ml;4、16μg/ml;屎肠球菌对上述4种抗菌药物的MIC50和MIC90分别为64、128μg/ml;64、128μg/ml;32、128μg/ml;32、128μg/ml;粪肠球菌和屎肠球菌对万古霉素MIC50和MIC90均分别为2μg/ml和4μg/ml;324株粪肠球菌和66株屎肠球菌Ⅰ类整合子的携带率分别为53.1%和51.5%;Ⅰ类整合子携带aadA2基因;40株粪肠球菌和20株屎肠球菌中的Ⅰ类整合子全部转移到受体菌中;对链霉素MIC≤2 000μg/ml的菌株,链霉素与氨苄西林的FIC指数≤0.5. 结论屎肠球菌对青霉素、氨苄西林、氯霉素、左氧氟沙星等抗菌药物的MIC50和MIC90显著高于粪肠球菌;万古霉素对粪肠球菌及屎肠球菌具有很好的抗菌作用;由质粒携带的整合子可通过质粒播散耐药性;携带Ⅰ类整合子及aadA2基因且非高耐链霉素的肠球菌,链霉素与氨苄西林具有协同抗菌作用.
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鲍氏不动杆菌多药耐药与Ⅰ类整合子相关性的研究
目的 探讨鲍氏不动杆菌的多药耐药与I类整合子的相关性.方法 收集39株医院感染多药耐药鲍氏不动杆菌株及41株非多药耐药鲍氏不动杆菌株,以纸片扩散法敏感试验(K-B法)检测其耐药表型,以聚合酶链反应(PCR)方法检测Ⅰ类整合子的分布情况,分析Ⅰ类整合子与细菌耐药表型的相关性.结果 鲍氏不动杆菌对多种抗菌药物的耐药率均较高,除对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、阿米卡星、哌拉西林/他唑巴坦敏感率较高外,对其他抗菌药物的耐药率均>40.0%;多药耐药鲍氏不动杆菌中Ⅰ类整合子阳性率为82.1%,非多药耐药菌株阳性率为26.8%,多药耐药菌与非多药耐药菌株Ⅰ类整合子阳性率差异有统计学意义(X~2=24.6,P<0.01);比较研究Ⅰ类整合子阳性菌株耐药表型与Ⅰ类整合子阴性菌株耐药表型发现,除了对亚胺培南敏感率均较高,对氨曲南均耐药,两者耐药率之间差异无统计学意义外,对其他抗菌药物耐药率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Ⅰ类整合子的表达与鲍氏不动杆菌多药耐药密切相关.
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尿液分离大肠埃希菌Ⅰ类整合子分子特征与耐药性的关系研究
目的 了解社区感染尿液分离大肠埃希菌中Ⅰ类整合子的分布,并分析其与细菌耐药性的关系.方法 选取114株临床非重复分离自医院门诊患者尿液标本中的大肠埃希菌,经全自动细菌分析系统鉴定并检测其对临床常用抗菌药物的耐药性,聚合酶链反应(PCR)检测Ⅰ类整合酶基因,对Ⅰ类整合酶阳性菌株用PCR扩增并测序分析可变区基因盒种类.结果 114株临床非重复分离自尿液大肠埃希菌中有50株检测到Ⅰ类整合酶基因;共检测出两种不同长度的可变区片段:1 700 bp片段(30株)为dfrA17-aadA 5,2 100 bp片段(5株)为dfrA12-or-fF-aadA2,有两株大肠埃希菌同时扩增出1 700 bp和2 100 bp的可变区片段,有17株Ⅰ类整合酶基因阳性大肠埃希菌未扩增出可变区;114株大肠埃希菌对氨苄西林、磺胺甲(嗯)唑/甲氧苄啶和左氧氟沙星的耐药率较高,＞50.0％,对头孢替坦、亚胺培南、厄他培南、哌拉西林/他唑巴坦、呋喃妥因、阿米卡星耐药率较低,＜5.0％;Ⅰ类整合子阳性菌株对氨苄西林、庆大霉素、妥布霉素和磺胺甲(嗯)唑/甲氧苄啶的耐药率高于Ⅰ类整合子阴性菌株.结论 与医院感染相比,社区感染尿液中分离的大肠埃希菌受抗菌药物的选择压力相对较小,其对常用抗菌药物的耐药率、Ⅰ类整合子携带率均较低,同时Ⅰ类整合子中携带的基因盒种类也较单一.
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多重耐药革兰阴性杆菌Ⅰ类整合子结构与功能分析
目的 探索Ⅰ类整合子在多重耐药的革兰阴性杆菌中的功能作用,并对其基因结构进行研究,为阐明革兰阴性杆菌的耐药机制和抑制耐药性的产生提供理论依据.方法 选择温岭市妇幼保健院2009年7月～2011年10月的多重耐药革兰阴性杆菌80株,其中铜绿假单胞菌40株,鲍曼不动杆菌40株,使用K-B纸片法和双纸片协同实验对细菌的耐药性和超广谱β-内酰胺酶(ELSBs)的产生情况进行考察.对耐药且产ELSBs的细菌进行筛选,使用聚合酶链式反应(PCR)扩增实验、电泳法、整合酶Sourthen杂交实验对耐药细菌体内的Ⅰ类整合子存在情况、整合子基因结构、基因位置进行考察.结果 药敏结果显示,40株铜绿假单胞菌中多重耐药且产ELSBs的菌株为27株,40株鲍曼不动杆菌中多重耐药且产ELSBs的菌株为28株.对多耐药且产ELSBs的菌株通过PCR扩增实验进行的Ⅰ类整合子存在情况的考察结果显示,40株鲍曼不动杆菌和40株铜绿假单胞菌中Ⅰ类整合子的阳性率分别为57.5％和55.0％.Ⅰ类整合子的保守区和可变区PCR扩增与测序分析结果显示,保守区内含有qaeE△1-F和sul 1-B这两种特征性基因片段,可变区内以长度为0.15、1.00、2.00、2.30 kb的基因片段出现频率高,0.15 kb含有保守区内基因结果,其它基因片段依次为aadA、aaeA4、craB8这3种基因盒.结论 Ⅰ类整合子与革兰氏阴性杆菌耐药性的产生有着密切的关系,qaeE△1-F和sul 1-B为Ⅰ类整合子基因保守区的特征性片段,两者同时出现则可确证该细菌体内含有Ⅰ类整合子.Ⅰ类整合子基因可变区内含有aadA、aaeA4、caaB8三种出现频率高的基因盒且长短为0.15 kb的基因片段含有保守区的基因结构,这3种基因盒和保守区基因片段的存在是导致细菌间耐药性平行转移的重要因素.
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产ESBLs大肠埃希菌Ⅰ类整合子与耐药性关系分析
目的 了解Ⅰ类整合子在产ESBLs和非产ESBLs大肠埃希菌中分布流行状况,分析Ⅰ类整合子在细菌多重耐药中的作用.方法 根据NCCLS推荐的琼脂稀释法进行药敏试验,用双纸片协同试验检测产ESBLs菌,PCR扩增Ⅰ类整合酶基因.结果 大肠埃希菌ESBLs和Ⅰ类整合子的检出率分别为57.4%和45.4%,Ⅰ类整合子在产ESBLs菌的分布明显高于非产ESBLs菌.结论 Ⅰ类整合子的存在与细菌产生ESBLs相关,影响着临床分离株多重耐药率的高低.
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万古霉素耐药肠球菌及Ⅰ类整合子基因的检测与分析
目的:统计中日友好医院肠球菌耐药情况,对万古霉素耐药肠球菌(VRE)进行筛查,检测Ⅰ类整合子基因,为肠球菌感染的药物治疗和控制提供参考.方法:药敏采用微量肉汤稀释法检测低抑菌浓度(MIC),WHONET 5.3统计耐药率;万古霉素确证试验筛查VRE,多重聚合酶链反应(PCR)法检测其van基因,Etest法测定万古霉素、替考拉宁对VRE的MIC;PCR检测Ⅰ类整合子基因.结果:肠球菌对多种抗菌药物耐药程度很高;449株肠球菌中有6株检出van C1基因,表型和基因型一致;未检出Ⅰ类整合子基因.结论:肠球菌耐药严重,需采取有效措施预防和控制VRE感染与传播,VRE筛查未见Ⅰ类整合子基因介导的耐药机制.
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产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ类整合子基因盒的研究
目的 探讨整合子参与产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药的分子机制.方法 整合酶基因扩增法检测I类整合子;整合子可变区扩增并测序.结果 8株产ESBLs肺炎克雷伯菌中有7株Ⅰ类整合子检测阳性,其中4株耐药基因盒为dfrA12-orfF-aadA2,2株为dfrA17-aadA4/aadA5,1株为aadA2,1株未检测到耐药基因盒.结论 整合子介导的耐药基因盒参与了产ESBLs肺炎克雷伯菌多重耐药的形成,应引起高度重视.
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铜绿假单胞菌Ⅰ类整合子及耐药基因分析
铜绿假单胞菌是临床上重要的院内感染菌,对多种抗生素耐药.整合子是能捕获并整合外源耐药基因盒,并使之表达的DNA元件.通过整合子水平转移的方式极大地加速了耐药基因在同种及不同种属之间的传播,造成细菌的耐药以至多重耐药问题日益严重.
