297 小柴胡汤抑制黑素瘤发病

随着地球臭氧层被破坏的程度逐渐加重,人类黑素瘤的发病率也呈逐年上升的趋势.日本名古屋大学的中岛泉应用基因导入法制作自发性黑素瘤动物模型,探讨了黑素瘤的发病机制、宿主免疫机制以及汉方药小柴胡汤的作用机制.

小鼠黑素瘤细胞系分泌的外泌体促进间充质基质细胞增殖和迁移

目的 研究黑素瘤来源的外泌体(exosome)如何与微环境相互作用.方法 分离并鉴定小鼠黑素瘤细胞培养液上清中的外泌体,并与间充质基质细胞(MSC)共培养.利用免疫荧光观察细胞摄入外泌体情况,CCK-8及transwell实验测定MSC增殖与迁移的变化情况,Western blot检测外泌体对MSC的α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.结果 发现MSC在摄取外泌体后,增殖和迁移能力显著上升,α-SMA的表达明显上调.且这些变化都可被TGF-β受体的抑制剂阻断.结论 外泌体可能通过TGF-β诱导MSC构建微环境,促进黑素瘤的生长与转移.

siRNA沉默肾上腺髓质素基因对A375黑素瘤细胞周期的影响

目的 研究小干扰RNA(siRNA)沉默A375黑素瘤细胞肾上腺髓质素(ADM)基因对其细胞周期的影响.方法 利用人工合成的ADM靶向小分子干扰RNA转染A375细胞,采用实时荧光定量-PCR(qRT-PCR)筛选出有效的siRNA,用选出的干扰效果好的siRNA转染的A375细胞为实验组;转染非特异序列的细胞为阴性对照组;未转染的细胞为空白对照组.流式细胞仪(FCM)检测干扰ADM基因48 h后A375细胞周期的情况.结果 FCM结果显示,siRNA干扰组G2/M期细胞比率为(11.360±1.224)%,明显高于未转染组的(1.020±0.990)%和非特异序列转染组的(4.150±1.032)%,差异有统计学意义(P<0.05);未转染组与非特异序列转染组差异无统计学意义(P>0.05).而siRNA干扰组G1/G0、S期细胞比率分别为(69.443±2.023)%、(19.197±0.890)%,与未转染组(68.567±3.653)%、(30.417±4.582)%和非特异序列转染组(70.530±3.008)% 、(23.313±4.645)%比较,差异均无显著性(P>0.05).结论 ADM能够将黑素瘤细胞阻滞在G2/M期,抑制细胞增殖.

二氢卟吩e6光动力学疗法对人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用

目的探讨二氢卟吩e6(Ce6)光动力学疗法(Ce6-PDT)对体外培养人黑素瘤A-375细胞株的杀伤作用.方法将体外培养的人黑素瘤A-375细胞加入Ce6,浓度分别为2、4、7.5、15、30和60 μmol/L,孵育12 h,予波长652 nm半导体激光照射,照射的功率密度为15.6 mW/cm2,能量密度分别为2、5、10和20 J/cm2,继续孵育12 h,用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率.结果(1)Ce6与细胞共同培养而不受光照的条件下对细胞的毒性较小,其浓度小于15 μmol/L时各浓度组间细胞存活率差异无显著意义(P＞0.05);浓度较高(＞15 μmol/L)对细胞的存活率影响较大(P＜0.01).(2)Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞,其杀伤作用与Ce6浓度及光照剂量成正相关(P＜0.01).结论Ce6-PDT能有效地杀伤体外培养的人黑素瘤A-375细胞;Ce6在较大浓度下对细胞有毒性.

在Ⅰ、Ⅱ期黑素瘤施行前哨淋巴结活检时肿瘤厚度是预测隐匿淋巴结的指标

CXCR4基因沉默对小鼠黑素瘤的抑瘤效应及器官转移影响

目的 探讨短发夹RNA(shRNA)沉默CXCR4基因对小鼠黑素瘤的抑瘤效应及器官转移的影响.方法 设计合成CXCR4特异性shRNA插入pSilencer载体,转染人高转移性黑素瘤细胞株MV3,通过小鼠尾静脉瘤细胞注射方法,建立黑素瘤转移模型,观察肿瘤生长情况,分析CXCR4基因沉默对黑素瘤细胞肝、脑、肺等实质性器官转移的影响.实验随机分为3组:A组(CXCR4-shRNA转染组)、B组(无关对照组)和C组(空白对照组).结果 小鼠黑素瘤皮下种植瘤成功率为100％,肿瘤生长曲线表明,A组肿瘤生长明显抑制.A组与C组和B组比较差异具有统计学意义(P＜0.01).肝、脑组织内转移瘤数目A组较B组和C组明显少.黑素瘤定向肺转移能力下降:B、C组和A组肺转移发生率分别为90.0％、87.5％和20.0％；B、C组和A组的肺转移结节数目分别为206、165和23个.结论 shRNA介导的CXCR4基因沉默可在黑素瘤皮下种植瘤产生抑瘤效应,明显降低肝、脑器官转移能力和定向肺转移能力.

重组人白介素-24蛋白对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的抑瘤作用

目的 研究原核表达及纯化、复性的重组人白介素24蛋白(recombined human interlukin 24,rhIL-24)对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的抑制肿瘤生长的作用.方法 将人A375黑素瘤细胞注射至裸鼠体内,待肿瘤生长到一定体积后,向裸鼠的肿瘤内注射rhIL-24,2周后切取肿瘤称重、量体积,进行病理检查及免疫组化检测.结果 经rhIL-24注射的肿瘤体积及重量与对照组相比明显减小、减轻;Bax基因表达上调、Bcl-2、CD34及VEGF基因表达下调,显示肿瘤细胞生长受到抑制,凋亡率增加.结论 rhIL-24对荷人A375细胞黑素瘤裸鼠的肿瘤有显著抑制生长的功能,可促进A375细胞凋亡,而对裸鼠则无明显的不良反应.

远离肺癌有良策

肺癌是全世界常见的肿瘤（除了西方国家常见的黑素瘤以外），也是目前癌症导致死亡的主要原因，几乎占到全部癌症致死的18%。肺癌发病男女有别，3/4的新发病例为男性。绝大部分肺癌（90%～95%）可分为小细胞肺癌和非小细胞肺癌两大类，非小细胞肺癌又分为3种主要的亚型：鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌。其中鳞状细胞癌占全部肺癌的30%～35%，腺癌占30%～45%，大细胞癌占约9%。而小细胞肺癌（SCLC）虽仅占全部肺癌的10%～15%，但有易侵袭扩散、易早期转移和预后差的特点。肺癌可以说已经成为威胁人类健康和影响生存的第一大肿瘤杀手。

PPO基因单克隆抗体的制备以及在恶性黑色素瘤中表达的研究

目的:制作PPO的单克隆抗体并研究其在恶性黑色素瘤中的表达.方法:利用细胞融合法制作单克隆抗体,蛋白免疫电泳法检测单克隆抗体,免疫组化法研究PPO基因在恶性黑色素瘤中的表达情况.结果:制作了PPO基因的特异性单克隆抗体,在恶性黑色素瘤中有过表达.结论:PPO抗体是一种特异性的抗体,该抗体对恶性黑色素瘤的检测有特异性.

全方位护理干预对黑素瘤患者术后生活状况的影响

目的 探讨全方位护理干预策略对黑素瘤患者术后生活状况的影响.方法 选取2014年3月至2014年12月间第四军医大学西京皮肤医院收治的84例黑素瘤患者,按照随机数字表法分为干预组和对照组,每组各42例.干预组患者采用全方位护理模式,对照组患者采用常规护理模式.比较不同护理模式对两组间患者生活状况的影响.结果 干预后,干预组患者的躯体功能、心理功能、社会功能、物质生活等评分均高于对照组(均P ＜0.05);干预组患者心理的客观支持度、主观支持度及支持利用度均高于对照组(均P ＜0.05).结论 全方位护理模式能够改善患者的生活质量,提升社会支持的水平,促进患者积极配合治疗,对康复具有重要的意义.

人端粒酶反转录酶mRNA在不同类型黑素瘤中的表达及其意义

目的：检测黑素瘤组织中人端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的表达，并分析其表达与黑素瘤类型及患者临床病理特征之间的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）法检测64例黑素瘤组织和30例色素痣组织中hTERT mRNA表达水平；采用SPSS 17.0软件分析黑素瘤hTERT mRNA的表达与临床病理特征间的关系。结果黑素瘤组织中hTERT mRNA相对表达水平为52.43±5.42，高于色素痣组织的21.38±3.73，差异有统计学意义（t＝4.72，P＝0.000）。hTERT mRNA的表达与黑素瘤患者的年龄、性别、民族均无关（均P＞0.05），而与黑素瘤类型、淋巴结转移、Clark分级相关（均P＜0.05）。黏膜黑素瘤中hTERT mRNA表达水平高于肢端、非肢端黑素瘤（t＝7.71，P＝0.001），而肢端、非肢端黑素瘤间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论黑素瘤组织中hTERT mRNA的表达升高，其中以黏膜黑素瘤尤为显著。 hTERT可能与黑素瘤的发生、发展相关。

肢端恶性黑素瘤一例A case of acral malignant melanoma

患者，男，51岁。主因右足部散在结节、肿物半年，于2013年12月21日就诊。半年前，左足内侧外伤后皮肤感染，患者未予以重视。后感染部位出现粟粒大小的褐色丘疹，自觉无痛痒，逐渐增大，生长速度较快；2个月前部分丘疹增大至直径为1 cm的结节，周围散在粟粒大小的褐色丘疹，无不适；1个月前患者出现纳差、反酸、腹胀、便秘等不适感觉，体重1个月内下降5 kg。体格检查：一般情况可，无发热、苍白及黄疸；腹部触诊正常，肝肋下未及；右侧腹股沟可扪及鹅蛋大小的淋巴结，质韧，无压痛，活动度不佳。皮肤科情况：右侧足踝内侧可见一直径为2 cm大小的淡红褐色结节，边界不规则，其上可见红褐色痂皮，周围皮肤散在分布粟粒至绿豆大小的红褐色丘疹，质韧（图1）。实验室检查：血、尿、粪常规正常。

巨大肢端恶性黑素瘤一例

临床资料患者,男,87岁.主因左足跟丘疹伴疼痛、渗出8个月,左踝部肿胀、结节伴疼痛、渗出1个月,于2012年10月就诊于我科.患者8个月前无意中发现左足跟部一黄豆大小丘疹,无自觉症状,搔抓破溃后,创面长时间不能愈合.至当地诊所就诊,对皮损部分切除后外用抗生素处理,创面仍不愈合,且丘疹逐渐增大.近1个月来,左下肢出现肿胀,左踝部出现大片暗紫色斑块、丘疹、结节,伴渗出,行左下肢血管超声检查,未见异常.发病后无发热、消瘦等.体格检查:一般情况可,各系统检查未见异常.皮肤科情况:左足跟见一蚕豆大小半球形暗褐色肿物,表面粗糙,可见结痂及血性渗出液,肿物周围散在数个灰黑色斑疹,表面未见破溃.

黑素瘤组织中乙醛脱氢酶1、上皮性钙黏附蛋白及尿激酶型纤溶酶原激活物受体的表达及临床意义

目的 研究黑素瘤组织中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)、上皮性钙黏附蛋白(E-cadherin,E-cad)及尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor,uPAR)的表达及与临床病理特征的关系.方法 选择50例黑素瘤和50例色素痣患者的病变组织作为研究对象,采用免疫组化法检测病变组织中的ALDH1、E-cad及uPAR的表达情况,分析这3种蛋白表达与患者临床组织病理特征、肿瘤分期的关系.结果 黑素瘤组织中ALDH1和uPAR表达阳性率分别为82.00％(41/50)和86.00％(43/50),均显著高于色素痣组(P<0.05);黑素瘤组织中E-cad阳性表达率为38.00％(19/50),显著低于色素痣组(P<0.05).ALDH1、uPAR表达阳性率与患者年龄、性别、肿瘤厚度、浸润深度、是否淋巴结转移和组织病理分型均无相关性,但肿瘤厚度≥4 mm、浸润深度Ⅳ～Ⅴ、发生淋巴结转移等患者黑素瘤组织中ALDH1、uPAR表达阳性率均>90％.浸润深度Ⅳ～Ⅴ的黑素瘤患者E-cad表达阳性率显著低于浸润深度Ⅰ～Ⅲ的患者(P<0.05),黑素瘤患者E-cad表达阳性率与其他临床特征无相关性.结论 黑素瘤在发生和进展过程中ALDH1、uPAR表达上调,E-cad表达下调,E-cad表达下调与肿瘤程度有关.

姜黄素联合热疗对人黑素瘤A375细胞毒性的实验研究

目的 从细胞水平探讨姜黄素联合热疗治疗人恶性黑素瘤的可行性.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同处理因素对人恶性黑素瘤A375细胞增殖活性的影响,流式细胞仪检测A375细胞的凋亡情况.结果 30 μmol/L姜黄素联合热疗的细胞抑制率高于单纯姜黄素组和热疗组,差异具有统计学意义(F=5.47,P＜0.01);A375细胞增殖抑制率与姜黄素浓度呈正相关(rs=0.95);30 μmol/L姜黄素联合热疗组细胞早期凋亡率高于单纯姜黄素组和热疗组,差异具有统计学意义(H=15.37,P＜0.01).结论 姜黄素联合热疗对人恶性黑素瘤A375细胞的毒性起协同相加作用,细胞毒性与姜黄素的剂量成明显剂量-效应关系.

Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT通路信号分子在黑素瘤中的表达

目的 探讨Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT通路主要信号分子在正常人黑素细胞及不同黑素瘤细胞系中的激活状态.方法 选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)黑素瘤细胞系和色素痣、黑素瘤组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Westem blot)、激光共聚焦及免疫组化法检测细胞及组织中该通路主要信号分子的表达情况.结果 与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中该通路主要信号分子Wnt5a、散乱蛋白2(DVL2)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)、活化T细胞核因子2(NFAT2)、环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、黏着斑蛋白(vinculin)及波形蛋白(vimentin)明显高表达,且Ca2+浓度较高;CN-B、NFAT2在色素痣中均为阴性表达,而在黑素瘤组织中多数呈阳性表达(P＜0.001).在侵袭性及转移性黑素瘤中的表达强度明显高于原位黑素瘤.结论 在黑素瘤的发生、发展过程中,Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT信号通路可能被激活,并在黑素瘤的侵袭和转移中发挥重要作用.

5例少见恶性黑素瘤的临床和组织病理分析

一些特殊类型的黑素瘤因临床和组织病理表现不典型，很容易误诊。该文报道5例少见恶性黑素瘤患者的临床和组织病理特点。其中无色素性黑素瘤2例，肢端黑素瘤局部转移、皮赘状先天性色痣恶变、结缔组织增生性和向神经性黑素瘤各1例。

干细胞因子及受体c-kit对A375细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的 利用基因工程方法建立稳定表达干细胞因子受体(SCF/c-kit)的恶性黑素瘤A375细胞株,再给予外源性SCF/c-kit,观察其对A375细胞增殖、凋亡的影响.方法 通过脂质体转染技术构建稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株(hc-kit/A375),给予A375细胞和hc-kit/A375细胞外源性SCF,将所有的细胞分为A375组、A375-SCF组、hc-kit/A375组和hc-kit/A375-SCF组.应用MTT法及流式细胞仪分析细胞的增殖和凋亡,并应用酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫组化方法检测肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF),基质金属蛋白酶(MMP)-9及肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达.结果 ①通过脂质体介导能将c-kit-pcDNA3.1neo重组质粒成功转染入黑素瘤细胞,建立稳定表达c-kit的黑素瘤细胞株hckit/A375,hc-kit/A375细胞中c-kit表达明显增加.②给予外源性SCF后,细胞的生长受到抑制,以培养后第5天尤为显著；细胞的凋亡率明显增加,S期比例降低,且hc-kit/A375-SCF组尤明显.③转染后细胞及加入SCF干预组VEGF、MMP-9分泌减少,而TNF-α的分泌增加.结论 通过脂质体转染和G418筛选成功构建稳定表达c-kit的A375细胞株；通过增加A375细胞中SCF/c-kit的表达能改变肿瘤细胞对VEGF、MMP-9、TNF-α的分泌,抑制肿瘤细胞的增殖,促进其凋亡.

Rho GTPase/ROCK信号通路在皮肤病免疫调节中的研究进展

在皮肤血管炎和皮肤肿瘤的免疫调节中，Rho GTPase/ROCK信号通路对T淋巴细胞的调节作用受到越来越多的重视。该通路主要影响细胞骨架重排及细胞运动。近年来研究表明，在系统性红斑狼疮、白塞病及黑素瘤的发病机制中，Rho GTPase/ROCK信号通路通过影响T淋巴细胞的黏附迁移、激活、效应等方面，进而影响免疫反应的发生。目前已有一些Rho GTPase/ROCK信号通路的抑制剂如Y27632、法舒地尔等应用于基础或临床研究中，并取得了一定的成果，有望成为治疗疾病的潜力药物，且近年来越来越多的证据还表明ROCK抑制剂在皮肤愈合和瘢痕治疗中发挥作用。

恶性黑素瘤组织iNOS的表达与血管增生研究

目的：探讨恶性黑素瘤组织中iNOS表达与增生及临床资料相关性。方法收集30例恶性黑素瘤患者皮损组织和20例色素痣患者的皮损组织，采用免疫组化检测恶性黑素瘤和色素痣组织中iNOS的表达，并与患者临床资料进行分析，同时观察其与癌细胞增生、血管生成的关系。结果 iNOS表达阳性率在恶性黑素瘤组织中比色素痣组织高(P＜0.05)，恶性黑素瘤iNOS表达在患者年龄、性别、部位中差异无统计学意义（P＞0.05）。病理分期Ⅲ～Ⅳ期患者iNOS阳性率显著高于Ⅰ～Ⅱ期（P＜0.05）。iNOS阳性肿瘤患者细胞增生核抗原（PCNA）标志指数（PLI）和微血管密度（MVD）的值明显高于iNOS阴性肿瘤患者（P＜0.01）。结论 iNOS能促进恶性黑素瘤细胞增生与血管形成，是恶性黑素瘤的重要调节因子。