首页 > 文献资料
-
慢性氟中毒大鼠睾丸组织中钙调神经磷酸酶和活化T细胞核因子1的表达
目的 探讨钙调神经磷酸酶(CaN)和活化T细胞核因子1(NFATc1)在慢性氟中毒大鼠睾丸损伤机制中的意义.方法 18只6周龄清洁级雄性SD大鼠按体重用随机数字表法分为3组(每组6只),对照组饮用自来水(含氟量＜1 mg/L),低氟组和高氟组分别饮用含5、50 mg/L氟化钠的自来水.饲养8个月后,观察氟斑牙发生情况,氟离子选择电极法检测尿氟含量情况;称量各组大鼠体重及睾丸质量;光镜观察各组大鼠睾丸组织形态学变化;免疫组化和原位杂交检测睾丸组织CaN和NFATc1的蛋白及mRNA表达情况.结果 大鼠氟斑牙检出只数为对照组0只,低氟组4只(4/6),高氟组5只(5/6),差异有统计学意义(x2=10.60,P＜0.05).在对照、低氟组、高氟组尿氟含量依次升高,分别为(1.26 ±0.17)、(2.06±0.64)、(7.69±1.96) mg/L(F=36.57,P＜0.05);体重分别为(629.00±16.00)、(585.17±17.27)、(560.50±16.07)g,差异有统计学意义(F=26.67,P＜0.05);睾丸质量分别为(2.58 ±0.17)、(2.43±0.31)、(2.35 ±0.38)g,差异无统计学意义(F=0.91,P＞0.05).与对照组比较,各染氟组大鼠各级生精小管结构出现不同程度破坏,高氟组破坏程度大.对照组、低氟组、高氟组睾丸组织中CaN蛋白表达灰度值依次增加,分别为59.10±5.62、77.93±4.16、101.69 ±6.31 (F=74.18,P＜0.05);NFATc1蛋白表达灰度值分别为76.11 ±4.41、93.42±3.85、120.42±9.31,随染氟增加而逐渐增加(F =92.4,P＜0.05).CaN的mRNA表达量分别为58.76±7.70、82.01±6.88、99.47±8.33(F=42.65,P＜0.05),NFATc1分别为59.39±4.74、90.02±5.37、121.15±7.69(F=155.47,P＜0.05).CaN和NFATc1蛋白及mRNA表达水平呈正相关(r分别为0.899、0.908).结论 CaN依赖的信号通路表达变化可能参与到慢性氟中毒大鼠睾丸组织的损伤机制中.
-
高迁移率族蛋白B 1在白细胞介素-2转录表达信号调控中的作用
目的 探讨高迁移率族蚩白B1(HMGB1)在白细胞介素-2(IL-2)转录表达信号调控机制中的可能作用.方法首先将HMGB1和NFAT2质粒共同转染Hela细胞,同时转染IL-2报告基因,逐步增加HMGB1的转染剂量,检测IL-2报告基因的表达活性.观察HMGB1质粒用量埘IL-2报告基凶活性的影响;然后应用sRNAi质粒对内源性及外源性HMGB1表达进行特异性抑制,观察对IL-2报告基因活性的影响,以期从反而论证HMGB1可促进IL-2转录表达.结果 在Hela细胞中,随着HMGB1质粒转染剂量增加,IL-2报告基因活性增加了2.12倍(P<0.01).应用sRNAi抑制293T细胞中外源性以及Hela细胞中内源性HMGB1表达水平后,IL-2报告基因活性分别下降1.7倍和4.76倍(P<0.05或P<0.01).结论 HMGB1在NFAT2介导IL-2报告基冈转录表达的信号调控过程中发挥重要作用.
-
非诺贝特抑制心肌细胞肥大的信号转导途径
目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)对内皮素1诱导的心肌肥大的作用及其对蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β-活化T细胞核因子(Akt/GSK3β-NFATc4)信号通路的影响.方法 培养新生SD大鼠的心肌细胞,构建PPAR-α-EGFPN3质粒并转染心肌细胞,采用[~3H]亮氨酸掺入法、蛋白免疫印迹(Western blot)技术、免疫荧光技术等方法,观察PPAR-α过表达对内皮素1诱导的心肌细胞蛋白质合成的作用以及PPAR-α过表达对内皮素1诱导的Akt/GSK3β磷酸化和NFATc4核移位的影响.结果 PPAR-α过表达和PPAR-α激动剂非诺贝特显著抑制了内皮素1诱导的心肌肥大;PPAR-α过表达及PPAR-α过表达联用非诺贝特可以显著抑制内皮素1诱导的Akt/GSK3β磷酸化;PPAR-α过表达防止了内皮素1诱导的NFATc4由胞浆到胞核的移位.结论 PPAR-α可能通过影响Akt/GSK3β-NFATc4信号通路来抑制内皮素1诱导的心肌肥大反应.
-
活化T细胞核因子和单核细胞趋化蛋白-1及该蛋白2518G/A基因多态性与冠心病的关系
目的:研究活化T细胞核因子和单核细胞趋化蛋白-1及该蛋白2518G/A基因多态性与冠心病病变程度的相关性.方法:选取冠心病患者300例,根据冠状动脉(冠脉)造影结果确诊为冠心病的患者分为急性冠脉综合征(ACS)组180例,稳定型心绞痛组120例.另选冠脉造影正常者为对照组60例.应用Gensini评分评定狭窄程度,酶联免疫法测定活化T细胞核因子(NFAT)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)浓度,多聚酶链反应--末端限制性片段长度多样性(PCR-RFLP)方法检测MCP-1 2518G/A基因多态性.结果:①急性冠脉综合征组的NFAT、MCP-1浓度显著高于稳定型心绞痛组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05),MCP-1浓度与NFAT呈正相关(r=0.65,P<0.05).②冠脉病变Gensini评分与NFAT、MCP-1、低密度脂蛋白胆固醇、血糖呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关.③MCP-1 2518G/A基因有三个基因型,GG型的MCP-1浓度较AG型及AA型升高(P<0.05),ACS组GG型基因和G等位基因频率较稳定型心绞痛组及对照组增高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:冠心病患者血浆NFAT与MCP-1水平的升高及MCP-1 2518G/A基因多态性与冠脉病变程度相关.
关键词： 活化T细胞核因子 基因多态性 单核细胞趋化蛋白-1 冠心病 -
钙/钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路与T细胞活化及支气管哮喘关系的研究进展
钙/钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路作为T细胞内重要的生物信号转导通路,在T细胞活化中起到调节枢纽的作用,与Th细胞的分化及多种细胞因子的产生有密切关系;而T细胞的浸润和活化在支气管哮喘(简称哮喘)气道慢性炎症及气道重塑的发生、发展过程中具有重要的意义,因此,钙/钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路可能与哮喘的发生有密切关系,其在哮喘T细胞活化机制中的研究对于揭示哮喘的发病机制和治疗有重要的意义.
-
创伤后IL-2表达受抑与核转录NFAT和AP-1变化的关系
目的:探讨创伤后脾细胞活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)和激活蛋白-1(activator protein-1,AP-1)的DNA结合活性、部分家族成员c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达和白细胞介素2(IL-2)表达的动态变化及它们间的关系.方法:采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后6、12h,1、4、7、10、14d处死动物,分离脾细胞,经ConA刺激细胞后收集培养上清以测定IL-2活性;提取脾细胞RNA以测定IL-2 mRNA;提取脾细胞核蛋白,用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测NFAT、AP-1的DNA结合活性,用免疫蛋白印迹法(Western blot assay)检测c-Fos,c-Jun,JunB蛋白的表达.结果:和正常对照组相比,创伤后IL-2活性均有不同程度的降低,其受抑的程度在创伤后4d更为明显.创伤后脾细胞NFAT和AP-1的DNA结合活性亦逐渐下降,至伤后4d时下降明显,为正常对照组的41%和49%.这与创伤后脾细胞IL-2的活性和IL-2 mRNA的降低相一致.c-Fos蛋白水平在伤后1、4d明显降低;c-Fos蛋白表达无明显变化;JunB蛋白水平仅在伤后1d明显表达.结论:上述结果提示,创伤后脾细胞IL-2表达受抑至少部分是由于核转录因子NFAT和AP-1的DNA结合活性降低所导致;而NFAT和AP-1的DNA结合活性降低可能部分由于创伤影响c-Fos蛋白的生成所致.
-
靶向活化T细胞核因子1基因的shRNA质粒表达载体的构建
目的 利用pRNAT-U6.1/Neo质粒构建靶向NFAT1基因的3个shRNA,为下一步探索肺癌基因治疗的RNA干扰途径奠定基础.方法 设计3对shRNA(NFAT1-sh-1、NFAT1-sh-2、NFAT1-sh-3),以人类基因同源性差的无关序列(NFAT1-sh-NC)作为阴性对照.筛选与人类其他基因同源性小、特异性针对目的基因的siRNA.合成并克隆至带有U6启动子的pRNAT -U6.1/Neo质粒中,构建质粒表达载体,通过凝胶电泳鉴定后转化至大肠杆菌中进行培养,并提取质粒进行DNA测序鉴定.结果 成功构建和筛选出靶向NFAT1基因的3对shRNA质粒表达载体,GC比例为40％～55％.结论 构建的3个靶向NFAT1基因shRNA质粒表达载体有助于肺癌靶向基因治疗RNA干扰的研究.为筛选有效的基因干扰载体,以及对荷瘤肺癌裸鼠靶向RNAi抗肿瘤细胞生长的研究鉴定了基础.
-
Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT通路信号分子在黑素瘤中的表达
目的 探讨Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT通路主要信号分子在正常人黑素细胞及不同黑素瘤细胞系中的激活状态.方法 选取正常人原代黑素细胞(MC)及来源于原位(WM793B)、侵袭性(LIBR)及转移性(SK-MEL-5)黑素瘤细胞系和色素痣、黑素瘤组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法(Westem blot)、激光共聚焦及免疫组化法检测细胞及组织中该通路主要信号分子的表达情况.结果 与正常人黑素细胞相比,在不同黑素瘤细胞系中该通路主要信号分子Wnt5a、散乱蛋白2(DVL2)、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CN)、活化T细胞核因子2(NFAT2)、环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、黏着斑蛋白(vinculin)及波形蛋白(vimentin)明显高表达,且Ca2+浓度较高;CN-B、NFAT2在色素痣中均为阴性表达,而在黑素瘤组织中多数呈阳性表达(P＜0.001).在侵袭性及转移性黑素瘤中的表达强度明显高于原位黑素瘤.结论 在黑素瘤的发生、发展过程中,Wnt5a-Ca2+-CN-NFAT信号通路可能被激活,并在黑素瘤的侵袭和转移中发挥重要作用.
-
以活化T细胞核因子为靶点的免疫抑制剂的研究进展
免疫抑制剂环孢素A(CsA)和FK506都是通过与细胞中一个蛋白质家族--亲免素家族(immunophilins family)受体结合形成免疫复合物来发挥作用.亲免素家族典型代表有亲环素(cyclophilins)和FK506结合蛋白(FK506binding proteins,FKBP),它们分别与CsA和FK506结合,药物-亲免素复合物形成后作用于它们的细胞靶点--钙调磷酸酶(CaN),继而又作用于它们的连锁靶点,即转录因子活化T细胞核因子(NF-AT).NF-AT从此引起广大学者的关注,本文综述了以NF-AT为靶点的免疫抑制剂的研究进展.
-
钙调磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路抑制剂的研究进展
钙调磷酸酶（CaN）是人体免疫调节中的关键酶，其重要的靶标蛋白是活化T细胞核因子（NFATc）。CaN抑制剂（CNI）如环孢素A和他克莫司的免疫抑制作用的发现克服了器官移植中的免疫排斥难题，使器官移植发生了根本性的改变，迄今这两种药物仍然广泛应用于临床和基础研究，但严重的肾毒性和神经毒性也限制了它们在临床上的使用。因此，查找新的特异性更高、在临床上副作用更小的CNI是一个研究热点。本文从药物-亲和素复合物阻断底物、直接抑制CaN活性和特异性干扰CaN-NFATc相互作用三方面对近几十年来天然的和人工合成的CNI作一综述。
-
低氧通过Ca2+-NFAT信号通路促进肺动脉平滑肌细胞增生
目的 通过观察低氧对肺动脉平滑肌细胞增生的影响及作用机制,探讨低氧在肺动脉高压发病过程中的作用,为肺动脉高压的进一步干预治疗提供可靠的理论依据.方法培养人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth muscle cell,HPASMCs)并分为以下几组:正常对照组、低氧组(24 h、48 h、72 h)、低氧并处理组(低氧48 h并在细胞外液中加入EDTA 2 mmol/L或VIVIT 4 μmol/L).分别应用细胞计数法检测细胞的增生情况、荧光钙成像法测定细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)、激光共聚焦显微镜观察活化T细胞核因子c3(nuclear factor of activated T cells,NFATc3)在细胞核内外分布的变化.结果低氧呈时间依赖性促进HPASMCs增生;低氧处理的细胞静息[Ca2+]i和库容性钙内流(capacitative calcium entry,CCE)显著升高,NFATc3的核转位增多. EDTA(Ca2+螯合剂)或VIVIT(NFAT特异性抑制剂)能够明显抑制低氧诱导的细胞增生现象.结论低氧能促进HPASMCs的增生,其机制可能是通过增加静息[Ca2+]i和库容性钙内流,使HPASMCs内的Ca2+异常升高并导致NFATc3转位至核内,进而促进与增生有关的基因的表达.
-
创伤后IL-2表达受抑与核转录因子NFAT,AP-1变化的关系
目的探讨创伤后脾细胞活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells, NFAT)和激活蛋白-1 (activator protein-1, AP-1)的DNA结合活性、部分家族成员c-Fos, c-Jun和JunB蛋白的表达和白细胞介素2(IL-2)表达的动态变化及它们间的关系.方法采用小鼠双后肢闭合性砸伤+骨折模型,于创伤后6h、12h、1、4、7、10和14天处死动物,分离脾细胞,经ConA刺激细胞后收集培养上清以测定IL-2活性;提取脾细胞RNA以测定IL-2 mRNA;提取脾细胞核蛋白,用电泳迁移率改变试验(electrophoretic mobility shift assay, EMSA)检测NFAT和AP-1的DNA结合活性.用免疫蛋白印迹法(Western blot assay)检测c-Fos, c-Jun和JunB蛋白的表达.结果和正常对照组相比, 创伤后IL-2活性、IL-2 mRNA均有不同程度的降低, 其受抑的程度在创伤后4天更为明显.创伤后脾细胞NFAT和AP-1 的DNA结合活性亦逐渐下降,至伤后4天时下降明显,为正常对照组的41%和49%.这与创伤后脾细胞IL-2的活性和IL-2 mRNA的降低相一致.c-Fos蛋白水平在伤后1和4天明显降低;c-Jun蛋白表达无明显变化;JunB蛋白水平仅在伤后1天明显表达.结论上述结果提示,创伤后脾细胞IL-2表达受抑至少部分上是由于核转录因子NFAT和AP-1的DNA结合活性降低所导致; 而NFAT和AP-1的DNA结合活性降低可能部分由于创伤影响c-Fos蛋白的生成所致.
-
不同强度运动对骨骼肌纤维MHC亚型转化及CaN/NFATc1信号通路的影响
目的:研究不同强度运动对骨骼肌纤维MHC亚型转化及钙调神经磷酸酶(CaN)/活化T细胞核因子1(NFATc1)信号通路的影响.方法:雄性SD大鼠(2月龄)24只,随机分为3组(n=8):正常对照组(NC)、中等强度组(ME)、大强度组(HⅡE),进行8周跑台训练.采用ATP酶染色法测定Ⅰ、Ⅱ型肌纤维,凝胶电泳技术分离肌球蛋白重链(MHC)亚型,比色法测定骨骼肌中CaN活性,免疫印迹技术测定骨骼肌NFATc1蛋白含量.结果:①肌纤维密度变化:股四头肌ME组Ⅰ、Ⅱ型纤维数密度均显著增加(P＜0.05),HE组仅Ⅱ型纤维面密度显著增加(P＜0.05);比目鱼肌HE、ME组Ⅰ型纤维数密度均显著增加(P＜0.05);②肌纤维MHC亚型百分比变化:股四头肌ME组MH-CI、Ⅱa百分比升高(P＜0.05),而MHCIIb百分比降低(P＜0.05);比目鱼肌MHCI百分比升高,MHCⅡa、Iib百分比降低;③ME组大鼠CaN活性、NFAT1蛋白含量均显著升高(P＜0.05).结论:大、中等强度运动可诱导骨骼肌MHC快型向慢型转化,同时伴随肌纤维亚型变化骨骼肌中CaN活性增加、NFATc1蛋白表达增加.
-
Calcineurin/NFAT信号通路与胰腺β细胞功能
钙调神经磷酸酶/活化T细胞核因子(Calcineurin/NFAT)信号转导通路广泛存在于多种组织器官中.它通过NFAT蛋白的脱磷酸化及核内转位,激活下游基因的转录,调节细胞的生长、发育及功能.近的研究证明,该通路对胰腺β细胞的生长、发育及内分泌作用过程中相关基因的转录可能也具有刺激作用,揭示了一个有关糖尿病发病机制和治疗的新模式.
-
钙/钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路与T细胞活化及支气管哮喘关系的研究进展
钙/钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路作为T细胞内重要的生物信号转导通路,在T细胞活化中起到调节枢纽的作用,与Th细胞的分化及多种细胞因子的产生有密切关系;而T细胞的浸润和活化在支气管哮喘(简称哮喘)气道慢性炎症及气道重塑的发生、发展过程中具有重要的意义,因此,钙/钙调神经磷酸酶-活化T细胞核因子信号通路可能与哮喘的发生有密切关系,其在哮喘T细胞活化机制中的研究对于揭示哮喘的发病机制和治疗有重要的意义.
-
活化T细胞核因子转录因子家族在T细胞中的作用及与哮喘的关系
活化T细胞核因子(NFAT)是一类具有多向调节功能的转录因子,在活化T细胞中,NFAT能与许多其它信号转导系统的转录因子在核内相互作用,完成不同信号间整合,激活特异性的基因表达.NFAT可能在Th0细胞的分化中起重要作用,并能调节Th2细胞因子的产生,在变态反应性疾病中具有重要意义.NFAT与哮喘也有很密切的关系.
-
犬乳恒牙替换期间活化T细胞核因子NFATc1表达的研究
目的 通过观察犬乳恒牙替换过程中活化T细胞核因子(nuclear factor of active T cells,NFAT)NFATc1的表达探讨其在此过程中的作用及意义.方法 制备犬乳恒牙替换各阶段乳牙根、牙槽骨、恒牙胚的组织标本切片,用免疫组织化学方法检测NFATc1在犬乳恒牙替换期间的表达.结果 NFATc1在破骨细胞、恒牙胚成釉细胞、成牙本质细胞层中表达阳性.结论 NFATc1可能参与了犬乳恒牙替换生理过程中乳牙根、牙槽骨的吸收和恒牙胚的发育.
-
砷对人正常膀胱上皮细胞NFAT2mRNA表达的影响
用浓度为0、1、2、4、8、10 μmol/L的亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞24h和浓度为0、0.5μmol/L的亚砷酸钠处理人正常膀胱上皮细胞至40代,应用RT-PCR方法检测活化T细胞核因子(NFAT2mRNA)的表达水平.结果显示,1 μmol/L剂量组染砷24h后NFAT2 mRNA表达水平显著高于其他浓度组(P＜0.05);0.5 μmoL/L浓度砷长期处理细胞40代后引起NFAT2 mRNA表达水平显著增高(P＜0.05).提示,长期、低剂量砷处理的人正常膀胱上皮细胞NFAT2mRNA水平增高.
-
活化T细胞核因子在双酚A调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用
研究活化T细胞核因子(NFAT)在环境内分泌干扰物双酚A (BPA)调控小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌白细胞介素-10(IL-10)蛋白中的作用,为进一步研究BPA的免疫毒作用机制提供理论依据.将不同剂量的BPA(0.1、1、10、100及1000μmol/L)作用于RAW264.7细胞24h、48 h,用CCK8试剂盒检测细胞活性.以1 μg/mnl脂多糖(LPS)为激活剂,以1、10、50、100μmol/L BPA作用细胞24 h,EHSA试剂盒检测细胞上清液中IL-10蛋白含量.10、100 μmol/L BPA作用细胞4h、12 h,用实时定量PCR方法测定IL-10、NFATc、NFATp基因表达.与对照组比较,1000 μmol/L BPA无论作用24 h还是48 h均能明显抑制细胞活性(P＜0.01);LPS显著促进巨噬细胞分泌IL-10蛋白,50和100 μmol/L BPA作用细胞24h,与LPS组比较,显著抑制IL-10蛋白的分泌(P＜0.01);10 μmol/L、100 μmol/L BPA染毒4h能明显促进NFATp mRNA表达(P＜0.01);染毒12 h时,IL-10 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).提示本实验条件下,NFATp在BPA调控巨噬细胞分泌IL-10蛋白中具有一定的作用.
关键词： 双酚A 活化T细胞核因子 巨噬细胞 白细胞介素-10(IL-10) -
活化T细胞核因子在儿童疾病发生发展中的作用
活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cell,NFAT)包括5个亚型(即NFATl-NFAT5),初发现其在免疫系统中发挥着重要作用,后来发现其在非免疫系统中也同样扮演着重要的角色,参与调控细胞组织的发育和生理过程.近些年来,许多研究发现NFAT的表达和功能异常与儿童疾病关系紧密.因此,该文就NFAT信号通路的调控及其在儿童疾病中的作用进行综述.
