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创伤弧菌脓毒症大鼠肝细胞Fas mRNA表达的动态变化研究
目的 探讨大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症时肝细胞Fas mRNA表达量的动态变化情况.方法 制作大鼠VV脓毒症模型(VV组),RT-PCR法测定染菌后各时间点大鼠肝细胞Fas mRNA表达量.结果 VV模型组感染创伤弧菌后大鼠肝细胞FasmRNA其表达量明显增加(P<0.05),染菌后2 h、6 h的表达昔高,9 h后开始降低,但在染菌16 h的表达量仍明显高于正常对照组(P<0.05).结论 VV脓毒症可致肝组织中Fas mRNA表达量增加,早期明显增高,并持续维持在高水平.
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人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA检测联合宫颈活检在宫颈病变中的应用价值
目的 探讨经过新柏超薄液基细胞学检测(TCT)的标本检测高危人乳头瘤病毒(HPV) E6/E7 mRNA联合宫颈活检在宫颈病变筛查中的可行性及应用价值. 方法 采用杂交信号放大的核酸检测技术,对100例TCT示不同程度宫颈上皮瘤样病变和宫颈癌的标本进行高危HPV E6/E7 mRNA检测,并对HPV E6/E7 mRNA阳性者和阴性者同时行宫颈活检,同时就HPV E6/E7 mRNA表达在不同细胞学级别中的分布情况行统计学分析. 结果 不同细胞诊断级别E6/E7转录数有统计学差异(P＜0.05),随着宫颈病变程度增加,HPV E6/E7 mRNA的转录数相应增加.HPV E6/E7mRNA的转录数越高,宫颈活检阳性率越高. 结论 高危HPV E6/E7 mRNA检测联合宫颈活检对宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的筛查有临床意义.
关键词： 人乳头瘤病毒 mRNA 新柏超薄液基细胞学检查 E6/E7 宫颈活检 -
多囊卵巢综合征大鼠卵巢smad3的表达及其组织病变的观察
目的 定量分析卵巢血管密度,探讨多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢smad3的表达与体积增大、微血管密度增加等病理改变的相关性. 方法 皮下注射脱氢表雄酮法建立PCOS大鼠病理模型,动情间期取卵巢组织后称重；免疫组织化学法检测smad3在卵巢组织中表达,anti-CD34标记卵巢微血管,并进行定量分析；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢smad3的表达；逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法检测smad3 mRNA在卵巢组织中的表达. 结果 免疫组织化学检测显示:与对照组比较,实验组卵泡smad3表达减弱,卵巢间质表达增强(P＜0.05),在各级卵泡及间质均有表达.实验组卵巢体积增大,卵巢间质微血管的密度增加(P＜0.05)；Western blot检测结果提示在实验组smad3表达上调；RT-PCR结果显示实验组卵巢组织中smad3 mRNA表达与对照组无显著性差异(P＞0.05). 结论 PCOS卵巢间质平均血管密度增加,smad3的表达变化可能与PCOS特殊卵巢病理改变有关.
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δ-生育三烯酚对结肠癌细胞SW620中Wnt信号途径的影响
目的 依据生育三烯酚的抗肿瘤作用,研究其对结肠癌细胞SW620细胞增殖抑制作用与Wnt信号途径之间的关系.方法 采用MTT方法,观察不同剂量δ-生育三烯酚对细胞增殖抑制作用,通过Real-time RT-PCR检测Wnt途径相关因子mRNA的表达量变化情况,观察δ-生育三烯酚对细胞中wnt-1、β-catenin、c-jun、c -myc、cyclin D1及MMP-7mRNA表达水平的影响.结果 δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖有明显抑制作用,20 μmol/L δ-生育三烯酚作用24 h对SW620细胞抑制率为70.43％,IC50值为15.18μmol/L.20 μmol/L δ-生育三烯酚对Wnt信号途径中的wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc mRNA表达降低(P＜0.05)；对cyclin D1及MMP-7 mRNA的表达无影响(P＞0.05).结论 δ-生育三烯酚对结肠癌SW620细胞增殖抑制作用可能与其致Wnt途径中wnt-1、β-catenin、c-jun及c-myc表达降低有关.
关键词： δ-生育三烯酚 人结肠癌SW620细胞 Wnt信号途径 mRNA -
2,5-己二酮对大鼠神经丝mRNA水平的影响
目的 探讨2,5-己二酮(HD)对神经组织神经丝(NF)mRNA水平的影响.方法 Wistar雄性大鼠27只,分为3组(1个对照组,2个染毒组),每组9只,经腹腔染毒,剂量分别为200和400 mg/(kg·d),连续8周.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测坐骨神经、脊髓、大脑组织中高分子量NF(NF-H)、中分子量NF(NF-M)和低分子量NF(NF-L)mRNA水平.结果 200和400 mg/kg剂量染毒后,坐骨神经NF-L mRNA水平分别为对照组的126%(P＜0.05)和152%(P＜0.01),NF-M mRNA未检测到,NF-H mRNA未发生明显变化;在脊髓、大脑组织中,NF-L mRNA下降为对照组的34%～54%(P＜0.01),NF-M mRNA未发生明显变化,400 mg/kg剂量组中NF-H mRNA下降为对照组的85%(P＜0.05).结论 HD染毒导致大鼠神经组织中NF亚单位mRNA水平的变化.
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利用基因芯片技术筛选汉族人群甲基苯丙胺依赖相关基因的初步研究
目的 探索汉族群体中甲基苯丙胺依赖相关的差异表达基因.方法 采集14例汉族甲基苯丙胺依赖者以及8例年龄、性别相匹配正常人的外周全血,利用mRNA表达谱芯片对其进行基因表达谱分析,并对差异表达基因进行功能分类分析.结果 在27 958条转录本中,实验组和对照组差异表达倍数在2倍或2倍以上的转录本有3 560条,其中上调表达基因1 510个,下调表达基因2 576个.对这些差异基因分析发现甲基苯丙胺对细胞组分、分子功能、生物学过程的负调节有重要影响,并与转录调控、核苷酸代谢和修饰、蛋白质修饰、细胞凋亡、应激调节、自身免疫反应等相关.结论 甲基苯丙胺成瘾的发生涉及多基因表达的改变,芯片技术可以有效地筛选出甲基苯丙胺依赖者与正常对照的差异表达基因,对进一步探索甲基苯丙胺成瘾机制、有效的干预或逆转毒品成瘾具有重要意义.
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氢醌诱导下肝细胞XPV基因mRNA表达规律的研究
目的 研究氢醌(HQ)对L-02肝细胞XPV基因mRNA表达的影响及其规律,探讨XPV基因在HQ所致肝细胞毒性过程中分子作用机制.方法 体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导后,采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点(6、12、24和48h)XPV基因mRNA的表达;并检测不同剂量(0、5、10、20、40、80和160tmaol/L)HQ诱导24h后,各浓度组XPV基因mRNA的表达.结果 在24h的时间范围内,XPV基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是正常对照组,均具有随时间的延长而增加的趋势;到24h时,相对表达量达到大值,当培养时间达到48h时,该基因的表达则有所下降;此外,在各时间处理组(6h、12h、24h和48h)中,染毒组L-02肝细胞内XPV基因在mRNA水平上的表达均高于正常对照组.各剂量HQ作用24h后,L-02肝细胞内XPV基因mRNA的表达在0～80μmol/L范围内随着剂量的增加而增加,以正常对照组XPV基因的相对表达量为1,各染毒剂量组内XPV基因mRNA的相对表达量分别增至1.20、2.02、2.37、2.67、4.40和2.32倍;80μmol/L时其相对表达量达到峰值,160μmol/L的HQ作用后,其表达却有所下降,但仍高于正常对照组.结论 HQ可以诱导XPV基因mRNA的表达变化,并且呈现一定的时间和剂量依赖性,提示XPV基因可能参与了肝细胞对HQ的应答过程.
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硒对高碘仔鼠脑MBP基因表达的影响
目的研究高碘摄入对仔鼠脑髓鞘碱性蛋白(MBP)mRNA的影响及硒干预的作用.方法将Balb/c小鼠按体重随机分为3组:正常对照组、高碘组(3mg/L)以及高碘+Se组(碘3mg/L+硒0.5mg/L),分别喂饲高碘水或高碘+硒水以及正常鼠饲料.各组亲代鼠饲养4个月后雌雄按2:1交配,取14天仔鼠血、脑组织测定相关指标.结果与正常对照组相比,高碘仔鼠血清和脑组织TT4显著下降,TT3水平亦降低;脑MBP mRNA表达水平较对照组下降了27%.补硒提高仔鼠甲状腺激素的水平,上调仔鼠脑MBP mRNA的表达.结论高碘引起仔鼠甲状腺激素水平降低是仔鼠脑MBP mRNA表达水平下降的原因,硒可通过影响含硒酶的活性来调节甲状腺激素水平从而上调仔鼠脑MBP mRNA的表达.
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砷冶炼厂工人肿瘤相关基因mRNA表达变化
目的 探讨砷冶炼厂工人肿瘤相关基因mRNA表达变化规律及影响因素.方法 选择在岗砷冶炼工人37名、停止砷冶炼85天的工人43名和对照组51名为研究对象,使用带砷预处理系统的原子吸收分光光度法检测研究对象尿中无机砷、甲基胂酸和二甲基胂酸含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测研究对象外周血Lin28、Bax、Bcl-2、Fas基因的mRNA相对表达量.结果 尿中无机砷、甲基胂酸和二甲基胂酸浓度分别为:在岗砷冶炼工人(133.97±109.53)、(208.93±171.43)和(820.35±487.39) μg/g肌酐;停止砷冶炼工人(123.31±112.72)、(176.21±157.19)和(467.73±392.17) μg/g肌酐;对照组(1.55±1.49)、(0.10±0.09)和(10.47±7.85) μg/g肌酐.砷接触组工人尿中3种砷化合物浓度均显著高于对照组,正在进行砷冶炼的工人二甲基胂酸浓度显著高于停止砷冶炼工人(P＜0.05).研究对象相应外周血Lin28、Bax、Bcl-2、Fas基因的mRNA相对表达量分别为:在岗砷冶炼工人(8.88±2.42)、(6.87±1.10)、(7.24±2.31)和(8.23±2.90);停止砷冶炼工人(6.21±2.94)、(5.81±1.72)、(4.50±1.59)和(6.89±2.35);对照组(5.60±1.43)、(5.56±0.98)、(4.88±1.39)和(6.92±1.87).在岗砷冶炼工人Lin28、Bax、Bcl-2、Fas基因的mRNA相对表达量均显著高于对照组(P＜0.05).结论 砷冶炼工人多种肿瘤相关基因mRNA高表达,无机砷甲基化代谢转化在相关mRNA高表达中具有重要作用.
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血清GDF-15 mRNA与大肠癌患者病理特征的关系
目的 探讨血清生长分化因子-15(GDF-15)的mRNA水平与大肠癌患者病理特征的关系.方法 选择70例于我院采取手术治疗的大肠癌患者为研究对象,并收集大肠癌患者癌组织切除标本,所有癌组织标本均经病理确诊.分析大肠癌患者各病理特征与GDF-15表达率的关系.结果 GDF-15在大肠癌患者中的阳性表达率为72.86%.GDF-15的阳性表达率与大肠癌患者性别、年龄、肿瘤发生部位、组织学类型、肉眼分型比较,无显著差异(P>0.05).低分化、有淋巴结转移及C、D期大肠癌患者GDF-15的阳性表达率分别高于高、中分化、无淋巴结转移及A、B期大肠癌患者,差异有统计学意义(P<0.05).结论 血清GDF-15 mRNA水平可反映肿瘤恶性程度、分化程度及是否存在淋巴结转移,在大肠癌的发生、发展中起重要作用,对临床诊断及治疗具有一定的指导意义.
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结核分枝杆菌Ag85B mRNA定量检测作为化疗监测指标的初步研究
目的探讨痰标本中结核分枝杆菌Ag85B mRNA分子作为肺结核患者化疗反应监测指标的可行性和临床价值.方法应用定量逆转录聚合酶链反应(RT.PCR)对15例初治涂阳肺结核患者应用标准短程化疗方案治疗过程中2、4、7、14、30、60 d痰标本的结核分枝杆菌Ag85B mRNA进行系列检测,并与培养法(CFU)作比较.结果痰标本中结核分枝杆菌Ag85B mRNA在治疗的前2 d下降明显且与CFU的下降基本一致,治疗7 d Ag85B mRNA检测阴性11例,治疗14 d阴性的12例,治疗30 d除1例阳性外,其余均为阴性,治疗60 d时全部阴性.结论结核分枝杆菌Ag85B mRNA在接受治疗的肺结核患者的痰标中快速下降,是活菌数量下降的反映,痰标本中mRNA的变化可作为快速评价化疗反应的分子指标.
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实时荧光PCR方法检测结核分枝杆菌mRNA的研究
目的 建立检测结核分枝杆菌mRNA表达水平的实时荧光PCR反应体系,快速鉴定结核分枝杆菌. 方法 设计合成结核分枝杆菌mRNA相应引物和探针,探针标记以JOE为报告基团,BHQ1为猝灭基团.优化反应条件,建立结核分枝杆菌mRNA的实时荧光PCR检测方法.通过检测22份肺结核患者痰液、10份健康无症状人群痰液、结核分枝杆菌标准菌株和偶然分枝杆菌菌株培养菌落,检验方法的特异性、重复性和灵敏度.结果 肺结核患者痰液检测均出现典型扩增曲线,CT均值31.35,标准差4.31.健康无症状人群痰液及偶然分枝杆菌未出现扩展曲线.对痰液标本及稀释RNA重复检测的变异系数在2.54％以下,检测CT值与痰涂片抗酸染色分枝杆菌的数量呈良好相关性.结论 建立了一种快速实时检测结核分枝杆菌mRNA基因的荧光PCR方法,具有良好的敏感性和特异性.
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高危型HPV mRNA表达阳性率对不同程度宫颈病变的诊断价值
目的:探讨高危型HPV mRNA阳性表达对不同程度宫颈病变的诊断价值.方法:选取本院妇科接诊的宫颈疾病患者70例作为研究对象,采用基因芯片导流杂交技术进行HPV DNA检测,并使用DNA杂交捕获技术进行高危型HPV mRNA检测.以宫颈组织病理学结果为金标准,对比HPV DNA与高危型HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈病变程度的诊断准确性.结果:宫颈病变患者的HPV DNA阳性检出率(68.6％)与高危型HPV E6/E7 mRNA的阳性检出率(61.4％)无统计学差异(P＞0.05).CIN Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ患者的高危型HPV E6/E7 mRNA阳性率高于慢性宫颈炎患者(P＜0.05).在慢性宫颈炎和CINⅠ患者中,HPV DNA阳性率高于高危型HPV E6/E7 mRNA阳性率(P＜0.05),在CINⅡ、CINⅢ患者中,高危型HPV E6/E7 mRNA阳性率与HPV DNA阳性率比较无差异(P＞0.05).HPV DNA与HPV mRNA检测的一致性随着宫颈病变程度的加重而升高.HPV mRNA对高级别宫颈病变的诊断敏感性、特异性及阴性预测值均高于HPV DNA(P＜0.05).结论;高危型HPV mRNA检测对高级别宫颈病变有较高的诊断敏感性及特异性,其对高、低级别宫颈病变的鉴别较准确.
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破骨细胞对成骨细胞作用的研究
目的:探讨破骨细胞及其亚细胞结构对成骨细胞生长和功能的影响.方法:在获取大量破骨细胞的基础上,以细胞生物学方法探讨破骨细胞及其产生骨吸收后,破骨细胞、细胞培养基和亚细胞结构对成骨细胞生长和功能、成骨细胞核结合因子Cbf α 1表达的影响.结果:破骨细胞及破骨细胞产生骨吸收后,破骨细胞、细胞培养基和亚细胞成分对成骨细胞的生长和功能均有促进作用,可使成骨细胞的Cbfα1 mRNA的表达明显增强.
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人宫颈鳞状上皮细胞癌组织中钙激活性中电导钾离子通道的表达
目的 探讨人宫颈鳞状上皮细胞癌(简称鳞癌)组织中电导钾离子通道(IKCa1)mRNA及其蛋白产物与正常宫颈上皮组织中钙激活性的差异.方法 采用免疫组织化学法及RT-PCR法分别检测30例不同分化程度的宫颈鳞癌组织和18例正常宫颈上皮组织中IKCa1 mRNA及其蛋白产物的表达情况.结果 (1)IKCa1 mRNA阳性表达率15例子宫颈鳞癌组织中分别为73.3 %,表达水平为(1.2±0.5),18例正常宫颈上皮组织中分别为11.1%,表达水平为(0.9±0.2),差异均有统计学意义;(2)30例宫颈鳞癌组织细胞核及细胞膜上IKCa1蛋白产物均呈阳性表达;正常宫颈上皮组织中仅1例在鳞状上皮部位细胞膜部位有较弱表达,差异有统计学意义;(3)宫颈鳞癌组织中IKCa1 蛋白产物的表达与癌细胞分化程度呈正相关.结论 IKCa1的高表达与宫颈鳞癌的发生和发展密切相关.
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hTERT mRNA联合CYFRA21-1、NSE在肺癌检测中的应用研究
目的 探讨hTERT mRNA、CYFRA21.1与NSE联合检测肺癌的意义.方法 CYFRA21-1、NSE使用电化学发光免疫法检测,hTERT mRNA使用荧光PCR定量检测.结果 检测组合中3种肿瘤标志物肺癌组阳性率依次为hTERTmRNA(70.62％).NSE(66.10％)、CYFRA21-1(53.11％).联合检测中hTERT mRNA+CYFRA21-1+NSE敏感性高为95.48％.结论 hTERTmRNA+CYFRA21.1+NSE合检测肺癌敏感性大大增高,特异性减低不明显,有效性高,在上述几种联合检测中价值高.
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Thl7细胞在急性髓系白血病中表达失衡的研究
研究Thl7细胞在急性髓系白血病(AML)患者骨髓与外周血中的表达水平,进一部探讨急性髓系白血病的发病机制.并探讨Thl7细胞比例的改变与病人临床的相关性.方法 ①用实时荧光定量(RT-PCR)分别检测AML初诊组、化疗完全缓解及正常对照组骨髓及外周血单个核细胞中Th17转录因子(RORC)的表达水平.②用流式细胞术分别检测AML初诊组、化疗完全缓解及正常对照组外周血中Thl7细胞所占比例.结果 AML初诊组外周血中Th17细胞表达水平(0.98±0.058)明显低于完全缓解组(2.08±0.76)及正常对照组(1.79±0.306),差异有统计学意义(P<0.05).AML初诊组(中位数0.0000364183范围0.0000033285~0.0014100871)外周血单个核细胞(PBMCs)RORC mRNA的表达水平明显低于完全缓解组(中位数0.0001875434范围0.0000254260~0.0012218927)及正常对照组(中位数0.002644026范围0.0000636270~0.0009564651),差异有统计学意义(P<0.001).初诊组(中位数0.0000367983范围0.0000050103~0.0005125569)骨髓单个核(BMMCs)RORC,显著低于完全缓解组(中位数0.0001028859范围0.0000140734~0.0015682087),差异有统计学意义(P<0.001).初诊的AML患者接受治疗达到完全缓解后外周血RORC mRNA的表达恢复到正常水平,差异有统计学意义.结论 Thl7细胞表达失衡可能与AML的发生发展相关.
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大鼠脑缺血后缺血区VEGF表达变化及通心络的影响
目的 观察大鼠脑缺血后缺血区VEGF mRNA及蛋白水平随时间表达的变化及通心络对其的影响.方法 制备大鼠大脑中动脉梗塞局灶性脑缺血模型,采用RT-PCR法及免疫组化法检测脑缺血后每组实验动物不同时间缺血区VEGF mRNA及蛋白表达的变化以及通心络的作用.结果 1、正常大鼠脑缺血后脑组织中VEGF mRNA表达很少,大鼠局灶性脑缺血后VEGF mRNA表达逐渐增强,3d达高峰,缺血7d后又降至约正常水平.vEGF主要在神经元阳性表达,表达趋势与mRNA基本吻合.2、通心络高剂组VEGF mRNA表达显著增强(p<0.01,p<0.05);通心络各组VEGF阳性神经元数量增加.结论 局灶性脑缺血可促进缺血区内源性神经保护因子VEGF高表达;通心络可增强和延长缺血区VEGF高表达,发挥对脑缺血的保护作用.
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络气郁滞证大鼠主动脉组织葡萄糖调节蛋白78mRNA表达的研究
目的 观察络气郁滞证大鼠主动脉组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)mRNA表达的变化.方法 20只Wistar大鼠按体重随机分为正常组、络气郁滞组,实验末检测血清同型半胱氨酸(Hcy)、一氧化氮(NO)、血浆内皮素(ET),观察主动脉组织超微结构,以RT-PCR方法检测主动脉组织中GRP78mRNA的表达.结果 与正常组比较,络气郁滞组血清Hcy明显增高.NO明显下降(P<0.05),ET明显升高(P<0.05);主动脉组织超微结构发生明显改变,主动脉组织中GRP78mRNA的表达较正常组比较明显增强(P<0.01).结论 络气郁滞证大鼠的主动脉组织GRP78mRNA表达增强,其血管内皮功能障碍可能与主动脉组织内质网的应激有关.
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益心康对感染柯萨奇病毒B3大鼠体外心肌细胞凋亡相关因子Fas/FasL mRNA表达的影响
目的 探讨益心康对体外感染柯萨奇病毒(CV) B3的新生SD大鼠心肌细胞的保护作用,分析其对细胞凋亡相关因子Fas/FasL mRNA表达的影响.方法 取新生SD大鼠心肌细胞,分成4组.并进行不同干预:正常细胞对照组、病毒对照组给予感染病毒,益心康组感染病毒后加入益心康,利巴韦林组感染病毒后加入利巴韦林.用RT-PCR方法检测各组心肌细胞中Fas及FasL mRNA的表达.结果 益心康组给药48h后细胞内Fas及FasL mRNA的表达较病毒对照组降低,差异有统计学意义(P＜0.05).益心康组及利巴韦林组减轻Fas及FasL mRNA的表达效果差异无统计学意义(P＞0.05).结论 益心康可有效减轻细胞凋亡相关因子Fas/FasL mRNA的表达水平,证实该方有抑制心肌细胞凋亡的作用.
