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HLA-G mRNA差异表达对细胞膜表面HLA-G异构体分子表达的影响
目的 探讨HLA-G异构体(HLA-G1～6)mRNA差异表达对HLA-G分子在细胞表面表达的影响.方法 通过RT-PCR方法分析卵巢癌细胞株HO-8910、H0-8910PM、OVCAR-3,白血病细胞株Jurkat、K562、HL60、MUTZ-1,绒癌细胞株JEG-3、JAR内HLA-G异构体mRNA的表达种类,采用流式细胞术分析上述细胞株细胞表面及细胞内HLA-G分子的分布及表达水平.结果 阳性对照JEG-3细胞内表达HLA-G1～6 mRNA,阴性对照JAR不表达HLA-G1～6 mRNA.HLA-G1 mRNA在HO-8910、HO-8910PM、OVCAR-3、MUTZ-1、Jurkat细胞内表达.除阳性对照JEG-3外,其他细胞均不表达HLA-G2 mRNA;表达HLA-G3 mRNA的细胞有HO-8910、HO-8910PM、K562、HL60、MUTZ-1、OVCAR-3、Jurkat;表达HLA-G4 mRNA的细胞有HO-8910、HO-8910PM、HL60、Jurkat;表达HLA-G5mRNA的细胞为Jurkat.FACS分析显示在JEG-3、HO-8910PM、Jurkat细胞膜表面表达HLA-G分子,而除JAR细胞外,其他细胞内均表达HLA-G分子.结论 HLA-G2、-G3、-G4、-G5、-G6均不能在细胞表面表达,而HIJA-G1分子则能在特定的细胞表面表达.
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类风湿性关节炎造血干/祖细胞Wnt5a、β-catenin基因表达的研究
类风湿性关节炎( rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性破坏性关节炎为主要特征的系统性自身免疫病，其发病机制尚不清楚。近年来发现，RA患者造血干细胞/祖细胞( hematopoietic stem/progenitor cell，HSC/HPC)增殖能力受损，Wnt信号途径是调控HSC/HPC增殖的重要信号途径，可能参与其调节。本研究旨在对RA患者中外周血CD34+ HSC/HPC中Wnt5a、β-catenin mRNA的表达进行研究，了解Wnt信号途径分子基因表达的异常，为认识RA发病机制在HSC/HPC中的异常提供依据。
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实时荧光定量PCR技术检测结核分枝杆菌方法的建立与初步应用
结核分枝杆菌不产外毒素和侵袭性酶,而结核分枝杆菌分泌的蛋白及菌体蛋白在宿主抗结核分枝杆菌的细胞免疫和体液免疫应答中发挥着重要作用.结核分枝杆菌mRNA的半衰期很短(3～5 min),是结核分枝杆菌活菌诊断及检测药物敏感性很好的分子标志.因此通过检测临床上分离的结核分枝杆菌的mRNA可以快速判断是否为致病性结核杆菌及结核分枝杆菌是否为活菌.
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β-catenin在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达
高危型HPV所致尖锐湿疣(condy-loma acuminatum,CA)皮损角质形成细胞的过度增生.可发展为鳞癌或基底细胞癌.β-catenin(β连环素)是环连蛋白家族中的一员,亦是Wnt信号转导系统中的核心蛋白,参与多种细胞的增殖和分化.为探讨β-catenin在尖锐湿疣皮损角质形成细胞过度增生机制中的作用,本研究检测了β-catenin蛋白及β-catenin mRNA在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达情况.
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B7-2和PD-L1 mRNA表达在慢性乙型肝炎免疫耐受中的意义
T淋巴细胞介导的细胞免疫反应是乙型肝炎病毒(HBV)感染的主要免疫反应,而T细胞的活化依赖于双信号的刺激,第一信号来自抗原,第二信号由共刺激分子提供.B7-2(CD86)和PD-L1(B7-H1)是正负共刺激分子的代表,B7-2组成型表达于抗原提呈细胞上,上调速度非常快,迅速促进T细胞的分化和产生效应[1];PD-L1被广泛地诱导性表达在身体各器官组织中,对免疫应答起负性调控作用,减弱T细胞的免疫应答,是诱导免疫耐受和T细胞凋亡的主要共刺激分子[2].
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原发性肝癌患者CXCR1、CXCR2及CXCL8的表达及其临床意义
目的 通过检测原发性肝癌(primary hepatocellular carcinoma, PHC)患者外周血单个核细胞及肝活检组织CXC趋化因子受体1(CXCR1)、CXCR2及CXC趋化因子配体8(CXCL8)表达,探讨其在PHC中的临床意义.方法 抽取36例临床确诊PHC患者、30例肝硬化患者及28例健康体检者血液,用实时荧光定量PCR法检测PBMCs中CXCR1、CXCR2及CXCL8 mRNA水平,分析CXCR1、CXCR2及CXCL8水平与PHC患者临床病理特征及预后的关系;SP法检测肝组织CXCR1、CXCR2及CXCL8蛋白表达水平;化学发光免疫分析法检测受试者血清C反应蛋白(CRP)、甲胎蛋白(AFP)及铁蛋白(FER)水平,并对各指标进行相关性分析.结果 PHC组PBMCs内CXCR1、CXCR2及CXCL8 mRNA均明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组CXCR1、CXCR2及CXCL8 mRNA结果均高于肝硬化组,且差异有统计学意义(P<0.05).PHC组CXCR1、CXCR2及CXCL8分别与肿瘤浸润深度、有无淋巴结转移或远处转移、TNM分期及血清CRP、AFP及FER水平有关(P<0.05),其他指标之间无相关关系.SP结果提示,PHC组CXCR1、CXCR2及CXCL8蛋白水平也较对照组升高.结论 PHC患者PBMCs及肝活检组织CXCR1、CXCR2及CXCL8表达明显升高,且与血清CRP、AFP及FER呈正相关,推测CXCR1、CXCR2及CXCL8介导的信号转导过程可能在原发性肝癌发生发展中发挥重要作用,为肝癌免疫干扰治疗提供新的靶点.
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荧光定量-逆转录-聚合酶链反应测定IL-2mRNA和IL-4 mRNA方法的建立及其应用
目的建立荧光定量-逆转录-聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)测定TH细胞中IL-2 mRNA和IL-4 mRNA方法,并作临床初步应用.方法制备IL-2 cDNA和IL-4 cDNA,分别构建含有人IL-2基因和IL-4基因片段的pMD18-T质粒,克隆后作为定量阳性模板;设计和制备用于FQ-RT-PCR的引物和FAM、TAMRA标记的探针,优化实验条件,建立FQ-RT-PCR方法;用固相单抗方法从健康人、妇科良性疾患和恶性肿瘤患者以及慢性肾功能衰竭(CRF)患者PBMC中富集CD4(TH)细胞,经PMA和calcium ionophore诱导,提取总RNA,继用所建FQ-RT-PCR方法,作IL-2 mRNA和IL-4 mRNA定量测定.实验设β-actin为内控基因以监测RNA的质量.结果根据系列模板浓度的对数与CT值作直线回归建立标准曲线,线性范围为102～107copies/μl;不精密度试验显示,高值样品的批内、批间CV分别为7.8%和12.5%,低值样品的批内、批间CV分别为10.8%和19.5%;妇科恶性肿瘤患者与健康对照组和妇科良性疾患组比较,CRF患者与健康对照组比较,IL-2 mRNA表达均显著降低,IL-4 mRNA表达均显著升高(P＜0.001).结论用所建立的FQ-RT-PCR法可对TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA作定量测定,方法简便、敏感、准确;妇科恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞内IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达有明显的极化现象,呈TH2反应,提示恶性肿瘤患者和CRF患者TH细胞功能处于失衡状态.可通过改善和调整TH细胞的失衡提高恶性肿瘤患者的免疫监视功能和纠正CRF患者免疫紊乱.
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解剖性肝切除术对肝癌患者的疗效及对MAGE-1、AFP mRNA水平的影响
目的 探讨解剖性肝切除术对肝癌患者外周血黑色素瘤抗原-l(MAGE-l)mRNA、甲胎蛋白(AFP)mRNA的影响及临床疗效.方法 回顾性选取2013年3月至2015年6月治疗的原发性肝细胞癌患者117例,根据患者终选取的手术方式分为观察组(n=69)和对照组(n=48).观察组采用解剖性肝切除术,对照组给予非解剖性肝切除术.观察两组手术情况,术前、术后7 d的丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、胆碱酯酶(CHE),以及术前、术后28d外周MAGE-1mRNA和AFP mRNA变化,随访观察患者总体生存时间和无进展生存期.结果 观察组手术时间和切缘有效率明显高于对照组(P＜0.05);观察组术后7 d ALT和AST水平明显低于对照组(P＜0.05);观察组和对照组术后7 dTBIL和CHE比较,差异无统计学意义(P＞0.05);观察组术后28d MAGE-1mRNA和AFP mRNA阳性率明显低于对照组(P＜0.05);观察组中位总体生存时间和中位无进展生存期也明显高于对照组(P＜0.05).结论 解剖性肝切除术有较好的临床效果,可改善肝功能,降低外周血MAGE-1mRNA和AFP mRNA表达,改善患者预后.
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CD14 mRNA和TLR4 mRNA表达与帕金森综合征的关系
目的 探讨外周血单核细胞CD14和toll样受体(TLR4)mRNA的表达与帕金森综合征(PD)的关系.方法 前瞻性选取2016年1月至2017年12月在北京潞河医院治疗的PD患者80例,同时选取健康志愿者80例作为对照组.采用RT-PCR技术检测CD14mRNA和TLRmRNA表达,同时分析CD14mRNA和TLR4mRNA表达与PD患者临床特征的关系,CD14mRNA和TLRmRNA表达的相关性.结果 PD组CD14mRNA和TLRmRNA相对表达量分别为(1.522±0.344)和(1.417±0.401),明显高于对照组(P＜0.05);H-Y分期＞2.5期患者CD14mRNA和 TLR4mRNA相对表达量分别为(1.843±0.312)和(1.722±0.422),明显高于H-Y分期≦2.5期患者(P＜0.05);CD14mRNA和TLR4mRNA相对表达量与PD患者性别、年龄、病程、运动并发症、服用受体激动剂和左旋多巴类药物无关(P＞0.05);CD14mRNA和TLRmRNA相对表达量呈正相关(P＜0.05).结论 CD14mRNA和TLR4mRNA表达与PD患者疾病严重程度有一定关系,提示机体固有免疫可能参与了 PD的发生发展.
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CK19 mRNA和CK20 mRNA检测对腹腔镜胃癌根治术的意义
目的 分别检测腹腔镜及开腹胃癌根治术患者外周静脉血细胞角蛋白19(CK19)和细胞角蛋白20(CK20)的mRNA表达,并探讨其临床意义.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测45例腹腔镜下胃癌根治术和39例开腹胃癌根治术患者外周静脉血的CK19 mRNA、CK20 mRNA的表达.结果 腹腔镜胃癌根治术患者CK19 mRNA开始时阳性率与结束时阳性率之间比较差异无显著性(P>0.05);开腹组CK19 mRNA阳性率手术前后差异无显著性(P>0.05).腹腔镜胃癌根治术患者CK20 mRNA开始时阳性率与手术结束时之间比较无显著性差异(P>0.05).开腹组CK20 mRNA阳性率手术前后相比差异无显著(P>0.05).结论 通过胃癌微转移指标的联合检测,可以得出初步结论:腹腔镜胃癌手术不增加肿瘤术后微转的机会,进而促进胃癌的复发和转移.
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CK19 mRNA和CK20 mRNA检测对腹腔镜胃癌根治术的意义
目的 分别检测腹腔镜及开腹胃癌根治术患者外周静脉血细胞角蛋白19(CK19)和细胞角蛋白20(CK20)的mRNA表达,并探讨其临床意义.方法 应用荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法检测45例腹腔镜下胃癌根治术和39例开腹胃癌根治术患者外周静脉血的CK19 mRNA、CK20 mRNA的表达.结果 腹腔镜胃癌根治术患者CK19 mRNA开始时阳性率与结束时阳性率之间比较差异无显著性(P>0.05);开腹组CK19 mRNA阳性率手术前后差异无显著性(P>0.05).腹腔镜胃癌根治术患者CK20 mRNA开始时阳性率与手术结束时之间比较无显著性差异(P>0.05).开腹组CK20 mRNA阳性率手术前后相比差异无显著(P>0.05).结论 通过胃癌微转移指标的联合检测,可以得出初步结论:腹腔镜胃癌手术不增加肿瘤术后微转的机会,进而促进胃癌的复发和转移.
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JAK2 V617F点突变的研究进展及其与ETS2 mRNA表达的相关性
慢性骨髓增殖性疾病(cMPDS)是一组造血干细胞克隆性疾病,在骨髓细胞普遍增生的基础上,某一个系列细胞增生尤其突出,呈持续不断的过度增殖.世界卫生组织(WHO)新关于 cMPDs 分类包括如下7 类:慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性中性粒细胞白血病(CNL)、嗜酸细胞性白血病(CEL)和高嗜酸细胞综合征(HES)、真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(IMF)、原发性血小板增多症(ET)和 CMPD(不能分类型)[1].
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脓毒症患者全血中钙结合蛋白S100A12的基因表达水平研究
目的 检测脓毒症患者全血中钙结合蛋白S100A12的基因表达情况,并将其与炎症反应性疾病的其他炎性指标进行比较,探讨其是否可以作为脓毒症患者诊断的另一种新的指示蛋白.方法 实时定量PCR方法检测脓毒症患者44例,以及10例健康人全血中S100A12基因mRNA表达水平,运用2-ΔΔCT算法计算相对表达量,并将S100A12的基因表达水平与白细胞、中性粒细胞绝对值、C反应蛋白、降钙素原水平进行相关性分析.结果 在44例脓毒症患者中有15例患者全血中S100A12的基因表达水平升高,高表达率为34.09%;29例病人S100A12的基因表达呈低表达水平,低表达率为65.91%;S100A12的基因表达水平与白细胞、中性粒细胞绝对值、C反应蛋白、降钙素原水平经相关性分析结果显示P值均大于0.05,差异无统计学意义.结论 尚不能认为在脓毒症患者全血中S100A12普遍呈高表达状态,暂不能将其作为脓毒症的另一种新的指示蛋白.
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结直肠癌中MMP-26 mRNA及蛋白的表达及其与临床病理特征关系的分析
目的:探讨结直肠癌患者基质金属蛋白酶-26(MMP-26)mRNA和蛋白质的表达及其与临床病理的关系.方法:采用RT-PCR及Western Blot法检测MMP-26在31份结直肠癌及31份癌旁正常组织样本中的表达水平并比较,采用免疫组化MaxVision法检测74份结直肠癌和65份癌旁正常组织中MMP-26的表达情况并比较,分析MMP-26表达水平与临床病理的关系.结果:31份结直肠癌样本中,有20份(64.52％)样本的MMP-26 mRNA表达明显高于癌旁正常组织,有21份(67.74％)MMP-26蛋白质表达水平明显高于癌旁正常组织.免疫组化结果显示,MMP-26在癌组织中阳性表达率为63.51％(47/74),明显高于癌旁正常组织26.15％(17/65),差异有统计学意义(P<0.05);MMP-26蛋白质表达水平与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小及分化程度均无相关性.结论:MMP-26在结直肠癌组织中呈高表达,且与临床病理特征相关,其可能在癌细胞浸润转移中发挥促进作用,可作为判断结直肠癌进展及预后的重要标记物.
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强直性脊柱炎患者白细胞介素-12、白细胞介素-17分子水平及其在外周血单个核细胞mRNA的表达及机制分析
目的 研究强直性脊柱炎(AS)患者白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-17(IL-17)分子水平及其在外周血单个核细胞mRNA的表达及机制.方法 选择2014年6月-2015年6月该院接诊的35例强直性脊柱炎患者进行研究.并选择30例健康体检人员作为对照组进行研究.采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR法)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测患者的IL-12、IL-17分子水平及其在外周血单个核细胞(PBMCs)mRNA的表达情况,并分析致病机制.结果 病例组的IL-12、IL-17分子水平均明显低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);病例组患者IL-12、IL-17分子在PBMCs中的mRNA表达水平明显高于对照组,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05).不同分期强直性脊柱炎患者的IL-12、IL-17分子水平及mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),IL-12和IL-17分子表达水平呈正相关性(P＜0.01);IL-12mRNA、IL-17mRNA表达水平呈正相关性(P＜0.05).结论 强直性脊柱炎患者的IL-12、IL-17分子水平密切相关,且与患者发病机制相关.
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巨细胞病毒即刻早期基因mRNA检测方法的建立
目的建立快速简便的逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测人巨细胞病毒(HCMV)即刻早期(IE)基因mRNA.方法设计合成跨越HCMV IE基因内含子区的一对引物,分别用RT-PCR和PCR技术扩增HCMV mRNA和DNA,用Southern杂交鉴定阳性产物.结果 HCMV IE基因mRNA表达在感染后6小时即可出现,并持续到感染后至少96小时,RT-PCR检测的低敏感性为100 fg总RNA,其他病毒和细胞RNA不能被扩增.结论 RT-PCR技术检测HCMV mRNA敏感、特异,有望应用于临床作为HCMV活动性感染的早期诊断方法.
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微小RNA在免疫系统中作用机制的研究进展
miR作为一类内源性短序列[约21 ～25核苷酸(nt)]非编码的RNA,作用于基因的转录后水平,通过与mRNA的3’端非翻译区的特异性结合达到间接抑制翻译或直接降解mRNA的目的,进而参与调控机体细胞的增殖、分化、代谢、凋亡等生物学活动[1].近年研究发现,在免疫系统中,miR 对免疫细胞的生长、发育以及免疫功能的发挥都有着重要的作用.但是,目前对二者的具体关系尚未完全明确.我们对当前二者关系的研究阐述如下.
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肾性高血压大鼠心房肌电重构相关离子通道的mRNA的变化
目的利用"2肾1夹"型Goldblatt高血压大鼠模型,观察在高血压形成过程中与心房肌电重构相关的离子通道mRNA的变化,探讨其意义.方法 Sprague-Dawley大鼠,高血压组用U型银夹夹住左肾动脉近心端,右肾保留;假手术组只分离左肾动脉,不夹银夹.套尾法监测尾动脉血压,分别于手术后2、4、6 w处死动物(各6只),TRIZOL提取左右心耳总mRNA,RT-PCR半定量分析Na+通道α亚单位(Na+-α)、L型钙通道α1C亚单位(CaL-α1C)和瞬时外向钾通道(Kv4.3)mRNA的表达量(以GAPDH为内参照).结果在高血压形成过程中,左心耳CaL-α1C的mRNA水平在2 w和4 w明显增高,分别是假手术组的2.5倍和2.4倍(P<0.001),6 w恢复正常,右心耳在2 w和4 w无明显变化,6 w为假手术组的2.5倍(P<0.001);左心耳Kv 4.3的mRNA水平在4 w和6 w分别是假手术组的1.9倍和1.7倍(P<0.001),在右心耳却呈下降趋势,4 w和6 w分别降低了30%(P<0.05)和20%(P=0.10);Na+-α的mRNA在左右房无明显变化.结论肾性高血压大鼠在高血压形成过程中,心房肌CaL-α1C的mRNA水平表现为上调,左房明显早于右房,左右房Na-α和Kv 4.3的mRNA变化明显不平行;提示mRNA水平的变化是电重构的基础,并可能进一步导致心律失常的发生.
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中国人肠上皮细胞γ射线损伤的差异表达基因
小、肠是电离辐射的敏感组织.γ射线照射后小肠上皮干细胞的损伤,肠道组织形态和生理功能改变的文献报道较多[1],但肠道辐射损伤分子机制的研究尚未见报道.我们采用mRNA差异展示技术,分离正常的和经60Coγ射线照射的人肠上皮细胞株HIEC细胞的差异表达基因,拟从分子水平探讨电离辐射对人肠上皮细胞损伤的分子机制,为建立辐射损伤的分子诊断标准打下基础.
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人胰腺癌中bcl-2基因和蛋白的过度表达
目的分析胰腺癌中bcl-2基因的mRNA转录和蛋白翻译,探讨其在胰腺癌发生、发展中的作用.方法以50例胰腺癌组织、15例胰腺癌转移灶组织和10例慢性胰腺炎为研究对象,采用免疫组织化学(SP法)和原位分子杂交法检测bcl-2的表达.结果 Bcl-2蛋白表达与患者年龄、性别、TNM分期无关,与肿瘤分化程度、有无转移病灶有关.在胰腺癌组织中的表达低于胰腺炎组织,但明显高于转移灶.免疫组织化学与原位杂交技术检测胰腺癌组织中的bcl-2基因表达结果一致.结论 Bcl-2蛋白可能作用于胰腺细胞的癌变阶段,并与胰腺导管上皮癌变有关;bcl-2基因在mRNA和蛋白水平表达是相对稳定的.
