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风疹病毒E1包膜糖蛋白的结构与功能研究进展
风疹病毒(RV)是致人类先天性畸形的重要病原体之一.其E1包膜糖蛋白在病毒感染及诱导机体免疫反应中起重要作用.对其氨基酸和核苷酸序列结构与蛋白功能的深入研究有助于我们理解RV产生免疫的机理,以研制亚单位疫苗、多肽疫苗等新型疫苗.本文对RVE1糖蛋白结构与功能关系的研究进展进行了综述.
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柯萨奇B组病毒致病的分子生物学机制
本文对柯萨奇B组病毒(CVB)致病性与抗原性的近期研究内容进行了复习.CVB的每个血清型存在多种毒株,病毒基因组编码区与非编码区核苷酸决定CVB的致病力.心肌球蛋白的氨基酸序列与疾病的发生有关联.T细胞基因在CVB致病及CVB蛋白2PC在CVB性自身免疫反应中均有重要地位.
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2003年美国宾夕法尼亚甲型肝炎暴发
宾夕法尼亚卫生部和CDC正在对宾夕法尼亚州Monaca一餐厅(餐厅A)顾客中的甲型肝炎暴发进行调查.到11月20日,共识别出大约555名甲肝病人,其中至少包括13名餐厅A的食品服务人员和75名在餐厅A就餐的其他6个州的人员.3人死亡.对从3名甲肝病人获得的RNA病毒340核苷酸区的初步基因序列分析表明3株病毒基因序列完全相同.初步的病例对照分析认为青洋葱是此次暴发的传染源.
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我国狂犬病病毒及其传播流行规律
狂犬病病毒为单股不分节段的负链RNA病毒,病毒基因组由11928-11932个核苷酸组成,依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病病毒的结构基因,其长度分别为1 424、991、805、1675、6475个核苷酸,分别编码核蛋白(NP)、磷蛋白(NSP)、基质蛋白(MP)、糖蛋白(GP)和转录酶大蛋白(LP).
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泌阳花菇俏四方
俗话说,金菇、银菇不如泌阳花菇。河南泌阳花菇以其朵圆、肉厚、质细、色白、爆花自然、外形美观、口感脆嫩爽滑、味道鲜美等特质而被誉为“菇中之皇”。
花菇是香菇子实体生长过程中,在特定的环境条件下形成的一种特殊的畸形菇,是香菇的极品。同时,花菇还是一种药用菌。据《河南大型真菌》记载:“花菇药能益气、治风破血、化痰理气、益味助食”。花菇的抗病、治病、保健功能在元代著名中医吴瑞所著《日用本草》中已有确切记述:花菇含有水溶性鲜味物质,其主要成分为核苷酸,可用作食品调味品。 -
RDPCR检测DNA损伤定位于核苷酸水平的研究
目的 简化RDPCR建立程序,并在核酸序列水平精确定位DNA损伤. 方法 培养TK6细胞,抽提基因组DNA,制备k-ras基因外显子2的单链探针.扩增k-ras基因外显子2(以下称短片段).酶切短片段和基因组DNA构建损伤模型,前者经依赖随机化末端连接物PCR(RDPCR)扩增,每一步产物作凝胶电泳,终产物与单链探针杂交显色,并进行测序;后者以短片段建立的实验条件进行RDPCR扩增,产物与单链探针杂交显色,并进行测序. 结果 凝胶电泳可见酶切短片段在RDPCR中每一步骤的目的 产物条带;酶切短片段和酶切基因组DNA的RDPCR产物均在相应位置出现杂交条带,测序证实损伤均位于Hinfl在k-ras外显子2上的酶切位点. 结论 短片段建立RDPCR的实验条件简单易行;并首次利用RDPCR检测DNA损伤精确定位于核酸序列水平的碱基位置.
关键词: 依赖随机化末端连接物PCR DNA损伤 定位检测 核苷酸 -
超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定乳粉类产品中核苷和核苷酸的含量
目的 建立超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法测定乳粉类产品中5种核苷(腺嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷、胞嘧啶核苷、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷)和5种核苷酸(胞嘧啶核苷酸、尿嘧啶核苷酸,腺嘌呤核苷酸、次黄嘌呤核苷酸和鸟嘌呤核苷酸)含量的方法.方法 样品用温水溶解,经25%乙酸溶液沉淀蛋白后离心,使用T3柱(2.1 mm×100 mm,1.8 μm)为分析柱,以0.1%甲酸水溶液和0.1%甲酸乙腈溶液作为流动相,梯度洗脱分离.质谱采用正离子模式,多反应监测模式进行检测,用外标法定量.结果 5种核苷和5种核苷酸在10 min内达到基线分离.次黄嘌呤核苷酸、鸟嘌呤核苷酸在10~1000 ng/mL浓度范围内,其余检测物在5~1000 ng/mL浓度范围内线性关系良好.方法检出限为0.002~0.150 mg/kg,加标回收率为89%~121%,相对标准偏差为0.91% ~8.84% (n =6).结论 该方法快速准确、灵敏度高、前处理简单,能够快速测定婴幼儿配方奶粉中5种核苷和5种核苷酸的含量.
关键词: 核苷 核苷酸 奶粉 超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱 食品检测 -
山东出入境人员丙型肝炎病毒核苷酸序列分析
[目的]探讨山东出入境人员中丙型肝炎感染的流行病学情况以及病毒的基因型.[方法]应用ELISA方法对2004~2005年在山东国际旅行卫生保健中心体检的出入境人员进行丙型肝炎血清学检测,HCV抗体阳性血清标本进一步应用逆转录套式PCR(RT-nested-PCR)方法扩增出HCV NS5B区基因片断(319bp).通过对扩增产物的双向测序,应用DNAssist分析软件进行排列比较;应用BLAST与Genebank中HCV各型分离株序列进行比较;并应用phlip3.65软件绘制系统发生树.[结果]①血清学方法共检测出42份HCV抗体阳性血清标本;②RT-nested-PCR检出11份NS5B区特异性扩增片段阳性;③所得11份标本与Genebank中HCV1b型同源,系统发生树也同样显示11份标本均为HCV1b型.[结论]本研究首次证明山东出入境人员中HCV流行株为1b型,为加强HCV流行病学研究与传染病的防治提供了理论依据.
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南方五省口岸蚊类携带虫媒病毒调查
[目的]掌握南方口岸蚊媒携带病毒的本底资料,为蚊传疾病的预防控制工作提供依据.[方法]采用电动吸蚊器人工法和捕蚊磁场自动法采集南方5省口岸各类蚊虫.采集到的蚊类超低温送至实验室,研磨处理后用荧光PCR方法检测登革病毒、乙脑病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等重要蚊媒病毒,结果阳性的标本进一步进行PCR扩增和核苷酸序列测定分析;蚊标本研磨液同时用C6/36细胞进行虫媒病毒分离培养,出现细胞病变后分别用黄病毒科、甲病毒科各自的通用引物进行鉴定;对未能鉴定的未知病毒进一步用随机PCR方法进行扩增、克隆、序列测定、Blast搜索.[结果]从南方5省口岸采集到各类蚊虫12575只,鉴定后共分成254组.各组标本经荧光PCR方法检测,结果登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒均为阴性;检测到2份福建省来源三带喙库蚊的标本乙脑病毒核酸阳性,经乙脑病毒E基因引物PCR扩增、测序分析证实为G Ⅰ型病毒.254份标本经C6/36细胞分离培养出现42份细胞病变,用黄病毒科、甲病毒通用引物PCR扩增,均未得到特异片段.选取1份典型病变的细胞培养物进行随机PCR鉴定,结果发现了1种潜伏于C6/36细胞中的浓核病毒.[结论]南方5省口岸蚊媒中可能未携带登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、基孔肯雅病毒等重要蚊媒病毒,只有少量蚊虫携带乙脑病毒,蚊虫体内检测到的G Ⅰ型乙脑病毒属于福建省首次发现,出现病变的C6/36细胞可能是由自身潜伏的1种C6/36细胞浓核病毒引起.
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ARHI抑癌基因与肿瘤关系的进展
一、ARHI基因结构和功能肿瘤抑制基因ARHI(aplysia ras homo log 1),又名NO-EY2或ras同源基因家族成员Ⅰ(ras homolog gene,member Ⅰ)或DIRAS3.ARHI是一个印迹基因,人ARHI基因定位于1p 31,总长约为8kb,由2个外显子和1个内含子组成.外显子Ⅰ为81个未编码的核苷酸,外显子Ⅱ则包括整个蛋白质的编码区[1].
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单管多重PCR体系检测缺失型α地中海贫血
α-地中海贫血(简称"α-地贫")是常见的遗传性疾病之一.广东省普查资料表明[1],α-地贫杂合子发生率为7.3 %,广西壮族自治区和海南省的发生率更高.其基因突变具有高度的异质性,主要为α-珠蛋白基因大片段缺失(缺失型),少数为碱基替代,几个核苷酸缺失或插入(非缺失型)[2],常见的3种缺失型α地贫分别是东南亚缺失型(--SEA)、右缺失型(-3.7)和左缺失型(-4.2).东南亚缺失型自身组合或与左、右缺失型相互组合可分别产生致死性的Hb Barts水肿胎和严重影响生存质量的HbH病[3].
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microRNA在酒精毒性机制中作用及叶酸保护机制的研究
MicroRNAs(miRNAs)是一种由22个核苷酸组成的小的非编码的RNAs,序列特异性的靶向结合并调节mRNAs的表达.miRNAs调节的靶基因广泛涉及到发育、细胞增生、凋亡、和肿瘤基因.
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口服核苷酸降血脂作用的实验研究
目的 研究口服核苷酸对实验性高脂血症大鼠血脂水平的影响.方法 选用60只健康雄性SD大鼠分成正常对照、高脂模型对照和0.04,0.16,0.64g/kg体重核苷酸组,正常对照组大鼠饲喂普通饲料,高脂模型和核苷酸组大鼠饲喂高脂饲料.核苷酸组大鼠以灌胃方式给予不同剂量的核苷酸(1 ml/100 g)45 d,测定血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇含量.结果 摄入核苷酸45 d后,0.04,0.16,0.64 g/kg体重组大鼠血清总胆固醇(TC)分别为(3.14±1.45),(3.65±1.58),(3.14±1.70)mmol/L,0.04g/kg体重组及0.64 g/kg体重组与高脂模型对照组(4.26±1.96)mmol/L相比显著降低;甘油三酯(TG)含量分别为(0.93±0.53),(0.93±0.44),(0.72±0.38)mmol/L,0.64 g/kg体重组与高脂模型对照组[(1.29±0.49)mmol/L]相比显著降低;高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)分别为(1.19±0.31),(1.22±0.31),(1.26±0.36)mmol/L,与高脂模型对照组[(1.09±0.16)mmol/L]相比差异无统计学意义.结论 口服核苷酸具有一定的辅助降血脂功能,并提示其对动脉粥样硬化的发生具有一定的预防作用.
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葛根素、核苷酸合剂对小鼠免疫功能的影响
目的观察葛根素、核苷酸合剂对小鼠免疫功能的影响.方法经口连续灌胃30d,测定小鼠脏器/体重比值、细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能.结果各剂量组小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无影响;小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能测定结果为阳性.结论葛根素、核苷酸合剂具有增强小鼠免疫功能的作用.
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60例丙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒RNA的基因分析
丙型肝炎(丙肝)病毒(HCV)全基因或片段基因克隆的序列分析,据国内外报道证实至少存在12种基因型,不同国家地区核苷酸有很大差异.目前日本和美国已分离出4种基因型,美国以Ⅰ型为主,日本以Ⅱ型为主,中国是Ⅱ、Ⅲ型,其次是Ⅱ/Ⅲ混合型.不同基因型的HCV致病性及对干扰素治疗反应不同.我们对克拉玛依地区慢性丙肝患者血清HCV RNA进行基因分型的检测,了解该地区HCV基因型分布情况,指导治疗及判断预后.
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中国地区丙型肝炎病毒的NS5A基因序列及干扰素敏感决定区特征分析
丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)NS5A基因编码的ISDR、PKRBD和V3等区域氨基酸序列的变异与HCV对干扰素-α( interferon-α,IFN-α)治疗的不同反应性有关[1-6],了解NS5A基因的序列特征及干扰素敏感决定区(IFN Sensitivity Determining Region,ISDR)的氨基酸序列有助于进一步研究中国地区HCV的致病性及HCV相关肝炎的药物治疗与预后.笔者选取了美国国立生物技术信息中心数据库(NCBI)中发表的中国地区HCV多聚蛋白的核苷酸和氨基酸序列及NS5A蛋白的部分氨基酸片段,对NS5A基因序列及ISDR氨基酸序列进行多序列比对、聚类分析、相似性分析及氨基酸变异位点分析,分析中国地区HCV的NS5A基因序列及ISDR特征,现将结果报道如下.
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基因组时代生物标志物研究的机遇与挑战
20世纪50年代,DNA双螺旋结构模型的建立标志着人类发现了生命的基本信息.20世纪70年代,遗传工程技术的发展使之趋于成熟,20世纪90年代开始,人类基因组计划把生命科学带入了新的世纪.人类基因组计划的任务是测定人类基因组的30亿个核苷酸序列结构,为阐明人类基因的结构与功能,解读人类遗传信息奠定基础.在此基础上的后基因组学研究要解决的课题是全面系统地分析基因功能,在整体水平上阐述基因活动规律 [1].
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miRNA通过信号通路对中药抗癌作用及肿瘤细胞增殖凋亡的影响
微小RNA(microRNAs,miRNA)是真核生物中广泛存在的一种长约22个核苷酸的非编码RNA分子,其与靶基因mRNA通过碱基不完全的互补结合,使靶mRNA降解或翻译抑制而发挥负调控基因表达作用,从而广泛参与机体的病理生理过程。目前,人类基因组中已确认的miRNA已达2578个(miRNA base release 20.0),估计至少有60%编码蛋白的基因上存在miRNA作用的靶点上[1]。研究提示,肿瘤组织中异常表达的miRNA,与肿瘤的发生、发展和耐药等有密切关系。近些年,从miRNA为切入点对肿瘤的研究引起了广泛关注。目前中药对降低肿瘤患者化疗的毒副作用,提高化疗效果发挥重要作用,但从miRNA方面研究中药抗癌作用的机制较少。本文概述了近年来miRNA 通过各种信号通路对肿瘤细胞增殖凋亡影响以及中药抗癌作用相关miRNA的研究,归纳如下。
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中医阴阳理论用于基因组研究的可行性探讨
生物的遗传物质核糖核酸/脱氧核糖核酸(RNA/DNA)由核苷酸组成.不同的核苷酸按所含碱基的不同分为4种,这些碱基为腺嘌呤(adenine,A)、鸟嘌呤(guanine,G)、胞嘧啶(cytosine,C)和胸腺嘧啶(thymine,T,为DNA特有)或尿嘧啶(uracil,U,为RNA特有).通常人们用碱基名称来区别核苷酸种类.
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猪生殖与呼吸综合征病毒的基因组及致病的分子基础
猪生殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)以引起母猪的生殖障碍及仔猪的呼吸道症状为特征.PRRSV 属于尼多病毒目、动脉炎病毒属.PRRSV的基因组为一单股正链RNA分子,由大约15 000个核苷酸组成,含有8个开放性阅读框架(ORFs),其线性排列顺序为5′-NCR-ORF1a/1b-ORF2-GP3-GP4-GP5-M-N-NCR-3′.大量研究表明PRRSV基因组的结构特征、表达模式及与宿主的相互作用构成了PRRSV致病的分子基础,系统了解该方面的研究进展对开展PRRSV致病机理和新型疫苗等方面的研究将有所帮助.