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我国狂犬病病毒及其传播流行规律
狂犬病病毒为单股不分节段的负链RNA病毒,病毒基因组由11928-11932个核苷酸组成,依次排列着N、P、M、G和L5个狂犬病病毒的结构基因,其长度分别为1 424、991、805、1675、6475个核苷酸,分别编码核蛋白(NP)、磷蛋白(NSP)、基质蛋白(MP)、糖蛋白(GP)和转录酶大蛋白(LP).
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狂犬病病毒M蛋白在杆状病毒中的表达、纯化及多克隆抗体的制备
为表达狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)基质蛋白(M)蛋白,进而制备多克隆抗体.本研究以狂犬病病毒BD06株RNA为模版,通过RT PCR扩增M蛋白基因全序列,将其插入质粒pFastbac Ⅰ中,获取的重组质粒pFastbac Ⅰ-M,经酶切鉴定后,转化到DH10Bac E.coli感受态中,以获取重组穿梭质粒Bacmid-M.用lipofectamine2000介导Bacmid-M转染Sf9细胞获取重组杆状病毒AcMNPV-M.用抗His标签的单体、犬抗RV阳性血清及兔抗RV阳性血清通过Western-Blot鉴定重组蛋白的表达及其反应原性.用镍离子亲和层析柱纯化重组蛋白,并免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体,用Western-Blot和FAVN试验鉴定多克隆抗体的反应原性及其病毒中和效价.结果表明:(1)利用杆状病毒表达系统成功的表达了大小约为25 kD的重组M蛋白;(2)重组M蛋白具有良好的免疫原性和反应原性;(3)制备的多克隆抗体与狂犬病病毒BD06、SRV 9、CVS-24、ERA、PV 2061及aG株的M蛋白均能发生特异性反应,但其无病毒中和能力.本研究完成了重组M蛋白的表达、纯化并制备了其多克隆抗体,为进一步研究M蛋白的生物学功能奠定了物质基础.
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2009~2013年杭州地区甲型流感病毒基质蛋白基因的遗传进化分析
为调查2009年至2013年杭州地区甲型流感病毒基质蛋白基因(Matrix protein,M)的遗传进化特征,本文对5个连续的流行季中A(H1N1) pdm09亚型和季节性A(H3N2)亚型流行株的M基因序列进行了深入的研究分析.从两家当地三级甲等医院发热门诊室共收集5675份流感样病例样本.利用病毒分离与实时荧光定量PCR法对样本内所含病毒进行鉴定,发现流感病毒阳性率为20.46%,其中甲型流感病毒872株.从5个流行季的9个时间段内,随机选取了76株甲型流感病毒进行M基因全序列测定和遗传进化分析.研究发现,杭州地区甲型流感病毒烷胺类耐药相关位点M2蛋白的S31N突变率接近100%.两株A(H1N1)pdm09本地流行株还发生了V27A/S31N或V27I/S31N双位点耐药突变.另外,在一株季节性A(H3N2)亚型流行株上还观察到R45H/S31N双位点耐药突变.基于M基因序列进行系统发育分析发现,无论是病毒亚型间还是各流行季间,M基因进化速率明显低于血凝素蛋白基因(Haemagglutinin,HA)和神经胺酸酶蛋白基因(Neuraminidase,NA).对M1和M2蛋白的变异进行正向选择压力分析发现,M2蛋白的编码区所受到的选择压力要远远高于M1蛋白,且A(H1N1) pdm09亚型流行株所受到的选择压力要高于季节性A(H3N2)亚型.甲型流感病毒M基因的遗传进化研究对判断病毒的进化方向、预防和控制病毒的暴发流行具有重要的参考价值.
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A型流感病毒M2蛋白疫苗的研究进展
目前用于免疫人群的流感疫苗多为三价灭活疫苗,包含A型流感病毒H1N1亚型、H3N2亚型和B型流感病毒.多年来的实践表明,三价灭活疫苗是有一定保护效果的.但是,由于流感病毒血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)经常发生抗原转变和抗原漂移,使其抗原性表现出很大的变异,所以根据流感疫情监测预测的疫苗株也很难产生理想的保护效果.但流感病毒基质蛋白M2的膜外区氨基酸序列高度保守,有可能发展成为具有交叉保护能力的流感疫苗的候选抗原.该文就A型流感病毒基质蛋白M2疫苗的研究作一综述.
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流感/禽流感病毒致病性研究进展
流感病毒是引起流行性感冒的病原体,它属正粘病毒科(Orthomyxoviridae),是具有包膜和分节段的单链负RNA病毒.甲、乙型流感病毒基因组均含8个节段,而丙型流感病毒仅含7个节段.根据流感病毒核蛋白(NP)和基质蛋白(MP)抗原特性及其基因特征的不同,流感病毒分为甲(A)、乙(B)、丙(C)三型.
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流感病毒A非结构蛋白功能的研究进展
流感病毒属正粘病毒科(Orthomyxoviridae),是一种带包膜并且分节段的单负链RNA病毒.根据病毒核农壳蛋白(Nucleocapsid)和基质蛋白(Matrix,M)抗原性的差异,流感病毒可分为甲、乙、丙3个型.甲型流感病毒呈球形或
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肿瘤相关胰蛋白酶原-2的研究进展
胰蛋白酶原-2(trypsinogen-2,T-2)是一种丝氨酸蛋白酶,由于它和肿瘤有密切关系,故又称为肿瘤相关胰蛋白酶原-2(TAT-2).TAT-2特征:(1)很多肿瘤细胞株和人体肿瘤均表达TAT-2,在临床上有辅助诊断的意义;(2)它与肿瘤的侵袭和播散机制有关,因为TAT-2可直接或间接地引起肿瘤周围基质蛋白的水解而形成肿瘤的侵袭;(3)TAT-2抑制剂(TATI)可抑制肿瘤侵袭;(4)TAT-2多产生于胰腺外的器官或组织.另外,T-2为急性胰腺炎的诊断指标,临床上应意鉴别.
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外周血中一种分泌胶原的新型细胞--循环成纤维细胞
由于"循环成纤维细胞"(circulating fibrocytes)在组织损伤、修复重建和基因治疗中的重要功能,自2004年首次命名以来深受人们的关注[1].其实这种细胞早在1994年就被人们发现、分离和鉴定[2].在研究组织创伤修复过程中发现和确认了一种纤维细胞(fibrocytes),并且基于它们的生长特点和独特的细胞膜表型给它们定义为循环成纤维细胞(circulatlng fibrocytes)或游走成纤维细胞(alitofibrocytes).循环成纤维细胞能生成和分泌胶原蛋白和其他基质蛋白,存在于外周血中,具有显示它们造血来源(hematopoetic orgin)的细胞表面标记.这种新的白细胞亚群开始曾被叫作"纤维细胞"(fibrocytes),这个术语是由希腊语"kytos"(细胞)和拉丁语"fiber"(纤维)共同组成.然而,这个定义在解剖学术语中可能导致混淆,如在组织学、病理学中的名词"纤维细胞"(fibrocytes)指的是"成熟"的成纤维细胞(mature fibroblasts).在内耳的解剖组织名词中也有叫作"fibrocytes"的细胞是指毛细胞.所以学者们需要考虑给循环成纤维细胞一个更具特色的名称即循环成纤维细胞(circulating fibrocytes)或游走成纤维细胞(alitofibrocytes),后者词汇中"alitis"在希腊语中表示"流浪者",以强调这些细胞的血源游走性.而循环成纤维细胞则强调它们存在于血循环之中.
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湖北地区季节性H1N1流感病毒NA和M基因特性分析
目的 分析湖北省2000年以来甲型流感病毒株神经氨酸酶(NA)和M基因特性,以及耐药性位点的变异情况.方法 从2000~2008年临床样品中分离毒株,运用RT PCR扩增NA和M基因,对扩增片段进行序列测定,利用DNAStar软件与世界卫生组织推荐的流感疫苗毒株进行同源性比较,对NA和M基因重要功能性位点和耐药性位点进行分析,利用Mega软件进化分析.结果 2000~2008年临床样品流感病毒分离株的NA和M基因与同年疫苗株相应基因的同源性分别为96.6%~99.7%和96.6%~99.6%,分离株NA基因中潜在的抗原性位点和糖基化位点与2000~2008年疫苗株基本相同,与2009年疫苗株有一定差异.NA基因未发生耐药性突变,但M基因在2005年以后的分离株中发生了S→N突变.NA和M基因进化分析表明不同年份分离株呈现出不同的亲缘关系.结论 湖北省季节性甲型H1N1流感病毒分离株与2000~2008年世界卫生组织推荐的疫苗毒株有高度同源性,但与2009年疫苗株有所不同,未出现达菲类药物抗药性位点的核苷酸突变,但2005年后的分离株在M基因上均发生金刚烷胺类耐药性突变.NA和M基因进化树中可以看到甲型H1N1流感病毒进化关系在时间(年)上具有聚集性.
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呼吸道合胞病毒疫苗研究动态
呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)是引起婴幼儿严重下呼吸道感染的重要病毒性病原体,广泛分布于世界各地.其发病率高,多数儿童在两岁前都感染过RSV.老年人和免疫力低下的人群中也会暴发流行.RSV感染的临床表现在不同年龄组往往不同,一般可致鼻炎、中耳炎、哮喘、支气管炎、细支气管炎和肺炎,尤其以后两种疾病为严重,甚至可导致死亡.RSV属副黏病毒科,肺炎病毒属, 病毒粒子直径约150~300 nm.基因组为一条约由15 000个核苷酸组成的单股、负链RNA,主要编码10个蛋白质:3种核衣壳蛋白[核壳蛋白(N)、磷酸蛋白(P)、大聚合酶蛋白(L)]、3种跨膜蛋白[融合蛋白(F)、附着蛋白(G)、小疏水蛋白(SH)];2种基质蛋白(M1、M2)和2种非结构蛋白(NS1、NS2).F蛋白和G蛋白是两种主要的结构蛋白,可诱导机体产生抗体和细胞免疫,因此常被作为RSV疫苗研制的靶抗原.世界卫生组织(WHO)已将研制RSV疫苗列为全球疫苗计划的优先发展项目之一.但迄今为止,尚无安全、有效的RSV疫苗获准上市.
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流感疫苗中血凝素定量检测方法的评价
流感病毒分为甲、乙、丙三型,其中甲、乙型流感病毒的基因组均含8个节段,丙型流感病毒含7个节段.甲、乙型流感病毒的8个基因节段分别编码血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基质蛋白(M)、三种多聚酶蛋白(PBl、PB2、PA)和非结构蛋白(NS).
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基质金属蛋白酶与损伤后血管再狭窄
支架植入与经皮球囊血管成形术可以迅速扩张血管、改善缺血症状,但术后再狭窄的发生严重影响了手术效果。再狭窄是血管损伤后内膜增生和血管重塑的过程,其中血管平滑肌细胞的迁移、增殖和细胞外基质的重塑是血管损伤后再狭窄的主要原因。金属基质蛋白( MMPs ),作为重要的细胞外基质水解酶[1-2],广泛参与调节血管重塑和细胞迁移过程,抑制MMPs活性可以显著抑制再狭窄的发生。
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BLCA-1、BLCA-4与膀胱癌关系的研究现状
膀胱癌是泌尿系统中常见的恶性肿瘤之一。美国癌症协会预测2013年美国膀胱癌新发病例72570例,有15210例患者死于膀胱癌[1]。在我国膀胱肿瘤的发病率占泌尿系肿瘤的首位,同时发病率正在不断的攀升[2]。低、中风险的膀胱癌患者在行经尿道膀胱肿瘤电切术后,一年之后分别有20%、40%的复发率,高风险患者复发率可高达90%[3]。膀胱癌的早期诊断和监测是治疗的核心。由于膀胱癌的慢性特性及需要长期监测的特点,造成膀胱癌是目前花费贵的肿瘤之一,因而是卫生经济学中值得研究的一个肿瘤疾病[4]。目前膀胱镜检查仍为诊断的金标准,但其本身具有侵入创伤性、检查者的主观因素变异、活检取材误诊、不易发现早期病变以及不能确定肿瘤的分级和分期等缺点[5]。近年来随着分子生物学的发展,越来越多的肿瘤标记物被发现并用于诊断及监测膀胱肿瘤[6]。并且学者们一直致力于寻找可用于替代膀胱镜的肿瘤标志物。目前国内外对核基质蛋白与膀胱肿瘤的关系研究也越来越多,其中膀胱癌特异性核基质蛋白-1( bladder cancer-associated nuclear matrix protein 1,BLCA-1)及膀胱癌特异性核基质蛋白-4(bladder cancer-associated nuclear matrix protein 4,BLCA-4)更以其在检测膀胱癌中的高敏感性及特异性,成为膀胱癌肿瘤标志物的研究热点,越来越受到重视。本文拟对BLCA-1、BLCA-4在膀胱癌中的研究现状作一综述。
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骨桥蛋白在变态反应性疾病中的作用
骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是早期在骨组织中发现的一种基质蛋白,具有调节钙离子浓度的作用[1] .后来发现OPN 还存在于肾、肺、肝、胰腺、膀胱及骨细胞、破骨细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、活化的T 细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和多种肿瘤细胞中,参与组织修复、肿瘤转移和炎症发生的过程.
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骨桥蛋白在颅内肿瘤侵袭及转移中的作用
骨桥蛋白(osteoponin,OPN)是一种分泌型磷酸化糖蛋白,是细胞基质蛋白小整合素结合配体N端联结糖蛋白(small integrin-binding ligand,N-linked glycoprotein,SIBLING)家族中的一员,在全身多种组织细胞中广泛表达.OPN与细胞外基质发生作用,作为信号转导分子涉及多种生物学功能,如细胞黏附、迁移、免疫反应、炎症反应、骨的钙化以及抗凋亡等.近年来研究发现,OPN在颅内肿瘤侵袭和转移的多个环节中起重要作用.
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糖尿病人为什么会出现靶器官损害?
问:糖尿病微血管病变发生的机制?答:糖尿病微血管病变在临床上表现为:视网膜病变、肾脏病与周围神经炎.主要病理生理机制如下:细胞内高血糖引起血管通透性加大,NO减少,血管扩张减弱,血管收缩加强.AngⅡ、内皮素、血管内皮生长因子(VEGF)增加.时间越长,微血管内皮细胞丧失,血管外TGF-β生成增多,血管外基质蛋白沉积,毛细血管进行性闭塞.再加上局部组织水肿、缺血、缺O2引起视网膜血管新生,蛋白尿,肾小球膜扩张,肾小球硬化,周围神经退行性变.
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泌尿系肿瘤侵袭与转移重要分子:基质金属蛋白酶
侵袭转移是肿瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质之间一系列主动、复杂、多步骤相互作用的过程.首先,有转移潜质的肿瘤细胞从母体脱离,粘附于其他细胞和 (或)基质蛋白的表面;接着由肿瘤细胞或基质细胞释放蛋白水解酶,降解细胞外基质(EC M)和基底膜(BM),破坏BM屏障,肿瘤细胞穿透血管或淋巴管壁向远处转移或直接侵入到周围组织中;后肿瘤细胞在多种生长因子的作用下形成转移灶[1].基质金属蛋白酶(MMPs)是一组具有高度保守锌依赖性的肽链水解酶,因参与ECM 和BM多种成分的降解而与恶性肿瘤的侵袭转移之间存在密切的关系.
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核基质蛋白22诊断肾细胞癌的临床价值研究
我们应用酶联免疫法检测54例肾细胞癌患者尿中的核基质蛋白22(NMP22),探讨NMP22诊断肾癌的临床价值.现报告如下.
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基质金属蛋白酶及其抑制物在膀胱癌中的表达及意义
为探讨基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)及其基质蛋白酶抑制物(tissue inhibitor of matrix metalloproteinases, TIMPs)在膀胱移行细胞癌(TCCB)中的表达及意义,我们对51例TCCB及10例正常膀胱组基质金属蛋白酶及其抑制物在膀胱癌中的表达进行了检测.
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基膜聚糖基因mRNA表达与子宫内膜癌浸润、转移的关系
基膜聚糖(lumican)基因在正常上皮细胞和间质细胞均有表达,并调节间质细胞分泌基质蛋白.基膜聚糖基因的表达异常可影响细胞基质的形成,促使肿瘤发展[1].本研究对32例子宫内膜癌(内膜癌)组织及其周围正常内膜组织基膜聚糖基因的表达进行检测,以探讨基膜聚糖基因mRNA表达与子宫内膜癌组织浸润、转移的关系.