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不同补肾方对卵巢摘除术后骨质疏松大鼠Wnt信号表达的影响
目的:比较3种补肾方对卵巢摘除骨质疏松大鼠Wnt通路β-Catenin mRNA表达的影响.方法:雌性SD大鼠70只,随机分为假手术组、模型组、龟鹿二仙胶组、二仙汤组、补肾活血组、雌二醇组、仙灵骨葆组,每组10只.双侧卵巢摘除术复制骨质疏松模型,术后30天进行相应的给药实验,假手术组和模型组给予灌服等量的生理盐水.12周后测定各组大鼠血清中Ⅰ型胶原羧基端肽(β-Crosslaps)、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(P1NP)含量;以双能X线骨密度测定仪测定大鼠股骨的骨密度;用RT-PCR检测右侧股骨髓LRP5、Wnt2、β-Catenin mRNA表达,用Western blot方法检测LRP5、Wnt2、β-Catenin蛋白表达.结果:与sham组比较,模型组股骨骨密度、血液PINP浓度、β-Catenin mRNA、LRP5 mRNA、Wnt2 mRNA表达均显著降低(P＜0.01),β-Crosslaps浓度显著增高(P＜0.01).与模型组比较,3组中药组骨密度、血液PINP浓度、LRP5 mRNA、β-Catenin mRNA、Wnt2 mRNA及蛋白表达显著增高(P＜0.05),血液β-Crosslaps浓度显著降低(P＜0.01),补肾活血组骨密度及β-Catenin mRNA及蛋白表达高于其他两补肾方剂组.结论:补肾方通过Wnt信号通路促进去卵巢大鼠成骨细胞增殖而改善骨质疏松症,补肾活血组方效果更为明显.
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双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Wnt信号通路的调控作用
目的 探讨双黄升白颗粒对荷瘤鼠化疗骨髓抑制期Wnt信号通路的调控作用.方法 采用Lewis肺癌荷瘤鼠腹腔注射环磷酰(cyclophosphamide,CTX)胺造成化疗骨髓抑制模型,用双黄升白颗粒干预治疗,常规计数白细胞、红细胞、血小板数量和肿瘤质量,流式细胞法检测骨髓造血干细胞比例(Sca、CD34双阳性细胞),实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测Wnt信号通路主要基因(Wnt、β-catenin、Frizz-ted、DSH、GSK3)mRNA的表达.结果 治疗组白细胞数量、造血干细胞比例均高于模型组(P＜0.05),Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH、GSK3 mRNA在骨髓中的表达高于模型组(P＜0.05),Wnt、β-catenin、Frizzted、DSH mRNA在肿瘤中的表达则低于模型组(P＜0.05);各组红细胞、血小板、肿瘤质量、GSK3mRNA在肿瘤中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 双黄升白颗粒治疗骨髓抑制的作用机制与调控Wnt信号通路有关,且该调控作用具有双重特性,即在上调骨髓Wnt信号通路主要基因表达同时抑制肿瘤中部分基因表达.
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Wnt信号参与氯化锂下调低氧复氧诱导HUVEC表达趋化因子FKN
目的 研究低氧复氧诱导培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达趋化因子FKN与Wnt信号通路中关键信号分子β-catenin、GSK-3β的相关性.方法 HUVECs,随机分为对照组、低氧复氧组和氯化锂(LiCl,10 mmol/L)组.免疫细胞荧光FITC法检测FKN蛋白表达,免疫细胞化学技术检测GSK-3β及β-catenin的表达.RT-PCR技术检测GSK-3β和FKN mRNA表达.结果 与正常对照组比较,低氧复氧引起GSK-3β、β-catenin及FKN表达明显增加(P＜0.05),于复氧2h达表达高峰;与低氧复氧组比较,LiCl组β-catenin表达明显增加(P＜0.05),FKN与GSK-33表达明显降低(P＜0.05),但仍然高于正常对照组.LiCl组FKN mRNA表达高于正常对照组(P＜0.05)而低于低氧复氧组(P＜0.05),于复氧1h达表达高峰;GSK-33 mRNA在低氧前后及复氧各时间点无差异表达.结论 Wnt 信号通路的激活可能在转录后翻译阶段参与LiCl下调低氧诱导HUVECs表达FKN的过程.
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β-连环蛋白和核转录因子-κB在大肠癌中的表达及临床意义
β-连环蛋白(β-cat)和核转录因子-κKB(NF-κB)分别作为Wnt信号系统和以NF-κB为中心的Rel/NF-κB/IKK信号系统的关键调控点,在细胞黏附、增殖和凋亡中起重要作用,与肿瘤的形成发展有着十分密切的关系,成为近几年研究的一个热点.目前对其在大肠癌组织中的表达及大肠癌细胞分化、侵袭、转移等研究尚不多见.本研究探讨了β-Cat、NF-κB的表达与大肠癌细胞生物学行为的关系.
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大鼠脊髓全横断损伤后Wnt信号基因的表达
目的 探讨大鼠脊髓全横断损伤后,Wnt信号基因在不同时相脊髓表达的变化及意义.方法 成年健康Wistar大鼠30只,随机分为假手术组(sham组)和脊髓损伤组(SCI组),SCI组分为术后1d、3d、7d、14d、21d组,每组5只.SCI组大鼠T11脊髓段做全横断损伤,sham组仅行椎板切除术,术后大鼠进行BBB运动功能评分.采用半定量RT-PCR方法检测脊髓损伤组织中Wnt信号基因的表达.结果 SCI组所有动物在术后均表现为双后肢瘫痪,BBB运动功能评分明显低于sham组.SCI组在脊髓横断术后1d、3d、7d Wnt3a表达均较sham组明显增加;尾侧端wnt3a较同时相头侧端的表达多,且在21d又出现明显的升高.在Blmm组和SCI组均未检测到神经基因蛋白1(Ngn1)的表达.发状分裂相关增强子1(Hes1)的表达在SCI后第1d较sham组有明显的下降,第3d出现升高,之后逐渐下降.结论 Wnt信号可能参与了脊髓损伤后修复再生的过程.
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慢病毒介导RNAi干扰β-catenin对小鼠骨髓间充质干细胞生物学行为的影响
本研究通过构建β-连环蛋白(β-catenin)特异的RNAi慢病毒表达载体,探讨阻断Wnt/β-catenin信号通路对骨髓间充质干细胞(MSC)生物学行为的影响.设计3对针对β-catenin mRNA不同位点的shRNA编码序列,分别连接到慢病毒载体质粒PLB中,构建PLB-β-catenin/shRNA1,PLB-β-catenin/shRNA2和PLB-β-catenin/shR-NA3;将重组质粒与慢病毒包装质粒及包膜蛋白质粒共转染293FT细胞,收获病毒颗粒,浓缩后测定病毒滴度,感染MSC细胞,并应用流式细胞术分选GFP阳性细胞,Western blot和RT-PCR验证其对细胞内β-catenin基因表达的抑制效果,筛选干扰效率高质粒;CCK-8法检测细胞增殖,Annexin-V/7-AAD法检测干扰后细胞凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell实验检测MSC迁移能力.结果表明:构建的特异性慢病毒siRNA干扰组(PLB-β-catenin/shRNA2)能有效抑制β-catenin的mRNA和蛋白表达,并抑制细胞的增殖;而空载体对照组(PLB group)和正常对照组(control group)细胞增殖无明显变化,两组之间无显著的统计学差异(P＞0.05);流式细胞术检测结果显示,采用血清饥饿法处理后,干扰组细胞的凋亡率明显增加,但两对照组之间无统计学差异(P＞0.05);细胞划痕和Tran-swell实验显示,干扰组MSC的迁移能力明显降低,对照组细胞迁移能力无明显变化.结论:构建的特异RNAi慢病毒能够有效抑制β-catenin基因的表达,减少细胞内目的基因mRNA和蛋白的水平,从而对MSC细胞的增殖、凋亡和迁移能力产生重要影响.
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外源性Wnt5a诱导K562细胞分化表型的实验研究
本研究探讨外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的作用.用重组腺病毒AdWntSa、AdGFP感染CHO细胞,分别制备Wnt5a和GFP对照条件培养液,并处理K562细胞1-7天,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;采用过氧化物酶(POX)、糖原(PAS)和非特异性酯酶(α-NAE)染色、细胞表面分化抗原CD13、CD14、CD68鉴定K562细胞的分化表型;用流式细胞术检测细胞分化周期的变化.结果表明:与对照GFP条件培养液相比,Wnt5a条件培养液处理的K562细胞形态和超微结构均出现了分化成熟的特征;POX、PAS、α-NAE细胞化学染色均为阳性,并且α-NAE阳性70%可被氟化钠抑制;单核细胞系表面标志抗原CD14、CD68和粒细胞系表面标志抗原CD13经免疫细胞化学染色均呈阳性,但CD13与对照比较无显著性差异;Wnt5a处理K562细胞5天,细胞周期阻滞在G2期.结论:外源性的Wnt5a可诱导K562细胞向成熟方向分化,并且有向单核细胞系分化的现象.
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β-catenin在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达
高危型HPV所致尖锐湿疣(condy-loma acuminatum,CA)皮损角质形成细胞的过度增生.可发展为鳞癌或基底细胞癌.β-catenin(β连环素)是环连蛋白家族中的一员,亦是Wnt信号转导系统中的核心蛋白,参与多种细胞的增殖和分化.为探讨β-catenin在尖锐湿疣皮损角质形成细胞过度增生机制中的作用,本研究检测了β-catenin蛋白及β-catenin mRNA在尖锐湿疣皮损角质形成细胞中的表达情况.
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散乱蛋白对神经发生影响的研究进展
散乱蛋白(Dvl)是广泛存在于人体组织内的一种蛋白,含有三个结构域:散乱蛋白轴蛋白(DIX)结构域、突触后密集区蛋白-95/大型肿瘤抑制基因/紧密连接跨膜蛋白(PDZ)结构域、散乱蛋白/Egl-10/普列克底物蛋白(DEP)结构域.散乱蛋白通过不同的结构域参与Wnt信号传导,影响神经系统发育与神经损伤后神经发生.
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Wnt信号对神经发生和血管新生的调控
Wnt信号通路与神经发生和血管新生密切相关,该通路对于大脑可塑性的调节意义重大.对Wnt信号调节作用与机制进行研究,有助于了解大脑损伤后修复和再生.
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用RNA干扰慢病毒研究Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响
目的 构建β-连环蛋白特异的RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒表达载体,初步探讨Wnt/β-连环蛋白信号通路对小鼠胰岛β细胞增殖的影响.方法 利用体外同源重组技术构建短发夹RNA(shRNA)慢病毒表达载体,与辅助包装质粒一起在293 T淋巴细胞中包装并扩增病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度;RNAi慢病毒感染小鼠胰岛β细胞,实时PCR以及Western blot法检测其对β-连环蛋白表达的抑制效应;利用构建的RNAi慢病毒抑制β-连环蛋白表达,四甲基偶氮唑盐法检测小鼠胰岛β细胞增殖活性.组间比较采用方差分析(ANOVA).结果 成功构建了β-连环蛋白特异的RNAi慢病毒表达载体,获得的慢病毒滴度在5.0×10~8TU/ml左右;RNAi慢病毒在3 d后就能有效感染小鼠胰岛β细胞,5 d后使细胞内β-连环蛋白基因mRNA和相应蛋白的表达受到明显抑制;慢病毒感染小鼠胰岛β细胞后,细胞增殖率明显减少.结论 构建的目的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制β-连环蛋白基因的表达;Wnt/β-连环蛋白信号通路在小鼠胰岛β细胞增殖中有重要影响.
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补肾活血中药对骨质疏松大鼠Wnt信号的影响
目的：探讨补肾活血方对卵巢摘除骨质疏松大鼠Wnt通路β－Catenin mRNA表达的影响。方法 SPF级250±20 g雌性SD大鼠40只，随机分为假手术组（sham group）、模型组（model group）、雌激素药物治疗组（E group）、中药组（TCM group），每组10只。对假手术组大鼠施行假手术，其余4组行双侧卵巢摘除术，术后30天进行相应的给药实验，假手术组和模型组给予灌服等量的生理盐水。12周后测定各组大鼠血清中I型胶原羧基端肽（β－Crosslaps）、I型前胶原氨基端延长肽（ P1NP）含量；以双能X线骨密度测定仪测定大鼠的骨密度；用RT－PCR检测右侧股骨髓LRP5、Wnt2、β－Catenin mRNA表达。结果model组动物骨密度值（0．137±0．013 g／cm2）、P1NP浓度（4．388±0．400 ng／ml）、β－Catenin mRNA表达（1．05±0．18）、LRP5 mRNA表达（0．96±0．24）、Wnt2 mRNA表达（0．53±0．11）。与模型组比较，sham组及TCM组BMD（0．168±0．008，0．173±0．008）显著增高（P＜0．05），血清β－Crosslaps（0．575±0．068，0．618±0．119）、LRP5 mRNA表达（1．63±0．51，2．630．22）显著增高（P＜0．05），sham、E、TCM组Wnt2mRNA表达（1．03±0．02，1．23±0．12，1．58±0．20）及β－Catenin mRNA表达（1．95±0．16，1．62±0．17，2．12±0．20）显著增高（P＜0．05）；与sham组比较，TCM组β－Crosslaps、BMD（0．618±0．119，0．173±0．008）没有差异（P＞0．05），P1NP、Wnt2、LRP5 mRNA表达（6．310±0．990，1．58±0．20，2．63±0．22）显著增高（P＜0．05）；与E组比较，TCM组PINP、BMD、Wnt2、β－catenin、LRP5显著增高（ P＜0．05）。结论补肾活血中药通过调节Wnt信号促进去卵巢术后骨质疏松大鼠成骨细胞增殖。
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DKK1在大鼠骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化早期的差异性表达
目的：分析DKK1在大鼠骨髓间充质干细胞成脂、成骨分化早期的表达，探讨其调节机制。方法 Real－time PCR检测骨髓间充质干细胞在成脂、成骨诱导培养早期DKK1基因表达的水平；检测激素处理骨髓间充质干细胞DKK1基因的表达水平。结果成脂组与正常对照组，在成脂诱导6、12、24、48时DKK1基因表达水平较对照组增高，差异有统计学意义， P＜0．01。成骨组与正常对照组，0．5、6两个时间点DKK1基因表达量较对照组明显降低，差异有统计学意义，P＜0．05。骨髓间充质干细胞激素处理3、6、12、24时检测，结果显示激素作用下，骨髓间充质干细胞DKK1表达明显增加，差异有统计学意义，P＜0．05。结论 DKK1在骨髓间充质干细胞成脂、成骨分化早期可能起重要的调节作用，激素可能通过调节DKK1的表达而发挥调节成脂、成骨分化的作用。
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Wnt信号传导途径与骨质疏松
过去20年,在分子生物学和基础医学领域对骨质疏松症的研究取得了长足进展.Wnt信号通路在胚胎发育及生命体成长过程中起着关键的调控作用.2001年,基因学研究证实标准的Wnt信号通路在骨骼形成过程中起到关键的调控作用,近,有报道非经典的Wnt信号通路在骨骼形成过程中有调控作用.由于目前应用调控合成代谢途径预防和治疗骨质疏松症尚无有效的报道.因此,本文主要从Wnt信号通路与骨质疏松症的发病机制及治疗进展的角度展开综述.
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大鼠毛囊发育启动阶段模型构建及其Wnt10b/β连环蛋白信号表达的观察
目的 构建适合研究毛囊发育启动的体外培养模型,观察Wnt10b/β连环蛋白信号在毛囊发育初期的表达情况.方法 将不同胎龄的SD大鼠胚胎(胎鼠)背部皮肤以明胶海绵为载体,在Dulbecco改良Eagle培养液(DMEM)的气液交界平面中漂浮培养3～6 d,HE染色,观察毛囊发育情况;免疫荧光法动态观察Wnt10b及β连环蛋白在毛囊发育初期的表达;将胎龄15 d胎鼠背部皮肤在含不同胎牛血清浓度的DMEM中培养,观察胎牛血清对毛囊形态发生的影响.结果 (1)胎龄14 d后期至15 d早期的胎鼠背部皮肤培养效果好,体外培养3 d以内,毛囊的发育保持与体内过程一致,培养3 d后毛囊发育逐渐减慢,直至停止于第4阶段;(2)胎牛血清对毛囊的发育没有明显促进作用;(3)在培养的前几天,Wnt10b/β连环蛋白的表达与体内一致,随着培养天数的增加,Wnt10b/β连环蛋白的表达逐渐减弱,在培养的第6天,毛囊的形态发生停止时,Wnt10b/β连环蛋白的表达也随之消失.结论 在体外短期培养的胎鼠背部皮肤毛囊发育与体内基本一致,可以作为研究毛囊发育启动的模型;Wnt10b/β连环蛋白信号的表达与毛囊的早期发育密切相关.
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Wnt信号通路的生物学效应及其与肺部疾病的关系
Wnt信号转导通路(Wnt 通路)是一条在进化上保守的信号途径,它主要由经典Wnt/β-catenin信号途径和非经典的Wnt信号途径(Wnt/平面细胞的极性途径和Wnt/Ca2+途径)组成.其生物学效应广泛,可调控细胞的黏附、迁移、增生和凋亡等.作为一条与多种疾病密切关系的信号转导通路,其在肺部疾病发生、发展中所起的重要作用也逐渐被揭示.
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axin、β-catenin在Wnt信号转导途径中的调节机制
Wnt信号转导通路是由一系列癌基因及抑癌基因编码的蛋白质组成,各种蛋白彼此联系,从而构成复杂的信号传递网络.
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骨－软骨交互作用与骨关节炎的研究进展
骨关节炎（ OA）进程中，为适应局部生化环境及生物信号的改变，由软骨及软骨下骨构成的关节功能单位经历了不可控制的分解及合成代谢的重构过程。软骨及软骨下骨信号分子的交互作用使两者在病理上相互影响、相互作用。新生血管及微裂隙的形成为骨－软骨间分子通讯提供结构基础。 WNT、骨形态发生蛋白、转化生长因子β和丝裂原活化蛋白激酶等信号通路可能是构成OA中骨－软骨交互作用的分子基础。
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GSK3-Wnt信号通路与糖尿病肾病的关系
Wnt信号通路参与细胞的分化、增殖和凋亡,与诸多疾病密不可分.糖原合酶激酶3(GSK3)是生物体内诸多信号通路的参与者,是Wnt信号通路的上游作用物,对其起着关键作用.糖尿病肾病的发生和发展机制复杂,在分子生物学上需要许多信号通路的参与.现就GSK3-Wnt信号通路与糖尿病肾病的关系进行总结和讨论.
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Wnt信号与肥胖
肥胖是一种能量代谢性疾病,其发生、发展与能量代谢紊乱有着重要联系,作为机体的主要储能部位,脂肪细胞的分化对肥胖症无疑有着重要影响.因此,脂肪细胞的分化调控已成为肥胖及其相关性疾病的研究热点.脂肪细胞分化过程受到多种因子的影响,其中,Wnt蛋白通过与其特异性受体及辅助受体的结合,启动一系列下游因子的磷酸化和去磷酸化,完成其信号转导过程,对脂肪形成起到抑制作用.现将对Wnt蛋白与脂肪细胞分化之间的关系综述如下.
