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益肾达络饮对EAE小鼠小胶质细胞活化的影响
目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠小胶质细胞活化的影响.方法:将48只雌性SJL(8-12周龄)小鼠随机分为4组,即正常组、模型组、中药组和激素组,每组各12只.除正常组外,其余各组小鼠上腹部分两点皮下注射抗原乳剂200μL(含PLP139-151 150μg、H37RA 400μg),记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100 μL(含百日咳杆菌0.6×106个);造模的第7天给药,正常组和模型组灌胃给予生理盐水(0.1 mL/10 g),中药组灌胃给予益肾达络饮(0.2 g生药/10 g),激素组灌胃给予泼尼松药液(0.039 mg/10 g),共干预15天.免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分.采用免疫组化和Western blot法测定EAE小鼠脑组织内钙离子连接蛋白-1(Iba-1)的表达.结果:与模型组比较,中药组和激素组EAE小鼠的神经功能评分明显降低,发病时间明显延迟(P＜0.05);Iba-1的表达明显降低(P＜0.05).与正常组比较,模型组、中药组和激素组EAE小鼠Iba-1的表达明显升高(P＜0.05).结论:小胶质细胞的激活参与了EAE的发病,益肾达络饮可通过抑制小胶质细胞的激活降低EAE小鼠的神经功能评分,延迟发病时间,但其具体抑制机制需进一步研究.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 益肾达络饮 小胶质细胞 钙离子连接蛋白-1 -
益肾达络饮对EAE小鼠p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的影响
目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠磷酸化c-Jun氨基末端激酶1/2(p-JNK1/2),c-Jun氨基末端激酶1/2(JNK1/2)及环氧合酶-2(COX-2)的影响.方法:将48只雌性SJL小鼠(8～12周龄)随机分为4组,即正常组、模型组、益肾达络饮组和泼尼松组,每组各12只.在模型组、益肾达络饮组和泼尼松组每只小鼠上腹部,分两点ih抗原乳剂200 μL[含髓鞘蛋白脂质蛋白(PLP)139-151150 μg,H37 Ra 400 μg],记为第1天;分别在第1天和第3天给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100 μL(含百日咳杆菌0.6×106个).造模的第7天给药,正常组和模型组给予生理盐水10 mL·kg-1ig,益肾达络饮组给予益肾达络饮生药量20 g·kg-1ig,泼尼松组给予泼尼松药液3.9 mg· kg-1ig,共干预15d.免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分;Western blot法测定EAE小鼠脑组织内p-JNK1/2,JNK1/2,COX-2的表达.结果:与正常组比较,模型组EAE小鼠的神经功能评分明显升高(P＜0.01),p-JNK1,p-JN K2和COX-2的表达水平明显升高(P＜0.05);与模型组比较,益肾达络饮组和泼尼松组明显降低EAE小鼠的神经功能评分(P＜0.05),明显降低p-JNK1,p-JNK2和COX-2蛋白表达的水平(P＜0.05,P＜0.01);泼尼松组COX-2的表达水平低于益肾达络饮组(P＜0.05).结论:JNK1/2通路和COX-2与EAE的发病有关,益肾达络饮可通过降低p-JNK2和COX-2的表达降低EAE小鼠的神经功能评分,但其具体的机制需进一步探讨.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎TNF-α的影响
目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预EAE的疗效,探讨其治疗EAE的作用机制.方法:选用雌性SJL/J小鼠95只,随机分为正常组、泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1加泼尼松3.9 mg·kg-1组,从开始造模后7d开始ig给药,连续15 d,从急性期、复发期采用免疫蛋白印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中枢神经组织中TNF-α蛋白表达的变化.结果:益肾达络饮能降低EAE的复发率(P＜0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P＜0.05).与模型组相比,泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1加泼尼松3.9 mg·kg-1组中枢神经组织TNF-α表达水平明显降低(P＜0.05).结论:降低TNF-α的表达水平,有助于缓解EAE病损程度;益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;醋酸泼尼松和益肾达络饮调节TNF-α的表达水平可能是治疗EAE的机制之一.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 肿瘤坏死因子α 益肾达络饮 -
EAE小鼠中枢神经系统中CD11b mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响
目的:观察实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠不同发病时期脑和脊髓组织中CD11b mRNA的表达变化,明确益肾达络饮的干预机制.方法:采用MOG35-55抗原免疫C57BL/6小鼠诱导EAE模型,随机选取分为正常组,佐剂组、模型组、醋酸泼尼松3.9 mg·kg-1组、益肾达络饮20 g·kg-1组,在造模后第7天开始灌胃给药,直到相应时间点进行取材.采用实时荧光定量PCR测定免疫后7d(发病前期)、14 d(发病初期)、24 d(发病急性期)、40 d(慢性持续期)4个不同时间点EAE小鼠脑和脊髓组织中CD11b mRNA表达的变化.结果:与正常组比较,在免疫后14,24,40d,模型组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA表达分别升高至2.39±1.09,3.20±1.14,1.58±0.36(P ＜0.05).与模型组比较,在免疫后40 d激素组和益肾达络饮组EAE小鼠大脑中CD11b mRNA的表达水平明显降低(P＜0.05);与正常组比较,激素组、益肾达络饮组在免疫后40 d CD11b mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平无显著改变;在免疫后14 d激素组EAE小鼠脊髓中CD11b mRNA的表达水平明显降低.结论:单核细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮干预EAE的作用机制与中枢神经系统单核细胞黏附分子CD11b的调节密切相关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 CD11b mRNA 益肾达络饮 -
益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠细胞外信号调剂激酶1/2通路的影响
目的:研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠ERK1/2通路的影响.方法:将60只雌性SJL小鼠随机分为5组,即正常组、模型组、中药组、西药组和PD98059组,每组各12只.模型组、中药组、西药组和P D98059组分两点皮下注射抗原乳剂共200μL(含PLP139-151150μg、H37Ra 400μg);分别在造模第1天、第3天再给予每只小鼠尾静脉注射百日咳杆菌液100μL(含百日咳杆菌0.6×106个).造模第7天给予相应药物治疗,共干预15d,免疫后每天记录各组小鼠的神经功能评分.用Western blot法测定EAE小鼠脑组织内Ras、p-c-Raf、c-Raf、p-MEK1/2、MEK1/2、p-ERK1/2和ERK1/2的表达.结果:与模型组比较,中药组、西药组和 PD98059组EAE/小鼠第21天的神经功能评分显著降低(P＜0.05).模型组p-c-Raf、p-MEK 1/2和p-ERK1/2的表达水平显著高于正常组(P＜0.05);中药组、西药组和PD98059组p-c-Raf、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达水平显著低于模型组(P＜0.05).名组Ras、c-Raf、MEK1/2和ERK1/2的表达水平无显著差异.结论:益肾达络饮可通过降低p-MEK 1/2和p-ERK1/2的表达抑制ERK1/2通路的激活,从而降低EAE小鼠的神经功能评分,延迟发病时间,但益肾达络饮抑制ERK 1/2通路后引起的下游生物学效应尚不明确,需进一步研究.
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益肾达络饮对EAE小鼠NgR、Gap-43表达的影响
目的:运用形态学检测技术,探讨益肾达络饮对EAE小鼠中枢神经损伤后神经再生的作用.方法:采用免疫组化方法测定各组小鼠脑组织中NgR、Gap-43的含量,旨在了解NgR在EAE发生后的作用和益肾达络饮对神经再生的作用情况.结果:NgR表达正常组和中药组差异有统计学意义(P＜0.05),与其余组差异有极显著统计学意义(P值均＜0.01)；模型组和激素组、中药组均差异有极显著统计学意义(P值均＜0.01)；激素组和中药组差异无统计学意义,提示模型组神经再生受抑制程度明显；Gap-43表达在正常组和模型组差异无统计学意义,正常组和激素组、中药组差异有极显著统计学意义(P值均＜0.01)；模型组和中药组、激素组差异有极显著统计学意义(P值＜0.01)；激素组和中药组差异有极显著统计学意义(P值＜0.01).结论:益肾达络饮有一定程度促进轴突再生的作用且优于激素组.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎β淀粉样前体蛋白的影响
目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内轴突病变标记物β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中APP蛋白含量.结果: APP蛋白表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01),模型组与中药组比较有极显著性差异(P值均<0.01),与激素组比较有显著性差异(P<0.05),激素组与中药组比较有显著性差异(P<0.05).结论:EAE小鼠APP表达升高,提示存在轴索损害.醋酸泼尼松、益肾达络饮均降低EAE小鼠中枢神经组织内APP的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松.益肾达络饮自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调APP、抑制轴突变性有一定关系.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎NF-κB信号传导通路的影响
目的:研究NF-κB信号传导通路在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制.方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠中框神经组织中NF-κBp65、1κB-α蛋白表达的变化.结果:中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率(P＜0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P＜0.05).与模型组相比,激素组、中药组、中药加激素组NF-κBp65表达水平明显降低.hB-α表达水平明显升高(P＜0.05).结论:在EAE中,NF-κB介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润、轴索损伤的重要原因；中药复方益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤；中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对NF-κB信号通路的调节密切相关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 NF-κB 益肾达络饮 -
益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎IFN-γ、IL-4的影响
采用ELISA方法,观察益肾达络饮对PLP139-151诱导的高敏感品系SJL小鼠自身免疫性脑脊髓炎的症状、中枢神经系统内细胞因子IFN-γ、IL-4的影响.结果发现益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与抑制局部炎症,促进Th1/Th2比例平衡,有一定关系.
关键词： 自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 益肾达络饮 γ-干扰素(IFN-γ) IL-4 -
益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎MCP-1的影响
[目的]研究益肾达络饮对髓鞘蛋白脂质蛋白多肽(PLP139-151)诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子(MCP-1)的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.[方法]采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术,测定各组小鼠中枢神经组织中MCP-1蛋白和MCP-1 mRNA的含量.[结果]正常组与模型组、激素组、中药组MCP-1蛋白、MCP-1 mRNA含量相比较均有极显著性差异(P＜0.01),中药组、激素组与模型组MCP-1蛋白、MCP-1 mRNA含量相比较均有极显著性差异(P＜0.01);中药组、激素组相比较有显著性差异(P＜0.05).[结论]益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低MCP-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调MCP-1,抑制单个核细胞的趋化性,减轻炎性浸润,抑制局部炎症有一定关系.
关键词： 自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 益肾达络饮 髓鞘蛋白脂质蛋白多肽 -
益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠神经功能评分和病理特征的影响
目的:研究益肾达络饮对复发-缓解型EAE小鼠发病率、发病时间、复发率、神经功能评分及病理特征的影响.方法:用HE染色和Luxol fast blue染色观察EAE小鼠的病理特征.结果:中药组EAE小鼠的复发率(14.27％)低于模型组(62.5％)；免疫后第21天神经功能评分,中药组(1.86±0.40)低于模型组(3.13±0.69)；免疫后第61天神经功能评分,中药组(0.86±0.55)低于模型组(2.75 ±0.73),差异有统计学意义(P＜0.05).结论:益肾达络饮能降低EAE小鼠的复发率、神经功能评分,减轻炎性细胞浸润和髓鞘脱失,但其作用机制需要进一步研究.
关键词： 益肾达络饮 实验性自身免疫性脑脊髓炎 神经功能评分 病理特征 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠p38的变化及益肾达络饮的影响
目的:研究中药复方益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内p38的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化技术,测定各组小鼠中枢神经组织中p38蛋白含量.结果:p38表达正常组与模型组、激素组、中药组比较均有极显著性差异(P值均<0.01);与模型组比较,激素组有显著性差异(P<0.05),中药组有极显著性差异(P<0.01);激素组与中药组比较,有显著性差异(P<0.05).结论:EAE小鼠p38表达升高,提示EAE病变过程中可能激活p38MAPK信号转导通路.醋酸泼尼松、益肾达络饮均能降低EAE小鼠中枢神经组织内p38的表达,且益肾达络饮优于醋酸泼尼松.益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能通过下调p38,抑制p38MAPK活化,从而改善机体免疫紊乱.
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠丝裂原和应激激活蛋白酶1表达的影响
目的：通过分析丝裂原和应激激活蛋白激酶1（MSK1）在实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）中的表达情况探讨中药复方益肾达络饮保护小鼠损伤脑组织的机制。方法利用蛋白印迹技术，检测小鼠脑组织中MSK1、CREB 的含量。结果脑组织中MSK1表达显示，正常组和中药组、激素组、抑制剂组均有显著性差异（均P＜0.01）；模型组和抑制剂组有显著性差异（均P＜0.01）；中药组和激素组、抑制剂组有显著性差异（ P＜0.01）；中药组和模型组、中药加激素组有差异（均P＜0.05）。 CREB表达显示：中药组CREB的表达与其余各组相比均显著升高（P＜0.01）；中药组、中药加激素组和激素组的CREB水平依次降低。结论复方益肾达络饮治疗EAE与MSK1升高有关，p38MAPK信号通路下游因子 MSK1表达与其底物CREB表达呈相同态势。
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益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠ICAM-1的影响
目的:研究益肾达络饮对PLP139-151诱导的实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经系统内趋化因子ICAM-1的影响,探讨益肾达络饮在神经系统炎性脱髓鞘疾病中的作用机制.方法:采用免疫组化、地高辛标记的寡核苷酸探针原位杂交技术,测定各组小鼠中枢神经组织中ICAM-1蛋白及mRNA的含量.结果:ICAM-1蛋白及mRNA表达一致性较好,模型组、激素组、中药组与正常组相比较均有极显著性差异(P值均＜0.01),模型组与中药组比较有极显著性差异(P值均＜0.01),模型组与激素组比较有显著性差异(P值均＜0.05),激素组与中药组比较没有差异(P值均＞0.05).结论:益肾达络饮在蛋白、分子水平能降低ICAM-1含量,其对自身免疫性脑脊髓炎小鼠保护作用可能与下调ICAM-1,抑制抑制内皮细胞与白细胞的黏附,干扰自身反应性T细胞及活化巨噬细胞的迁移有关.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 多发性硬化 益肾达络饮 ICAM-1 -
益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎小鼠IL-2、IL-4的影响
目的:探讨益肾达络饮对自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)的影响.方法:将40只小鼠随机分为正常组、模型组、益肾达络饮组扣泼尼松组,每组各10只.正常组和模型组给予生理盐水0.01 mL·g-1灌胃,益肾达络饮组给予益肾达络饮[2 g(生药)·mL-1]0.01 mL·g-1灌胃,泼尼松组给予泼尼松(0.42 mg·L-1)0.01 mL· g-1灌胃.采用蛋白质免疫印迹法测定EAE小鼠中枢神经组织中IL-2、IL-4的变化.结果:免疫后第61天神经功能评分,模型组高于益肾达络饮组,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).模型组中枢神经组织中IL-2的表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.05);益肾达络饮组和泼尼松组中枢神经组织中IL-2的表达水平低于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).益肾达络饮组中枢神经组织中IL-4的表达水平高于模型组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:益肾达络饮能降低EAE小鼠的神经功能评分,减轻EAE小鼠中枢神经组织的炎性细胞浸润和髓鞘脱失,其机制可能与降低IL-2的表达,升高IL-4的表达有关.
关键词： 实验性自身免疫性脑脊髓炎 益肾达络饮 白介素-2 白介素-4 -
益肾达络饮对EAE小鼠JAK/STAT信号传导通路的影响
目的 研究益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎 (EAE) 小鼠JAK/STAT信号传导通路的影响.方法 采用免疫蛋白质印迹法测定EAE小鼠脊髓中pSTAT1、pSTAT3蛋白表达的变化.结果 益肾达络饮能改善EAE模型小鼠神经功能评分 (P＜0.05) .与正常对照组相比, 模型组中pSTAT1、pSTAT3的表达显著升高 (P＜0.05), 而与模型组相比, 激素组、益肾达络饮组中pSTAT1、pSTAT3的表达则明显降低 (P＜0.05) .结论 益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能评分, 这种作用与其能够降低JAK/STAT信号转导通路中pSTAT1、pSTAT3的表达有关.
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实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中ZO-1 mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响
目的 研究血脑屏障紧密连接蛋白在EAE发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效和作用机制.方法 采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中ZO-1 mRNA表达的变化.结果 中药复方益肾达络饮可以显著改善EAE模型小鼠神经功能评分.与正常组相比,激素组、中药组在免疫后14、24、40d ZO-1 mRNA在EAE小鼠大脑中表达均未见显著改变,而脊髓中在免疫后第14日显著降低；在免疫后14、24、40d模型组小鼠脊髓中ZO-1 mRNA表达均显著降低.结论 ZO-1是实验性自身免疫性脑脊髓炎血脑屏障破坏的一个重要因素;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与血脑屏障紧密连接蛋白调节密切相关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫炎性细胞 益肾达络饮 -
实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠中枢神经组织中CD4mRNA的变化及益肾达络饮对其的影响
目的 观察中药复方益肾达络饮干预实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效和作用机制.方法 采用荧光定量PCR测定免疫后不同时间点EAE小鼠中枢神经组织中CD4mRNA表达的变化.结果 中药复方益肾达络饮可以显著改善EAE模型小鼠神经功能评分.与模型组相比,激素组、中药组在免疫后14、24、40 d CD4mRNA在EAE小鼠大脑中表达水平明显降低,而在脊髓中仅在免疫后第14日显著降低.结论 免疫炎性细胞CD4+T细胞是实验性自身免疫性脑脊髓炎的潜在调节细胞;中药复方益肾达络饮能有效改善EAE小鼠神经功能损伤,其干预EAE的作用机制与中枢神经系统免疫炎性细胞的调节密切相关.
关键词： 多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 免疫炎性细胞 益肾达络饮
