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快速制备液相色谱制备管花肉苁蓉中的松果菊苷
目的:建立从管花肉苁蓉中快速制备松果菊苷对照品的工艺.方法:运用快速制备液相色谱对管花肉苁蓉浸膏进行分离纯化,得到高纯度的松果菊苷.结果:分离得到的化合物经UV、IR、MS和NMR鉴定为松果菊苷,HPLC测定其纯度为98.38％.结论:本文方法简便、快速,所得产物纯度高,可用于松果菊苷对照品的制备.
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HPLC法同时测定苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的含量*
目的:建立同时测定苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷三种成分含量的HPLC法.方法:Waters C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相:甲醇-0.1%甲酸溶液梯度洗脱;流速:1.0 mL·min-1;检测波长:330 nm;柱温30℃.结果:松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷分别在27.792-277.92μg·mL-1(r=0.999 6,n=6),2.418 4-24.184μg·mL-1(r=0.999 6,n=6),5.106-51.06μg·mL-1(r=0.999 8, n=6)范围内呈良好的线性关系,加样回收率均符合含量测定要求.结论:该方法简便、准确,可以用于苁蓉总苷胶囊中松果菊苷、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷三个成分的含量测定.
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HPLC同时测定芪骨胶囊中5种成分的含量
目的:建立芪骨胶囊的多成分指标定量方法.方法:采用高效液相色谱法同时测定芪骨胶囊中松果菊苷、朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷和柚皮苷的含量,Platisil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长270 nm,柱温30℃.结果:松果菊苷,柚皮苷,朝藿定B,朝藿定C,淫羊藿苷分别在91 ～3 094 ng(r=0.999 8),19 ～646 ng(r =0.999 7),11～374 ng(r =0.999 5),25 ～850 ng(r =0.999 5),29 ～986 ng(r=0.999 6)与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为98.9％ (RSD 1.2％),99.1％(RSD 1.3％),99.1％ (RSD 1.5％),99.4％ (RSD 1.5％),99.3％ (RSD 1.5％).结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于芪骨胶囊的质量控制.
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芪术益气润肠颗粒质量控制方法
目的:建立一种简便、可靠的控制芪术益气润肠颗粒质量的方法.方法:采用HPLC测定芪术益气润肠颗粒中黄芪甲苷、松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量,对其中的黄芪、白术、枳壳饮片进行薄层色谱鉴别.结果:毛蕊异黄酮葡萄糖苷在0.041 4 ～0.207 μg,松果菊苷0.1467～0.7335 μg,毛蕊花糖苷0.035 1 ～0.175 5μg,均成良好的线性关系;相关系数分别为0.999 5,0.999 5,0.999 6;平均回收率在97.8％ ～ 102.2％,RSD在1.8％ ～2.3％.薄层色谱中检出了黄芪、白术、枳壳的特征斑点,阴性对照无干扰.结论:该方法重复性好、简便、快速,能够有效控制芪术颗粒的质量.
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抗骨增生丸定性定量方法研究
目的:建立抗骨增生丸质量标准.方法:采用TLC法对制剂中鸡血藤和骨碎补进行了鉴别;其中鸡血藤的薄层色谱鉴别采用鸡血藤为对照药材,以三氯甲烷-丙酮(15:1)为展开剂;骨碎补的薄层色谱鉴别采用柚皮苷为对照品,以苯-醋酸乙酯-甲酸-水(1:12:2.5:3)为展开剂.采用HPLC法测定制剂中淫羊藿苷和松果菊苷含量.流动相分别为乙腈-水(30:70)和甲醇-0.1%甲酸(28.5:71.5).结果:淫羊藿苷平均回收率为97.7%,RSD为1.2%(n=5);松果菊苷平均回收率为97.9%,RSD为0.8%(n=5).结论:鉴别方法专属性强,定量方法准确,稳定,重现性好,可作为抗骨增生丸的质量控制标准.
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8种柽柳引种适应性及接种管花肉苁蓉试验研究
目的:通过对不同柽柳种适应性、管花肉苁蓉接种率和松果菊苷含量的分析,为柽柳引种和管花肉苁蓉种质资源保护及筛选提供理论依据.方法:在华北平原引种8种柽柳并接种管花肉苁蓉,采用高效液相法分析了苯乙醇总苷指纹图谱和松果菊苷含量.结果:不同柽柳种的适应性差异显著,甘肃柽柳、甘蒙柽柳与对照中国柽柳管花肉苁蓉的苯乙醇总苷组成成分基本相同,生长4个月时的松果菊苷含量差异不显著.结论:甘肃柽柳和甘蒙柽柳适宜作为管花肉苁蓉种质资源保护和筛选的寄主在华北平原引种栽培.
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管花肉苁蓉中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定
目的:采用高效液相色谱法,测定管花肉苁蓉野生种和栽培种以及人工种植不同寄主、不同大小药材的有效成分松果菊苷和毛蕊花糖苷含量.方法:Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相甲醇-乙腈-1%醋酸(15:10:75),流速0.6 mL·min-1,柱温30 ℃,检测波长334 nm.结果:松果菊苷在0.904～9.04 μg呈良好线性关系,回归方程为Y=2.000×106X-114 800(r=0.999 9),毛蕊花糖苷在1.27～12.7 μg呈良好线性关系,回归方程为Y=3.000×106X-243 200(r=0.999 9),加样回收率松果菊苷平均为98.9%(n=5,RSD 1.9%);毛蕊花糖苷平均为97.0%(n=5,RSD 0.97%).结论:本法用于管花肉苁蓉的测定简便、快速、灵敏、重复性好,所测样品中有效成分松果菊苷比毛蕊花糖苷的含量均高,野生种的2种有效成分含量均比栽培种的高,将样品以个体长度分成大、中、小3种不同样品,所测结果表示其含量按大、中、小依次增加,不同寄主间的含量差异很大,为评价管花肉苁蓉的药材质量提供一定的依据.
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管花肉苁蓉松果菊苷次生代谢部位研究
目的:通过对管花肉苁蓉寄生生长和柽柳-管花肉苁蓉不同部位松果菊苷含量的研究,为明确管花肉苁蓉松果菊苷的次生代谢部位及调控提供理论依据.方法:高效液相系统分析了指标性成分松果菊苷含量,比较分析了管花肉苁蓉干物质积累量、松果菊苷积累量和寄生柽柳根粗的相关关系.结果:随着管花肉苁蓉干物质积累量的增加,植株内的松果菊苷积累量显著增加,两者与寄生的柽柳根粗呈极显著正相关关系.吸器韧皮部的松果菊苷质量分数为15.53%,高于吸器木质部、管花肉苁蓉植株及其他部位的松果菊苷含量.结论:吸器韧皮部可能是管花肉苁蓉松果菊苷的次生代谢部位.
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华北平原管花肉苁蓉干物质积累和松果菊苷含量动态变化研究
目的:通过对管花肉苁蓉干物质积累和松果菊苷含量的研究,为华北平原人工栽培管花肉苁蓉提供理论依据.方法:比较分析了华北平原管花肉苁蓉不同生长阶段干物质积累量的动态变化,高效液相系统分析了指标性成分松果菊苷含量.结果:管花肉苁蓉干物质积累呈"S"型动态变化,9月份干物质积累增加多,生长12个月单株干物质量可达138.58g;不同接种时间的管花肉苁蓉,随着接种时间的推迟,年内干物质积累量显著降低;管花肉苁蓉松果菊苷含量以生长5个月时高,达到30.59%,之后逐渐降低,生长12个月时松果菊苷含量为9.76%.结论:明确了华北平原一年生管花肉苁蓉干物质积累和松果菊苷含量的动态变化规律.
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鲜管花肉苁蓉加工工艺
目的:建立鲜管花肉苁蓉直接加工饮片的工艺.方法:采用4因素3水平的正交试验对鲜管花肉苁蓉饮片加工过程的主要影响因素,包括切片厚度、加热温度和杀酶时间进行了优化,得到佳的工艺参数为:鲜管花肉苁蓉切成4 mm厚片,70℃杀酶6 min.另外,将优化后的工艺与鲜管花肉苁蓉切片直接晒干、鲜管花肉苁蓉按传统方法晒干的工艺进行了比较.结果:按照优化后工艺得到的饮片,其松果菊苷的含量是鲜品切片直接晒干方法的7.3倍,是传统晒干方法的12.8倍;毛蕊花糖苷的含量是鲜品切片直接晒干方法的6.5倍,是传统晒干方法的14.9倍.结论:利用本方法加工管花肉苁蓉,可以大大提高饮片中有效成分的质量,节约原料,从而有效地保护野生肉苁蓉资源,提高药物的疗效,将产生很好的经济效益和生态效益.
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松果菊苷对乙肝病毒复制和抗原表达的影响
以HBV基因转染的HepG2.2.15细胞为体外模型,研究松果菊苷对乙肝病毒(HBV)复制和抗原表达的影响,采用ELISA法测定细胞上清乙肝表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)水平;采用荧光定量PCR法检测HBV DNA水平.以HBV转基因小鼠为体内模型,研究松果菊苷对HBV复制的影响,首先采用荧光定量PCR法检测转基因小鼠肝组织HBV DNA水平,采用ELISA法检测小鼠血清HBsAg和HBeAg水平;同时检测血清转氨酶水平和肝组织病理变化;然后将HBV表达阳性的转基因小鼠随机分为5组:对照组、拉米夫定(50 mg·kg-1)组和松果菊苷高、中、低剂量(50,25,12.5 mg·kg-1)组.每天灌胃给药1次,连续给药30 d.第31天分离小鼠血清检测HBV DNA,HBsAg和HBeAg水平;提取肝组织DNA测定其HBV DNA水平,同时作肝组织病理检查.结果表明:松果菊苷在50,100 mg·L-1作用HepG2.2.15细胞6d后能显著抑制HBsAg和HBeAg表达,其高抑制率分别为42.68％,46.29％;同时在100 mg·L-1对HBV DNA具有抑制作用.此外,松果菊苷在50mg· kg-1剂量时能显著抑制HBV转基因小鼠HBsAg与HBeAg表达,其抑制率分别为42.82％,29.12％,同时对转基因小鼠血清HBV DNA水平有显著抑制作用.提示松果菊苷对HBV复制和抗原表达具有较强抑制作用.
关键词： 松果菊苷 乙肝病毒 HepG2.2.15细胞 转基因小鼠 -
松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化及ZHX3表达的影响
探讨松果菊苷含药血清促进大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用及可能的机制.采用全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞分为3组:空白对照组、经典成骨诱导组、10％松果菊苷含药血清组.ELISA测定碱性磷酸酶和骨钙素的表达;免疫荧光和Western blot检测ZHX3蛋白的表达,RT-PCR检测ZHX3mRNA的表达.结果显示,经典成骨诱导组和10％松果菊苷含药血清组的碱性磷酸酶和骨钙素表达明显增强,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01);10％松果菊苷含药血清组的碱性磷酸酶和骨钙素表达与经典成骨诱导组比较明显增强,有显著性差异(P＜0.01).经典成骨诱导组和10％松果菊苷含药血清组的ZHX3蛋白及mRNA表达明显增强,与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01);10％松果菊苷含药血清组的ZHX3蛋白及mRNA表达与经典成骨诱导组比较明显增强,有显著性差异(P＜0.01).10％松果菊苷含药血清可以促进体外培养的骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,其作用机制与ZHX3表达增加有关.
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肉苁蓉主要活性成分松果菊苷在甲醇中转化路径的阐明
松果菊苷(ECH)为中药肉苁蓉的主要活性成分之一,亦为苁蓉总苷胶囊抗血管性痴呆的药效成分.以该化合物为原料药制成的脑清智明片也于日前获得了临床批文.然而,对于该化合物的稳定性研究尚较为薄弱,一定程度上影响了其临床研究和进一步开发.该研究中,笔者首先通过HPLC-DAD检识发现ECH在甲醇中易转化成2个主要产物(P1和P2),进一步通过引入2个2位/6通电子切换阀构建流份自动接收装置,制备产物,并结合1H-NMR和LC-MS/MS分析,准确鉴定产物结构分别为毛蕊花糖苷(P1)和肉苁蓉苷A(P2).深入分析松果菊苷、毛蕊花糖苷和肉苁蓉苷A的1H-NMR谱图发现三者均能产生对应的顺式异构体(顺式松果菊苷、顺式毛蕊花糖苷和顺式肉苁蓉苷A).因此,ECH在甲醇中的转化途径主要包括糖苷键水解、甲基化和顺式/反式异构化.该文的结果将为中药肉苁蓉的深入开发和脑清智明片的杂质检测提供准确的信息.同时,该研究建立的流份自动接收装置将为微量杂质的自动化制备及半制备液相目标信号自动化收集提供简单易行的方案.
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松果菊苷的药理研究进展
松果菊苷(ECH)具有显著的抗氧化、保护神经、保护肝脏、抗炎、抗肿瘤、改善学习记忆以及免疫调节等药理作用,值得深入研究开发.本研究对ECH近年来的药理研究进展作一综述.
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苁蓉总苷胶囊HPLC指纹图谱研究
该文建立苁蓉总苷胶囊的HPLC指纹图谱,为其质量评价提供依据.以毛蕊花糖苷为参照物,采用高效液相色谱法,对苁蓉总苷胶囊进行了指纹图谱分析.色谱条件:Waters C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm);流动相甲醇-0.1％甲酸溶液梯度洗脱;流速1.0 mL·min-1;检测波长330 nm;柱温30℃.该方法精密度高、重复性好,所测样品中的13个成分均达到基线分离,并且15批成品指纹图谱相似度在0.95以上.该方法准确、可行,是一种简便、有效的中药质量评价手段.
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松果菊苷通过上调miR-34a减轻心肌细胞缺血再灌注损伤
目的 探究松果菊苷对心肌细胞缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及microRNA-34a(miR-34a)表达的影响.方法 培养鼠胚胎H9c2心肌细胞,建立IRI模型,并随机分为对照组、模型组、阳性药物(盐酸地尔硫卓)组及松果菊苷低、中、高剂量组.阳性药物组造模时用含10％盐酸地尔硫卓血清处理;松果菊苷(ECH)各处理组造模时用含10％对应浓度的ECH血清处理.MTT法检测各组细胞存活率;流式细胞仪检测细胞凋亡率;试剂盒检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;qRT-PCR检测细胞miRNA-34a水平.结果 ①心肌细胞IRI后细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05);阳性药物组和ECH中、高剂量组心肌细胞存活率较模型组显著升高(P<0.05);ECH中、高剂量组心肌细胞存活率与阳性药物组间的差异无统计学意义(P>0.05).②流式细胞仪结果显示,心肌细胞IRI后细胞凋亡率较对照组显著升高(P<0.05);阳性药物组和ECH中、高剂量组心肌细胞凋亡率较模型组显著降低(P<0.05);ECH高剂量组心肌细胞凋亡率较阳性药物组显著降低(P<0.05).③心肌细胞IRI后生成LDH、CK、MDA量较对照组显著升高(P<0.05),SOD活力较对照组显著降低(P<0.05);阳性药物组和ECH中、高剂量组心肌细胞生成LDH、CK、MDA量较模型组显著降低(P<0.05),SOD活力较对照组显著升高(P<0.05).④qRT-PCR结果显示,心肌细胞IRI后细胞miRNA-34a水平较对照组显著升高(P<0.05);阳性药物组和ECH各剂量组心肌细胞miRNA-34a水平较模型组显著升高(P<0.05).结论 松果菊苷对心肌细胞IRI后具有显著保护作用,其机制可能与miR-34a表达上调有关.
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松果菊苷对刀豆蛋白A所致急性肝损伤小鼠的保护作用及对细胞外组蛋白的影响
目的 研究松果菊苷对刀豆蛋白A(ConA)诱导的急性肝损伤小鼠的保护作用以及对细胞外组蛋白水平的影响,并初步探讨其可能机制.方法 将野生型C57BL/6(B6)小鼠随机分为正常对照组(n=6)、ConA染毒组(n=8)和松果菊苷+ConA组(n=8).ConA染毒组小鼠经尾静脉注射ConA(30mg/kg)诱导急性肝损伤,松果菊苷+ConA组小鼠先给予松果菊苷(50mg/kg)连续灌胃3d,然后再给予ConA染毒;正常对照组仅给予生理盐水.计算各组小鼠的生存率,HE染色观察肝损伤情况,ELISA法检测血清细胞外组蛋白表达情况,高效液相芯片系统测定细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平的变化.结果 与正常对照组相比,ConA染毒组小鼠肝损伤严重,病理学观察可见大量肝细胞凋亡变性坏死,血清ALT、AST水平明显升高,血清中细胞外组蛋白和细胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平均明显升高(p＜0.01).与ConA染毒组比较,松果菊苷+ConA组生存小鼠明显增多,肝损伤程度亦减轻;细胞外组蛋白、IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平均显著低于染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 松果菊苷能明显减轻ConA诱导的小鼠急性肝损伤,其机制可能与降低血清中细胞外组蛋白及肝损伤相关的细胞因子水平有关.
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管花肉苁蓉苯乙醇总苷在狗胃肠道内的生物转化
目的研究苯乙醇苷类化合物在狗胃肠道内的代谢规律.探讨中药有效部位体内转化的研究方法.方法用反相HPLC,对ig苯乙醇总苷的狗粪便中的化合物进行分离,并以含量高的3个化合物为标准,比较不同时间胃肠容物及粪便中的含量.结果从粪便中分离得到4个苯乙醇苷类化合物,分别为松果菊苷(echinacoside, I)、类叶升麻苷(acteoside, II)、异类叶升麻苷(isoacteoside, III)和2′-乙酰基类叶升麻苷(2′-acetylacteoside, IV);经HPLC分析发现,各成分在胃及小肠运行期间相对比例未发生明显变化,但在粪便中变化很大,其中松果菊苷由总苷中的48.0%降低到16.0%,而类叶升麻苷由11.0%升高为34.7%.结论苯乙醇苷类成分的代谢主要发生在大肠,其中松果菊苷经脱糖反应转化成类叶升麻苷.
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松果菊苷对脑缺血大鼠海马、纹状体胆碱、乙酰胆碱水平的影响
松果菊苷(echinacoside,ECH)是从新疆特色植物、国家重点保护野生药材肉苁蓉中分离、纯化的苯乙醇苷类化合物的主要成分[1],研究表明,ECH具有明显的神经保护作用,主要表现在抗氧化作用[2]、抗神经元凋亡作用[3]、改善学习记忆能力[4]和抗衰老作用[5]等.血管性痴呆(vascular dementia,VD)是以记忆、认知功能缺损为主,伴有语言、运动、视空间障碍等脑血管病变损害导致的痴呆,近年VD发病呈上升趋势,因此寻找安全有效的抗VD药物成为迫切的需要[6].
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HPLC同时测定壮元益生丸中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量
目的 建立壮元益生丸中松果菊苷和毛蕊花糖苷的含量测定方法 .方法 采用高效液相色谱法,以YMC-PaekODS-A(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱为固定相,乙腈-甲醇-1%乙酸水溶液(10:13:77)为流动相,柱温为30℃,流速为1.0ml·min-1,检测波长为334nm.结果 松果菊苷的测定在0.168～1.008μg内、毛蕊花糖苷在0.072～0.432μg内与峰面积呈良好线性关系,相关系数均分别为0.999 7和0.999 6;平均回收率分别为100.25%和100.70%;RSD为1.22%(n=6)和1.41%(n=6).结论 方法 简便、准确,重复性好,可用于壮元益生丸的质量控制.
