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多囊卵巢综合征大鼠卵巢smad3的表达及其组织病变的观察
目的 定量分析卵巢血管密度,探讨多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠卵巢smad3的表达与体积增大、微血管密度增加等病理改变的相关性. 方法 皮下注射脱氢表雄酮法建立PCOS大鼠病理模型,动情间期取卵巢组织后称重；免疫组织化学法检测smad3在卵巢组织中表达,anti-CD34标记卵巢微血管,并进行定量分析；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢smad3的表达；逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法检测smad3 mRNA在卵巢组织中的表达. 结果 免疫组织化学检测显示:与对照组比较,实验组卵泡smad3表达减弱,卵巢间质表达增强(P＜0.05),在各级卵泡及间质均有表达.实验组卵巢体积增大,卵巢间质微血管的密度增加(P＜0.05)；Western blot检测结果提示在实验组smad3表达上调；RT-PCR结果显示实验组卵巢组织中smad3 mRNA表达与对照组无显著性差异(P＞0.05). 结论 PCOS卵巢间质平均血管密度增加,smad3的表达变化可能与PCOS特殊卵巢病理改变有关.
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蛇毒血凝酶调控TGF-β1/Smads信号通路干预肝纤维化
目的 探讨蛇毒血凝酶如何调控TGF-β1/Smads信号通路从而干预肝纤维化的发生发展.方法 选取健康清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为正常组、模型组和蛇毒血凝酶实验组各20只.模型组和实验组用皮下注射CCl4诱导肝纤维化大鼠模型为评价载体,正常组皮下注射花生油作为对照,检测血清中ALT、AST、ALB含量和Col-Ⅳ、LN参数,苏木素-伊红(HE)染色测定肝纤维化程度表达,用RT-PCR法检测肝组织中TGF-β1及Smad3水平,Western blot法测定肝组织TGF-β1及Smad3蛋白表达.结果 实验组的HE染色显示肝纤维化程度好转.正常组和实验组的血清ALT、AST和ALB含量明显低于模型组大鼠(P＜0.05),实验组与正常组比较,血清ALT、AST和ALB含量差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠血清TCol-Ⅳ、LN参数明显高于正常组和实验组(P＜0.05);实验组与正常组相比差异无统计学意义(P＞0.05).实验组与正常组比较,大鼠肝脏组织TGF-β1和Smad3的表达无明显差异(P＞0.05);实验组TGF-β1和Smad3的表达高于正常组和模型组(P＜0.05).与模型组相比,正常组和实验组TGF-β1及Smad3蛋白表达明显降低(P＜0.05);实验组与正常组比较,TGF-β1及Smad3蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 蛇毒血凝酶干预能显著改善肝功能,降低肝纤维化程度,提示其作用机制可能与调控肝组织TGF-β1/Smads信号通路有关.
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基于 TGF -β1/Smad 信号通路探讨加味茵芍散含药血清对大鼠肝星状细胞增殖作用的影响及机制
目的：基于转化生长因子β1（TGF -β1）/ Smad 通路探讨加味茵芍散含药血清对大鼠肝星状细胞（HSC）增殖的影响。方法选成年雄性 Wistar 大鼠随机分为加味茵芍散组、己酮可可碱组和生理盐水组，分别给予加味茵芍散、己酮可可碱、生理盐水灌胃，喂养1周后，予以腹主动脉采血，制备含药血清。设生理盐水组，己酮可可碱组，空白组，加味茵芍散低、中、高剂量组，含药血清干预HSC - T6后，用 MTT 法检测加味茵芍散对 HSC - T6增殖的影响，并予以 PCR、Western blot 检测 TGF-β1、Smad3 mRNA 和蛋白表达情况。结果加味茵芍散高、中、低剂量组与生理盐水同等稀释倍数组相比较，加味茵芍散含药血清对 HSC 的增殖存在较为明显的抑制作用（P <0.05），在5%~15%的血清稀释倍数范围内，随剂量增大或给药时间的延长而抑制作用增强。加味茵芍散能有效抑制 TGF-β1/ Smad 通路中 TGF -β1、Smad3的 mRNA 和蛋白表达，与空白组和生理盐水组比较差异有统计学意义（P <0.05），且具有量效与时效关系。结论加味茵芍散可抑制 HSC 增殖，其机制可能与下调TGFβ1、Smad3的表达、阻断 TGF -β1/ Smad 信号传导通路有关。
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虎杖总蒽醌对糖尿病肾病模型小鼠肾皮质TGF-β1,Smad3的影响
目的:观察虎杖总蒽醌对糖尿病肾病(DN)模型小鼠肾脏皮质转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3的影响.方法:将成模小鼠随机分为模型、开搏通、虎杖总蒽醌高、中、低剂量5组,每组17只,另外选取17只小鼠做为空白组.给药组分别ig高、中、低剂量的虎杖总蒽醌(400,200,100 mg·kg-1),共给药8周.运用免疫组化法,分别观察虎杖总蒽醌对DN模型肾脏皮质TGF-β1,Smad3的影响.结果:NH小鼠DN模型肾皮质TGF-β1,Smad3蛋白表达水平明显升高,而中剂量虎杖总蒽醌组NH小鼠肾皮质Smad3蛋白表达水平明显下降(IA为542.00±116.89)(P＜0.05)；虎杖总蒽醌高、中、低剂量组肾TGF-β1 IA值有降低的趋势,但无统计学意义.结论:TGF-β1,Smad3与DN形成有关；虎杖总蒽醌能显著抑制NH小鼠DN模型肾皮质Smad3蛋白表达.
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补阳还五汤对肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1/Smad3表达的影响
目的:观察补阳还五汤对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织病理及转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA,Smad3mRNA表达的影响.方法:将144只健康雄性SD大鼠随机分成6组,即假手术(NS)组、模型(BLM)组、强的松(P)组、补阳还五汤高、中、低(A,B,C)组,每组各24只.除NS组外,其余各组采用一次性气管滴注博莱霉素复制肺纤维化大鼠模型,NS组气管内滴注等量NS,造模第2天起,A,B,C组用补阳还五汤(剂量分别为18.48,9.24,4.62 g·kg-1)灌胃,P组用强的松混悬液(4.2 mg·kg-1)灌胃,NS组及BLM组用NS(10 mL·kg-1)灌胃,于造模后第7,14,28 d分3批处死动物,每次8只,取左肺制备病理切片,行HE,Masson染色观察肺泡炎及肺纤维化程度改变情况;取右肺上中叶组织,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组大鼠肺组织TGF-β1mRNA,Smad3 mRNA的表达.结果:①BLM组大鼠肺泡炎及肺纤维化程度在不同时间点均明显高于同期NS组,差异明显(P＜0.01);②与BLM组相比,补阳还五汤各剂量组肺泡炎及肺纤维化程度有不同程度的改善(P＜0.01或P＜0.05);③与NS组相比,BLM组肺组织TGF-β1,Smad3表达水平在不同时间点均明显增高(P＜0.01),尤以第7天为明显,并随时间推移有逐渐下降的趋势;④补阳还五汤各剂量组TGF-β1,Smad3表达水平与同期BLM组相有不同程度的降低(P＜0.01或P＜0.05),其中B组在7,14,28 d,C组在14,28 d下降较明显(P＜0.01),A组与同期BLM组相比虽有所降低,但早期不如B,C组明显.结论:补阳还五汤可以明显改善模型大鼠肺组织肺泡炎和肺纤维化程度,抑制博莱霉素诱导的肺纤维化大鼠肺组织TGF-β1 mRNA、Smad3mRNA的表达上调,从而减轻肺纤维化程度.
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逍遥丸对小鼠卵母细胞分泌因子生长分化因子-9受体及Smads通路的影响
目的:观察逍遥丸对小鼠卵母细胞分泌因子生长分化因子-9(GDF-9)受体BMPRⅡ、ALK-5及下游Smads通路中Smad2、Smad3的影响.方法:将120只小鼠随机分为4组:疏肝高、低剂量组;COH组和空白对照组,每组30只.应用免疫组化和实时荧光定量PCR (Real-time PCR)法分别测定卵母细胞中BMPRⅡ、ALK-5、Smad2、Smad3蛋白及mRNA的表达.结果:与空白对照组比较,COH组及疏肝低剂量组BMPRⅡ蛋白及mRNA表达无统计学意义;疏肝高剂量组BMPRⅡ蛋白及mRNA表达增强(P＜0.05).ALK-5、Smad2、Smad3蛋白及mRNA表达在各组间比较均无统计学意义.结论:高剂量逍遥丸可上调卵母细胞中GDF-9Ⅱ型受体BMPRⅡ蛋白及mRNA表达,但并未影响ALK-5、Smad2、Smad3的表达,提示逍遥丸影响卵子质量的机制与GDF-9一型受体及下游Smads通路无关.
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青光安颗粒剂有效组分对兔眼滤过术后滤过道瘢痕组织TGF-β1和Smad3表达的影响
目的:观察青光安颗粒剂4种有效组分对兔眼滤过术后滤过道瘢痕组织TGF-β 1和Smad3表达的影响,探讨青光安有效组分抗青光眼术后滤过道瘢痕化的效果及作用机制.方法:将青光安颗粒剂有效组分作用于滤过性手术后兔眼(有效组分1-4组),通过与正常组、模型组、丝裂霉素组(MMC组)的比较,观察青光安颗粒剂4种有效组分对青光眼术后滤过道瘢痕组织TGF-β 1和Smad3的影响.结果:有效组分2组与MMC组TGF-β 1和Smad3及mRNA表达比较差异无统计学意义,其余3组与MMC组TGF-β 1和Smad3及mRNA表达比较,差异有显著性(P＜0.05),其抑制效果不如MMC组.结论:青光安有效组分2和MMC都可通过抑制TGF-β 1和Smad3 mRNA及其蛋白表达减少瘢痕组织增生,具有明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用.
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大黄素对肝纤维化大鼠肝脏组织Smad3表达的影响
目的:观察大黄素对四氯化碳(CCl4)诱导肝纤维化大鼠肝脏组织Smad3 mRNA和蛋白表达的影响.方法:50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组(10只)、CCl4组(20只)和大黄素+CCl4组(20只),共3组.CC14皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,同时大黄素灌胃干预,12周后处死大鼠.采用VG胶原染色法检测大鼠肝脏组织病理学改变,免疫组织化学法检测肝脏组织Smad3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测肝脏组织Smad3 mRNA表达.结果:与CCl4组比较,大黄素可显著降低CC14诱导的肝纤维化程度(P＜0.05),减少肝脏组织Smad3蛋白和mRNA表达(P＜0.05).结论:大黄素可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能通过下调Smad3 mRNA和蛋白表达有关.
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小承气汤对烟熏法诱导慢性支气管炎模型大鼠TGF-β1/Smad3信号通路的影响
目的:探讨小承气汤对慢性支气管炎模型大鼠药物干预的可能机制.方法:80只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组和治疗组.采用改良烟熏法复制慢性支气管炎模型,造模完成后用小承气汤对模型大鼠进行治疗.取肺和结肠光镜下观察病理形态学改变,测量转化生长因子-β1 (TGF-β1)、Smad3表达水平.结果:病理形态学观察:与模型组比较,治疗组大鼠肺及肠组织病理损伤程度减轻.免疫组化:与模型组比较,治疗组大鼠肺组织TGF-β1、Smad3表达及肠组织TGF-β1、Smad3表达明降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:小承气汤"肺病治肠"的药物干预机制可能和降低肺、肠组织的TGF-β 1、Smad3等炎性介质的表达有关.
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保元Ⅱ号对糖尿病大鼠肾脏中Smad蛋白表达的影响
目的:观察Smad在糖尿病大鼠肾脏中的表达及保元Ⅱ号对其表达的影响.方法:用链脲佐菌素腹腔注射制备糖尿病大鼠模型,随机分为空白对照组(N),模型组(DN),保元Ⅱ号治疗组(Z)和贝那普利治疗组(B),并用相应的药物干预,给药8周后处死大鼠,检测各组血浆白蛋白、血糖、尿蛋白定量、尿β2微球蛋白含量,并且用RT-PCR检测TGF-β1和Smad2,Smad3,Smad7在肾组织的表达水平.结果:与DN组相比,DN-Z组血浆白蛋白明显上升(P<0.01),血糖和尿蛋白定量、尿β2微球蛋白水平均有下降(P<0.01);TGF-β1、Smad2、Smad3的mRNA在模型大鼠肾组织中表达明显下调,Smad7的mRNA明显下调.干预效果与贝那普利相近.结论:保元Ⅱ号对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与调节肾脏中TGF-β1和Smad2,Smad3,Smad7表达水平有关.
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化瘀降浊汤对转化生长因子-β1/母系同源物家族信号通路相关蛋白的影响
目的 观察化瘀降浊汤对转化生长因子(TGF)-β1诱导HK-2细胞发生上皮间质转分化(EMT)过程TGF-β/母系同源物家族Smad通路中关键因子E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Smad3、蜗形蛋白(Snail)的影响,探讨其保护肾功能的作用机制.方法 MTT法测定不同浓度化瘀降浊汤对TGF-β1诱导HK-2的细胞增殖抑制率,计算半数抑制率(IC50).Westem blot和RT-PCR检测E-cadherin、Smad3、Snail蛋白和基因表达,间接免疫荧光检测E-cadherin蛋白表达.结果 化瘀降浊汤在一定浓度范围内抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞增殖,呈现出一定的量效关系,IC50为472.017μg/mL. Westem blot和RT-PCR检测结果显示,化瘀降浊汤中、高剂量组E-cadherin、Smad3、Snail蛋白和mRNA表达与诱导组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);免疫荧光检测结果显示,化瘀降浊汤能促进E-cadherin蛋白表达,与Western blot分析结果一致.结论 化瘀降浊汤可能通过调节HK-2细胞TGF-p/Smad信号途径中的关键蛋白达到抑制甚至逆转肾小管EMT,从而对肾小管间质纤维化起到保护作用.
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丹参酮ⅡA对小鼠肝纤维化的干预作用
目的 通过观察胰岛素样生长因子结合蛋白7(IGFBP7)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)/Smad3信号通路在丹参酮ⅡA作用的肝纤维化小鼠肝组织中的作用,探讨丹参酮ⅡA护肝作用的新机制.方法 腹腔注射硫代乙酰胺(TAA)制备肝纤维化模型.将36只雄性昆明小鼠随机分为5组:正常对照组、4周模型组、4周预防组、6周模型组、3周治疗组.检测血清丙氨酸氨基转氨酶(ALT)和乳酸脱氢酶(LDH)活力,进行HE和Masson染色观察肝组织形态学变化,免疫组织化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、纤维粘连蛋白(FN)、TGF-β1、Smad3和IGFBP7的表达;用TUNEL方法检测肝细胞凋亡;Western blot 检测肝组织FN、Smad3和 IGFBP7的含量.结果 分别与4周和6周模型组比较,4周预防组和3周治疗组血清ALT、LDH含量明显降低,肝组织损伤显著改善,肝细胞凋亡指数降低;肝组织α-SMA、collagenⅠ、FN、TGF-β1、Smad3和IGFBP7的表达亦明显减少;肝组织FN、IGFBP7和Smad3含量减少,各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA具有改善肝功能、抑制肝星状细胞活化、减少细胞外基质(ECM)生成、保护肝细胞的作用,其机制可能与阻止TGF-β1/Smad3信号通路,降低肝组织IGFBP7的表达有关.
关键词： 肝纤维化 丹参酮ⅡA 胰岛素样生长因子结合蛋白7 转化生长因子-β1 smad3 -
SMAD3敲除对雄性小鼠生殖功能的影响
目的 探讨SMAD3缺失对雄性小鼠生殖功能的影响.方法 野生型雌性小鼠分别与基因敲除(实验组)及野生型(对照组)雄性小鼠配对;睾丸常规石蜡包埋、切片并进行HE、TUNEL染色;对附睾精子进行形态、动力学分析等.结果 实验组受孕率为92%,对照组受孕率100%;实验组每窝仔鼠数目为(5.45±0.78)只,存活率(87±19)%;对照组每窝仔鼠(6.01±1.03)只,存活率(97±15)%.不同发育阶段(7、18及90d)基因敲除小鼠的睾丸与同龄野生型相比,组织学结构未见明显异常,生精细胞凋亡未见明显增加.其精子形态正常,数量及活力与野生型相比无显著下降.结论 SMAD3敲除对雄性小鼠生殖功能无明显影响,提示SMAD3在睾丸中的功能是可以被替代的.
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大鼠心肌肥厚过程中信号蛋白Smad3的变化
为研究SMAD信号通路在大鼠心肌肥厚中的作用,结扎大鼠腹主动脉复制心肌肥厚模型,在不同时间点检测左心室重量指数(left vertricular mass index,LVMI),RT-PCR法检测肥大心肌组织中胚胎抗原心房利钠因子(atrial natriuretic factor,ANF)的mRNA表达、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)及Smad3的mRNA表达,Western blotting 检测Smad3的蛋白表达.结果术后3天LVMI开始上升并持续至4周,肥大心肌组织中ANF 、TGF-β1、 Smad3的mRNA表达水平以及Smad3的蛋白表达术后3天开始上升,持续至4周,术后2周为表达高峰(P＜0.01).提示信号蛋白Smad3参与了腹主动脉结扎诱导的大鼠心肌肥厚病理过程.
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Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响
目的 研究Smad2/Smad3蛋白在大鼠卵巢颗粒细胞中的表达及FSH对其活化的影响.方法 21d SD雌性大鼠,注射PMSG 20IU,48h后对卵巢颗粒细胞进行原代培养,用TGFβRⅡ抗体及不同浓度的FSH对细胞进行不同时间的处理,通过免疫细胞化学方法观察TGFβ信号通路中Smad2/Smad3和P-Smad2/P-Smad3(磷酸化Smad2/3)表达的变化.结果 1.Smad2/Smad3主要定位于卵巢颗粒细胞胞质,其活化形式P-Smad2/P-Smad3有少量表达;2.经FSH处理后, Smad2/Smad3向核内转移增多,P-Smad2/P-Smad3的表达增强,并与FSH的作用时间及剂量呈正相关性;3.TGFβRⅡ被抗体完全中和后再用FSH处理,Smad2/Smad3的核阳性率无显著增多, P-Smad2/P-Smad3的表达未见明显增强.结论 1.FSH促进Smad2/Smad3的磷酸化;2.FSH对 Smad2/Smad3的激活作用与TGFβ受体密切相关.
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Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞增殖
目的 探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞增殖功能的影响.方法 21d SD雌性大鼠,腹腔注射孕马血清20IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养,用Smad3 基因特异的siRNA基因沉默后,采用免疫细胞化学法检测颗粒细胞中Smad3蛋白表达的变化,以判定基因沉默效率,Smad3基因沉默后用免疫细胞化学法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及Cyclin D2蛋白表达的变化.结果 Smad3基因沉默后,卵巢颗粒细胞中PCNA阳性细胞百分比为(25.80±1.70)%,显著低于空白对照组(40.80±2.50)%,Smad3基因沉默后Cyclin D2阳性细胞百分比为(25.00±2.90)%,与空白对照组(55.50±2.50)%相比明显减少.结论 Smad3基因可促进大鼠卵巢颗粒细胞的增殖.
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Smad3促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬
目的 探讨Smad3基因对大鼠卵巢颗粒细胞自噬的影响.方法 21d SD雌性大鼠腹腔注射孕马血清20 IU/只,48h后收集卵巢颗粒细胞进行原代培养.培养细胞分为3组:空白对照组:培养液中不加任何处理因素;敲低实验组:培养液中加入Smad3基因特异性的SiRNA及转染试剂RNAiMAX;过表达实验组:培养液中加入Smad3真核表达质粒及转染试剂Lip0 2000.免疫细胞化学方法鉴定培养细胞纯度;Western blotting方法检测Smad3蛋白表达变化,检测转染效率.Smad3基因敲低及过表达后,Western blotting方法检测自噬体膜形成标志蛋白LC3B及自噬调控相关蛋白Bcl-2的蛋白表达变化.结果 Smad3敲低时,LC3B蛋白Ⅱ型与Ⅰ型的比值(LC3BⅡ/Ⅰ)变化不明显,Bcl-2蛋白表达明显降低;Smad3过表达时,LC3BⅡ/Ⅰ明显增加,Bcl-2蛋白表达明显增加.结论 Smad3基因特异的SiRNA及真核表达质粒可以有效地转入大鼠卵巢颗粒细胞中,Smad3基因促进大鼠卵巢颗粒细胞自噬,其机制可能与Bcl-2蛋白相关.
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阿魏酸对大鼠肝纤维化过程中肝细胞的保护作用及其可能机制
目的 探讨阿魏酸干预对转化生长因子-β(TGF-β)诱导的肝细胞增殖、凋亡影响及其保护肝细胞具体作用机制.方法 体外培养大鼠肝细胞,随机分为:空白对照组,TGF-β1组(2.5 ng/ml),100μmol/L阿魏酸组(阿魏酸100μmol/L+TGF-β12.5 ng/ml),200μmol/L阿魏酸组(阿魏酸200μmol/L+TGF-β12.5 ng/ml),400μmol/L阿魏酸组(阿魏酸400μmol/L+TGF-β12.5 ng/ml).各组均加入含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液,实验组按照剂量按要求添加.MMT法检测肝细胞增殖情况;流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况;实时荧光定量PCR检测肝细胞Smad3 mRNA表达情况;Western Blot检测肝细胞Smad3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平.结果 与TGF-β1组相比,MTT实验结果显示阿魏酸促进肝细胞增殖,且呈剂量依赖性(P<0.05).流式细胞仪实验结果显示阿魏酸抑制肝细胞凋亡,且呈浓度依赖性(P<0.05).实时荧光定量PCR结果显示阿魏酸抑制肝细胞Smad3 mRNA表达,且呈剂量依赖性(P<0.05).Western blot结果显示阿魏酸抑制肝细胞细胞Smad3蛋白表达,且呈剂量依赖性(P<0.05).并进一步发现阿魏酸增加肝细胞MMP-2、MMP-9蛋白表达,抑制肝细胞纤维化(P<0.05).结论 阿魏酸保护肝细胞的机制可能是抑制TGF-β1诱导肝细胞Smad3表达,促进MMP-2、MMP-9表达,减少肝细胞凋亡,并促进肝细胞增殖,减轻肝脏纤维化,并与阿魏酸呈剂量依赖性.
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Smad3基因siRNA表达载体的构建及在瘢痕疙瘩成纤维细胞的沉默效应
目的 构建针对Smad3基因的短片断干扰RNA(small interfer RNA,siRNA)表达载体,观察RNA干扰对瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3基因表达的抑制作用.方法 根据siRNA设计原则,设计3条针对Smad3基因的siRNA靶序列,分别合成两条互补的寡核苷酸链,退火后与载体pRNAT-U6连接,行酶切鉴定和DNA序列测定.用脂质体包裹转染瘢痕疙瘩成纤维细胞,荧光定量PCR和Western-blot方法检测Smad3基因的表达情况.结果 经测序鉴定DNA片段确已克隆入载体pLVshRNA-puro,测序结果提示三组碱基序列与靶序列完全相同.经荧光定量PCR和Western-blot方法检测示shRNA-smad3(CA3)沉默效率高.结论 证实实验构建的沉默瘢痕疙瘩成纤维细胞Smad3基因表达的siRNA载体获得成功,为下一步以TGF-β信号转导通路的Smad3因子为靶点的瘢痕疙瘩治疗实验研究奠定了基础.
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人脑胶质瘤中转化生长因子β2、Smad3蛋白表达及临床意义
目的 探讨人脑胶质瘤组织中转化生长因子β<,2>(TGF-β<,2>)、Smad3蛋白表达水平与患者预后的关系.方法 应用免疫组化SP法检测80例人脑胶质瘤组织TGF-β<,2>、Smad3蛋白表达水平,并分析其与患者无进展生存期及总生存期的关系.结果 TGF-β<,2>蛋白和Smad3蛋白在不同级别胶质瘤之间表达具有显著性差异(P<0.05),其表达与病理级别呈正相关(r=0.545,r=0.570,P<0.01).将所有患者分为TGF-β<,2>或Smad3高表达组和低表达组,其无进展生存期和总生存期均有显著性差异(P≤0.05).结论 TGF-β<,2>、Smad3蛋白表达与胶质瘤发生及恶性程度相关;检测两者表达情况可为脑胶质瘤的临床诊治及预后判断提供依据.
