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气血并治方有效组分对缺氧/复氧损伤心肌保护作用的机制研究
目的:观察气血并治方组分配伍(Components of water extract from Qixue Bingzhi Recipe,CWQB)对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞的保护作用,探讨其改善心肌能量代谢从而防止细胞凋亡的相关性机制.方法:分离、提取、培养出生1-2天的SD乳鼠原代心肌细胞,缺氧3h复氧2h制作H/R模型,分为Control组(正常氧组)、H/R组(缺氧/复氧模型)、TMZ组(缺氧/复氧模型+100μmol/L曲美他嗪(Trimetazidine,TMZ))和CWQB组(缺氧/复氧模型+1mmol/L气血并治方有效组分).采用高效液相色谱分析法(High Performance Liquid Chromato-graph,HPLC)测定各组细胞高能磷酸化合物-一磷酸腺苷(Adenosine mono-phosphate,AMP)、二磷酸腺苷(Adenosine diphosphate,ADP)、三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate,ATP)的含量并计算总腺苷酸量(Total adenylic acid,TAN)、能荷(Energy charge,EC)水平;酶联免疫吸附法(Enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)法检测心肌细胞损伤标志物肌酸激酶同工酶(Creatine kinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白T(Troponin,cTnT)水平,流式细胞术检测心肌细胞早期凋亡率.Pearson相关性检验分析心肌损伤标志物、早期凋亡率与高能磷酸化合物含量之间的关系.结果:与H/R组比较,TMZ组、CWQB组AMP含量下降,ADP、ATP含量和TAN、EC水平均有所升高,其中TMZ组ADP、ATP、TAN升高程度较CWQB组更为显著(p＜0.05);TMZ组、CWQB组CK-MB、cTnT含量显著下降,其中CWQB组cTnT含量下降更为显著(p＜0.05);TMZ组、CWQB组早期凋亡率有所下降,TMZ组下降更为显著(p＜0.05).相关性分析显示,CK-MB水平与ADP浓度呈显著负相关;早期凋亡率与AMP浓度呈显著正相关,与ADP、ATP浓度呈负相关(P＜0.01).结论:CWQB能够在降低H/R心肌细胞AMP浓度,升高ADP、ATP浓度和TAN、EC水平的同时,减轻心肌损伤标志物CK-MB、cTnT含量,抑制心肌细胞的早期凋亡率,从而发挥对H/R损伤心肌细胞的保护作用.
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基于药物代谢酶和转运蛋白的中药方剂配伍规律研究
药物代谢酶和转运蛋白是决定药物体内过程的关键因素,底物对它们的抑制或诱导作用是药物联合应用时产生药动学相互作用的主要机制.作为复杂化学成分组合体的中药及其有效成分也表现出对药物代谢酶和转运蛋白的抑制或诱导作用,并且中药在配伍应用时也产生了对药效物质体内过程的影响.由此认为.这种作用可能也是中药在按照传统君臣佐使配伍原则组成方剂时发挥增效解毒作用的一个重要机制,在体内直接作用物质层面上研究整合药物代谢酶和转运蛋白活性的方剂配伍规律,对于指导有效组分配伍将具有重要意义.
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中药有效组(成)分配伍的研究进展与述评
文章分析了当前中药有效组(成)分配伍研究中的2种模式中药有效组(成)分直接配伍模式和基于方剂药效的中药有效组(成)分配伍模式的研究进展,指出中药有效组(成)分配伍研究模式是当前方剂药效物质和配伍原理研究的一条重要途径,它对于研制成分相对清楚、作用机制明确的创新型中药有效组(成)分配伍复方药物具有重要的意义.指出了当前中药有效组(成)配伍研究中存在的问题,认为加强方剂配伍理论和药理机制对中药有效组(成)分配伍研究的指导、加强从经典有效的方剂中进一步寻找中药有效组分和进一步开展多学科协作,寻找适合中药有效组分配伍研究的模式和方法是发展中药有效组(成)分配伍研究的重要途径.
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通脉复方有效组分抑制肾小球系膜细胞增殖的活性筛选及配伍研究
目的:筛选黄芪、三七组成的通脉复方有效组分,并确定其佳配伍剂量.方法:SD大鼠随机分为空白血清组、金水宝组1.32 g·kg(-1)、通脉水煎8 g·kg(-1)组、通脉提取物8 g·kg(-1)组、复方多糖0.64 g·kg(-1)组、复方皂苷0.16 g·kg(-1)组、其余组分组,共7组.ig给药7d,7d后采集大鼠含药血清.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定不同提取组分含药血清对肾小球系膜细胞(GMC)增殖的影响.在此基础上,采用2因素3水平的正交试验L9(34)对"有效组分"多糖、皂苷佳配伍组合进行了研究.结果:正常培养及LPS刺激条件下,复方多糖与复方皂苷、通脉提取物、水煎液、金水宝含药血清均能抑制GMC增殖,与空白对照组相比,均有显著或非常显著性差异(P<0.05～0.01);而其余组分含药血清对GMC增殖尤明显抑制,与空白对照组相比无显著性差异;通脉提取物含药血清对GMC增殖的抑制作用强于复方多糖、复方皂苷及金水宝含药血清,组间比较,有显著或非常显著性差异(P<0.05～P<0.01).对主效应即GMC增殖的抑制作用的贡献程度(F值)复方多糖(13.69)与复方皂苷(13.67)几乎无差别.有效组分不同剂量配伍中,以A3B3即复方多糖960 mg、复方皂苷240 mg配伍对GMC的抑制作用为显著.结论:复方多糖与复方皂苷为通脉复方的主要有效组分,其比例为4:1(960 mg:240 mg)为有效组分佳剂量配伍.
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虫草菌丝水煎液及其有效组分C12对肝纤维化大鼠HGF-α及肝细胞凋亡的影响
目的:研究虫草菌丝治疗二甲基亚硝胺(DMN)模型大鼠肝纤维化有效组分及其作用机制.方法:大鼠ip 0.5％DMN 5 mg·kg-1,每周连续3d,共4周.造模结束后,模型大鼠随机分组,治疗组分别以虫草菌丝水煎液(CsB)及其组分(C12)以生药800 mg· kg-ig,每日1次,共2周；正常组及模型组以等量生理盐水ig.疗程结束后,分别检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)及天冬氨酸转氨酶(AST),血清白蛋白(Alb)及血清总胆红素(TBiL)含量,检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量、观察肝组织病理及胶原沉积变化,Western印迹法检测肝细胞生长因子α(HGF-α)的表达,TUNEL染色检测大鼠肝细胞凋亡并计算凋亡数量.结果:与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠血清ALT,AST活性、TBil含量和大鼠肝组织Hyp含量显著降低,Alb含量显著升高(P＜0.05).与6周模型组比较,CsB及C12治疗组的坏死出血、炎性细胞浸润、胶原增生、纤维间隔形成有所改善.与模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝组织的蛋白表达量显著升高(P＜0.01).与6周模型组比较,CsB及C12治疗组大鼠肝细胞凋亡数量显著降低(P＜0.01).结论:CsB及C12能够显著改善肝功能,有显著抗肝纤维化作用.CsB和C12能促进HGF-α表达,抑肝细胞凋亡,使肝细胞凋亡和增殖达到平衡状态,阻断和逆转肝纤维化.
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基于指纹图谱的决明子有效组分纯化工艺
目的:采用HPLC指纹图谱指导优化决明子有效组分纯化工艺.方法:采用HPLC建立决明子指纹图谱,以5个主要峰的回收率和指纹图谱相似度为指标,优选大孔树脂型号、上样量和洗脱条件.结果:D-101树脂对5个成分的回收率高,上样量为3 mL,树脂用量为10 mL,洗脱溶剂为75％乙醇50 mL,纯化后主峰回收率均＞85％,RSD均＜0.6％,HPLC指纹图谱相似度＞0.98.结论:采用HPLC指纹图谱指导优化决明子有效组分大孔树脂纯化工艺,可保持分离前后有效组分中化学成分的一致性.
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透皮特性结合正交试验优选麻芥平喘巴布剂有效组分的提取工艺
目的:优选麻芥平喘巴布剂的有效组分提取工艺.方法:以盐酸伪麻黄碱、苦杏仁苷的提取率和透过率为综合评价指标,采用正交试验优选提取工艺,提取物用Franz扩散池法进行体外透皮试验,HPLC测定伪麻黄碱、苦杏仁苷含量.结果:麻芥平喘有效组分的佳提取工艺为加6倍量80％乙醇回流提取2次,每次1.5h.结论:结合药效学指标优选的提取工艺符合实际应用需求,为麻芥平喘巴布剂的临床推广提供依据.
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丹参和三七的配伍研究概况
总结了近年来丹参、三七及其有效组分配伍的研究进展,归纳分析了丹参与三七的不同配伍形式对有效成分的提取率、稳定性、药理作用等方面的影响,结果表明两药配伍存在一定的协同作用,且不同比例配伍的相互作用存在着显著差异性.
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三草降压汤有效组分对自发性高血压大鼠血管活性舒缩因子的影响
目的:观察三草降压汤(SCD)有效组分的降压作用与血管舒缩因子内皮素(ET-1)、一氧化氢(NO)、血管紧张素(Ang)Ⅱ的之间的关系.方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测SCD有效组分干预后自发性高血管大鼠(SHR)血浆中AngⅡ和ET-1的浓度;用硝酸还原酶法检测其NO的含量,以此探讨SCD有效组分的降压作用机制.结果:与模型组比较,95％SCD醇提物组血浆NO及NO/ET-1均显著升高(P＜0.05).结论:SCD有效组分可以通过升高血管舒张因子NO,改变血浆NO/ET-1比值,发挥其降压作用.
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青光安颗粒剂有效组分对兔眼滤过术后滤过道瘢痕组织TGF-β1和Smad3表达的影响
目的:观察青光安颗粒剂4种有效组分对兔眼滤过术后滤过道瘢痕组织TGF-β 1和Smad3表达的影响,探讨青光安有效组分抗青光眼术后滤过道瘢痕化的效果及作用机制.方法:将青光安颗粒剂有效组分作用于滤过性手术后兔眼(有效组分1-4组),通过与正常组、模型组、丝裂霉素组(MMC组)的比较,观察青光安颗粒剂4种有效组分对青光眼术后滤过道瘢痕组织TGF-β 1和Smad3的影响.结果:有效组分2组与MMC组TGF-β 1和Smad3及mRNA表达比较差异无统计学意义,其余3组与MMC组TGF-β 1和Smad3及mRNA表达比较,差异有显著性(P＜0.05),其抑制效果不如MMC组.结论:青光安有效组分2和MMC都可通过抑制TGF-β 1和Smad3 mRNA及其蛋白表达减少瘢痕组织增生,具有明显的抗青光眼术后滤过道瘢痕化的作用.
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优化甘参复方抗肝纤维化组分配伍的研究
甘参复方是由丹参与甘草组成的和血柔肝方剂,以丹酚酸与甘草酸作为指标性有效组分.丹酚酸是丹参水溶性成分中重要的有效成分,甘草酸是中药甘草中重要的化学成分,这两味中药均具有较好的抗肝纤维化作用[1～3],但是,目前尚无两者联合作用抗肝纤维化的研究报道,本研究旨在找出以丹酚酸与甘草酸为指标性成分的丹参与甘草抗肝纤维化的优配伍.
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中药复方物质基础研究新思路和方法
复杂的化学成分是中药复方发挥预防、治疗、诊断疾病的物质基础.基于对传统中药复方物质基础和现代中药复方创新物质基础的认识,提出了"功能组分"新观点,中药复方成分可以划分为有效组分、功能组分和无用成分.中药复方物质基础由"有效组分+功能组分"共同构成有序的整体结构,具有"三个层次多维结构";提出了由"微观到宏观"和"宏观到微观"的二个不同的物质基础整体性结构研究解决方案.
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清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响
目的:探讨清开灵有效组分对大鼠缺血脑组织星形胶质细胞活化的影响.方法:参照Longa法复制大鼠脑缺血模型,清开灵有效组分干预,免疫组化分析缺血脑组织胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、酸性钙结合蛋白(S-100β)表达的组间与时效特征.结果:脑缺血后GFAP、S-100β表达增强.用药可增强缺血12h GFAP、S-100β的表达,促进星形胶质细胞的激活,对受损神经元发挥保护作用;至缺血24h,除珍珠母水解液组外,其余用药组促进GFAP、S-100β表达的作用减弱.结论:清开灵有效组分促进星形胶质细胞活化的作用具有明显时效性和相对特异性,黄芩苷、栀子苷的作用在于促进星形胶质细胞的反应性增生,而胆酸、珍珠母水解液则表现为对星形胶质细胞功能活化的促进作用.
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复方补骨脂缓释片药材-中间体-制剂HPLC指纹图谱的相关性研究
复方补骨脂缓释片由补骨脂和葛根两味药组成,具有补肾健脾,活血化瘀的功效,可用于骨质疏松症的防治,其有效组分为葛根总黄酮、补骨脂总香豆素及补骨脂总黄酮,针对这几类成分,对药材、中间体、制剂进行系统的指纹图谱研究,从整体上宏观的综合控制复方补骨脂缓释片的质量.
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双参通冠方药物血清对心肌细胞缺氧复氧损伤Ca2+超载的影响
双参通冠方(SSTG)由人参、丹参、元胡3药的有效组分提取物组成,前期工作表明,该方是治疗心肌缺血再灌注损伤的有效中药制剂[1].
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中医方药物质基础研究的名词术语标准化探讨
中药源于我国,也是我国少数几个拥有自主知识产权开发潜力的学科领域之一,以我为主,制定和推广中药国际化标准,发挥其法规效用和自我约束作用,促进中药与国际社会各方面的衔接已迫在眉睫.而名词术语的规范性和标准化是中药标准化的前题,因此规范中药术语是中医药现代化和国际化过程中急需解决的问题之一.笔者以"3个层次多维结构"组分结构理论为指导,提出了中医方药物质基础研究的名词标准化建议.
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中药方剂有效成(组)分配伍研究
方剂通过配伍提高临床疗效,组分配伍是中药方剂配伍的新形式.组分配伍以中医学理论为指导,其目标是能够按照中医理论辨证用药,并且具有较高的安全性,临床适应证明确且针对性好,成分及作用机理相对清楚,质量稳定可控,能够产业化推广.因此,组分配伍必须要建立标准组分的配伍方法,并根据实验设计确定主要组分,剔除有毒组分,还要建立组分剂量配比的方法.组分配伍模式有从有效方剂的饮片配伍深入到组分配伍,直接组分配伍及单味药的标准组分配伍几类,组分配伍的作用方式仍然是多组分、多靶点、整体综合调节.有效组分配伍的意义在于确保临床用药剂量准确和安全有效,提高疗效,节省药材,减少毒副作用.通过上述工作创制成分清楚,机理明确的现代中药.现代对中药化学及其药理作用的研究结果为有效组分配伍提供了科学依据,现代医药学面临的多基因复杂性疾病靠单一成分难以获得佳疗效为有效组分配伍新药提供了新机遇.因此,从传统有效复方中寻找佳配伍,从成分清楚的单味标准组分中按中医理论组合佳配伍,突破以临床经验积累作为中药研制的一贯模式,相信可以为中医学术进步及产业发展起到积极的推动作用.
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基于有效组分检测与理化表征相结合的蜣螂有效部位制备工艺研究
目的:优选蜣螂有效部位的制备工艺,探索通过提取液理化表征来进行过程控制的可行性.方法:采用单因素试验法,主要以有效组分多肽与氨基酸的含量为指标,结合流变学、表面化学、电学等方面的表征,系统考察影响蜣螂有效部位制备相关的提取、浓缩、分离、纯化、干燥各环节的各因素.结果:确定了蜣螂有效部位的制备工艺条件,即:取蜣螂药材粉碎为粗粉,用3倍量的85%乙醇浸泡48 h,加85%乙醇10倍量,以4 mL·min-1·kg-1的速度渗漉,收集漉液,滤过,滤液在50～55℃浓缩至1:1,冷藏除脂后,通过DA201-C大孔树脂柱,先后用1 BV水与4 BV 70%乙醇为洗脱剂进行洗脱,分别收集洗脱液.水洗脱液浓缩,干燥,加85%乙醇洗涤2次,取洗液,与70%乙醇洗脱液合并,浓缩,干燥,即得.同时,本实验对有效部位制备各环节的液相体系进行表征,发现与有效物质多肽相关的表面张力基本未变,而与无效物质盐密切相关的电导率降低了约90%,大限度地保留了药物治病的有效信息,去除了无效信息.结论:筛选的蜣螂有效部位制备工艺条件稳定可靠,通过提取液理化表征来进行过程控制切实可行.
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宁心痛颗粒含药血清及有效组分干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制
目的 探讨宁心痛颗粒含药血清及主要药物的有效组分(黄芪多糖、藁本内酯)干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制.方法 采用佛波酯诱导人THP-1细胞转化为巨噬细胞,再与oxLDL共培养建立泡沫细胞模型;分为空白对照组、模型对照组、宁心痛颗粒含药血清(CMS)组、空白血清组、黄芪多糖(APS)组、藁本内酯(LIG)组、黄芪多糖合藁本内酯(APS +LIG)组7组,对巨噬细胞泡沫化过程进行干预.运用高效液相色谱法检测泡沫化程度(CE/TC比值),Western blot法检测SRA-Ⅰ、CD36、ABCA1、LXR-α、PPAR-y的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组CE/TC值、SRA-Ⅰ、CD36、ABCA1及LXR-α 、PPAR γ蛋白表达升高(P＜0.05);与模型对照组比较,LIG组、APS+LIG组、CMS组CE/rC值降低(P＜0.05),除APS组ABCA1外,APS组、LIG组、APS+LIG组、CMS组SRA-Ⅰ、CD36蛋白表达降低,AB-CA1、LXR-α、PPARy蛋白表达升高(P＜0.05).与APS组比较,CMS组CE/TC值降低,ABCA1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 宁心痛颗粒含药血清、主要药物的有效组分(APS、LIG)均可不同程度抑制THP-1源性巨噬细胞泡沫化,其机制可能与调节巨噬细胞脂质吞噬-逆转运间的平衡,即下调脂蛋白吞噬受体SRA-Ⅰ、CD36的表达,上调胆固醇逆转运通路中的ABCA1、PPARγ及LXR-α的表达有关.
关键词： 宁心痛颗粒 含药血清 有效组分 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞 -
宁心痛颗粒含药血清及有效组分干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制
目的 探讨宁心痛颗粒含药血清及主要药物的有效组分(黄芪多糖、藁本内酯)干预THP-1源性巨噬细胞泡沫化的效应与机制.方法 采用佛波酯诱导人THP-1细胞转化为巨噬细胞,再与oxLDL共培养建立泡沫细胞模型;分为空白对照组、模型对照组、宁心痛颗粒含药血清(CMS)组、空白血清组、黄芪多糖(APS)组、藁本内酯(LIG)组、黄芪多糖合藁本内酯(APS + LIG)组7组,对巨噬细胞泡沫化过程进行干预.运用高效液相色谱法检测泡沫化程度(CE/TC比值),Western blot法检测SRA-I、CD36、ABCA1、LXRα、PPAR-γ的表达.结果 与空白对照组比较,模型对照组CE/TC值、SRA-I、CD36、ABCA1及LXR-α、 PPARγ蛋白表达升高(P ＜0. 05);与模型对照组比较,LIG组、APS + LIG组、CMS组CE/TC值降低(P ＜ 0. 05),除 APS 组 ABCA1 外,APS 组、LIG 组、APS + LIG 组、CMS 组 SRA-I、CD36 蛋白表达降低,ABCA1、LXR-a、PPARγ蛋白表达升高(P ＜0.05).与APS组比较,CMS组CE/TC值降低,ABCA1蛋白表达升高(P＜0.05).结论 宁心痛颗粒含药血清、主要药物的有效组分(APS、LIG)均可不同程度抑制 THP-1源性巨噬细胞泡沫化,其机制可能与调节巨噬细胞脂质吞噬-逆转运间的平衡,即下调脂蛋白吞噬受体SRA-I、CD36的表达,上调胆固醇逆转运通路中的ABCA1、PPARγ及LXR-α的表达有关.
关键词： 宁心痛颗粒 含药血清 有效组分 THP-1源性巨噬细胞 泡沫细胞
