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前列地尔对兔内皮细胞缺氧-复氧损伤的保护作用
目的:研究前列地尔(PGE1)对兔血管内皮细胞缺氧/复氧损伤的保护作用,探讨其可能机制.方法:建立兔内皮细胞缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常细胞培养组(正常组)、缺氧复氧损伤组(模型组)、缺氧复氧损伤+PGE1低、中、高剂量组(0.05 μg/mL,0.20μg/mL,0.40μg/mL).测定各组细胞死亡率及细胞上清丙二醛(MDA)、超氧化歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-PX)、一氧化氮(NO)水平.结果:与对照组相比,模型组内皮细胞死亡率显著上升,而PGE1组细胞死亡率较模型组显著降低(P＜0.05);与对照组相比,模型组MDA水平显著上升,PGE1组MDA水平相对于模型组显著下降(P均＜0.05);模型组SOD、GSH-PX及NO水平相对于对照组显著降低,PGE1组上述因子水平较模型组显著升高,且具有剂量依赖性.结论:PGE1对血管内皮细胞的缺氧复氧损伤具有保护作用,其作用机制可能与抗氧化与促进NO释放有关.
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金属硫蛋白介导附子多糖对缺氧复氧心肌细胞的保护
目的:以金属硫蛋白为着眼点,探讨附子多糖对缺氧复氧后心肌细胞的保护机制.方法:建立乳鼠心肌细胞缺氧/复氧模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、缺氧/复氧组、附子多糖组.缺氧/复氧组给予心肌细胞缺氧3h后复氧6h；附子多糖组分别给予10.0,1.0,0.1 g·L-1的附子多糖预处理心肌细胞24 h后再予缺氧3h后复氧6h.ELISA检测金属硫蛋白的含量,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,测定心肌细胞内丙二醛( MDA)的含量和细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.结果:与缺氧/复氧组相比较,附子多糖可以呈剂量依赖形式地增加金属硫蛋白的合成,减少MDA的生成与LDH的的释放,抑制心肌细胞凋亡,在10.0 g·L-1时作用达到峰值.结论:附子多糖对于缺氧复氧心肌细胞损伤具有保护效应,其机制与附子多糖促进金属硫蛋白的合成,对抗氧化应激损伤,抑制心肌细胞凋亡有关.
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生脉注射液对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤保护的主要活性部位研究
目的:探索生脉注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧复氧损伤保护的物质基础.方法:使用半制备型HPLC将生脉注射液分成3个极性部位,采用HUVEC缺氧复氧损伤模型分别检测各极性部位对缺氧复氧损伤的保护活性.结果:50～80 min洗脱部位对HUVEC缺氧复氧损伤模型保护活性强,大保护率达52.76％,经HPLC-MS鉴定,此部位主要含人参皂苷类物质.结论:生脉注射液中主要含人参皂苷的中等极性部位是HUVEC缺氧复氧损伤保护的主要活性部位.
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双参宁心方血清药物化学和抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的实验研究
目的研究双参宁心方(SSNX)主要有效成分及其对大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响.方法利用血药指纹图谱检测来源于SSNX的血中成分,并利用体外心肌细胞缺氧/复氧损伤实验进行验证.结果给药后血清样本中,共检测到15个来源于SSNX的原型成分,其中确定了人参皂苷Rg1、丹酚酸B、延胡索乙素、脱氢紫堇碱4个化学成分.在对心肌细胞缺氧/复氧损伤的实验中,人参皂苷Rg1、脱氢紫堇碱能抑制心肌细胞缺氧/复氧损伤导致的乳酰脱氢酶升高(P＜0.05),丹酚酸B、延胡索乙素则能显著抑制乳酸脱氢酶的升高(P＜0.01),对心肌细胞具有保护作用.结论提示人参皂苷Rg1、丹酚酸B、延胡索乙素、脱氢紫堇碱可能是SSNX抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的有效物质基础,可用于复方药代动力学的指标检测.
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4种延胡索成分对乳鼠心肌细胞缺氧和过氧化损伤的影响
目的:观察延胡索乙素、脱氢紫堇碱、黄连素和巴马汀4种单体对心肌细胞缺氧、过氧化损伤的影响,探讨延胡索抗心肌缺血作用的物质基础.方法:体外培养乳鼠心肌细胞,复制缺氧复氧和过氧化氢损伤模型;使用4种单体与细胞共孵育;MTT法测定细胞活力,评价药物的安全作用范围和对过氧化氢损伤的作用;酶反应动力监测法测定LDH活性,计算细胞LDH漏出量和药物对LDH漏出的抑制率,评价药物对缺氧损伤的作用.结果:多至500 mg·L~(-1)的延胡索乙索对细胞活力无任何影响,脱氢紫堇碱、黄连素、巴马汀分别在质量浓度大于6.3,0.6,6.3 mg·L~(-1)时,显著降低细胞活力(P<0.05,P<0.01);延胡索乙素、脱氢紫堇碱、黄连素和巴马汀分别在质量浓度为50～100,1.25～5,4,30 mg·L~(-1)时,显著抑制缺氧复氧导致的LDH漏出(P<0.05,P<0.01);4种单体对过氧化氢损伤无显著的保护作用.结论:延胡索抗心肌缺血损伤的作用与其成分延胡索乙素、脱氢紫堇碱、黄连素和巴马汀对心肌细胞的直接保护能力有关;其中,延胡索乙素和脱氢紫堇碱的作用为重要,前者安全性高,但效能较低,后者安全性低,而效能较高;而这4个单体的保护作用可能是通过抗氧化损伤之外的机制达到的.
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双参通冠方药物血清对心肌细胞缺氧复氧损伤Ca2+超载的影响
双参通冠方(SSTG)由人参、丹参、元胡3药的有效组分提取物组成,前期工作表明,该方是治疗心肌缺血再灌注损伤的有效中药制剂[1].
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山楂叶提取物及其制剂对人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤中性粒细胞黏附的影响
目的 研究山楂叶提取物(牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷)及其制剂奥沙恩注射液对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧复氧损伤时中性粒细胞(PMN)黏附的影响及其分子机制.方法 以HUVEC为实验对象,复制缺氧复氧损伤模型,用酶标仪检测山楂叶提取物牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷及其制剂奥沙恩注射液对HUVEC缺氧60 min复氧30 rain和复氧240 min时PMN黏附的影响;应用流式细胞学方法,观察牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷及奥沙恩注射液对PMN表面黏附分子CD11/CDl8表达的影响.结果 缺氧60 min后可见HUVEC皱缩,变形;复氧30 min,模型组PMN-HUVEC之间有明显的细胞黏附现象,正常组细胞之间黏附较少,各用药组与模型组比较,PMN-HUVEC黏附较少.复氧240 min处理的细胞各组情况与复氧30 min相似.山楂叶提取物牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷及其制剂奥沙恩注射液均可显著抑制复氧30 min和240 min时PMN-HUVEC之间的黏附,且呈现出一定的量效关系.牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷可显著抑制HUVEC缺氧复氧损伤导致的PMN表面CD11/CDl8分子表达,且奥沙恩注射液和牡荆素葡萄糖苷均表现出良好的量效关系.结论 在静息状态下,PMN表面几乎不表达CD11/CD18分子,但缺氧复氧30 min和240 min处理的HUVEC上清液孵育中性粒细胞30 min,可增强PMN表面CD11/CD18分子表达的增加.且第1个时相即复氧后30 min时PMN-HUVEC的黏附比第2个时相点更为明显.复氧时经牡荆素鼠李糖苷、牡荆素葡萄糖苷及其制剂奥沙恩注射液处理的HUVEC上清液可抑制PMN表面CD11/CD18分子表达的增加,降低PMN-HUVEC黏附,这可能是山楂叶提取物及其制剂奥沙恩注射液保护心脏免于缺血再灌注损伤的重要分子作用机制之一.
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艾塞那肽通过抑制黄嘌呤氧化酶-活性氧类降低内皮细胞缺氧复氧损伤
目的 探究原代心肌微血管内皮细胞(CMEC)在缺氧复氧损伤(H/R)模型条件下的损伤信号通路,以及艾塞那肽(Exe)的保护机制.方法 双酶消化法体外分离培养SD大鼠CMEC,CD31和Ⅷ因子鉴定纯度.建立H/R模型并筛选Exe的佳干预浓度.Fluo-3AM荧光探针检测H/R条件下胞内Ca2+变化.Western blotting检测黄嘌呤氧化酶(XO)表达量.DCFH-DA标记的活性氧探针检测胞内活性氧类(ROS)水平.共聚焦显微镜观察JC-1染色和细胞色素-C(Cyt-C)释放.予以Exe干预和使用小干扰RNA(siRNA)干扰技术抑制XO的表达,同步观察各指标变化情况.计量资料以均数±标准差(±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析.结果 10 nmol/L为Exe的佳抗凋亡浓度.H/R导致胞浆内Ca2+荧光强度和Ca2+依赖的XO表达量升高,予以Exe处理可显著降低Ca2+荧光(P<0.05).予以Exe处理或使用siRNA干扰技术可显著抑制XO的表达、降低XO-ROS生成、降低H/R损伤造成的线粒体膜电位、减少Cyt-C的释放,并伴随caspase-3和caspase-9活性的降低(P<0.05).结论 H/R通过激活Ca2+-XO-ROS损伤信号通路,导致CMEC的线粒体结构功能障碍,终诱导细胞凋亡;而予以Exe处理可通过抑制上述信号通路保护CMEC,降低H/R模型引起的细胞凋亡.
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乙酰肝素酶介导心肌细胞凋亡的研究
目的 研究硫酸乙酰肝素酶(HPSE)对心肌细胞缺氧/复氧损伤后细胞凋亡的影响作用.方法 体外培养H9C2心肌细胞,复制心肌细胞缺氧/复氧模型,模拟心肌缺血/再灌注损伤(MIRI).实验分为正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、HPSE抑制剂处理组(OGT2115组)等三组.形态学观察细胞状态,MTT法检测H9C2心肌细胞存活率.结果 与对照组相比,H/R处理后心肌细胞存活率显著降低(P<0.05);与H/R组比较,OGT2115处理后可提高缺氧/复氧后H9C2心肌细胞存活率(P<0.05).结论 HPSE抑制剂对缺氧/复氧后H9C2心肌细胞凋亡有抑制作用,拓宽HPSE阻滞剂临床应用范围,具有重要的基础及临床意义.
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全反式维甲酸对缺氧复氧小鼠巨噬细胞RAW264.7的影响
目的 探讨全反式维甲酸(all-transretinoic acid,ATRA)对缺氧复氧小鼠巨噬细胞RAW264.7的保护作用及其机制.方法 体外培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7,制备缺氧复氧模型,将细胞随机分为3组:(1)对照组:不做任何处理;(2)模型组:单纯制备缺氧复氧模型;(3)维甲酸组:在细胞进行缺氧复氧处理之前,加入10 μmol/L ATRA.在倒置显微镜下观察各组细胞的形态,利用逆转录聚合酶链式反应、免疫印迹法和免疫荧光法检测各组细胞过氧化物酶体增值激活物受体-γ(peroxisome proliferators-activated receptors-γ,PPAR-γ)、巨噬细胞亚型M1标志物诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和M2标志物白细胞分化抗原206(CD206)的表达.结果 倒置显微镜下可见ATRA组的细胞较模型组数量增加,细胞生长状态改善.与模型组相比,维甲酸组iNOS免疫荧光强度,mRNA和蛋白表达水平下降(P＜0.01);CD206和PPAR-γ免疫荧光强度,mRNA和蛋白表达水平升高(P＜0.01).结论 ATRA通过调控小鼠RAW264.7巨噬细胞内iNOS、CD206和PPAR-γ的表达,促进M1向M2分化,进而减轻缺氧复氧损伤.
关键词： 全反式维甲酸 缺氧复氧损伤 巨噬细胞 过氧化物酶体增值激活物受体-γ -
对比观察咪达唑仑和异丙酚对大鼠肝脏缺氧复氧损伤的影响
目的 对比观察异丙酚和咪达唑仑对大鼠肝脏缺氧复氧损伤的影响.方法 24只健康成年Wistar大鼠随机分为4组:对照组(A组)、缺氧复氧组(B组)及咪唑安定和异丙酚预处理组(C组和D组),每组6只.采用酶联免疫吸附法检测大鼠肝组织8-异前列腺素F2α(8-iso-PGF2α)水平,硝酸还原法测定其一氧化氮合酶(NOS)活力和NO含量.结果 缺氧复氧损伤后,B组肝组织中8-iso-PGF2α水平明显升高,而NOS活力和NO含量则明显降低,与A组比较差异有显著性(P＜0.05);C、D两组与B组相比,肝组织中8-iso-PGF2α水平明显下降,而NOS活力和NO含量明显上升,差异有显著性(P＜0.05);D组的肝组织8-iso-PGF2α含量明显低于C组,而其NOS活力和NO含量明显高于C组(P＜0.05).结论 咪达唑仑和异丙酚均能对大鼠肝脏缺氧复氧损伤起到明显的保护作用,但咪达唑仑的保护效应不如异丙酚.
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缺氧复氧损伤诱导内皮细胞凋亡及卡托普利的晚期干预作用
目的 探讨缺氧复氧对血管内皮细胞凋亡的影响及卡托普利延迟预处理机制.方法 建立人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤模型,用流氏细胞仪检测不同的缺氧和复氧时间以及卡托普利晚期预处理,应用缓激肽β2受体阻断剂、PKC阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂和NF-κB阻断剂,分别与卡托普利共同孵育细胞,24 h后再对内皮细胞行缺氧复氧损伤,观察不同条件下内皮细胞DNA周期和Annexin V染色率及细胞凋亡情况的变化.结果 单纯缺氧和缺氧复氧均可引起血管内皮细胞凋亡,并且随着单纯缺氧和缺氧后复氧时间的延长,凋亡峰面积和Annexin V染色率逐渐增加.卡托普利晚期预处理后,细胞凋亡明显减少,并且在本实验特定的浓度中(10-2～10-4 mmol/L),凋亡峰面积随卡托普利剂量的增加而逐渐增强.但给予上面4种阻断剂后,卡托普利的晚期预处理抗凋亡作用均部分消失.结论 单纯缺氧和缺氧复氧均可以导致细胞凋亡,且具有时间依赖性.卡托普利晚期预处理可以减轻内皮细胞凋亡,此作用具有剂量依赖性.这一过程涉及缓激肽β2受体、PKC途径、一氧化氮和核因子的转录等多种因素的参与.
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卡托普利晚期预处理对人内皮细胞缺氧复氧损伤保护作用机制的研究
目的 探讨缺氧复氧对内皮细胞的损伤性影响,以及卡托普利预处理的延迟保护作用和机制.方法 建立人脐静脉内皮细胞缺氧复氧损伤模型,观察不同的缺氧和复氧时间对内皮细胞的损伤作用.应用缓激肽β2受体阻断剂、PKC阻断剂、一氧化氮合酶阻断剂和NF-κB阻断剂分别与卡托普利共同孵育细胞,再对内皮细胞行缺氧复氧损伤,观察细胞形态和死亡率的变化,并利用分光光度计检测细胞培养液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱苷肽还原酶(GSH-PX)的浓度.结果 单纯缺氧组和缺氧复氧组均可见细胞变圆、收缩、脱落；细胞死亡率均较正常培养组增加；MDA浓度增高,而SOD和GSH-PX含量均有不同程度的降低,与正常培养组相比差异有统计学意义,并且随着缺氧和复氧时间的延长,上述变化愈明显.卡托普利晚期预处理后,细胞形态基本保持正常,上述多项检测指标与缺氧复氧组相比差异有统计学意义.但给予上面4种阻断剂后,卡托普利的预处理保护作用均部分消失,与卡托普利预处理组相比差异有统计学意义,与缺氧复氧组相比差异也具有统计学意义.结论 缺氧复氧可以导致细胞死亡率增加,脂质过氧化反应增强和抗氧化能力减弱,并且此种变化具有时间依赖性.卡托普利晚期预处理可以减轻内皮细胞缺氧复氧损伤.这一过程涉及缓激肽β2受体、PKC途径、一氧化氮和核因子的转录等多种因素的参与.
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葛根素对再灌注损伤心肌细胞内K+/Na+及Ca2+浓度的影响
葛根素具有扩张冠状动脉和脑动脉,降低心肌耗氧量,限制心肌梗死范围的扩大,改善微循环及缓和的降压效果等作用[13].本研究从大鼠分离的、耐钙心肌细胞模型上观察葛根素对缺氧复氧损伤的保护作用.报告如下.
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人参皂苷Rg1对原代培养心肌细胞缺氧复氧损伤的作用
目的 探讨人参皂苷Rg1对原代培养乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的作用及其是否能直接抑制线粒体通透性转换孔的开放.方法 原代培养大鼠乳鼠心肌细胞,构建缺氧复氧损伤(H/R)模型,应用不同浓度人参皂苷Rg1进行干预,通过检测细胞活力、线粒体膜电位、细胞色素C的释放,观察人参皂苷Rg1对心肌细胞H/R损伤的作用;将不同浓度的人参皂苷Rg1分别和线粒体25℃孵育10 min,加入200μmol/L CaCl2诱发mPTP的开放,以1μmol/L的mPTP特异性抑制剂环孢素A(CsA)为阳性对照,每间隔30 s观察520 nm处吸光度的变化,连续观察10 min,以线粒体肿胀程度评估mPTP的开放情况.结果 人参皂苷Rg1能增强H/R损伤后心肌细胞活力,阻止H/R引起的线粒体膜电位的降低,减少细胞色素C释放;6.25,25,100,400μmol/L人参皂苷Rg1无直接抑制mPTP开放的作用.结论 人参皂苷Rg1可减轻心肌细胞H/R损伤,保护心肌细胞,其作用与直接抑制mPTP开放无关.
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低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用
脑缺血再灌注损伤是一个多因素、多环节的恶性级联过程,针对不同环节发挥作用的保护措施联合应用比单一保护措施更有效.低温简单易行,安全范围大,是当前较为重要的脑保护措施,但低温并不能完全消除脑损伤.有研究表明,选择性线粒体内膜ATP敏感性钾通道(Mito-KATP)开放剂二氮嗪可减轻缺氧复氧性脑损伤[1].但低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用尚需进一步探讨.本研究拟观察低温对二氮嗪预处理减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤的作用,为临床研究提供理论依据.
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还原型谷胱甘肽预先给药对体外循环心脏直视手术患儿心肌损伤的影响
研究表明,还原型谷胱甘肽可减轻大鼠心肌细胞缺氧复氧损伤,可减轻心肌细胞脂质过氧化损伤,提高心肌细胞清除超氧阴离子的能力,从而发挥抗自由基损伤的作用[1].而其在临床抗脂质过氧化损伤的效果如何尚不清楚.本研究拟探讨还原型谷胱甘肽预先给药对体外循环心脏直视手术患儿心肌损伤的影响,为临床提供参考.
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二氮嗪预处理对大鼠海马神经细胞缺氧复氧损伤的影响
缺血预处理(IPC)被认为是所得到的强的心肌内源性保护之一.研究表明,这种奇异的预处理保护还存在于神经组织[1].
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梓葛冻干粉针剂对人脐静脉内皮细胞体外缺血再灌注模型损伤的保护作用
目的:研究中药单体组方梓葛冻干粉针剂对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外缺血再灌注模型损伤的保护作用.方法:体外培养HUVECs,采用氧糖剥夺(Krebs液)方法建立缺氧-复氧模型以模拟体内缺血再灌注损伤.分为正常组、模型组、尼莫地平组、梓葛低、中、高剂量组,复氧时正常组及模型组给予生理盐水,余组给予相应的药物干预后,测定细胞活力、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、一氧化氮(NO)含量、细胞外乳酸脱氢酶(LDH)释放量；分析细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达.结果:与正常组相比,模型组A值、SOD活性显著性降低(P＜0.05)；MDA和NO含量以及LDH释放量均显著性升高(P＜0.05),Caspase-3和Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达显著下降,Bcl-2/Bax显著降低(P＜0.01).与模型组比较,梓葛低剂量组A值显著升高(P＜0.05)；梓葛低、中剂量组MDA和LDH含量显著降低(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01)；梓葛低剂量组NO含量显著降低(P＜0.05)；梓葛冻干粉针剂的各剂量组SOD活性均显著提高(P＜0.05),Bax蛋白水平显著降低(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2/Bax均显著提高(P＜0.05,P＜0.01)；梓葛中、高剂量组Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P＜0.01).结论:梓葛冻干粉针剂可显著拮抗缺氧-复氧对人脐静脉内皮细胞的损伤,其机制与抑制细胞自由基的产生、提高抗氧化能力及调节凋亡相关蛋白表达密切相关.
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咪达唑仑对缺氧复氧损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的:探讨咪达唑仑对缺氧复氧损伤所致大鼠心肌细胞凋亡的影响及与外周型苯二氮卓类受体(PBR)的关系.方法:将培养融合的心肌细胞随机分为7组,即对照组(C组)、缺氧复氧组(HR组)、PK11195组(P组)、Ro5-4864组(R组)、咪达唑仑组(M组)、PK11195+Ro5-4864组(PR组)和PK11195+咪达唑仑组(PM组).建立缺氧复氧损伤模型.流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:PR组细胞凋亡,与R组比较差异显著(P＜0.01),与HR组比较无显著差异.M组细胞凋亡,与HR组比较差异显著(P＜0.05).PM组细胞凋亡与M组比较无显著差异.PR组PBR mRNA表达,与R组比较差异显著(P＜0.01),与HR组比较无显著差异.M组、PM组、HR组PBR mRNA表达比较无显著差异.结论:激活PBR明显抑制缺氧复氧所致的大鼠心肌细胞凋亡.咪达唑仑减轻缺氧复氧引起的心肌细胞凋亡,其作用是非PBR依赖性的.
