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肝X受体激动剂T0901317对缺氧复氧损伤人脐静脉内皮细胞的保护及机制研究
目的:探讨肝X受体激动剂T0901317激活肝X受体对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)缺氧复氧(Anoxia/reoxygenation,A/R)损伤的影响及其可能机制.方法:传代培养HUVECs,建立A/R模型,实验分为6组:正常对照组,单纯缺氧(Anoxia,AN)组,缺氧复氧(A/R)组,A/R+不同浓度(0.1、1、10 μmol/L)肝X受体激动剂T0901317干预组(A/R+T 0.1组、A/R+T 1组、A/R+T 10组).流式细胞术检测各组细胞凋亡率；RT-PCR方法检测各组细胞间黏附分子-1(Intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)mRNA表达；凝胶电泳迁移率分析法检测各组核转录因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)的活性.结果:与正常对照组比较,AN组、A/R组的细胞凋亡率升高,ICAM-1、IL-6 mRNA的表达增高,NF-κB活性增强(P＜0.05).与A/R组比较,A/R+T 0.1,A/R+T 1组显著抑制A/R损伤引起的细胞凋亡,减少炎症因子ICAM-1、IL-6 mRNA的表达,并明显抑制A/R损伤造成的NF-κB活化(R＜0.05).与A/R+T 0.1组比较,A/R+T 1组细胞凋亡率,ICAM-1、IL-6的表达及NF-κB活性均降低(P＜0.05).结论:适当剂量(0.1、1μmol/L)T0901317可激活HUVECs肝X受体,对A/R引起的HUVECs损伤起保护作用,其机制可能与抑制NF-κB转录活性从而下调NF-κB通路下游炎症因子如ICAM-1,IL-6的表达有关.
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促红细胞生成素预处理对心肌缺氧复氧损伤心脏血流动力学的影响
目的 观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理在大鼠心肌缺氧复氧损伤中对其心脏血流动力学的影响,并研究其可能机制.方法 将Wistar成年雄性大鼠60只用随机数字表法分为对照组及EPO预处理组(EPO组),每组30只,EPO组大鼠经腹腔注射5 000 U/kg重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin, RHuEPO),对照组注射同体积生理盐水.两组中的各15只大鼠于给药24 h后检测各指标,其余各15只大鼠置于常压缺氧环境中(O2的体积分数为7%)12 h后,移至常压常氧环境中2 h.采集血及心肌标本,通过全自动生化分析仪检测血清心肌酶活性,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测凋亡效应酶caspase-3蛋白表达水平,并分别于复氧30、60、120 min后观察心脏血流动力学指标,包括+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVSP、LVEDP、HR.结果 损伤前两组大鼠血清心肌酶活性、心肌细胞凋亡率以及心脏血流动力学各指标无显著差异(P>0 05),损伤后EPO组大鼠血清心肌酶活性、心肌细胞凋亡率及caspase-3蛋白表达水平显著低于对照组(P<0 05,P<0 01),复氧后30、60、120 min EPO组的±dp/dtmax显著高于对照组(P<0 05),复氧30、60 min EPO组的LVSP显著高于对照组(P<0 05).结论 EPO预处理能促进心肌缺氧复氧损伤后心脏舒缩功能的维持及恢复,这一作用可能与其抗凋亡心肌保护效应有关.
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NF-κB在EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤保护效应中作用的研究
目的观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤(H/R)的保护效应及其与预处理过程中NF-κB的关系.方法采用培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,细胞分组为:对照组,EPO预处理组(EPO组)(EPO 10 U/ml),EPO+吡咯烷二硫氨基甲酸盐(PDTC)预处理组(EPO+PDTC组)(EPO 10 U/ml+PDTC 5 μg/ml),PDTC预处理组(PDTC组)(PDTC 5 μg /ml),共4组,分别于缺氧/复氧损伤前后,检测培养液LDH含量,MTT比色法观察细胞活力及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡.采用EMSA检测缺氧复氧损伤前后各组心肌细胞NF-κB活性.结果 EPO预处理显著降低心肌细胞缺氧/复氧损伤后细胞培养液LDH含量,提高细胞存活率,并降低心肌细胞凋亡率,预处理过程中同时加入NF-κB阻断剂PDTC使EPO预处理的以上心肌保护效应显著减弱或消失.EMSA显示EPO预处理使H/R前心肌细胞NF-κB活性较对照组、EPO+PDTC组、PDTC组显著升高(P<0.05),EPO+PDTC组心肌细胞NF-κB活性与PDTC组和对照组无显著差异(P>0.05).缺氧复氧损伤后各组心肌细胞NF-κB活性较正常对照组显著升高(P<0.01),但EPO组的NF-κB活性低于其余各组(P<0.05),其余各组间无显著差异(P>0.05).结论 EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤具有保护效应,这一作用与EPO预处理过程中NF-κB的活化有关,NF-κB的活化可能通过其负反馈调节机制抑制H/R后心肌细胞NF-κB活性的升高.
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参附注射液对缺氧复氧损伤心肌的保护作用及机制研究
随着心肌缺血治疗过程中多种血管再通技术的广泛应用,由此引起的心肌再灌注损伤(myocardial reperfusion injury;MRI)问题亦日趋突出.因而探索心肌缺血再灌注损伤的机制和防治措施,已成为当今医学研究的热点之一.
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芬太尼对缺氧复氧损伤相关的心肌细胞凋亡的影响
目的 观察不同剂量芬太尼对心肌细胞缺氧复氧损伤的影响,在细胞水平上为临床应用芬太尼减轻心肌缺血再灌注损伤提供理论依据.方法 以常规方法制备与培养心肌细胞.实验分为正常对照组(C组)、单纯缺氧复氧组(A/R组)、各试验组(F1、F2、F3、F4组).C组不经任何处理.A/R组、各试验组均经历2h缺氧及1h复氧.缺氧前,各试验组分别给予终浓度为2、10、50、250ng/ml的芬太尼.分别以MTT快速比色法检测细胞存活情况(OD值)、流式细胞仪检测细胞凋亡率及透射电子显微镜观察细胞超微结构改变.结果 各试验组OD值均显著高于A/R组,细胞凋亡率显著低于A/R组,电镜显示A/R组细胞超微结构改变呈典型的凋亡细胞形态学改变,F3组细胞形态大致正常,凋亡细胞少见.F3组(50ng/ml)在所有试验组中OD值高,细胞凋亡率低.芬太尼剂量在50ng/ml内,OD值与剂量呈正相关(r=0.720,P<0.01),细胞凋亡率与剂量呈负相关(r=-0.990,P<0.01).结论 ①芬太尼对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤有保护作用;②在一定剂量范围内芬太尼的保护效应与剂量成正相关.
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下调NAD(P)H氧化酶4加重缺氧复氧心肌细胞损伤:线粒体SIRT3信号的关键作用
目的:明确内源性NAD(P)H氧化酶4(Nox4)在心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤中的作用并探讨其可能的机制.方法:以H9 C2心肌细胞系为研究对象,建立H/R模型,将细胞分为对照组、NC-siRNA组、Nox4-siRNA组、H/R组、H/R+ NC-siRNA组和H/R+ Nox4-siRNA组.采用RNAi方法下调Nox4的表达,MTr比色法测定相对存活率、荧光素酶化学发光法测量ATP水平,MitoSOX荧光探针检测线粒体ROS,比色法测定NAD+/NADH的比值,Westem blot法测定Nox4和SIRT3表达水平.结果:与对照组相比,H/R组H9 C2心肌细胞中Nox4蛋白的水平明显增加(P＜0.05),相对存活率、ATP的水平明显降低(P ＜0.05,P＜0.01),而线粒体ROS生成明显增加(P＜0.01),同时NAD+/NADH的比值明显增加、SIRT3表达量明显降低(P ＜0.05,P＜0.01).与H/R组相比,H/R+Nox4-siRNA组Nox4蛋白水平显著降低(P＜0.05),相对存活率、ATP的水平进一步降低、线粒体ROS生成进一步增加(P＜0.05),同时,NAD+/NADH的比值明显降低(P＜0.01)、SIRT3蛋白水平进一步降低(P＜0.05).结论:下调Nox4可加重H/R诱导的心肌细胞损伤和氧化应激,抑制线粒体能量生成,其心肌细胞保护机制可能是通过上调NAD+/NADH的比值,增加SIRT3的表达而发挥作用.
关键词： NAD(P)H氧化酶 心肌细胞 活性氧 缺氧复氧损伤 线粒体 -
中介素(IMD)对大鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用
目的 探讨中介素(IMD)对大鼠体外培养心肌细胞缺氧-复氧损伤的作用.方法 用大鼠H9c2心肌细胞株制作实验模型,样本分为对照组、缺氧-复氧组(缺氧1h、复氧30min)、IMD组(缺氧-复氧前30min加入10-7mol/LIMD).采用MTT比色法检测心肌细胞活力;透射电镜观察细胞超微结构;激光共聚焦显微镜观察并测定细胞内钙离子浓度;流式细胞术测定细胞凋亡率.结果 与对照组比较,缺氧-复氧组和IMD组细胞存活率显著降低,而IMD处理组明显升高细胞存活率(P＜0.01);在形态学上,IMD预处理可明显减轻缺氧-复氧对大鼠心肌细胞的损伤;缺氧-复氧组细胞[Ca2+]i荧光强度和细胞凋亡率比对照组显著升高,IMD预处理可明显降低上述升高的比率(P＜0.01).结论 IMD对大鼠心肌细胞缺氧-复氧损伤有一定保护作用,提高心肌细胞存活率、减轻心肌细胞钙超载和抑制凋亡是其作用途径.
关键词： 法医病理学 缺氧复氧损伤 心肌细胞 Intermedin 凋亡
