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体外培养硬皮病成纤维细胞Smad3及Smad7mRNA的表达
目的:探讨体外培养来自硬皮病患者的成纤维细胞中转化生长因子(TGF)β受体活化的Smad3及Smad7 mRNA表达水平.方法:体外培养4例硬皮病患者(患者组)及4名正常对照者(对照组)组织的成纤维细胞,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,分别检测硬皮病患者组成纤维细胞及正常对照组成纤维细胞中Smad3和Smad7 mRNA的表达情况,并比较两组间的表达差异.结果:体外培养的硬皮病患者组成纤维细胞的Smad3及Smad7 mRNA表达水平均要显著高于对照组的成纤维细胞(P < 0.05).结论:Smad3在硬皮病中的上调,提示Smad3在硬皮病的发病过程中可能与TGF-β协同作用,共同促进了硬皮病的纤维化过程.而Smad7在硬皮病中的表达升高,可能是机体的一种负反馈调节作用.
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体外培养人皮肤鳞状细胞癌A431细胞Smad2和Smad3 mRNA的表达
目的:探讨体外培养的人皮肤鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞的转化生长因子(TGF)β受体活化Smad--Smad2和Smad3 mRNA的表达水平.方法:采用反转录-实时荧光定量聚合酶链反应,分别检测体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞与人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)中Smad2和Smad3 mRNA的表达水平.结果:人皮肤鳞癌A431细胞Smad2和Smad3的mRNA表达水平均显著低于对照的角质形成细胞.结论:Smad2和Smad3表达下调不但见于人类皮肤鳞癌的在体形成过程中,还见于能持续传代的体外培养的鳞癌细胞中.Smad2和Smad3表达下调可能代表了鳞癌细胞所固有的TGF-B信号转导通路的异常变化.有助于鳞癌的形成.
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通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治作用
目的 探讨通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化的防治作用及机制.方法 用链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型并给予通心络灌胃,12周后测定各组大鼠心脏重量指数,胶原容积积分,免疫组化测定心肌中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad3、Smad7的蛋白表达水平,RT-PCR法检测TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA的表达水平.结果 糖尿病组大鼠心脏重量指数、胶原容积积分明显增高,TGF-β1、Smad3蛋白的表达增加,Smad7蛋白的表达减少;TGF-β1、Smad3mRNA的表达增加,Smad7mRNA的表达减少,通心络组上述指标均得到改善.结论 通心络对糖尿病大鼠心肌纤维化有防治作用,其作用机制可能通过改善糖尿病大鼠心肌中TGF-β1、Smad3、Smad7的表达,从而减轻和廷缓糖尿病大鼠心肌的纤维化有关.
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转染Smad3基因的大鼠肾系膜细胞uPA及PAI-1表达的改变
目的: 通过对大鼠肾小球系膜细胞(MsC)转染Smad3基因,观察转染阳性细胞克隆尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及纤溶酶原激活物抑制因子-1(PAI-1)表达的改变,以进一步阐明转移生长因子-β(TGF-β)介导肾小球硬化发生的作用机制.方法: 经脂质体介导将含有Smad3重组表达质粒转染大鼠MsC,用G418筛选及RT-PCR,Western blot法鉴定;又分别采用RT-PCR与Western blot法,检测转染阳性细胞克隆uPA及PAI-1表达改变. 结果: 成功建立高表达Smad3的阳性MsC克隆(Th-8,Th-15),并证实其uPA mRNA及蛋白表达明显降低,而PAI-1 mRNA及其蛋白的表达显著增加.结论: TGF-β可能通过上调Smad3而减少组织内uPA的生成和增加PAI-1的合成,从而促进肾小球硬化的进展.
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TGF-β1、Smad3、Snail1和FoxM1在翼状胬肉中的表达及意义
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3、Snail1和叉头框转录因子M1(FoxM1)蛋白在翼状胬肉与胬肉旁结膜组织中表达的差异及意义.方法:收集原发性翼状胬肉组织(30例)和正常结膜组织(5例)的石蜡切片,免疫组织化学染色观察TGF-β1、Smad3、Snail1和FoxM1蛋白的表达差异,并对表达阳性的细胞进行计数,比较两种组织中4种蛋白的阳性细胞率.结果:HE染色结果显示,胬肉旁结膜的上皮层次为3～5层,细胞排列整齐,固有层含有少量血管;翼状胬肉表面上皮细胞层次明显增多,细胞排列紊乱,固有层内含有高密度分布的血管.免疫组化结果显示,TGF-β1主要分布于翼状胬肉的上皮细胞和固有层间质细胞的胞质内,另外3种蛋白主要分布于翼状胬肉组织的上皮细胞和固有层间质细胞的胞核内;翼状胬肉组织内TGF-β1、Smad3、Snail1及FoxM1蛋白的阳性细胞率均明显高于胬肉旁结膜组织(均P＜0.01).结论:TGF-β1、Smad3、Snail1和FoxM1在翼状胬肉内高表达,病变的结膜细胞分泌的TGF-β1可激活TGF-β1-Smad3-Snail1-FoxM1通路,从而促进翼状胬肉的发生和发展.
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ppGalNAc-T2基因下调对肝星状细胞TGFβ1-Smad3激活途径基因表达的影响
目的 探讨糖基转移酶ppGalNAc-T2对大鼠肝星状细胞的转化生长因子(TGF)β1-Smad3激活的影响.方法 在大鼠肝星状细胞中转染ppGalNac-T2的siRNA表达质粒,用RT-PCR检测相关基因mRNA表达,Western blot以及免疫荧光方法检测Smad3基因蛋白表达.结果 相对于正常细胞,ppGalNAc-T2下调后,肝星状细胞中Smad2、Smad3、Smad4、胶原3αl(Col3α1)、转化生长因子β调节基因4(Tbrg4)、TGFβ、TGFβ2及转化生长因子β受体(TGFβr)3的mRNA及Smad3的蛋白表达几乎没有变化(P>0.05),但TGFβrl和TGFβ2都有较大程度的降低(P<0.05).结论 在大鼠肝星状细胞中,ppGalNAc-T2下调对于TGFβ1-Smad3激活途径基因表达基本没有影响,其在肝星状细胞中的具体功能有待于进一步研究.
关键词： 肝星状细胞 ppGalNAc-T2 smad3 -
转化生长因子β1/Smad3促进大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad3信号促进大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)成骨分化的机制.方法:常规细胞培养、免疫细胞化学染色观察TGF-β1作用下MSC中Smad3的表达情况;脂质体介导稳定转染Smad3中部分C端功能域突变体(Smad3△C),间接免疫荧光试验鉴定;采用RT-PCR检测转染细胞中碱性磷酸酶(ALP)和核心结合因子(cbfa1)mRNA的表达,用Gomori钙钴法定性检测ALP,用对硝基苯磷酸盐(PNP)法检测细胞ALP活性,观察Smad3△C对MSC成骨分化的影响.结果:MSC细胞表达Smad3,受TGF-β1刺激后,呈现出即刻由细胞质向细胞核转位的趋势.稳定转染细胞中c-Myc抗原阳性表达;受TGF-β1刺激后,MSC和空载体对照MSC(V-MSC)中ALP染色呈强阳性反应,而Smad3△C-MSC中阳性率仅为34.9%(P＜0.01);MSC和V-MSC中ALP、cbfa1 mRNA的表达水平以及ALP活性明显高于Smad3△C-MSC(P＜0.05或P＜0.01),而MSC和V-MSC之间无显著性差异(P＞0.05).结论:MSC中的Smad3是作为TGF-β1信号转导通路下游转导介质而存在的;通过Smad3选择性调节,具有多重生物学效应的TGF-β1才得以实现其促进MSC成骨分化的功能.
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Smad2和Smad3在TGF-β1信号转导中的作用
Smads通路是TGF-β1信号转导中重要的通路,Smad2/Smad3是TGF-β1信号下传的第一个信号分子,在TGF-β1生物学效应的发挥中起重要作用.虽然Smad2和Smad3的同源性高达92%,但是它们的功能不完全相同,本文从Smad2和Smad3的结构、功能以及相关蛋白等多个方面探讨Smad2和Smad3在TGF-β1信号转导中的不同作用.
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姜黄素对Lewis肺癌小鼠TGF-β1、Smad3、Smad7表达的影响
目的:观察姜黄素对Lewis 肺癌小鼠瘤体组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达的影响.方法:雄性C57BL/6小鼠20只,随机分成姜黄素处理组与模型组,每组10只.采用皮下接种瘤细胞悬液造模.造模24h后,模型组与姜黄素组分别腹腔注射注射用水和200mg/(kg·d)浓度的姜黄素混悬液,0.5mL/只,1天1次,连续12天.应用免疫组织化学显色技术,检测小鼠瘤体组织内TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白的表达及定位情况.结果:①与模型组比较,姜黄素抑瘤率29.96%.姜黄素组瘤体平均质量(1.64±0.32)g,与模型组(2.34±0.70)g比较,差异具有统计学意义(P<0.05).②本研究采用免疫组化定量公式计算蛋白表达阳性单位,结果显示TGF-β1 染色强度姜黄素组为(17.83±3.46),模型组为(25.76±4.72),两组比较差异具有统计学意义(P<0.01);Smad3染色强度姜黄素组为(14.64±2.24),模型组为(23.71±3.07),两组比较差异有统计学意义(P<0.01);Smad7染色强度结果显示姜黄素组为(10.97±1.89),模型组为(8.46±1.04),两者比较差异具有统计学意义(P<0.01).③瘤体组织内TGF-β1与Smad3蛋白表达具有相关性(P=0.043).结论:姜黄素能抑制肿瘤生长,其作用机制可能与上调Smad7蛋白表达,下调Smad3蛋白表达,从而减少TGF-β1的过度表达有关.
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INF-γ对肝纤维化大鼠TGF-β1/Smad3蛋白表达的影响
目的 通过干扰素-γ(IFN-γ)治疗大鼠肝纤维化,观察大鼠肝脏组织病理学及TGF-β1,Smad3蛋白表达水平的变化,探讨INF-γ抗肝纤维化作用机制.方法 将48只雄性SD大鼠随机分成对照组、模型组和实验组3组.用3%硫代乙酰胺(TAA)100mg/kg复制大鼠肝纤维化模型,实验组同时肌肉注射INF-γ5U/d.在肝纤维化诱导第8周处死,用Masson染色观测肝组织纤维化程度,免疫组化法检测肝组织TGF-β1、Smad3蛋白表达水平.结果 实验组肝纤维化程度、TGF-β1和Smad3表达比正常组增高(P<0.05),比模型组显著降低(P<0.05).结论 IFN-γ可能通过抑制TGF-β1/Smad3蛋白的表达,从而起到抗肝纤维化的作用.
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miR-34b促进关节软骨细胞基质退变的分子机制研究
目的 探讨微小RNA-34b(miR-34b)促进关节软骨细胞基质退变的分子机制.方法 提取10例骨关节炎(OA)患者和7例创伤性截肢者的膝关节软骨组织,实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测组织标本中miR-34b表达水平.利用Targetscan基因信息软件预测得到miR-34b靶基因为Smad3,构建Smad3野生型及突变型3'非编码区(3'-UTR)-荧光素酶报告载体,利用荧光素酶报告基因实验检测miR-34b对Smad3基因野生型及突变型3'-UTR荧光素酶活性的影响.体外培养SW 1353细胞,分为A、B、C和D组,分别加入等量脂质体、无义序列、miR-34b模拟物(miR-34b mimic)和miR-34b抑制物(miR-34b inhibitor).RT-qPCR法检测miR-34b、Smad3、Ⅱ型胶原和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)的表达水平.结果 OA软骨组织中miR-34b表达水平较正常膝关节软骨组织明显上调(P＜0.05).SW 1353细胞转染后,与A组比较,C组miR-34b表达水平明显升高(P＜0.05),D组明显降低(P＜0.05);A组与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).Targets Can软件预测miR-34b的潜在靶基因为Smad3,荧光素酶报告基因实验证实miR-34b直接靶向抑制靶基因Smad3;转染miR-34b mimic和miR-34inhibitor后,与A组比较,C组Smad3 mRNA表达水平明显降低(P＜0.05),D组明显升高(P＜0.05);A组与B组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).转染后,与A组比较,C组Ⅱ型胶原mRNA表达水平明显降低(P＜0.05),D组明显升高(P＜0.05);C组MMP-13mRNA明显升高(P＜0.05),D组明显降低(P＜0.05).结论 miR-34b可能通过抑制其靶基因Smad3的表达进而诱导人关节软骨细胞基质退变,从而促进OA的发生、发展.
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桔梗皂苷-D干预大鼠肺成纤维细胞纤维化的实验研究
目的 观察桔梗皂苷-D(PD)对转化生长因子(TGF-β1)诱导大鼠肺成纤维细胞纤维化的干预作用影响.方法 通过TGF-β诱导大鼠肺成纤维细胞纤维化,采用PD对细胞进行干预,检测大鼠肺纤维化细胞代谢活性,RT-PCR检测细胞信号蛋白Smad3、Smad7基因的表达,以及流式细胞术检测细胞上TGF-βII受体的表达.结果 干预组细胞代谢活性平均OD值0.299±0.022,模型组0.342±0.012(P＜0.05);干预组Smad7表达较模型组上调,Smad3表达较模型组下降;干预组平均TGF-β II受体表达率(28.97±0.54)%,模型组(36.62±0.58)% (P＜0.05).结论 PD可以抑制TGF-β诱导的大鼠肺成纤维细胞增殖和Smad3及TGF-β II受体表达,增强抑制性信号蛋白Smad7的表达.
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IL-37、Smad3在博来霉素致大鼠肺纤维化模型中的表达及意义
目的 研究博来霉素致肺纤维化大鼠肺组织中IL-37、Smad3的表达水平,探讨其在PF发生、发展中的作用及意义.方法 将45只清洁级Wistar大鼠按随机数字表法分为健康对照组(N组)、博来霉素组(B组)、地塞米松治疗组(D组),每组大鼠15只,B组及D组大鼠气管内给予博来霉素4mg/kg制作肺纤维化模型,N组给予相同体积生理盐水作为对照组,D组大鼠于肺纤维化造模基础上第2天每日腹腔注射地塞米松3mg/kg,N、B组大鼠腹腔注射生理盐水作为对照.各组大鼠分别于造模后7、14、28天处死,HE染色评价肺组织病理形态学变化,碱水解法及酶联免疫吸附法分别测定肺组织匀浆中羟脯氨酸(HYP)、IL-37含量,RT-PCR法测定肺组织中Smad3 mRNA表达量.结果 (1)HE染色示B、D组大鼠肺组织由肺泡炎逐渐发展为纤维化性变,B、D组HYP含量在各时间点均较N组升高,以28天为著,P＜0.05;(2)B、D组IL-37含量于第7天升高明显,后逐渐降低,但均高于N组,P＜0.05;(3)随着时间延长B、D组肺组织Smad3mRNA表达量逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-37、Smad3在大鼠肺纤维化发病过程中起重要作用,可能参与了肺纤维化发生与发展.
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化瘀理肺方对肺纤维化大鼠Smad3表达的影响
目的 研究化瘀理肺方对大鼠肺纤维化肺组织形态学的影响及可能作用机制.方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,经气管内注入博莱霉素(5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组注入生理盐水0.25 ml作为正常对照,造模后第2d开始分别给予化瘀理肺方药物灌胃(中药组,13410mg/kg)、生理盐水灌胃(对照组、模型组)、氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(激素组,25 mg/kg)进行干预,后于给药后的14 d、28 d分别处死,取肺组织行HE染色脱察病理变化情况,免疫组化法测定肺组织中Smad3蛋白的表达情况.结果 中药组肺泡炎和纤维化程度明显低于模型组和激素组,中药组Smad3蛋白表达明显少于模型组和激素组(p＜0.0l).结论 化瘀理肺方对博莱霉素所致肺纤维化大鼠有一定预防性治疗作用,可能部分通过调节Smad3蛋白表达发挥作用.
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自拟中药对CCl4诱导的肝纤维化大鼠肝组织Smad3表达的影响
目的 研究自拟中药对CCl4诱导的大鼠肝纤维化肝脏Smad3表达的影响,探讨其抗纤维化的作用机制.方法 Wistar大鼠40只,随机分成正常对照组、模型组、自拟中药组、鳖甲软肝片组,采用CCl4背部皮下注射构建肝纤维化模型,行HE和VG染色,光镜下观察肝组织肝纤维化程度.同时免疫组化SABC方法 检测各组Smad3的表达.结果 与正常对照组比,模型组Smad3表达明显增强,自拟中药组大鼠肝脏Smad3的表达(0.279±0.085 对 0.885±0.904,P<0.05)显著下调.另外,自拟中药组大鼠肝脏肝纤维化病理变化显著改善.结论 自拟中药对CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型肝脏Smad3表达有明显的下调作用,可能是其抗肝纤维化的主要作用机制之一.
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马洛替酯对肝纤维化大鼠肝组织Smads蛋白表达的影响
目的：观察马洛替酯对二甲基亚硝胺（DMN）诱导的肝纤维化大鼠肝组织Smads信号通路中关键信号传导分子Smad3、smad4和Smad7蛋白表达的影响，探讨其抗肝纤维化的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分成对照组、模型组、秋水仙碱组和马洛替酯组各15只。在造模的同时给药灌胃。6 w后，取肝组织，进行病理学观察；采用实时荧光定量PCR法和Western Blot 法检测 Smad3、smad4、Smad7 mRNA和蛋白表达。结果对照组大鼠肝组织Smad3、smad4 mRNA和蛋白表达分别为（0.38±0.09）、（0.29±0.08）和（0.16±0.05）、（0.16±0.07），显著低于模型组[分别为（0.84±0.08）、（0.76±0.11）和（1.01±0.12）、（0.94±0.11），P＜0.05]；对照组肝组织Smad7 mR-NA和蛋白分别为（0.73±0.14）和（0.44±0.15），模型组Smad7 mRNA和蛋白[（0.22±0.08）和（0.17±0.08），P＜0.05]表达明显减弱；与模型组比较，马洛替酯组肝组织smad3、smad4 mRNA和蛋白表达分别为[（0.52±0.10）、（0.40±0.10）和（0.51±0.08）、（0.41±0.09），P＜0.05）]，马洛替酯组肝组织Smad7 mRNA和蛋白分别为（0.48±0.09）和（0.39±0.10），表达有所升高（P＜0.05）。结论马洛替酯可明显抑制DMN诱导的大鼠肝脏损伤，改善肝纤维化程度，其作用机制可能与下调Smad3和smad4表达，上调Smad7表达有关。
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shRNA 重组慢病毒沉默 SMAD3对大鼠肝纤维化的抑制作用
目的：观察 SMAD3 shRNA 重组慢病毒对大鼠肝纤维化的影响。方法随机将 Wistar 大鼠60只分为生理盐水对照组（20只）、shRNA 对照组（20只）和 SMAD3 shRNA 组（20只）。对 shRNA 对照组和 SMAD3 shRNA组大鼠，通过脾脏注射法给予慢病毒1.0×108TU/只，生理盐水对照组则给予等体积500μl 生理盐水，给药1w 后开始制备大鼠四氯化碳肝纤维化模型。在造模4w 和8w 时，采用 Real-Time PCR 法检测肝组织 SMAD3表达；采用ELISA 法检测血清 I 型和 III 型胶原水平。结果在造模4w 和8w 时，与生理盐水对照组和 shRNA 对照组比， SMAD3 shRNA 组肝组织 SMAD3 mRNA 水平显著降低（4w：P=0.000，P=0.001；8w：P=0.001，P=0.009）；肝组织学检查显示，在造模4w 和8w 时，SMAD3 shRNA 组大鼠肝纤维化程度减轻；在造模4w 时，SMAD3 shRNA 组动物血清 I型胶原[（3.33±1.60） ng/ml]和 III 型胶原[（1.32±0.56） ng/ml]明显低于生理盐水对照组[（69.4±13.67） ng/ml，（3.90±1.41） ng/ml]，也低于 shRNA 对照组[（66.8±3.50） ng/ml 和（3.80±0.93） ng/ml，均 P＜0.01]；在8w 时，各组间胶原水平比较无明显差异（P>0.05）。结论 SMAD3 shRNA 在大鼠体内能明显减轻肝纤维化程度。
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TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响
目的 观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响.方法 采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量.结果 与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5% vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2% vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2% vs 26.4±10.1%;36h:35.2±3.7% vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COL ⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加.结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌.
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基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨虾青素对心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响
目的 观察虾青素(astaxanthin,ASTX)对转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)诱导的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)I型胶原(collegeⅠ,ColⅠ)和Ⅲ型胶原(collegeⅢ,ColⅢ)表达的影响,并探讨其作用机制.方法 分离新生乳鼠的CFs,TGF-β1诱导CFs,使用ASTX(0、5、10、20、40、80、160μmol·L-1)预处理CFs 24 h.采用MTT法测定不同浓度ASTX对CFs细胞活性的影响;采用DCFH-DA试剂盒检测CFs细胞内活性氧(ROS)生成;采用siRNA技术沉默Smad3基因,采用real-time PCR和Western blot检测Smad3沉默前后ColⅠ、ColⅢmRNA及ColⅠ、ColⅢ、Smad3蛋白表达水平.结果 ASTX在0～20μmol·L-1范围内不仅无明显的细胞毒性,且能够明显减少TGF-β1诱导的CFs内ROS生成(P<0.05).ASTX能够明显抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达(P<0.01),且呈浓度依赖性.此外,ASTX还可以明显下调TGF-β1诱导的CFs Smad3磷酸化(P<0.01);使用特异性siRNA对Smad3基因沉默后,ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达亦明显减少(P<0.01).结论 ASTX能够有效抑制TGF-β1诱导的CFs ColⅠ、ColⅢmRNA和蛋白表达,可能的机制是下调Smad3磷酸化.
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雷公藤内酯醇减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞活化与抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路相关
目的 通过体内外实验,观察雷公藤内酯醇(TPL)减少放射性肺纤维化中肌成纤维细胞(MFBs)活化与TGF-β1/ERK/Smad3通路的相关性.方法 以TGF-β1刺激成纤维细胞建立体外MFBs活化模型,C57BL/6小鼠胸部照射形成体内MFBs活化、放射性肺纤维化模型.MFBs活化状态通过检测小鼠成纤维细胞中α-SMA(RT-PCR、Western blot方法)和Col Ⅰ(RT-PCR、ELISA方法)的表达,通路活性采用Western blot法检测p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平.ERK siRNA及Smad3 siRNA观察ERK、Smad3在MFBs活化中的地位.结果 TGF-β1激活p-ERK/p-Smad3(Ser208)及p-Smad3(Ser423),诱导成纤维细胞表达α-SMA,活化为MFBs,合成Col I明显增多;使用ERK siRNA及Smad3 siRNA确定了ERK及Smad3均参与α-SMA、Col Ⅰ的表达,其中ERK可能通过磷酸化Smad3连接区(Ser208)起相关作用.小鼠胸部照射可致肺组织中p-ERK、p-Smad3(Ser208)、p-Smad3(Ser423)的水平上调,α-SMA表达增加,显示多量MFBs活化.TPL对体内和体外实验中ERK、Smad3(Ser208)、Smad3(Ser423)的磷酸化活化均有明显抑制作用,可明显下调α-SMA表达及Col Ⅰ合成,减少MFBs的活化.结论 TPL可通过抑制TGF-β1/ERK/Smad3通路,减少肺部照射后MFBs活化,从而抑制放射性肺纤维化进展.
