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蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响
目的:研究蛇葡萄素对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的增殖及胶原蛋白、细胞因子生成的影响.方法:对HSC-T6增殖的影响:用含10％胎牛血清的高糖DMEM培养液制备成HSC-T6细胞3×104个/mL细胞悬液100 μL/孔接种于96孔培养板.设细胞对照组、秋水仙碱1.0 mg·L-1组和100.0,75.0,50.0,25.0,12.5 mg·L-15个不同质量浓度蛇葡萄素组,置37℃5％CO2培养48 h.采用MTT法检测蛇葡萄素对大鼠肝细胞HSC-T6增殖的影响.对HSC-T6生成Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白及细胞因子(TGF-β1,PDGF)含量的影响:取终质量浓度分别为50.0,25.0,12.5 mg·L-1蛇葡萄素,3×104个/mL细胞悬液100 μL/孔细胞液接种于96孔培养板.阳性组秋水仙碱的质量浓度为1.0 mg·L-1.置37℃5％ CO2培养48 h.ELISA法检测HSC-T6细胞生成的胶原蛋白(Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ)、转化生长因子(TGF-β1)及血小板衍生因子(PDGF)含量.结果:蛇葡萄素100.0,75.0mg·L-1对HSC-T6细胞的增殖有明显抑制作用,其无毒浓度为50.0 mg·L-1.50 mg·L的蛇葡萄素可使HSC-T6细胞生成的l,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β1,PDGF含量明显低于细胞对照组(P＜0.05),25 mg·L-1的蛇葡萄素也可使HSC-T6细胞生成的Ⅲ型胶原蛋白含量明显低于细胞对照组(P＜0.05).结论:蛇葡萄素能抑制HSC-T6增殖并可使HSC-T6生成的Ⅰ,Ⅲ,Ⅳ型胶原蛋白,TGF-β1,PDGF含量降低.
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鳖甲提取物对抑制TGF-β诱导的大鼠肝星状细胞活化的影响
目的:研究鳖甲提取物相对分子质量＜6 kDa肽段(P6)对转化生长因子]β(transforming growth factor-β,TGF-β)诱导的大鼠肝星状细胞HSC-T6的活化增殖与肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)相关基因表达的影响,初步探究其抗肝纤维化的作用机制.方法:应用透析法得到P6;细胞增殖与活性检测(CCK8)法检测P6对HSC-T6细胞增殖的影响;实时荧光定量聚合酶反应(Real-time PCR)检测HSC-T6细胞内α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ,ColI),基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的mRNA表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)分析HSC-T6细胞内α-SMA与Col Ⅰ蛋白的表达.结果:与空白组比较,P6对HSC-T6细胞存活率无明显影响,但却能显著抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的增殖(P＜0.05).与TGF-β组比较,P6各浓度均能显著降低HSC-T6细胞中α-SMA,Col Ⅰ,TIMP-1 mRNA的表达,增加MMP-2 mRNA的表达(P ＜0.05,P＜0.01),明显降低α-SMA与Col Ⅰ蛋白的表达.结论:P6能抑制TGF-β诱导的HSC-T6细胞的活化增殖,减少细胞外基质(extracellular matrix,ECM)生成,促进其降解,发挥抗肝纤维化作用.
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重组截短型TGF-β前体潜在相关肽的原核表达及其对HSC-T6细胞增殖的影响
目的 初步研究截短型TGF-β前体潜在相关肽(LAP)的重组蛋白对HSC-T6细胞增殖的影响.方法 PCR扩增截短型LAP片段,构建该片段的原核表达载体,经双酶切、DNA测序鉴定后,IPTG 0.5 mmol/L,37℃,4h诱导出蛋白的大量表达,表达的蛋白经SDS-PAGE,Western blot检测,经镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,将重组蛋白作用于大鼠肝星状细胞-T6(HSC-T6),用MTT法检测不同浓度重组蛋白对细胞增殖作用的影响.结果 原核表达载体构建成功,成功表达、纯化了重组蛋白,且HSC-T6细胞的增殖程度随重组蛋白浓度的增加而降低.结论 重组蛋白可抑制HSC-T6细胞的增殖,为后续研究LAP片段对TGF-β活化过程的干扰作用及对器官纤维化的影响奠定基础.
关键词： TGF-β前体潜在相关肽 原核表达 蛋白纯化 HSC-T6 增殖 -
ZEB-1因子在大鼠肝纤维化体内外TGF-β通路中的研究
目的 探讨ZEB1在大鼠肝纤维化模型和肝星状细胞中的动态变化和意义.方法 健康雄性SD大鼠30只,分为健康对照组和模型组,模型组按造模后不同时间点分为2、4、6、8周4个亚组,每组6只.模型组腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)诱导形成大鼠肝纤维化模型,测定不同时间点ALT、AST的变化,肝组织经HE、Masson染色,光学显微镜下观察；采用RT-PCR检测不同时间点肝脏ZEB-ImRNA的表达.大鼠HSCT-6细胞用不同浓度TGF-βl因子刺激48h后提取RNA,检测不同TGF-β1浓度下ZEB-1 mRNA的表达.各组间均数比较采用单因素分析.结果 DMN腹腔注射成功诱导大鼠肝纤维化,4、6周纤维化明显.模型组血清ALT、AST在2周开始升高,4周达到高峰,并明显高于健康对照组.ZEB-ImRNA在正常肝组织中少量表达,模型组表达逐渐升高,4周表达高,随后又逐渐降低,相关性分析显示与TGF-β1呈正相关.HSC-T6细胞中,不同浓度TGF-β1刺激后,ZEB-1mRNA呈浓度梯度变化,随着TGF-β1浓度的升高,ZEB-1表达量增加.结论 ZEB-1可能参与肝纤维化的发生,并与肝纤维化的发展密切相关.
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苦参素对肝星状细胞HSC-T6增殖及端粒酶的影响
目的 探讨苦参素在诱导肝星状细胞HSC-T6凋亡过程中的作用,以及对端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶(rTERT)mRNA表达的影响.方法 将不同质量浓度的苦参素与HSC-T6细胞共培养不同时间后,MTT法检测苦参素对HSC-T6细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测苦参素对HSC-T6细胞凋亡的影响;TRAP-PAGE-银染法检测苦参素作用后HSC-T6细胞中端粒酶活性的改变;RT-PCR检测苦参素对HSC-T6细胞rTERT mRNA表达的影响.结果 苦参素能显著抑制HSC-T6细胞生长、诱导细胞凋亡、降低端粒酶活性,并抑制rTERT mRNA表达.结论 苦参素对HSC-T6细胞增殖具有抑制作用,可能与抑制细胞端粒酶及其亚单位rTERT的活性有关.
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罗汉果甜苷对肝星状细胞HSC-T6增殖及肝纤维化相关基因的影响
目的 研究罗汉果甜苷含药血清对大鼠肝星状细胞HSC-T6的毒性以及对细胞增殖与相关基因表达的影响,初步探讨其抗肝纤维化作用机制.方法 以罗汉果甜苷含药血清干预HSC-T6,乳酸脱氢酶(LDH)法检测罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6的细胞毒性；MTT法检测其对HSC-T6生长的抑制作用；RT-PCR法检测HSC-T6中Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、转化生长因子-β1 (TGF-β1)及基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)mRNA表达.结果 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6无特异毒性,罗汉果甜苷含药血清体积分数为20％、10％时可显著抑制HSC-T6的增殖(P＜0.05、0.01),并对Col-Ⅰ、TGF-β1及TIMP-1mRNA表达均表现显著抑制作用(P＜0.05、0.01).结论 罗汉果甜苷含药血清对HSC-T6细胞无特异毒性,对HSC-T6细胞增殖、Col-Ⅰ有抑制作用,促进细胞外基质(ECM)降解,这可能是其抗肝纤维化的部分作用机制.
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基于体外溶出度与抗肝纤维化作用效应动力学的冬虫夏草粉碎度研究
目的 从血清药理学的角度,结合体外溶出度实验,研究冬虫夏草用于抗肝纤维化佳的粉碎度.方法 冬虫夏草粉碎后分别过100、150、200、300目筛,制成不同粉碎度的冬虫夏草粉样品,结合腺苷的体外溶出度实验,采用体外肝纤维化细胞模型,不同粉碎度的冬虫夏草粉大鼠ig给药后,以大鼠含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响为指标,采用效应动力学方法研究不同粉碎度的冬虫夏草粉对肝纤维化细胞的抑制作用.结果 粉碎度为200～300目冬虫夏草粉腺苷累积溶出度较好,冬虫夏草粉含药血清具有较好的抑制HSC-T6细胞增殖的作用,200～300目冬虫夏草粉含药血清对HSC-T6抑制的效应动力学曲线下面积较大.结论 基于体外溶出度与效应动力学的方法可用于冬虫夏草治疗肝纤维化的粉碎度研究,粉碎度以200～300目优.
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HMGB1对肝星状细胞细胞外基质合成的影响
目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对肝星状细胞(hepatic stellate cell HSC)合成细胞外基质(extracellular matrix ECM)的影响.方法:剂量效应组分别用含HMGB1 0 mg/L,0.1 mg/L,1.0 mg/L,10 mg/L,20 mg/L和40 mg/L的HMGB1培养液培养HSC-T6 6 h;时间效应组以含有10 mg/L HMGB1的培养液培养0 h、6 h、12 h、18 h和24 h,对照组以不含HMGB1的培养液分别培养HSC-T6细胞,留取各组培养液离心后的上清,用双抗体夹心ELISA方法检测其上清中PⅢP和CⅣ的含量.结果:对照组HSC-T6细胞ECM分泌量较低;HSC-T6的ECM分泌量与HMGB1呈剂量依赖关系(r=0.835,0.955,P<0.05);10 mg/L HMGB1时间效应组的PⅢP,CⅣ分泌量在18 h和24 h 均明显高于对照组(P<0.05).结论:HMGB1能诱导HSC-T6细胞分泌ECM,可能在肝纤维化的发生、发展中发挥重要作用.
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靶向Nrf2基因shRNA慢病毒载体的构建及其对肝星状细胞Nrf2基因表达的沉默
目的：设计以NF-E2-related factor2(Nrf2)基因为靶点的短发夹状RNA(shRNA),构建重组慢病毒表达载体并转染大鼠肝星状细胞株HSC-T6,观察其对Nrf2表达的影响。方法应用重组DNA技术,将设计好的4条基因特异性shRNA序列插至慢病毒表达载体pGLV3-GFP中,构建pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA-1/2/3/4,并应用脂质体法转染293T细胞,进行病毒包装及滴度测定。采用实时荧光定量PCR( RT-PCR)及Western blot分别从mRNA和蛋白水平检测转染72 h和96 h后大鼠肝星状细胞株HSC-T6 Nrf2基因的表达情况。结果测序证实慢病毒载体构建成功,并测定滴度为1×109 TU/ml,pGLV3-GFP-Nrf2-shRNA转染后72 h和96 h可抑制Nrf2基因mRNA及蛋白的表达。结论成功构建Nrf2基因的shRNA慢病毒载体,可有效抑制大鼠肝星状细胞株HSC-T6中Nrf2基因的表达。
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壮药排钱草总生物碱对大鼠肝星状细胞胶原和细胞因子生成的影响
目的:研究排钱草总生物碱对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)相关胶原和细胞因子的分泌影响.方法:体外培养HSC-T6细胞,将排钱草总生物碱(终浓度为500、250、125、62.5、31.25、15.625 μg/mL)作用于细胞48h后,以MTT法检测细胞存活率,求出半数抑制浓度(IC50),根据IC50选取无细胞度浓度进一步研究;收集细胞上清液,用ELISA法分别检测Ⅰ型胶原(COL-Ⅰ)、Ⅲ型胶原(COL-Ⅲ)、Ⅳ型胶原(COL-Ⅳ)、转化生长因子(TGF-β1)、血小板衍生因子(PDGF)的含量.结果:排钱草总生物碱能明显抑制HSC-T6细胞的增殖,其抑制作用与药物终浓度呈量效关系,求得IC50为337μg/mL;并显著降低HSC-T6细胞生成的COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1,PDGF含量,与空白对照组比较,P＜0.05或P＜0.01.结论:排钱草总生物碱对HSC-T6细胞增殖有显著抑制作用,并能降低COL-Ⅰ、COL-Ⅲ、TGF-β1、PDGF的含量.
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黄芩苷与芍药苷联合用药对TGFβ1诱导HSC-T6的影响
目的:采用细胞培养的方法,体外观察黄芩苷、芍药苷及其联合用药对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的肝星状细胞(HSC-T6)增殖作用的影响.方法:采用TGFβ1诱导HSC-T6细胞作为活化的肝星状细胞的研究模型,在倒置显微镜下观察细胞形态变化并采用噻唑蓝(MTT)法测定黄芩苷、芍药苷及其联合用药对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞增殖的影响.结果:黄芩苷高(0.981±0.081)、低剂量组(1.046±0.073)和芍药苷高(1.019±0.111)、低剂量组(0.983±0.064)对TGFβ1诱导的HSC-T6细胞活化有一定的抑制作用,差异无统计学意义(P＞0.05).联合用药中,高剂量黄芩苷+低剂量芍药苷(0.921±0.076)和高剂量黄芩苷+高剂量芍药苷(0.893±0.087)与模型组(1.108±0.098)相比,OD值明显降低(P＜0.05).倒置显微镜显示,各组药物除了引起部分细胞死亡外,对细胞形态无明显影响.结论:黄芩苷、芍药苷对TGFβ1的促诱导HSC-T6细胞活化作用增殖有一定的抑制作用,并且黄芩苷与芍药苷联合用药可明显提高对TGFβ1诱导HSC-T6细胞增殖抑制作用.
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黄芪对HSC-T6细胞Col-I、TIMP1mRNA影响表达的研究
观察黄芪对HSC-T6细胞Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)mRNA表达的影响.用黄芪0.5mg/ml、1.0mg/ml浓度作用于HSC-T6细胞48h,以逆转录定量PCR方法测定其对HSC-T6细胞Col-Ⅰ、TIMP1mRNA表达的影响.提示黄芪0.5mg/ml、1.0mg/ml浓度HSC-T6细胞Col-ImRNA表达水平为2.5±0.71、1.5±0.01,与空白对照组比较,具有显著性差异;TIMP1mRNA表达水平依次为4.00±0.01、4.00±1.41,与空白对照组比较,无显著性差异.指出黄芪可明显降低HSC-T6细胞Col-ImRNA表达水平,而对TIMP1mRNA表达水平无明显影响.
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红景天苷对LPS诱导的HSC-T6细胞增殖作用及机制研究
目的:观察红景天苷(Salidroside,Sal)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6增殖的影响,并探讨一氧化氮(NO)在此过程中的作用.方法:选择脂多糖(LPS)活化HSC-T6,采用不同浓度的Sal,作用于经LPS活化的大鼠HSC-T6,24小时后进行如下实验:噻唑兰(MTT)比色法检测HSC-T6增殖;NO荧光探针(DAF-FM DA)检测细胞内NO浓度;Westem-blot检测INOS蛋白水平.结果:在LPS作用于HSC-T6细胞24小时后,与对照组相比,细胞增殖增加(P＜0.01),在Sal作用下,HSC-T6细胞增殖与LPS组相比受到抑制(P＜0.01),并呈浓度依赖性;在Sal处理HSC-T6细胞24小时后,细胞内NO水平有所上升,并呈浓度依赖性增加(P＜0.01);Sal预处理后的HSC-T6细胞,iNOS蛋白表达有所升高(P＜0.01).结论:Sal对HSC-T6细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用,NO可能是抑制增殖的因素之一.
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血管紧张素Ⅱ抑制大鼠肝星形细胞的凋亡
目的研究血管紧张素Ⅱ对大鼠肝星形细胞系HSC-T6凋亡的影响.方法采用免疫细胞化学法检测血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体表达;采用流式细胞仪技术和Hoechest 33342直接染色法观察血管紧张素Ⅱ对HSC-T6凋亡的影响;采用半定量RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的变化.结果无血清培养的HSC-T6自发凋亡率分别为(2.99±0.98)%(流式细胞仪检测)和(5.69±1.52)%(Hoechest 33342直接染色法),血管紧张素Ⅱ能剂量依赖性的抑制其凋亡.与对照组比较,凋亡率具有显著差异(P＜0.05或P＜0.01);血管紧张素Ⅱ还能上调Bcl-2/Bax比值.结论血管紧张素Ⅱ抑制HSC-T6凋亡是其参与肝纤维化的机制之一,此作用是通过上调Bcl-2/Bax比值实现的.
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盐酸川芎嗪影响HSC增殖的作用机制研究
目的 研究盐酸川芎嗪抑制HSC-T6细胞增殖的机制.方法 MTT比色法观察药物对HSC-T6细胞增殖的影响;流式细胞仪检测药物对细胞周期的影响;应用Western blotting和Real time PCR方法观察药物对P21和P27蛋白及mRNA表达的影响.结果 MTT结果显示川芎嗪具有明显的抑制HSC-T6增殖的作用,随着药物浓度的增大,其对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,呈现量效关系.流式细胞周期检测发现该药物通过将细胞聚积于G0/G1期,减少S期及G2/M期的细胞而抑制细胞增殖;Western blotting结果显示盐酸川芎嗪通过促进P21/P27蛋白表达抑制细胞的增殖;进一步采用Real time PCR研究发现,盐酸川芎嗪能够从mRNA水平促进P21/P27表达.结论 盐酸川芎嗪能抑制HSC-T6细胞的增殖,这主要是通过促进P21/P27蛋白和mRNA的表达而抑制HSC-T6细胞增殖.
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TGF-β1对大鼠HSC-T6细胞增殖、细胞周期和胶原分泌的影响
目的 观察TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6增殖、细胞周期以及分泌肝纤维化相关胶原的影响.方法 采用MTT法检测细胞增殖;使用流式细胞仪检测细胞周期;采用荧光定量RT-PCR法检测SMAD3、c-myc、cdk-2、cyclinE、EGF、HGF、Bcl-2、NF-κB、MMP1、MMP9、MMP14、TIMP-1、PAI-1、α-SMA、COLⅠ及COLⅢ等基因mRNA水平;采用ELISA法检测细胞培养液COLⅠ、COLⅢ和α-SMA含量.结果 与对照组比,TGF-β1处理24h及36h时,细胞形态及生长状况均无明显变化;在24h和36h时,TGF-β1处理组细胞G0/G1期细胞比率均减少(24h:57.3±8.5% vs 60.6±9.7%;36h:53.0±2.2% vs 56.6±5.0%),S期细胞比例略高(24h:30.6±7.2% vs 26.4±10.1%;36h:35.2±3.7% vs 30.8±2.5%),但差异无统计学意义(P>0.05);TGF-β1处理组SMAD3、c-myc、cdk2、cyclin E、EGF、Bcl-2、NF-κB、TIMP1、PAI-1、α-SMA及COLⅠmRNA在24h和36h表达均上调,HGF、MMP1、MMP9、MMP14及COL ⅢmRNA在24h时表达下调,36h时表达上调;TGF-β1处理组HSC-T6细胞分泌COLⅠ[24h:(63.0±7.4ng/ml vs 33.2±10.8 ng/ml,P<0.05;36h:58.5±6.0ng/ml vs 42.2±6.3ng/ml,P<0.05];α-SMA[24h:20.6±2.6ng/ml vs 4.2±0.7ng/ml,P<0.05;36h:59.7±14.6ng/ml vs 36.8±5.6ng/ml,P<0.05)均显著增加.结论 TGF-β1对大鼠肝星状细胞系HSC-T6显示了促增殖作用,并能促进肝纤维化相关胶原的分泌.
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SOCS3对四氯化碳诱导的小鼠肝纤维化进展和逆转的影响及机制研究
目的 观察细胞因子信号传导抑制蛋白-3(suppressor of cytokine signaling3, SOCS3)对肝纤维化进展和逆转过程的影响.方法 皮下注射四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)建立C57BL/6小鼠肝纤维化模型,纤维化模型成功后正常饮食喂养1个月为纤维化逆转模型,以同体重、同性别的正常小鼠为对照组.分别在1、2、3、4、5、6、7、8周后处死小鼠,取肝组织,HE染色观察肝组织损伤情况,Masson染色观察胶原变化,免疫组织化学法观察Ⅰ型胶原(collagen Ⅰ,Colla-1)、α平滑肌肌动蛋白(α smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子β1(transforming growth factor beta1,TGF-β1)和SOCS3蛋白表达.体外用TGF-β1刺激HSC-T6 细胞株形成纤维化体外模型,MDI培养基逆转纤维化过程,SOCS3过表达质粒作用于逆转过程,Western blot方法检测SOCS3、Colla-1、α-SMA、TGF-β1表达情况.结果 SOCS3和TGF-β1在小鼠纤维化模型中随着纤维化加重而表达增加,逆转过程中减少,过表达逆转过程,纤维化指标降低,有利于逆转的进行,TGF-β1表达也相应降低.结论 SOCS3可能通过调控TGF-β1的表达参与肝脏纤维化的形成和逆转过程.
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川芎嗪衍生物影响肝星状细胞增殖的作用机制研究
目的 研究川芎嗪衍生物H168抑制肝星状细胞(HSC-T6)增殖的机制.方法 MTS比色法观察H168对HSC-T6细胞增殖的影响;流式细胞仪检测H168对细胞周期的影响;应用Western blot和Real time PCR方法观察H168对p21/p27蛋白及mRNA表达的影响.结果 MTS结果显示H168具有明显的抑制HSC-T6增殖的作用,随着药物浓度的增大,对HSC-T6增殖的抑制作用逐渐增强,呈现量效关系.流式细胞周期检测发现H168作用24 h后,G0/G1期细胞增多,S期及G2/M期细胞减少;Western blot结果显示H168通过促进p21/p27蛋白表达抑制细胞的增殖;进一步采用Real time PCR研究发现,H168能够从mRNA水平促进p21/p27表达.结论 H168能抑制HSC-T6细胞的增殖,这主要是通过促进p21/p27蛋白和mRNA的表达而抑制HSC-T6细胞增殖.
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栀子苷对PDGF诱导的HSC-T6增殖活化的影响
目的探讨栀子苷抑制血小板衍生生长因子(PDGF)介导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖活化的作用及其可能机制。方法培养 HSC-T6,体外给予不同浓度(20、50、100、200、400μg/ml)的栀子苷,通过MTT法检测细胞的活力；选取20、50、100μg/ml的栀子苷, PDGF刺激后,采用MTT、实时定量PCR( qRT-PCR)和Western blot 法检测细胞增殖和细胞活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达；进一步采用Western blot 法检测栀子苷对MAPK通路蛋白 P-ERK、P-p38和 Akt/mTOR/p70S6K 通路蛋白的表
达。结果栀子苷可以抑制PDGF诱导的HSC-T6的增殖和减少活化标志物α-SMA的表达,并且明显抑制 Akt、mTOR和p70S6K的磷酸化水平,但是对ERK、p38活化水平无显著影响。结论栀子苷可以抑制PDGF诱导的HSC-T6的增殖与活化,可能起到抗纤维化的作用,这一作用的产生可能与Akt/mTOR/p70S6K通路有关。关键词： 栀子苷 HSC-T6 肝纤维化 AKT/mTOR/P70S6K -
化痰法结合补气、活血法促进肝星状细胞系HSC-T6凋亡的实验研究
目的:观察化痰法结合补气、活血法对肝星状细胞系HSC-T6生长的抑制作用及对相关凋亡蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.方法:制备相关化痰法药物血清,采用MTT法检测各组含药血清对HSC-T6细胞增殖的影响;Annexin V/PI双染法,流式细胞技术检测细胞周期及细胞凋亡率;Western blot方法检测细胞中Bcl-2、Bax蛋白表达情况.结果:MTT结果表明化痰法结合补气、活血法可有效抑制肝星状细胞HSC-T6的增殖;Annexin V/PI双染色流式细胞术检测结果表明化痰法结合补气、活血法可以促进HSC-T6细胞凋亡:Western blot结果显示化痰法结合补气、活血法能降低细胞中Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,且Bcl-2/Bax明显下降.结论:化痰法结合补气、活血法可通过抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达来诱导HSC-T6细胞凋亡,进而发挥抗肝纤维化作用.
