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2,5-己二酮对大鼠坐骨神经骨架蛋白的影响
目的 探讨2,5-己二酮(HD)对大鼠坐骨神经中神经丝、微丝、微管等骨架蛋白的影响.方法 Wistar雄性大鼠,经腹腔染毒,剂量分别为100和300 mg/(kg·bw),连续8周(每周5d).处死一半动物并分离、冻存坐骨神经.另一半动物停止染毒、自然恢复8周后取材.采用免疫组化方法检测大鼠坐骨神经中高分子量神经丝(NF-H)、中分子量神经丝(NF-M)、低分子量神经丝(NF-L)、β-肌动蛋白(β-actin)和β-管蛋白(β-tubulin)的相对含量.结果 剂量组NF-H、NF-M、NF-L相对含量在染毒8周时均降低,下降至对照组的81％ ～92％,且呈现剂量-反应关系;染毒8周又自然恢复8周时相对含量较染毒8周时无明显变化.β-actin的相对含量与对照组相比无明显变化.β-tubulin的相对含量在染毒8周时无明显变化,染毒8周又自然恢复8周时300 mg/(kg·bw)剂量组明显降低.结论 HD导致大鼠坐骨神经中骨架蛋白的改变自然恢复8周后无明显变化.
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2,5-己二酮对大鼠神经丝mRNA水平的影响
目的 探讨2,5-己二酮(HD)对神经组织神经丝(NF)mRNA水平的影响.方法 Wistar雄性大鼠27只,分为3组(1个对照组,2个染毒组),每组9只,经腹腔染毒,剂量分别为200和400 mg/(kg·d),连续8周.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测坐骨神经、脊髓、大脑组织中高分子量NF(NF-H)、中分子量NF(NF-M)和低分子量NF(NF-L)mRNA水平.结果 200和400 mg/kg剂量染毒后,坐骨神经NF-L mRNA水平分别为对照组的126%(P＜0.05)和152%(P＜0.01),NF-M mRNA未检测到,NF-H mRNA未发生明显变化;在脊髓、大脑组织中,NF-L mRNA下降为对照组的34%～54%(P＜0.01),NF-M mRNA未发生明显变化,400 mg/kg剂量组中NF-H mRNA下降为对照组的85%(P＜0.05).结论 HD染毒导致大鼠神经组织中NF亚单位mRNA水平的变化.
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丙烯酰胺对大鼠小脑神经丝蛋白的影响
目的研究丙烯酰胺(ACR)亚慢性染毒对小脑神经丝(NF)蛋白的影响,探讨其中毒性神经病机制.方法以20、40mg/kg ACR腹腔注射雄性Wistar大鼠2个月,Western Blot法测定小脑中NF-L、NF-M和NF-H相对含量.结果与对照组相比,高剂量组小脑上清液NF-L、NF-M、NF-H和沉淀NF-L分别增高348%、241%、32%和20%(P<0.01),而沉淀NF-H降低14%(P<0.05);低剂量组沉淀NF-L、上清NF-H分别增加16%、17%(P<0.05);低剂量组上清NF-L、NF-M及沉淀NF-M、NF-H均略为降低,但差异无显著性(P>0.05).结论ACR亚慢性中毒可引起小脑组织中NF亚单位蛋白的明显改变,尤其以上清中NF-L、NF-M升幅大(348%、241%).ACR引起的中毒性神经病与小脑组织中NF亚单位的含量变化有关.
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活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝运输的影响
目的 用活细胞成像技术研究2,5-己二酮对中分子量神经丝蛋白(NF-M)在体外培养的背根神经节神经元轴突中的运输的影响.方法 转染pPA-GFP-NFM质粒的背根神经节神经元体外培养,给予2,5-己二酮作用24 h后,荧光显微镜下定量观察GFP-NFM的转运量.结果 给药4、8和16 mmol/L 2,5-HD组,NF-M在轴突中被转运的量分别为28.5±11.6％(P＜0.05)、22.6±9.2％(P＜0.01)和18.5 ±8.6％(P＜0.01),而空白对照组中NF-M被转运的量为35.6±11.0％.结论 2,5-己二酮降低了NF-M的轴浆运输速率,这可能是2,5-己二酮引起中毒性周围神经病的致病机制之一.
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PMSF对TOCP诱导的母鸡大脑中神经丝含量的变化
目的 研究苯甲基磺酰氟(PMSF)阻断有机磷诱导的迟发性神经病(OPIDN)母鸡大脑中神经丝(NFs)的动态变化和机制.方法 成年母鸡随机分为正常对照组、磷酸三邻甲苯酯(tri-o-cresyl phosphate,TOCP)组和PMSF+TOCP组,Western-blotting检测母鸡染毒后第1、5、10和21天大脑中高分子量神经丝蛋白(NF-H)、中分子量神经丝蛋白(NF-M)、低分子量神经丝蛋白(NF-L)3种神经丝蛋白的相对含量.结果 TOCP染毒后母鸡出现OPIDN症状,大脑中NFs含量明显改变,且大脑沉淀中比上清中变化更加明显.总的趋势是从第1天开始降低,第10天达到低,第21天有所恢复.大脑沉淀中NF-L、NF-M和NF-H在第10天分别降低了86.22%(P＜0.01),86.98%(P＜0.01),54.05%(P＜0.05).提前24 h给予PMSF后,与正常对照相比,母鸡未出现明显OPIDN症状,大脑上清和沉淀中NF-L和NF-M均无明显变化,NF-H有所增加,在沉淀中第5天增加多达109.05%(P＜0.01).沉淀中PMSF+TOCP组NF 3个亚单位比TOCP组在各时间点均有不同程度的增加.结论 TOCP染毒引起母鸡大脑中NFs紊乱,提前给予PMSF能够抑制这种变化,提示TOCP诱发的NF紊乱可能是OPIDN发生的一种机制.
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枳实水提物对大鼠泻剂结肠肠壁神经丛的影响及机制研究
目的:探讨枳实水提物对胃肠道动力的兴奋作用是否有5-羟色胺4受体(5-HTR4)的参与,以及其与5-HTR4激动剂是否在泻剂结肠大鼠肠壁神经网络的重塑中发挥作用.方法:应用大黄建立泻剂结肠大鼠模型,随后分组予莫沙必利及不同剂量的枳实水提物灌胃治疗,持续14d.以墨汁推进试验测定其传输功能;留取结肠组织,采用透射电镜观察各组大鼠结肠组织的超微结构;Real-time PCR、Western blot及免疫组化测定5-HTR4高分子量神经丝(NF-H) mRNA/蛋白的表达水平.结果:①莫沙必利及枳实水提物高剂量组可显著改善泻剂结肠大鼠的肠道动力;②模型组、莫沙必利组及中药各剂量组结肠超微结构均出现不同程度的神经元退行性病变;③莫沙必利可上调5-HTR4蛋白质的表达,与mRNA水平呈同步变化;而枳实水提物上调5-HTR4 mRNA转录水平的同时并未使其蛋白质的表达增加.莫沙必利及枳实水提物高剂量组均可上调NF-H mRNA及蛋白质的表达.结论:莫沙必利通过兴奋5-HTR4受体增强慢传输型便秘大鼠模型结肠动力的同时,还能起到修复泻剂结肠肠壁肌间NF-H的作用.而枳实水提物促结肠动力的机制主要是通过促进NF-H生长实现的,5-HTR4是其作用的一个分子靶标,但可能不是发挥生物学活性的主要途径.
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脊髓半横断损伤后大鼠皮层神经元细胞骨架蛋白基因表达的变化
目的探讨神经再生过程中细胞骨架蛋白的作用机制, 了解中枢和外周神经系统神经元应答神经损伤和再生的差异. 方法用原位分子杂交方法观察了大鼠T10～11脊髓半横断损伤后1、3、 5、7、10、14、21、28、56d皮层感觉运动区皮层神经元中α-管蛋白和3个神经丝蛋白亚基 mRNA的表达变化. 结果脊髓半横断损伤后损伤侧皮层感觉运动区皮层神经元中α-管蛋白、神经丝-L、-M、-H mRNA表达明显下调.α-管蛋白mRNA表达水平在损伤后1d降低, 而神经丝亚基mRNA表达水平直到下一个时间点(损伤后3d)才下调,至损伤后56d均无恢复趋势. 结论皮层神经元损伤后α-管蛋白mRNA的表达被抑制,提示皮层神经元和外周神经元应答损伤的信号不同.
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神经丝的完整性对线状溶酶体形状与分布的影响
目的观察神经丝的完整性是否对线状溶酶体的形状与分布有影响. 方法采用SABC单克隆抗体免疫组织化学法、免疫电镜及酶组织化学、电镜酶组织化学技术观察钒酸盐处理后培养的神经元内神经丝蛋白NF-H及线状溶酶体的改变. 结果当神经丝的完整性被破坏时,神经丝蛋白向核周聚集,并伴随线状溶酶体亦向核周聚集并形状改变. 结论钒酸盐通过多途径作用,使神经丝过度磷酸化,失去装配能力,当神经丝结构被破坏时,线状溶酶体的形状及分布都发生变化.线状溶酶体的形状与分布对神经丝的完整性有依赖作用.
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糖尿病大鼠外周神经病变与胰岛素样生长因子-1基因表达的关系
胰岛素样生长因子-1(IGF-1)是一种神经营养因子,肝组织可能是其主要来源[1,2],IGF-1肽可通过内分泌发挥生物学作用,促进外周神经轴突结构蛋白神经丝和微管的合成,并与髓鞘代谢有关[3].研究发现,实验性糖尿病(DM)状态下,肝组织IGF-1基因表达下降[1].我们在此基础上,进一步探讨长期DM对肝组织IGF-1基因表达及其对外周神经病变的致病作用.
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罗格列酮对三重转基因小鼠认知障碍的干预作用
观察胰岛素增敏剂罗格列酮对3×Tg小鼠认知障碍的影响.以雄性C57/BL6小鼠分为正常对照组(WT组)和药物干预组(RSG组),取雄性APP/PS1Rau转基因小鼠随机分为模型组(3×Tg模型组)和罗格列酮治疗组(3×Tg+RSG治疗组).6月龄小鼠成模后,3×Tg+RSG组和RSG组给予罗格列酮(2.5 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗8周,其他组给予等量生理盐水;选用Morris水迷宫实验评估小鼠的认知功能,采用蛋白免疫印迹技术检测小鼠脑内细胞Tau蛋白和NFs蛋白磷酸化水平及糖基化水平.结果显示:与WT组和RSG组相比,3×Tg模型组的逃避潜伏期和路径长度显著增加,同时明显减少平台所在象限的停留时间和穿越隐匿平台的次数(P＜0.05);此外,模型小鼠脑内Tau蛋白和NFs蛋白磷酸化表达水平明显增高而糖基化相关蛋白的表达显著降低(P＜0.05);但3×Tg+RSG治疗组在上述行为学和细胞骨架的病理学改变方面有明显的改善(P＜0.05).结果提示:罗格列酮可以改善3×Tg模型小鼠阿尔茨海默病(AD)样的学习记忆减退和Tau蛋白的过磷酸化表达.
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利拉鲁肽对2型糖尿病阿尔茨海默病样三重转基因小鼠学习记忆的影响
目的：研究2型糖尿病（T2DM）对阿尔茨海默病（AD）样APP/PS1/Tau三重转基因（3×Tg）小鼠学习记忆能力的影响和利拉鲁肽（LIR）对此模型神经保护作用的相关机制。方法将1月龄C57BL/6小鼠设为正常对照（WT）组，1月龄3×Tg小鼠分为对照（Tg）组、单纯利拉鲁肽（Tg+LIR）组、Tg+T2DM组、T2DM+利拉鲁肽（Tg+T2DM+LIR）组。T2DM造模方法为喂2个月高脂高糖饲料，然后腹腔注射链脲佐菌素（STZ），空腹血糖大于7 mmol/L为造模成功，腹腔注射LIR治疗2个月。5月龄时测体质量、空腹血糖。Morris水迷宫检测空间学习记忆能力，Western blot?ting检测Tau、神经丝（NFs）和胰岛素受体底物（IRS）磷酸化水平。ELISA检测转入的人APP基因表达的人β淀粉样蛋白（Aβ）42，检测LIR对Aβ的影响。结果与Tg组比较，Tg+T2DM组小鼠质量、空腹血糖、逃避潜伏期、pT231、pT181、SMI31、Aβ42增加，穿越隐匿平台次数及pIRS减少。LIR能减轻高脂高糖饮食及T2DM造成的体质量和血糖的增加，能缓解T2DM对3×Tg小鼠空间学习记忆能力的损伤，改善T2DM对3×Tg小鼠Tau、NFs及IRS蛋白磷酸化的影响，减少3×Tg小鼠的Aβ沉积。结论 T2DM会加重3×Tg小鼠的AD样症状，而LIR对其有保护作用。
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胰岛素对AD样小鼠学习记忆的影响及其机制
目的 研究胰岛素对阿尔茨海默病(AD)样小鼠学习记忆能力的影响及其机制.方法 将21只小鼠随机分为对照(CON)组、模型(链脲佐菌素,STZ)组和胰岛素治疗(INS)组,每组7只,后2组小鼠脑室内注射STZ建立AD模型,INS组小鼠皮下注射胰岛素持续30 d.Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力,Western blotting检测Tau和神经丝(NFs)蛋白的磷酸化水平,荧光染料Fluoro-Jade B (FJB)标记退化神经元.结果 与CON组相比,STZ组小鼠平均逃避潜伏期和路径长度明显增加(P＜0.05)、穿越隐匿平台次数明显减少(P＜0.05),小鼠脑内Tau蛋白在Ser199/202、Ser396/404、Thr212和Thr205位点的磷酸化水平以及NFs蛋白的磷酸化增加(P＜0.05),FJB标记的小鼠海马CA1区平均累积光密度(IOD)较CON组明显增加(P＜0.001)；与STZ组相比,INS组小鼠学习记忆改善,逃避潜伏期和路径长度明显减少(P＜0.05)、穿越隐匿平台次数明显增加(P＜0.05),Tau蛋白特异性位点和NFs蛋白的磷酸化作用明显降低(P＜0.05),FJB标记的小鼠海马CA1区平均累积分光密度(IOD)明显减少(P＜0.001).结论 胰岛素能改善STZ脑室内注射的AD样小鼠学习记忆减退,可能与降低Tau和NFs蛋白的过度磷酸化和神经细胞退行性变有关.
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二肽基肽酶-4抑制剂对阿尔茨海默病样神经退行性变的保护作用
目的 探讨二肽基肽酶-4抑制剂(DDP-4I)对阿尔茨海默病(AD)样神经退行性改变的保护作用及其机制.方法 取对数生长期的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y分为6组:空白对照组(CON组),含1‰二甲基亚砜(DMSO)的磷酸盐缓冲液(PBS)处理12 h;wortmannin干预组(W组),0.03μmol/L wortmannin处理12 h;DPP-4I干预组(DPP-4I组),10μmol/L DPP-4I处理12 h;DPP-4I与wortmannin共同干预组(DPP-4I+W组),10μmol/L DPP-4I预处理2 h,再给予0.03μmol/L wortmannin处理12 h;DPP-4I+wortmannin+Ex9-39共同干预组(DPP-4I+W+Ex9-39组),10μmol/L Ex9-39预处理2 h,再加入10μmol/L DPP-4I作用2 h,后0.03μmol/L wortmannin处理12 h;Ex9-39干预组(Ex9-39组),10μmol/L Ex9-39处理12 h.MTT法检测各组细胞活性的变化,Western blot法检测各组微管相关的tau总蛋白(tau-5)及其不同磷酸化位点(pSpS199/202、pT231和pS396)、神经丝(NFs)相关蛋白(NF-H、NF-M)以及胰岛素信号通路PI3K/Akt/GSK-3β中关键酶的磷酸化水平.结果 (1)与CON组相比,W组细胞活力下降,pSpS199/202、pT231、pS396以及NF-H/M的磷酸化水平升高,而DPP-4I组细胞活力上升,上述指标的磷酸化水平下降;与W组相比,W+DPP-4I组的细胞活力上升,上述指标的磷酸化水平下降.(2)与CON组相比,Ex9-39组细胞活力下降,pSpS199/202、pT231、pS396以及NF-H/M的磷酸化水平升高;与DPP-4I+W组相比,DPP-4I+W+Ex9-39组上述指标发生相同的变化.(3)与CON组相比,W组p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β水平下降,DPP-4I组p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β水平上升;与W组相比,DPP-4I+W组p-PI3K、p-Akt、p-GSK3β水平上升.结论 DPP-4I可通过提高GLP-1的浓度和激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路来改善wotmannin诱导的AD样的tau蛋白和神经丝的过度磷酸化,保护神经细胞的退行性变.
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贲门失弛缓症44例肺功能改变的临床分析
贲门失弛缓症是由于食管壁神经丝缺如、发育不良、炎症或退化性改变,导致交感神经系统功能失调,使贲门失弛(不开放、不松弛)的一种原发性食管运动障碍性疾病.
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口服西沙必利致心律失常1例
西沙必利(Cisapride Tadte)商品名普瑞博思,它是一种促胃肠动力药物,其作用机理主要是促进肠肌间神经丝中乙酰胆硷的生理学释放,从而可增强食道、胃肠的运动.临床应用认为是一种疗效好、副作用较少的消化道的促动力药物,但个别病历也有不良反应,现报道如下:
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2,5己二酮对大鼠大脑组织骨架蛋白的影响
目的探讨2,5己二酮(HD)对大脑组织中神经丝、微管、微丝等骨架蛋白的影响.方法Wistar雄性大鼠,经腹腔染毒,剂量分别为200和400 mg/(kg.d),连续8周(每周5次),采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western印迹方法检测大脑组织匀浆28000g、30 min离心后所得上清和沉淀中低分子量神经丝(NF-L)、中分子量神经丝(NF-M)、高分子量神经丝(NF-H)、β-肌动蛋白、α-管蛋白和β-管蛋白的相对含量.结果上清中NF-L和NF-M未能检测到,其它神经丝亚单位的含量在沉淀和上清中均明显降低,下降至对照组的33%～73%,且呈现良好的剂量-反应关系.β-肌动蛋白、α-管蛋白、β-管蛋白的含量与对照组相比无明显变化.结论HD导致大鼠大脑中神经丝含量的降低,神经丝含量的改变和其神经毒性有关.
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醋酸铅对ST-8814细胞神经丝蛋白、微管结合蛋白mRNA水平的影响
目的 初步探讨铅的周围神经毒性是否与其对神经细胞骨架蛋白表达的影响相关.方法 ST-8814细胞作为周围神经体外细胞模型,100 μmol/L醋酸铅染毒24 h后,实时定量PCR扩增仪分析神经丝各亚型(NF-H、NF-M、NF-L)及微管结合蛋白MAPT基因mRNA水平的改变.结果 100 μmol/L醋酸铅对ST-8814细胞的抑制率约为50%,100 μmol/L醋酸铅处理ST-8814细胞前后神经丝各亚型基因NF-H、NF-M及NF-L的mRNA表达无明显差别;微管结合蛋白MAPT基因mRNA水平升高.结论 铅的周围神经毒性可能与其影响微管结合蛋白MAPT的表达,导致神经细胞骨架某些成分的功能变化有关.
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迟发型阿尔茨海默病患者脑脊液神经丝轻链蛋白含量测定的meta分析
目的 系统评价脑脊液神经丝轻链蛋白(neurofilament light,NFL)与迟发型阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)的关系.方法 电子检索PubMed、EMBase、中国知网、万方数据库、维普数据库中有关脑脊液NFL与迟发型AD关系的病例对照研究,检索时间截止至2017年1月.运用Stata 12.0软件进行meta分析.结果 共纳入8篇文献,包含研究对象1905人,其中迟发型AD患者1468人,对照437人.经meta分析显示,迟发型AD患者脑脊液中NFL水平高于对照组(SMD=2.49,95％ CI为1.13～3.85).Egger's回归检验显示无发表偏倚,敏感性分析显示结果比较稳健.结论 脑脊液中高水平的NFL可能是AD发病的危险因素.
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弓形虫感染对大鼠脑组织神经丝mRNA表达和细胞免疫水平的影响
目的 探讨弓形虫感染对大鼠大脑组织神经丝(NF)mRNA表达和细胞免疫水平的影响.方法 将4周龄雄性SD大鼠分成两组(每组10只):弓形虫感染组腹腔感染2×10~(10)个/L弓形虫速殖子悬液2 ml;对照组腹腔注射灭菌生理盐水2 ml.9周后,应用RT-PCR法检测大鼠大脑组织中高相对分子质量NF(NF-H)、中相对分子质量NF(NF-M)和低相对分子质量NF(NF-L)mRNA表达水平:流式细胞术检测大鼠外周血CD3~+、CD4~+、CD8~+T淋巴细胞;酶联免疫吸附试验测定其血清γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)水平.结果 大鼠弓形虫感染9周后,大脑组织NF-L、NF-H mRNA表达量(0.51±0.06、0.68±0.05)较对照组(0.79±0.03、0.76±0.05)明显下降(t值分别为3.41、2.17,P<0.01或<0.05);NF-M mRNA表达量(0.69±0.02)与对照组(0.72±0.03)比较.差异无统计学意义(t=2.09,P>0.05).弓形虫感染组大鼠的CD4~+T细胞[(32.19±5.01)%]和CD8~+T细胞[(20.06±2.28)%]与对照组[(35.82±3.71)%、(22.06±3.90)%]比较,差异均无统计学意义(t值分别为1.69、1.88,P均>0.05).弓形虫感染组大鼠血清IFN-γ[(6.03±0.16)ng/L]、TNF-α[(18.05±1.93)ng/L]、IL-4[(15.76±1.59)ng/L]水平均高于对照组((4.77±0.13)、(9.54±1.57)、(5.67±0.42)ng/L,t值分别为2.81、2.74、2.63,P均<0.05].结论 弓形虫感染可导致大鼠大脑组织中NF亚单位mRNA表达水平下降,血清IFN-γ、TNF-α、IL-4水平升高.
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糖尿病大鼠坐骨神经calpain Ⅱ的动态表达
目的观察早期糖尿病(DM)大鼠坐骨神经calpainⅡ的动态表达,探讨其在糖尿病多发性神经病(DPN)发病中的作用.方法以链佐星(STZ)诱导DM大鼠模型,通过原位杂交和免疫组化技术观察不同病程DM大鼠坐骨神经calpainⅡmRNA和蛋白的表达;并通过光镜和电镜观察坐骨神经形态,免疫组化观察坐骨神经中神经丝(NF)的表达.结果DM 4和8周大鼠坐骨神经calpainⅡmRNA均较正常组明显减少[(2.64±0.78)%vs(5.44±0.36)%,P＜0.001;(1.97±0.31)%vs(5.18±0.69)%,P＜0.001];蛋白表达也较正常组明显减少[(3.35±0.57)%vs(7.79±1.42)%,P＜0.001;(2.82±0.77)%vs(6.47±1.12)%,P＜0.001].DM 4周时坐骨神经仅有超微结构改变,NF含量无明显改变;DM 8周时神经形态明显改变,NF含量明显减少.结论DM大鼠坐骨神经calpainⅡ表达减少,其参与DPN的发病.
