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血清κ/λ轻链比值在多发性骨髓瘤合并肾功能不全与肾功能不全患者中的鉴别诊断价值
目的 比较血清轻链κ(kappa)、λ(lambda)浓度的测定及κ/λ比值在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)和肾功能不全患者中的不同,探讨其诊断价值.方法 采用速率散射免疫比浊法测定血清轻链κ、λ,并计算κ/λ比值.结果 各组血清κ/λ比值分别为:肾功能不全患组(1.99 ±0.72),κ型MM伴肾功能不全组(9.74±7.39),λ型MM伴肾功能不全组(0.27±0.24),肾功能不全组与MM伴肾功能不全组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 对于肾功能不全的老年患者,血清轻链浓度的测量及κ/λ比值计算是一个方便、快捷、有效的方法,有助于鉴别诊断,更大程度的降低MM患者的误诊、漏诊率.
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体外急性心肌梗死早期诊断方法的研究
从人心肌中提取心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞做常规融合,制备单克隆抗体.通过抗人心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体的相加指数、亲和常数测定和抗体夹心实验,筛选到配对较好的两对单抗,在此基础上建立起轻链夹心ELISA方法,为临床急性心肌梗死早期诊断方法研究提供条件.
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从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区
目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列.方法 首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型.结果 共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列.没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5'端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03.33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次).18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次).Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异.结论 利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因.
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轻链肾病的病理学特点
目的探讨轻链肾病(light chain nephropathy,LCN)的病理学特点及其诊断方法.方法对7例LCN进行了系统的光镜、免疫荧光及透射电镜检查,并进行轻链蛋白(κ、λ)的免疫荧光和免疫电镜标记.结果 7例的光镜表现不一,3例系膜结节状硬化性肾小球病,1例系膜轻至中度增生;其余3例为管型肾病,肾小球病变轻微.免疫荧光检查:7例均可见单一品种的轻链蛋白在肾小球系膜区团块状,及肾小球基底膜、肾小管基底膜和小血管壁呈线性沉积.透射电镜检查可见肾小球系膜区和基底膜内侧、肾小管基底膜外侧及小血管壁的颗粒状电子致密物沉积.免疫电镜标记显示,肾小球基底膜内侧和系膜区、肾小管基底膜外侧及小血管壁的颗粒状沉积物均可被单一品种轻链蛋白(5例κ,2例λ)标记.结论典型的LCN呈系膜结节状硬化性肾小球病,电镜观察到LCN的特征性超微结构改变具有诊断意义,结合轻链蛋白(κ、λ)的免疫荧光或免疫电镜检查可进一步确诊,尤其对光镜病变不明显的LCN更有意义.
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肾脏早期淀粉样变临床病理特点
目的探讨光学显微镜尚未表现明显特点的早期肾淀粉样变(amyloidosis, AL)的临床病理特点及诊断方法.方法回顾性分析该院1994～2001年间诊断的肾AL病例,重点对其中15例光镜未能及时诊断而通过透射电镜诊断的早期AL病例,进行临床病理特点的分析,并对其肾活检组织进行了轻链蛋白(κ、λ)的免疫电镜定位检测.结果 15例均为早期肾AL,发病年龄以中老年为主,突出表现为肾病综合征,偶见镜下血尿及高血压,肾功能正常.多数以肾脏病为初诊症状.肾活检组织光镜观察病变表现轻微,可有系膜轻度增生或基底膜空泡变性及轻度增厚;免疫荧光表现不一,部分病例全部阴性,部分表现免疫球蛋白及补体沿系膜区或毛细血管壁不同程度的沉积,均有单一品种的轻链蛋白沉积;光镜初步诊断为肾小球微小病变4例,轻度系膜增生性肾小球肾炎5例,Ⅰ期膜性肾病5例和1例管型肾病;电镜观察可见系膜区、基底膜及小动脉壁上的淀粉样纤维分布;补作刚果红染色时,呈阳性反应;免疫电镜可观察到轻链蛋白被标记于淀粉样纤维部位,证实15例均为轻链型AL.结论电镜检查是发现及早期诊断肾淀粉样变的重要手段,单一品种的轻链蛋白沉积有一定的诊断意义,结合免疫电镜检查可进一步确诊和分型.
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原位杂交对胃粘膜相关组织淋巴瘤的免疫球蛋白轻链的检测
目的 评价mRNA原位杂交方法检测免疫球蛋白轻链限制性在胃粘膜相关组织淋巴瘤诊断中的应用价值。方法 用非同位素标记寡核苷酸mRNA探针原位杂交方法检测27例原发性胃粘膜相关淋巴瘤和5例慢性胃炎,对其中的肿瘤细胞、淋巴细胞及浆细胞的免疫球蛋白κ和λ轻链的比例进行分析，以确定肿瘤细胞的轻链限制性及浆细胞的单克隆性。结果 27例原发性胃粘膜相关淋巴瘤中有10例出现轻链限制性(37%)，其中5例(5/9)为低度恶性病例，5例(5/18，28%)为高度恶性病例。单克隆性的浆细胞只在低度恶性病例中检出。慢性胃炎标本及肿瘤旁组织中未检测出轻链限制性。结论 mRNA原位杂交方法检测轻链限制性是诊断胃淋巴瘤的一个有用工具。低度恶性淋巴瘤中单克隆性浆细胞的存在，可作为诊断早期胃粘膜相关淋巴瘤的依据之一。
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人源抗狂犬病毒基因工程单链抗体的研究
目的 研制人源抗狂犬病毒基因工程抗体.方法 从具有高滴度狂犬病毒抗体的疫苗接种者采集外周血淋巴细胞,通过pHAL14载体和高效噬菌体系统构建人源抗狂犬病毒单链基因工程抗体库,经纯化的狂犬病毒aG株富集筛选,通过ELISA和IFA鉴定阳性抗体克隆并进行序列测定.利用IgG表达载体VH/VK双质粒系统瞬时转染293T细胞实现IgG抗体的分泌型表达,通过亲和力测定和中和试验鉴定IgG抗体功能.结果 成功地获得了6株抗狂犬病毒糖蛋白的人源单克隆抗体,非竞争ELISA显示6株抗体具有较高的亲和力,体外中和试验证实这6株人源单抗对狂犬病毒CVS株无中和活性,对aG株具有较强的中和活性.结论 从免疫库中获得了6株人源单克隆抗体,为狂犬病毒的鉴别诊断和治疗奠定了基础.
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人源抗EV71病毒基因工程抗体的研究
目的 研制人源抗EV71病毒基因工程抗体.方法 采集多个患儿外周血淋巴细胞,构建人源抗EV71单链(scFv)噬菌体抗体基因文库.用纯化的EV71 VPI蛋白对抗体库进行筛选,将筛出抗体的轻链和重链通过序列测定确定抗体轻重链型别后分别克隆入全抗体表达载体pAC-LCH3R后转染昆虫Sf9细胞,利用杆状病毒/昆虫细胞系统实现全抗体的分泌型表达.结果 成功地获得了1株抗EV71病毒VPI蛋白的人源单克隆抗体,利用ELISA、IFA对所获人源单克隆抗体的功能特性进行鉴定,表达成分泌型IgG全抗体在体外与A型及C4亚型EV71病毒的中和反应结果 显示为阴性.结论 从免疫库中获得了1株人源非中和单抗,为EV71病毒引起的手足口病的鉴别诊断奠定了基础.
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免疫固定电泳在多发性骨髓瘤中的应用
目的 探讨免疫固定电泳技术(IFE)在鉴定多发性骨髓瘤诊断中的应用.方法 采用免疫固定电泳技术检测50例多发性骨髓瘤患者血清标本.结果 其中45例多发性骨髓瘤检出M蛋白,M蛋白分型为IgGκ型16例,IgGλ型13例,IgAκ型6例,IgAλ型10例,单纯λ型2例;3例未检出M带.结论 采用免疫固定电泳技术诊断多发性骨髓瘤,沉淀带易识别,操作简单、快速.对鉴定各类型M蛋白有重要价值.
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血清免疫球蛋白轻链测定与多发性骨髓瘤诊断相关性探讨
目的 探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)的诊断与血清中免疫球蛋白及κ、λ轻链之间相关性.方法 选择53例MM患者及90例正常对照者,用速率散射比浊法检测受检者血清免疫球蛋白和κ、λ轻链,并计算κ/λ比值,对检测结果进行统计学分析.结果 53例MM患者中,以IgG型MM为多34例(64.16%),其中IgG κ型21例,lgGλ型13例.IgG型MM患者的IgG含量,IgA型MM患者的IgA含量,IgM型MM患者的IgM含量与对照组比较,其差异均有统计学意义(P均＜0.01).所有κ型MM,κ/λ比值显著升高,而所有λ型,κ/λ比值显著降低,分别与对照组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 血清免疫球蛋白,κ、λ轻链以及κ/λ比值的测定可为MM诊断提供较好的临床依据.
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轻链型淀粉样变性周围神经病一例
患者男,45 岁,汉族.主因进行性四肢麻木无力4 年,于2009 年7 月9 日入院.患者4 年前无明显诱因出现右足部麻木,此后麻木范围逐渐上升至右小腿,并反复出现恶心,时有呕吐,呕吐物为胃内容物,非喷射性,无呕血.3 年前于当地医院就诊,考虑为腰椎间盘突出,行手术治疗后肢体麻木未见好转,逐渐出现左下肢及双上肢麻木,同时伴有四肢无力,无肢体疼痛及肉跳,2 年前肢体无力加重,行走较前困难,呕吐好转,出现腹泻,排黄色稀便,3 ～6 次/d,无腹痛,里急后重,无黑便及黏液脓血便,就诊当地医院诊为"多发性神经根神经炎",给予维生素、激素等治疗,稍有好转,停药后症状再次加重.1 年前肢体麻木无力明显加重,麻木范围扩大至双侧大腿根部及手肘部,不能独立行走,并伴有小便失禁,消瘦,体重下降30 kg,直立性头晕,胸腹背部出汗增多,头部及肢体无汗.既往体健,否认家中类似病史及遗传病史.
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纯化和标记抗人轻链β2m的单克隆抗体在细胞表面HLA-Ⅰ类分子检测中的应用
HLA-Ⅰ类分子在单个核细胞(PBMC)表面表达丰富,HLA-Ⅰ类分子除了参与全身免疫应答外,还有调节免疫和参与免疫细胞分化的作用.研究表明,PBMC的HLA-Ⅰ类分子在细胞免疫中发挥着极为重要的作用,其表达降低可能会减弱机体对肿瘤细胞的杀伤力,从而导致肿瘤细胞逃避机体免疫监视[1].
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慢性特发性血小板减少性紫癜自身抗体克隆性分析
目的了解慢性特发性血小板减少性紫癜(ITP)自身抗体克隆性生成特性.方法采用改良的单克隆抗体免疫固定特异血小板抗原(MAIPA)法检测43例慢性ITP患者血清血小板膜糖蛋白(GP)特异性IgG抗体及其重链亚型和轻链表型,采用PCR技术分析患者淋巴细胞免疫球蛋白重链基因重排.结果 43例中16例(38%)血清中至少存在一种抗GP(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb、GPⅠa、GPⅣ、GPⅤ)IgG抗体.73%(8/11)的血清糖蛋白特异性自身抗体表现重链限制性,仅表达一种重链亚型;80%(16/20)的糖蛋白特异性抗体仅表达一种轻链表型;6例患者的糖蛋白特异性抗体既表现为轻链限制性又表现为重链限制性.PCR分析显示,3例存在淋巴细胞重链基因重排.结论部分慢性ITP患者GP特异性自身抗体源于寡克隆B淋巴细胞增生.
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免疫球蛋白轻链型淀粉样变性病心脏受累的临床特征及预后
目的 分析免疫球蛋白轻链型(AL型)淀粉样变性病累及心脏患者的临床特征、治疗和预后.方法 回顾性分析我院近7年来确诊的AL型淀粉样变性病心脏受累的比例、心脏淀粉样变的临床特征以及治疗和预后.结果 共有60例患者诊断为AL型淀粉样变,其中心脏受累36例(60%).36例中有心功能不全表现者18例(50%).心电图异常多表现为肢体导联低电压(47.2%)和伪心肌梗死改变(33.3%).30例患者(83.3%)超声心动图有异常表现,多为室壁肥厚(63.9%)、心肌颗粒状回声(11.1%)、心房扩大(33.3%)及舒张功能不全(30.6%).中位存活时间为13.9个月.结论 AL型淀粉样变性病累及心脏并不少见,临床表现以室壁增厚、舒张功能不全为特征,预后不良,早期诊断尤为重要.
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抗人喉癌单克隆抗体轻链可变区基因的克隆
目的 分离抗人喉癌单克隆抗体LC9-G5轻链可变区(liht chain variable region,VL)基因,并测定分析其核苷酸序列.方法 使用PCR方法体外扩增抗人喉癌单克隆抗体LC9-G5 VL基因,将其克隆入PMD18-T载体,重组子测序,将其序列使用数据库NCBI和Kabat进行分析.结果 这段序列与小鼠卵巢癌抗体VL基因的同源性为99%,基因全长336 bp,属于小鼠免疫球蛋白轻链第Ⅱ亚类,该VL基因序列已被Gene Bank收录,收录号为U60463.结论 该基因为抗人喉癌单克隆抗体LC9-G5轻链可变区基因.
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重组肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)蛋白的表达、纯化与鉴定
目的:克隆、表达并纯化肉毒神经毒素A轻链(BoNT/A LC)片段,为BoNT/A的抗体制备和检测方法的建立奠定基础.方法:以PCR方法自肉毒梭菌中扩增BoNT/A轻链基因,直接插入pGEM-T载体,测序正确后再与表达载体pET21a构建重组表达载体pET21a-轻链,转化E.coli BL21(pLys)感受态细胞获得表达工程菌株并进行诱导表达,用Western 印迹鉴定重组BoNT/A 轻链.结果:经PCR获得的BoNT/A 轻链序列与GenBank中的BoNT/A轻链基因序列的一致性达99.9%以上.表达工程菌BL21/pET21a-A LC于37℃经0.7 mmol/L IPTG诱导6 h,目的蛋白获得高表达,约占菌体总蛋白的23%.经过镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析一步纯化,重组BoNT/A 轻链的纯度可达97%以上.Western 印迹结果表明,重组BoNT/A 轻链与抗天然BoNT/A的马血清发生特异性的抗原抗体结合反应.结论:成功克隆、表达并纯化了BoNT/A 轻链片段,其抗原性良好.
关键词： 肉毒神经毒素A(BoNT/A) 轻链 克隆表达 Ni-NTA亲和层析 -
肾轻链沉积病和轻链型淀粉样变的电镜及免疫电镜研究
目的:探讨电镜及免疫电镜方法在肾轻链沉积病(light chain deposition disease, LCDD)和轻链型淀粉样变(amyloid, AL)诊断中的作用.方法:对我院1994年1月至2002年2月间的肾活检病例进行电镜观察,对疑为LCDD及早期AL的病例进行轻链(κ、λ)的免疫电镜标记.结果:6例符合LCDD的诊断,36例符合AL的诊断.LCDD电镜下可见肾小管基底膜外侧、肾小球基底膜内侧、鲍曼囊外侧及小血管壁的点状、颗粒状电子致密物质沉积,其中2例早期病例表现颗粒状物质节段性分布;免疫电镜标记,颗粒状物质被单种轻链标记,其中κ轻链4例,λ轻链2例.AL电镜下可见肾小球系膜区、毛细血管壁及小动脉壁的纤维物质分布,其中15例早期病例表现系膜区或/及毛细血管壁的纤维结构呈节段性分布;15例早期AL的免疫电镜标记结果,纤维结构被单种轻链标记,其中κ轻链4例,λ轻链11例.结论:肾脏LCDD及早期AL的诊断需依赖于电镜检查,免疫电镜检查对早期LCDD及早期AL的确诊具有不可替代的作用.
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单链抗体在大肠杆菌中的分泌型表达
单链抗体(scFv)是目前报道多的一类小分子抗体,对科研及疾病的诊断和治疗有重要意义.本文介绍了scFv在大肠杆菌周质腔及培养基中分泌型表达的特点、影响因素及研究进展.
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免疫球蛋白轻链kappa和lambda在胃癌细胞中同时表达
通常认为免疫球蛋白(Ig)是B淋巴细胞的特异产物,但近来发现非淋巴细胞性恶性肿瘤也存在Ig或Ig样物质.数个病例的研究结果显示胃癌细胞与其他上皮性肿瘤细胞一样有Ig表达,都是用多克隆抗体检测其中的IgG状况.每一Ig包括两条相同的重链和两条相同的轻链,轻链分为kappa和lambda二型(Igκ和Igλ),已知一个成熟的B细胞只能产生一类重链和一型轻链.检测两种轻链就能反映整个Ig存在状况.
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血浆免疫球蛋白分析的临床应用价值
目的探讨免疫球蛋白定量和κ、λ比值分析在MM、SLE、LC诊断中的价值. 方法对62例MM、49例LC、30例SLE患者的免疫球蛋白定量和κ、λ比值进行统计分析. 结果MM组各型M蛋白相应的免疫球蛋白及一型轻链呈单克隆升高,另一型轻链的含量减低,κ/λ比值发生明显改变.LC及SLE组各项免疫球蛋白浓度及κ、λ轻链均升高,κ/λ比值正常. 结论免疫球蛋白测定具有很高临床应用价值.
