首页 > 文献资料
-
乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的相互作用
目的:阐明基于药物代谢酶的乌头、白及配伍产生相互作用的机制.研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外-可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和WesternBlot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2 mRNA及蛋白水平的影响.结果:乌头、白及合用后CYP3A1/2的酶活性明显下降;Western Blot检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的蛋白质表达水平下降;RT-PCR检测显示CYP1A2、CYP3A1、CYP3A2的mRNA水平均上升.结论:乌头、白及合用后抑制CYP3A1/2的酶活性,乌头、白及配伍存在基于CYP3A1/2的药物相互作用.
关键词： 细胞色素P450 酶活性 蛋白质免疫印迹 反转录聚合酶链式反应 -
针刺手厥阴经穴对心肌缺血再灌注损伤大鼠CRTmRNA表达率的影响
目的:观察电针手厥阴经“内关”“郄门”穴对缺血再灌注损伤过程大鼠心肌组织CRTmRNA表达率的影响,探讨经穴与脏腑间的特异性联系.方法:50只Wistar大鼠根据随机数字表法分为假手术组、缺血-再灌注模型组、针刺“内关”治疗组、针刺“郄门”治疗组以及针刺“合谷”对照组5组各10只.除假手术组外,其他4组均制备缺血-再灌注动物模型,假手术组穿线但不结扎冠状动脉.“内关”、“郄门”、“合谷”3组穴位针刺20 min后,结扎冠状动脉左前降支40 min,再次针刺上述穴位20 min松扎,恢复冠脉灌流60 min后摘取心脏取心尖部组织,采用RT-PCR方法测定CRTmRNA表达率,实验过程中心电图(ECG)全程监测.结果:假手术组CRTmRNA的表达很低,模型组与“内关”组、“郄门”组比较,CRTmRNA表达率下降非常明显;模型组与“合谷”组比较,CRTmRNA表达率比较差异无统计学意义;“内关”组与“郄门”组比较差异无统计学意义.结论:针刺手厥阴经穴可有效促进CRTmRNA的表达,提高CRTmRNA的表达率,减轻胞浆钙超载对心肌细胞的损伤.
关键词： 针刺 心肌缺血再灌注损伤 钙网蛋白 反转录聚合酶链式反应 -
天麻素对大鼠皮层缺氧神经细胞NR1亚基mRNA表达的影响
目的:观察天麻素对体外培养大鼠皮层缺氧神经细胞N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR1亚基mRNA表达的影响,探讨天麻素在神经保护方面的可能作用机制.方法:体外培养大鼠胚胎皮层神经细胞,以缺氧无糖培养建立神经细胞损伤模型,采用不同质量浓度的天麻素(13,26,52 mg·L-1)处理细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测神经细胞NR1 mRNA的表达.结果:神经细胞缺氧损伤后,NR1 mRNA的表达显著增高;加入不同质量浓度的天麻素后均能显著降低神经细胞NRI mRNA的表达.其中以26,52 mg·L-1的抑制作用佳.结论:天麻素可能通过拮抗由缺氧引起的神经细胞NMDA受体NR1亚基mRNA表达的增加,发挥其神经保护作用.
关键词： 天麻素 神经细胞 缺氧 NR1 mRNA 反转录聚合酶链式反应 -
应用表达载体介导siRNA抑制乳腺癌细胞MCF-7血管内皮生长因子-C基因的表达
目的 探讨表达载体介导小干扰RNA(siRNA)对人乳腺癌细胞系MCF-7血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达的抑制作用. 方法 设计合成一对编码后可形成小发夹结构针对VEGF-C基因的siRNA的DNA序列,将其连入pRNAT-U6.1/Neo质粒中,构建VEGF-CsiRNA表达载体.表达载体进行PCR及测序鉴定,并分别转染MCF-7细胞,半定量RT-PCR和免疫组织化学技术检测转染前后MCF-7细胞VEGF-C基因表达的变化. 结果 PCR和DNA测序证实,携带VEGF-CsiRNA表达载体构建成功,VEGF-C基因的mRNA和蛋白表达量与空质粒转染相比均明显下降(P<0.05),在mRNA水平其表达抑制率为61.8%;在蛋白表达水平其表达抑制率为78.3%. 结论 本研究构建的VEGF-CsiRNA表达载体可有效抑制MCF-7细胞VEGF-C的mRNA和蛋白表达,为进一步以VEGF-C为靶点的乳腺癌治疗实验研究奠定了基础.
关键词： 小干扰RNA 血管内皮生长因子-C MCF-7 反转录聚合酶链式反应 -
利拉鲁肽调控高脂诱导的非酒精性脂肪肝病的分子机制
目的 探讨大鼠非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型中利拉鲁肽对炎症反应和抗氧化能力的影响及对脂类代谢相关酶的表达调控.方法 SD大鼠70只,25只给予正常饮食,45只采用高糖饮食加高脂灌胃12周,正常组和模型组随机挑取5只大鼠处死.确定NAFLD模型成功建立后,随机分为空白对照组(n=20)、模型对照组(n=20)和利拉鲁肽治疗组(n=20).利拉鲁肽治疗组给予利拉鲁肽60μg/(kg·d)皮下注射,模型对照组给予生理盐水1ml/(kg·d)皮下注射.利拉鲁肽治疗开始4周和8周后,各组处死大鼠各半,测定各组血浆中炎性因子、氧化因子、抗氧化因子、肝功能和脂类的变化,检测肝脏的形态学改变,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胆固醇调节元件结合转录因子-1c(SREBF-1c)和乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)的mRNA表达,应用免疫组织化学和Western blotting检测SREBF-1c和ACCα的蛋白质表达.结果 与模型对照组比较,利拉鲁肽治疗4周和8周后,血浆中C反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1α、IL-1β 、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量降低(P＜0.05);超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和总抗氧化能力(T-AOC)增加(P＜0.05),肝脏组织脂肪颗粒沉积减少;肝脏组织中SREBF-1c和ACCα的mRNA和蛋白表达下调(P＜0.05).利拉鲁肽治疗8周与治疗4周比较,上述指标进一步改善.结论 利拉鲁肽可以减轻NAFLD中炎症反应,提高抗氧化能力,改善肝功能;利拉鲁肽可能通过下调肝脏组织中SREBF-1c和ACCα的表达,减少脂质的生成,缓解肝脏组织中的脂肪变性,而且随治疗时间的增加,对NAFLD的防治作用更明显.
-
从兔外周血直接克隆B细胞κ轻链的可变区
目的 从兔外周血总RNA中直接扩增出B细胞κ轻链的可变区序列.方法 首先从IMGT/GENE-DB数据库中获取大耳白兔Ig胚系基因Vκ(IGKV)、Jκ(IGKJ)和Cκ(IGKC)的cDNA序列、设计引物,然后以非免疫兔外周血总RNA为模板进行RT-PCR扩增,回收产物并克隆到T载体,随机挑选单克隆测序,终将序列提交到IMGT/V-QUEST,分析出每个克隆的Vκ-Jκ组合,并利用BioEdit的本地Blast程序比较出Cκ的基因型.结果 共设计出4对引物,其中引物对RK.C1[4-5-9]无产物,引物对RK.C1[1-2-7]、RK.C1[3-6-8]和RK.C2[1-2-3-4]有产物,分别回收、克隆到T载体后各挑取20个克隆,共获得51个克隆的插入子序列.没有任何2个克隆的插入子序列完全相同,每个克隆均包含完整的兔Vκ、Jκ及Cκ的5'端序列,其中Vκ-Jκ-IGKC1组合的克隆33个,Vκ-Jκ-IGKC2组合的克隆18个;68个Vκ胚系基因中有22个出现,其中频率高的是IGKV1S10*01(12次),其次是IGKV1S36*01、IGKV1S37*01和IGKV1S4*01(各5次),其余均为3次以下;8个Jκ胚系基因中只有1个出现,为IGKJ1-2*01;2个Cκ基因的等位基因分别为IGKC1*01和IGKC2*03.33个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01]克隆中有17种不同的组合方式,其中频率高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC1*01](7次).18个Vκ-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03]克隆中有11种不同的组合方式,频率高的为[IGKV1S10*01]-[IGKJ1-2*01]-[IGKC2*03](5次).Vκ-Jκ-Cκ组合方式相同的克隆,序列仍具有明显的差异.结论 利用自行设计的兼并引物,成功并特异地从兔外周血总RNA中直接扩增出了κ轻链的可变区,且产物具有良好的多样性,但所有Vκ-Jκ-Cκ组合中只出现了1种Jκ基因.
-
RegⅠ在胃泌素促胃癌细胞体外增殖通路中的作用
目的 探讨再生蛋白I (RegⅠ)在胃泌素刺激胃癌细胞增殖通路中的作用.方法 根据RegⅠ cDNA已知序列,在线设计3个小干扰RNA,并经基因库同源性比较,构建其RegⅠ-shRNA表达载体(pSUPER-EGFP-REG/1、pSUPER-EGFP-REG/2和pSUPER-EGFP-REG/3),利用脂质体2000转染试剂分别转染胃癌细胞BGC823细胞株、SGC7901细胞株,同时设转染空质粒的实验对照组和无质粒转染的空白细胞组.后经G418筛选建立稳定转染细胞株.RT-PCR检测RegⅠ基因mRNA的转录水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测胃泌素孵育对胃癌细胞增殖的效应.结果 酶切及测序鉴定,插入片段正确,3个RegⅠ-shRNA表达载体构建成功;RT-PCR显示,pSUPER-EGFP-REG/1可有效抑制RegⅠ mRNA在胃癌细胞BGC823、SGC7901的转录.Western boltting结果显示,BGC823和SGC7901细胞的RegⅠ蛋白表达率分别下调到空载体对照组的(45±4)%和(53±4)%;MTT结果显示,RegⅠ基因表达抑制胃癌细胞系的增殖效率均降低(P＜0.05).胃泌素孵育后,胃癌细胞BGC823、SGC7901的增殖效率均增加(P＜0.05),而RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系增殖效率则无明显改变(P＞0.05).结论 实验成功建立了RegⅠ基因表达抑制的胃癌细胞系; RegⅠ基因可能对胃泌素促胃癌细胞的增殖有促进的作用.
-
内皮祖细胞移植对动脉粥样硬化模型大鼠脑缺血再灌注后学习记忆能力与脑顶叶皮质的影响
目的 探讨内皮祖细胞(EPCs)移植对动脉粥样硬化(AS)模型大鼠脑缺血再灌注损伤(IRI)后学习记忆能力与脑顶叶皮质结构的影响.方法 高脂膳食饲养建立30只动脉粥样硬化大鼠模型,随机分为AS组,IRI组和EPCs移植组.采集骨髓分离EPCs并体外扩增培养,检测其表面标记物的表达;第7天采用线栓法制作局灶性IRI模型,建模成功后1d EPCs移植组经尾静脉移植EPCs,IRI组与AS组给予等量体积的磷酸盐缓冲液.移植后7d检测各组大鼠的行为能力、脑组织血管内皮生长因子(VEGF)含量及其mRNA表达与其结构的病理改变.结果 培养24h后见细胞贴壁生长逐渐变为梭形;第3天细胞明显增殖集落形成;第5天细胞集落逐渐增大呈现克隆样生长;第7天细胞汇合达80%;第10～14天细胞基本铺满瓶底呈铺路石样密集排列.荧光显微镜下,DIL-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色的细胞数占贴壁细胞数的75%以上.与IRI组相比,EPCs移植后大鼠的学习记忆能力较IRI组明显改善,VEGF含量及其mRNA表达显著下降(P<0.05).光镜下,EPCs移植组大鼠脑缺血侧顶叶皮质Caspase-3和胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)阳性神经元均较IRI组明显下降(P<0.05).结论 EPCs移植能改善AS模型大鼠脑IRI后的学习记忆能力、减轻脑组织的病理损害,这些变化提示EPCs促进了神经的修复.
-
递增负荷运动及恢复过程中大鼠雌激素受体mRNA表达的变化及其意义
目的:观察持续9周递增负荷运动的不同训练周期及恢复过程大鼠HPO轴各环节ER mRNA水平的变化.探讨持续运动应激致动情周期紊乱ER水平变化的机制.方法:对不同训练周期及恢复过程的大鼠.采用RT-PCR检测下丘脑、垂体、卵巢、子宫各环节ER mRNA的表达,采用液相平衡竞争放射免疫分析法检测其血清雌二醇水平.结果:训练7周结束时,垂体及下丘脑ER mRNA表达及血清E2水平均显著降低,卵巢及子宫ER mRNA表达则显著增加;HPO轴各环节ER mRNA表达的变化持续至恢复2期,血清E2水平持续至恢复3期基本复原.结论:递增负荷运动大鼠HPO轴各环节ER mRNA表达对运动负荷的反应不尽相同,ER mRNA表达的变化与血清E2水平密切相关,其表达水平的非同一性可能是运动性月经失调病理过程的重要一环.
-
GADD45β在肝癌中的异常表达
目的:探讨生长抑制DNA损伤诱导因子β(GADD45β)与肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生、发展的关系.方法:应用寡核苷酸基因芯片、反转录PCR(RT-PCR)、免疫组织化学技术检测GADD45β在人正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中的异常表达,分析GADD45β与临床病理学特征的关系及其异常表达的可能分子生物学机制.结果:正常肝组织、肝硬化组织和肝癌组织中GADD45β mRNA的阳性表达率分别为80％、60％和26％,肝癌组织与正常肝组织间有非常统计学差异(x2=15.128,P<0.01); GADD45β在肝癌组织中的表达缺失与病理学分级显著相关(P<0.01).结论:GADD45β作为抑癌基因在肝癌的发生发展中起到相当重要的作用,且与肿瘤分化程度密切相关.
-
CDK5在肝细胞癌中的异常表达
目的:研究周期素依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase5.CDK5)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生发展中的异常表达.方法:应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测CDK5 mRNA的表达水平;免疫组织化学技术检测CDK5蛋白在正常肝组织、肝硬化和HCC组织中的表达:分析CDK5与临床病理学特征的关系.结果:CDK5 mRNA在HCC中呈上调表达,阳性表达率在正常肝组织、肝硬化和HCC组织中分别为35.3%、64.3%、89.7%;正常肝组织与HCC组织有显著差异(P<0.05),肝硬化组织与HCC组织也有显著差异(P<0.01).CDK5蛋白在HCC中高表达,阳性表达率在人正常肝组织、肝硬化和HCC组织之间分别为29.4%.64.3%,89.7%,三组之间差异有统计学意义(x2=58.095,P<0.01).HCC组织中CDK5蛋白表达强度与肿瘤的病理学分级显著相关(x2=19.330,P<0.01).结论:CDK5在HCC中上调表达,他的异常表达在HCC的发生发展过程中发挥重要的作用,且与肿瘤的分化程度相关.
关键词： 反转录聚合酶链式反应 免疫组织化学 肝细胞癌 周期素依赖性激酶5 高表达 -
肿瘤相关基因RASAL1在结肠癌中的表达及临床意义
目的:探讨Ras三磷酸鸟苷酶激活样蛋白(RASAL1)及基因在人结肠癌中的表达及其与临床病理参数问的关系.方法:收集2009-04/2010-05经手术切除的结肠腺癌标本50例作为研究组,相应正常组织为对照组,做成蜡块标本;其中20例另取其癌组织、癌旁组织及正常组织的新鲜标本:用免疫组织化学染色观察50例蜡块标本RASAL1蛋白的表达;用RT-PCR检测20例新鲜标本RASAL1 mRNA的表达,并分析其与临床病理参数的关系.结果:RASAL1蛋白主要在细胞质中表达;RASAL1蛋白在结肠癌中的阳性表达率明显低于癌旁组织及正常组织[46%(23/50) vs 85%(17/20),96%(48/50),均P<0.05];RASAL1mRNA在结肠癌中的阳性表达率较癌旁组织及正常组织明显减低[50%(10/20) vs 90%(18/20),95%(19/20),均P<0.05],RASAL1蛋白与mRNA的表达呈明显正相关(r=0.686,P<0.01),与肿瘤的分化程度(P<0.05)、侵袭深度(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.05)、TNM分期60<0.05)呈负相关.结论:RASAL1在结肠腺癌组织中低表达,且与分化程度及进展阶段负相关;RASAL1有可能成为结肠癌治疗的一个新靶点.
关键词： 结肠癌 Ras三磷酸鸟苷酶激活样蛋白 RAS 免疫组织化学 反转录聚合酶链式反应 -
锌对缺血再灌注损伤家兔心肌金属硫蛋白-1基因表达的影响
目的研究锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法采用RT-PCR技术,检测分析金属硫蛋白-1(MT-1)基因在家兔缺血再灌注损伤心肌的表达及锌对其基因表达的调节.结果各组家兔心肌组织中均有MT-1基因的表达,缺血再灌注组MT-1基因的表达较正常对照组明显下降(P＜0.01),补锌再灌注组MT-1基因的表达较缺血再灌注组明显上调(P＜0.01).结论锌对家兔心肌缺血再灌注损伤的分子机制中,调节其心肌组织中MT-1基因转录水平的表达可能是一条重要途径.
关键词： 锌 缺血再灌注损伤 金属硫蛋白-1 反转录聚合酶链式反应 -
异丹叶大黄素对人滑膜细胞白细胞介素-8生成及mRNA表达的影响
目的研究异丹叶大黄素(isorhapotigenin,Iso)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人滑膜细胞(human synovial cell, HSC)白细胞介素-8(IL-8)生成和mRNA表达的影响.方法用RIA方法测定IL-8的含量,以RT-PCR法测IL-8 mRNA.结果 Iso在1×10-6-1×10-5 mol*L-1浓度范围内对TNF-α诱导的人滑膜细胞IL-8生成有抑制作用,并抑制TNF-α诱导的HSC IL-8 mRNA表达.结论 Iso抑制TNF-α诱导的HSC IL-8生成,可能与影响IL-8 mRNA表达有关.
关键词： 异丹叶大黄素 白细胞介素-8 放免测定法 反转录聚合酶链式反应 -
甘糖酯对高脂血症大鼠血脂及脂蛋白脂酶的调节作用
目的探讨甘糖酯调节血脂的分子机制.方法以不同剂量甘糖酯(37.8,75.6 mg*kg-1*d-1)给高脂血症大鼠ig给药3周,禁食12 h后,测定大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的浓度变化,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测组织中脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表达.结果甘糖酯有降低血清TC,TG和LDL-C,升高HDL-C的作用,同时提高LPL mRNA的表达,且呈剂量依赖性关系.甘糖酯对LPL mRNA转录的促进作用与其降低TC,TG和LDL-C的作用呈正比关系.结论甘糖酯通过促进LPL mRNA转录而调节血脂水平,这可能是甘糖酯降血脂、预防动脉粥样硬化等心脑血管疾病的机制之一.
关键词： 甘糖酯 高脂血症 脂蛋白脂酶 反转录聚合酶链式反应 -
甘糖酯对大鼠肝脏CuZn-SOD mRNA表达和酶活的诱导作用
目的探讨甘糖酯对大鼠肝脏CuZn-SOD的诱导作用.方法 RT-PCR法检测甘糖酯po后的Wistar大鼠肝脏中CuZn-SOD mRNA的表达情况;亚硝酸盐法测定肝组织中CuZn-SOD酶活.结果 po甘糖酯后,高剂量组大鼠肝组织的SOD mRNA水平与对照组相比有显著的差异(P<0.01);高剂量组大鼠肝组织CuZn-SOD活力与对照组相比有非常显著的差异(P<0.001),而中剂量组和低剂量组CuZn-SOD活力与对照组相比有显著的差异(P<0.01).结论甘糖酯能够诱导大鼠肝组织中CuZn-SOD mRNA的表达,并提高其酶活,而且其作用随剂量的增加而提高.
关键词： 甘糖酯 超氧物歧化酶 反转录聚合酶链式反应 -
长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用
目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测.方法 根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物.提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增.优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验.并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测.结果 建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定.以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒小滴度为10-3/mL.65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%.结论 建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测.
关键词： 小鼠肝炎病毒 反转录聚合酶链式反应 长爪沙鼠 小鼠 -
锌对缺血再灌注大鼠肝脏金属硫蛋白-1基因表达的影响
目的研究锌对肝脏缺血再灌注损伤(HIRl)保护作用的分子机制.方法采用RT-PCR技术,检测分析金属硫蛋白-l(MT-1)基因在HIRI大鼠肝组织中的表达和锌对其表达的调节.结果各组大鼠肝组织均有MT-1基因表达;缺血30min、再灌90min大鼠肝组织中MT-1mRNA较对照组显著降低(P＜0.01);灌胃补锌后,HIRI大鼠肝MT-1mRNA转录水平较对照组明显增高(P＜0.01),单纯补锌亦可上调其组织中MT-1基因表达(P＜0.01).结论在锌对HIRI产生保护作用的分子机制中,调节其肝组织中MT-1转录水平的表达可能是一条重要途径.
关键词： 金属硫蛋白-1 反转录聚合酶链式反应 肝脏缺血再灌注 锌 -
半夏乌头合用对大鼠肝脏CYP450的调节作用
目的:为了阐明基于药物代谢酶的中药产生相互作用的机制,选取乌头、半夏作为研究对象.研究二者合用对主要药物代谢酶CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1/2在酶活性、mRNA水平和蛋白质水平的影响.方法:采用高效液相色谱法测定CYP1A2、CYP2E1活性;采用紫外可见分光光度法测定CYP3A1/2活性;分别采用RT-PCR和Western Blot方法评价药物对CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2mRNA及蛋白水平的影响.结果:乌头、半夏合用后CYP1A2、CYP3A1/2的酶活性下降,CYP2E1的酶活性却呈现明显的诱导;Western Blot检测显示CYP1A2的蛋白质表达水平下降.结论:乌头、半夏合用后抑制CYP1A2、CYP3A1酶活性,酶活性下降可能主要与转录后调节降低其蛋白水平来实现.
关键词： 细胞色素P450 酶活性 反转录聚合酶链式反应 -
血管内皮生长因子在激素性骨坏死过程中的变化特点
背景:动物实验显示,激素可导致股骨头内毛细血管明显充盈不良,单位面积内毛细血管密度明显下降,软骨下松质骨内微血管数明显减少,但具体机制尚不清楚.目的:观察激素诱导骨坏死过程中血管内皮生长因子的表达变化.方法:将中国大耳白兔以抽签法随机分马血清加甲基强的松龙组与单纯甲基强的松龙组.参考Matsui的方法制备典型的兔骨坏死动物模型,马血清加甲基强的松龙组经耳缘静脉注射马血清10 mL/kg,间隔2周后,再次相同剂量及方法注射马血清,间隔2周后腹腔注射甲基强的松龙45 mg/(kg·d),连续5 d.对照组腹腔注射甲基强的松龙45 mg/(kg·d),连续5 d.采用RT-RCR技术检测两组用药前、用药后7,14 d,第1次用激素后1,3,7,21,35,49 d骨组织中血管内皮生长因子基因表达,并进行微血管计数.结果与结论:使用马血清后7 d血管内皮生长因子明显增高,此后呈缓慢回落状态,在应用激素后1 d回落到正常用药前水平,随着应用激素时间的延长,血管内皮生长因子mRNA的表达量逐渐减低,以第7,21天为显著(P＜0.05),以后逐渐回升,但不能达到正常水平;微血管计数数量逐渐减少,在21 d时减少明显,与血管内皮生长因子表达量呈正相关.结果提示糖皮质激素抑制了骨组织中血管内皮生长因子的表达,从而抑制了骨内新生血管的形成,使骨组织局部缺血、缺氧状态难以修复重建:血管内皮生长因子的表达与骨组织微血管数量及骨坏死程度密切相关.
