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小鼠肝炎病毒核酸快速检测方法的建立和应用
为满足口岸对入境噬齿类动物快速检疫的需要,建立小鼠肝炎病毒(Mouse hepatitis virus,MHV)快速核酸检测方法.方法 使用引物和TaqMan荧光探针设计软件,针对MHV保守基因设计引物和探针,建立了RT-PCR和Real-time RT-PCR方法检测噬齿类动物临床样本中MHV的方法.结果 本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV方法具有良好的特异性和敏感性,通过将建立的方法应用于MHV阳性鼠临床样品的检测,证实两种MHV核酸检测方法具有良好的稳定性.结论 本研究建立的RT-PCR和Real-time RT-PCR检测MHV的方法,适用于动物粪便、尿液等易于获得样本的检测.
关键词： 小鼠肝炎病毒 RT-PCR Real-time RT-PCR -
ICR 小鼠自然感染小鼠肝炎病毒后抗原抗体的变化
目的：了解小鼠肝炎病毒（ MHV）污染的设施内，ICR小鼠自然感染后MHV抗原抗体存在情况。方法选择50只ICR小鼠，通过更换“脏垫料”的方式进行饲养，分别在实验第2，4，8，14，21，28，35，42，56和84天各剖杀动物5只，采集血清、盲肠内容物、粪便、肝脏以及肺脏检测抗原抗体分布情况。结果实验开始第2天，肺脏中检出小鼠肝炎病毒，检出率为20％（1/5），第4天开始，肝脏、肺部、盲肠以及粪便中均可检出小鼠肝炎病毒；84天后，肺脏、盲肠、粪便和肝脏阳性检出率降为0。实验第8天，血清中抗体检出阳性，阳性率为100％（5/5），直至第84天实验结束，抗体阳性率仍维持在100％（5/5）。结论血清学方法可作为日常监督主要诊断方法，而抗原检测方法只能应用于早期诊断。
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五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究
目的 评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒.方法 选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较.结果 国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差低为2倍,差异显著(P<0.05),高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01).结论 除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好.
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小鼠肝炎病毒N蛋白间接ELISA方法的建立
目的 运用重组蛋白作为包被抗原建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法.方法 将大肠杆菌表达小鼠肝炎病毒核衣壳蛋白(Nucleocapsid N)的主要抗原域NP(S)纯化后作为诊断抗原,通过条件优化,建立检测小鼠肝炎病毒抗体的间接ELISA方法.结果 确定其包被抗原的浓度为300 ng/mL,血清稀释度为1:200,山羊抗小鼠酶标抗体的稀释浓度为1:3000.S/P≥0.386则为阳性,S/P<0.308为阴性,两者之间为可疑.经阻断试验、交叉试验和重复性实验,表明该方法特异性强,重复性好.与国家实验动物检测中心的MHV全病毒ELISA抗体诊断试剂盒比较,特异性、敏感性和符合率分别为94.1%、93.3%和93.9%.用该融合蛋白包被聚苯乙烯板后在-20℃下可保存5个月,应用该方法检测了98份送检的血清样品,有10份检测为阳性.结论 本研究建立的间接ELISA特异性强,重复性好,为进一步开发MHV血清抗体诊断试剂盒奠定了基础.
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长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用
目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测.方法 根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物.提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增.优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验.并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测.结果 建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定.以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒小滴度为10-3/mL.65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%.结论 建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测.
关键词： 小鼠肝炎病毒 反转录聚合酶链式反应 长爪沙鼠 小鼠 -
剖腹产手术净化小鼠肝炎病毒的试验
本文报告以无菌剖腹产术净化小鼠肝炎病毒感染的小鼠种群的结果.剖腹产术前100%感染小鼠肝炎病毒的小鼠种群,经无菌剖腹产术净化后,结果均为阴性,并经5年的大规模生产、繁殖,至今仍保持阴性结果.
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长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体ELISA检测方法的建立与初步应用
目的 建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)抗体ELISA检测方法.方法 培养DBT细胞,接种MHV-V1、MHV-V3、MHV-JHM病毒,制备DBT正常抗原和MHV-V1、MHV-V3、MHV-JHM三价特异抗原,滴定酶结合物和抗原佳工作浓度,并进行精密性、敏感性、稳定性、特异性实验.结果 正常抗原、特异抗原和酶结合物佳工作浓度分别为0.4 μg/ml、5μg/ml和1∶5000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为7.9％和6.8％,批间平均变异系数分别为12.7％和11.2％;检测灵敏度为1∶1280;与小鼠仙台病毒(SV)、小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)均无交叉反应.稳定性试验相对偏差小于25％.结论 建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强.可用于沙鼠MHV抗体的检测.
关键词： 小鼠肝炎病毒 ELISA(MHV) 长爪沙鼠 -
ELISA法检测野生和驯养长爪沙鼠携带病毒情况
目的 检测野生长爪沙鼠和驯养长爪沙鼠的病毒携带情况,为制定长爪沙鼠微生物学检测北京市地方标准提供依据.方法 制备兔抗长爪沙鼠IgG抗体并用辣根酶标记.分别采集银川市、呼和浩特周边地区的野生长爪沙鼠以及长期驯养的长爪沙鼠血清,用间接ELISA进行流行性出血热、淋巴细胞脉络丛脑膜炎等人兽共患病毒及仙台病毒、鼠痘病毒、小鼠肝炎病毒等啮齿类动物烈性传染病病毒抗体检测,并计算检出率.结果 兔抗沙鼠的IgG抗体ELISA法效价1:64 000以上,满足血清学检测要求.银川地区野生长爪沙鼠小鼠肝炎病毒抗体阳性(6.0%),而呼和浩特和驯养的则未检出;但呼和浩特地区的野生长爪沙鼠有淋巴脉络丛脑膜炎病毒抗体检出(13.3%),而银川和驯养长爪沙鼠则没有.仙台病毒抗体的检出率为呼和浩特地区的低(40.0%),宁夏和驯养动物相等(53.3%).结论 两地区野生长爪沙鼠和人工驯养长爪沙鼠病毒抗体的检出种类和检出率有所不同,在制定北京市地方标准时要综合考虑.
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小鼠肝炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
[目的]制备并鉴定小鼠肝炎病毒(MHV)N蛋白的单克隆抗体(mAb).[方法]以Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达的重组N蛋白为免疫原,免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤进行融合,用间接ELISA方法筛选分泌N蛋白mAb的杂交瘤细胞系.并用Western blot和IFA方法对所获得的mAb进行鉴定.[结果]共获得4株稳定分泌抗N蛋白mAb的杂交瘤细胞系,其亚类鉴定2株为IgG2a,1株为IgG2b,1株为IgG1,轻链均为k型.经鉴定4株mAb均能与重组N蛋白发生特异性反应.[结论]成功获得了特异性抗MHV N蛋白的mAb,为进一步研究N蛋白的结构功能及建立诊断学方法奠定了基础.
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小鼠肝炎病毒受体研究进展
小鼠肝炎病毒属于冠状病毒科,不同的MHV毒株可引起易感动物的肠炎、肝炎以及脑脊髓炎.MHV的受体属于免疫球蛋白超家族中癌胚抗原家族成员,称为CEACAM.具有4个免疫球蛋白样结构域、一个跨膜结构域和一个胞浆内尾.受体的多种同型体都可作为MHV的功能性受体.已确定小鼠CEACAM1a同型体结构域1和4可溶性外结构域的晶体结构.MHV受体的研究为病毒受体类似物作为病毒异体亲嗜性和种间交叉传播的途径提供了依据.
