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多发性骨髓瘤患者血清游离轻链检测及其临床意义
目的 确定中国人血清游离轻链(sFLC)的正常值,评价sFLC在多发性骨髓瘤(MM)患者的诊断、疗效判断中的临床意义.方法 自动免疫比浊法检测63例健康人sFLC水平,确定其正常参考区间.采用同样方法 检测72例MM患者不同疾病阶段的sFLC水平,通过与传统的M蛋白检测方法 的比较来评价sFLC的临床意义.结果 (1)健康人sFLC-κ、sFLC-λ的95%参考区间分别为(9～29)mg/L、(15～34)mg/L,sFLC-κ/λ比值的中位值为0.59,100%参考区间为0.27～2.49.(2)初治MM患者中,κ增高的MM(κ-MM)患者的sFLC-κ、sFLC-λ的95%参考区间分别为(53～14 100)mg/L、(0～97)mg/L,sFLC-κ/λ比值中位值为10.27;λ增高的MM(λ-MM)患者的sFLC-κ、sFLC-λ 95%参考区间分别为(9～117)mg/L、(205～6875)mg/L,sFLCκ/λ比值中位值是0.005.MM患者sFLC-κ、sFLC-λ的95%参考区间与健康人间无交叉重叠.96.4%(26/27)初治MM患者的sFLCκ/λ比值异常.(3)健康人sFLC-κ、sFLC-λ均与年龄呈正相关(P值分别为0.031、0.01),而sFLCκ/λ比值与年龄无相关性(P=0.861).初治MM患者年龄与sFLC-κ、sFLC-λ浓度及sFLCκ/λ比值间均无相关性(P分别为0.287、0.408、0.471).(4)对于初治患者,检测κ克隆时比浊法与免疫固定法的敏感性和特异性分别是100% vs 73.7%和100% vs 44.4%;检测λ克隆时比浊法与IFE法的敏感性和特异性分别是100% vs 68.8%和100% vs 58.3%.对于治疗后达完全缓解的MM患者比浊法仍可以检测到单克隆M蛋白的存在.结论 首次获得了一个中国人sFLC-κ、sFLC-λ及sFLCκ/λ的正常参考区间.自动免疫比浊法检测sFLC可以提高MM患者的初诊时的阳性率和疗效判断准确率.
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多发性骨髓瘤患者Bmi-1基因表达及其临床意义
多发性骨髓瘤(MM)是浆细胞异常增生的恶性肿瘤,其特征为骨髓浆细胞恶性增殖和过度分泌单克隆免疫球蛋白(IgG、IgA、IgD或.IgE)或本-周蛋白(游离的单克隆性κ或γ轻链).因正常免疫球蛋白的合成受抑,临床上细菌、病毒和真菌感染的易感性增高,同时伴有多发性溶骨性损害、高钙血症、贫血、肾脏损害等.
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血、尿轻链含量κ/λ比值在骨髓瘤性肾病及原发性肾病综合征中的意义
多发性骨髓瘤(MM)致肾损害常表现继发性肾病综合征,称为骨髓瘤性肾病,其特点是患者血清和尿中常能检测到单一增殖的轻链Kappa(κ)或Lambda(λ),而原发性肾病综合征患者,尿中亦能检测到轻链κ和(或)λ,我们运用速率散射比浊法测定血、尿中κ、λ轻链的含量及κ/λ比率,旨在运用血、尿中κ、λ轻链含量及比率正确判断骨髓瘤性肾病和原发性肾病综合征提供帮助.
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血清和尿液轻链κ、λ含量对MM伴肾功能不全的诊断价值
目的:探讨血清和尿液轻链1c、λ含量和κ/λ比值对多发性骨髓瘤(MM)伴肾功能不全的诊断价值.方法:72例原发性肾功能不全患者作为肾功能不全组,以同期单纯MM患者作为MM组,MM伴肾功能不全患者作为MM伴肾功能不全组;单纯MM患者和MM伴肾功能不全患者再根据轻链κ、λ含量区分为κ型组和λ型组.采用速率散射比浊法检测患者血清和尿液轻链κ、λ含量,并计算κ/λ比值.结果:与肾功能不全组比较,κ型MM组、κ型MM合并肾功能不全组患者血清和尿液κ含量、κ/λ值明显升高,血清λ含量明显升高、尿液λ含量明显降低(P＜0.05);λ型MM组、λ型MM合并肾功能不全组患者血清和尿液λ含量明显升高,1κ含量、κ/λ值明显降低(P＜0.05).并且,1κ型MM合并肾功能不全组患者尿液κ含量明显高于κ型MM组,λ型MM合并肾功能不全组患者尿液λ含量明显高于λ型MM组(P＜0.05).结论:检测血清和尿液κ、λ含量和κ/λ比值可初步鉴别MM与肾功能不全,再联合尿液κ、λ含量可进一步区分MM与MM合并肾功能不全.
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原发性干燥综合征并淀粉样变患者血清游离轻链和细胞因子水平及环磷酰胺对其的影响
目的 研究原发性干燥综合征(pSS)并淀粉样变患者外周血血清游离轻链(sFLC)和细胞因子水平的特点及环磷酰胺治疗对其的影响.方法 检测9例初诊的pSS并淀粉样变患者治疗前和环磷酰胺治疗3、6、12个月时外周血sFLC、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1、白细胞介素(IL)-4水平,治疗前后指标变化采用重复测量设计的方差分析.结果 pSS并淀粉样变患者sFLC中均为X型,未发现κ型.治疗后12个月sFLC水平(22±42) mg/L低于治疗前(180±15) mg/L(P＜0.05).pSS并淀粉样变患者环磷酰胺治疗后3个月细胞因子水平出现下降,治疗后12个月TNF-α、TGF-β1、IL-4水平分别为(24.0±14)、(58±5)、(38.8±3.2) ng/L,均较治疗前[(31.1±2.0)、(65±5)、(61.2±3.8) ng/L]下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 pSS并淀粉样变患者外周血sFLC水平和细胞因子水平明显异常,治疗后下降,提示细胞因子可能在其发病机制中起重要作用；环磷酰胺可能有较好的治疗效果.
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迟发型阿尔茨海默病患者脑脊液神经丝轻链蛋白含量测定的meta分析
目的 系统评价脑脊液神经丝轻链蛋白(neurofilament light,NFL)与迟发型阿尔茨海默病(Alzheimer'sdisease,AD)的关系.方法 电子检索PubMed、EMBase、中国知网、万方数据库、维普数据库中有关脑脊液NFL与迟发型AD关系的病例对照研究,检索时间截止至2017年1月.运用Stata 12.0软件进行meta分析.结果 共纳入8篇文献,包含研究对象1905人,其中迟发型AD患者1468人,对照437人.经meta分析显示,迟发型AD患者脑脊液中NFL水平高于对照组(SMD=2.49,95％ CI为1.13～3.85).Egger's回归检验显示无发表偏倚,敏感性分析显示结果比较稳健.结论 脑脊液中高水平的NFL可能是AD发病的危险因素.
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纯化和标记抗人轻链β2m单克隆抗体的方法
背景:通过杂交瘤细胞株接种小鼠腹腔可获得含大量抗体的腹水,但以往纯化腹水中单克隆抗的方法较复杂,不易操作.目的:制备、纯化和标记抗人类白细胞抗原Ⅰ类分子轻链的单克隆抗体,以检测肿瘤细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达.方法:将杂交瘤细胞接种至小鼠腹腔,获得含抗人轻链β2m抗体的腹水,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水,将纯化后的单克隆抗体标记异硫氰酸荧光素(FITC),标记后的抗体用于检测外周血单个核细胞、表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞和白血病K562细胞表面的人类白细胞抗原Ⅰ类分子,并用流式细胞仪和荧光显微镜观察人类白细胞抗原Ⅰ类分子的表达.结果与结论:纯化后的抗人轻链β2m-FITC单克隆抗体纯度为96%.流式细胞检测结果表明,人类白细胞抗原Ⅰ类分子在外周血单个核细胞表面高表达,在表达空载人类白细胞抗原A2分子的T2细胞表面低表达,而在白血病K562细胞表面不表达.结果证实,用改良的辛酸-硫酸铵方法纯化腹水以此制备的抗人轻链β2m-FITC能有效区别不同细胞表达人类白细胞抗原Ⅰ类分子的强弱,其纯化方法简便易行.
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单克隆免疫球蛋白相关肾小管间质疾病诊治进展
单克隆免疫球蛋白相关肾小管间质疾病主要指单克隆轻链(κ,λ)所导致的肾小管间质病变,包括轻链相关肾小管损伤及肾小管坏死、轻链相关肾小管间质性肾炎、轻链近端肾小管病及轻链管型肾病等四类疾病.临床上以肾功能不全为主要特征,可伴有小分子为主的蛋白尿;病理以单克隆轻链在肾小管上皮胞浆、肾小管基底膜及管型沉积为共同特征;电镜与免疫电镜证实单克隆轻链在上皮胞质溶酶体及其结晶等包涵体内的蓄积,具有重要的诊断价值.轻链导致不同的病理损伤类型,可能与轻链的负荷量、轻链的特定基因亚型及其不同的结构变异有关,详细的发病机制有待进一步研究.
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肠道病毒71型手足口病患儿血清轻链检测的临床应用
目的:通过检测肠道病毒71型手足口病(HFMD)患儿血清中轻链κ、轻链λ和κ/λ比值的变化,探讨血清轻链检测在手足口病诊断中的意义.方法:对178例EV71感染的手足口病患儿和40例健康体检儿童的血清标本进行轻链κ、轻链λ及κ/λ比值检测,并对其结果进行统计学分析.结果:HFMD组血清轻链κ水平显著低于健康组(P＜0.05),差异有统计学意义;HFMD组血清轻链λ水平及κ/λ比值与健康组比较有所降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).HFMD组血清轻链κ、λ及κ/λ比值异常率均显著高于健康组(P＜0.05),差异有统计学意义.结论:EV71感染的手足口病患儿的轻链结果有显著变化,提示EV71感染的手足口病患儿存在体液免疫的紊乱.
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B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究
目的:探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应 (RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA 含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性.结果:MM患者血清 BLyS含量[(7.95±4.93) g/L 明显高于健康对照组[(2.70±1.09) g/L,P<0.01 ,并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4% (18/19),84.2% (16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32% (9/19)患者TACI mRNA表达水平降低.结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.
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血清免疫球蛋白及轻链定量测定在多发性骨髓瘤病情监测中的应用
目的：通过对多发性骨髓瘤患者血清免疫球蛋白及轻链定量测定结果变化的动态分析，以评价治疗效果。方法对25例 IgG-Kappa 型多发性骨髓瘤患者在2008-2014年不同发展阶段中的血清 IgG、Kappa 定量测定及血清蛋白电泳、免疫固定电泳结果进行统计，结合患者不同治疗阶段的疗效，遴选出四个主要时期（初发、移植前有效、复发、移植后有效）的结果并进行统计学分析。结果初发组、复发组、移植前有效组和移植后有效组的 M 蛋白平均含量分别为（35．67±8．49）％、（18．08±7．02）％、（8．43±7．94）％、（3．05±2．96）％。25例移植前有效组和8例移植后有效组的 M 蛋白含量为0的及免疫固定电泳未见 IgG、Kappa 区带的分别都占20％、50％。初发和复发组的 IgG、Kappa，相比正常对照组升高有统计学意义（P ＜0．001），移植前有效组 Kappa 相比正常对照组升高有统计学意义（P＜0．05）。移植前有效组 IgG 及移植后有效组 IgG、Kappa，相比正常对照组升高无统计学意义（P ＞0．05）。移植后有效组 IgG、Kappa 轻链定量结果相比移植前有效组的更低于其他两组，疗效佳。结论血清免疫球蛋白及轻链定期的测定为临床治疗多发性骨髓瘤患者提供可靠的依据，在患者病情监测和疗效评价中起到重要的作用。
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IgD型多发性骨髓瘤患者实验室检查结果分析
目的 IgD型多发性骨髓瘤患者临床上较为少见,通过实验室检查,以求发现其特点,避免漏诊.方法 分别收集20例本实验室检测到的IgD型、IgG型、IgA型、IgM型多发性骨髓瘤患者的实验室检查结果,分析IgD型与其它较为常见类型的多发性骨髓瘤患者实验室检查结果的异同.结果 IgD型多发性骨髓瘤患者的免疫球蛋白定量结果显示,IgG、IgA和 IgM含量均减低者有18例占90%,其余两例3种免疫球蛋白含量处于正常下限.轻链定量发现,20例IgD型多发性骨髓瘤患者有19例为IgD型λ轻链型,占95%,而IgD型κ轻链型仅1例,且20例中有19例是轻链比值异常的.IgD型多发性骨髓瘤患者的血清蛋白电泳阳性率与其余类型无显著差异(P＞0.05);免疫固定电泳显示IgD泳道有特异性的抗原抗体沉淀带.结论 如实验室检查发现患者免疫球蛋白IgG、IgA和 IgM含量均减低、轻链比值异常、血清蛋白电泳出现阳性条带,要高度怀疑其为IgD型多发性骨髓瘤,免疫固定电泳时务必加IgD泳道,以避免IgD型多发性骨髓瘤的漏诊.
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重组人抗乙型肝炎病毒表面抗体的筛选及序列分析
目的 克隆、筛选人抗乙型肝炎病毒表面抗体(抗-HBs),并对其基因序列进行分析.方法 从抗-HBs抗体阳性血液中分离淋巴细胞,提取总RNA,合成cDNA,以此为模板,PCR扩增轻链和重链抗体可变区基因;应用已构建的抗体支架载体,构建重组表达载体,转化毕赤酵母X33,建立相应的酵母表达文库;甲醇诱导表达,Western blot及ELISA筛选抗-HBs抗体阳性菌株;PCR扩增DNA片段,进行测序及Blasm比对,并与已发表的抗-HBs抗体序列进行同源性分析.结果 重链及轻链抗体重组表达载体经双酶切鉴定,证明构建正确;经Western blot及ELISA筛选,获得了具有HBsAg结合活性的完整轻重链抗体;轻链可变区与已发表序列核苷酸同源性为93%,而氨基酸同源性仅为88%,尤其CDR3变异较大;重链可变区与已发表序列同源性较低,CDR3区基因长度及序列均有较大差别.结论 应用毕赤酵母表达体系筛选,获得了新的抗-HBs抗体.
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实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数
目的 建立实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻重链基因的拷贝数.方法 以分别带有抗体轻链和重链的质粒作为标准品,进行实时定量PCR反应,建立标准曲线.提取转染抗体轻重链基因的CHO细胞基因组DNA,进行定量PCR反应,通过标准曲线,再根据10 ng CHO基因组中含有的单拷贝基因的数量,分别计算得到抗体的轻链和重链基因在CHO细胞中的拷贝数.结果 分别建立了抗体轻链和重链基因的拷贝数标准曲线,标准曲线的相关系数均在0.99以上,PCR扩增效率分别为91.6％和91.8％,具有良好的特异性.随着细胞培养代次的增加,轻链基因和重链基因的拷贝数均出现降低的现象.结论 成功建立了实时定量PCR法检测转基因CHO细胞中外源抗体轻链和重链基因的拷贝数,可用于外源抗体基因在CHO细胞中的遗传稳定性研究,也为高表达细胞株的获得提供了一种检测方法.
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5'-RACE法扩增抗人乳头瘤病毒16型L1蛋白单克隆抗体轻链可变区基因及序列分析
目的 获得抗人乳头瘤病毒16型(HPV16)L1蛋白单克隆抗体的轻链可变区(VL)基因并分析序列.方法 从分泌抗HPV16L1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA,逆转录形成cDNA,用5'-RACE策略扩增抗体轻链可变区基因,经琼脂糖凝胶电泳鉴定,并测序及进行序列分析.结果 VL基因全长336bp,编码112个氨基酸,基因测序结果符合小鼠抗体轻链可变区特征.结论 5'-RACE法成功获得了抗HPV16L1蛋白的单克隆抗体轻链可变区基因的真实序列,为基因工程抗体研究奠定了良好基础.
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轻链λ对RF和抗CCP抗体阴性的类风湿关节炎的临床价值研究
为了评价类风湿因子(RF)和抗CCP抗体阴性的关节炎患者就诊时血清轻链λ水平对类风湿关节炎(RA)的诊断价值,回顾性分析我院住院RA患者的临床资料,获取患者初诊的RF、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体、免疫球蛋白(Ig)和轻链等数据.根据RF和抗CCP抗体水平,RA患者分为自身抗体阴性组和阳性组.将血清阴性RA患者作为实验组,与非RA关节炎患者构成的对照组进行比较,用受试者工作特征曲线(ROC)和多元Logistic回归分析轻链λ对RA患者诊断的临床价值.结果显示,实验组较对照组关节炎患者的轻链λ水平升高,差异具有统计学意义(P=0.026);ROC分析表明轻链λ对关节炎患者发展为RA具有预测价值,曲线下面积(AUC)达到0.665[95％CI(0.518,0.812)];以620.5 mg/dl为临界值,预测RA的敏感性为0.565(0.345,0.768),特异性为0.804(0.661,0.906);多元Logistic回归校正后轻链λ仍然与关节炎患者发生RA相关(OR=3.551,P=0.037).研究结果表明,血清轻链λ水平对关节炎患者发展为RA具有一定的预测价值.
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尿轻链检测的临床意义探讨
目的：探讨免疫散射比浊法测定尿轻链检测的临床意义。方法检测733例患者及188名健康体检者（正常对照组）尿轻链水平，同时与尿本-周蛋白免疫固定电泳及肾功能指标[尿蛋白定量（TP ）、尿微量白蛋白（mAlb）、尿蛋白/肌酐比值（TP/Cr）、尿白蛋白/肌酐比值（Alb/Cr）]进行比较。结果733例患者中有155例患者临床诊断为轻链病，尿轻链总异常率为88％（647/733），κ/λ比值异常率为21％（154/733）。κ和/或λ轻链对轻链病的诊断敏感性和特异性分别为99．3％、28．9％，κ/λ比值对轻链病的诊断敏感性和特异性分别为91．0％、97．4％。正常对照组中有61例（32％）尿轻链异常，其中本-周蛋白免疫固定电泳阳性16例[κ轻链阳性15例、λ轻链阳性2例、游离λ轻链阳性1例、单独κ轻链阳性14例]，κ/λ比值异常率为1％（2/188）。结论免疫散射比浊法测定尿κ、λ轻链较准确可靠，κ/λ比值对轻链病的筛查更具价值，但应注意与肾功能损伤鉴别。采用尿本-周蛋白免疫固定电泳则能提供更加直观和明确的信息。
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硼替佐米治疗多发性骨髓瘤髓外病变1例
多发性骨髓瘤是血液系统较常见的恶性肿瘤,其髓外病变则缺乏有效的治疗手段.我们用硼替佐米联合甲泼尼龙及环磷酰胺治疗1例伴有髓外软组织病变的复发、难治性多发性骨髓瘤(轻链型)患者,现将其治疗效果及不良反应报告如下.
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血清游离轻链检测在IgG型多发性骨髓瘤化疗疗效评估中的临床意义
背景与目的:血清游离轻链(sFLC)的免疫比浊法检测是一敏感性强、特异性高的定量检测方法,在浆细胞病的诊治中具有重要的作用.本研究探讨sFLC检测在IgG型多发性骨髓瘤(MM)化疗疗效评估中的临床意义.方法:对2006年3-9月在我院住院进行化疗的30例IgG型MM患者,采用散射免疫比浊法(nephelometry)检测化疗前(基线)、化疗后疗程早期(第7～10天),疗程晚期(第28～35天)不同时间点的患者sFLC、免疫球蛋白、总轻链定量水平,对具有sFLC可测量性疾病的患者继续随访下一化疗周期疗效.探讨基线时sFLC在IgG型MM的克隆性轻链的检出率及其和疾病状态的关系,对比化疗后不同时间点采用sFLC、IgG变化水平在评估疗效中的敏感性和特异性.结果:克隆性sFLC在初治及疾病进展(PD)患者中阳性检出率为100%,在疾病稳定期的患者中阳性率达81.8%,在疾病状态为非常好的部分缓解(PR)以上的患者中阳性检出率为0.在疗程早期采用sFLC评估PR的敏感性和特异性分别为100%和92.3%,sFLC 评价PR/PD总符合率达69.2%,与常规方法相比,差异具有非常显著性(P=0.008);疗程晚期采用sFLC评估疗效时,PR的敏感性和特异性分别为87.5%和100%,PD的敏感性和特异性也明显高于采用IgG的评估,PR/PD总符合率升至92.3% , 与采用IgG评估相比差异具有非常显著性(P=0.002).结论:超过3/4的IgG型MM患者可检出克隆性sFLC,其阳性率与患者疾病状态相关;sFLC检测可能有助于早期发现单纯髓外复发的MM;采用sFLC评价IgG型MM患者疗效要优于常规IgG方法,敏感性和特异性均高于后者.
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血清免疫球蛋白、轻链测定对多发性骨髓瘤诊断的临床价值
目的:探讨血清免疫球蛋白(Ig)、轻链(κ、λ)的含量测定对多发性骨髓瘤(MM)诊断的临床价值.方法:速率散射比浊法.结果:39例MM的初诊患者,Ig测定结果显示,IgG型27例,占69.2%,IgG含量(60.19±29.80)g/L;IgA型7例,占17.9%,IgA含量(38.10±20.72)g/L;IgM型1例,占2.6%,IgM含量39.40g/L;轻链型4例,占10.3%,其IgG、IgA、IgM含量减低,单一类型Ig含量升高的MM组与其他MM组Ig含量相比有显著性差异(P＜0.01),与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.01).39例MM血清轻链含量都有单一类型升高,轻链κ含量升高为21例,占53.8%,λ含量升高为18例,占46.2%.κ型MM组、λ型MM组同一类型之间κ或λ含量与正常对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:血清Ig、轻链κ、λ含量可作为MM的诊断和分型的重要指标,其检测结果对MM诊断及鉴别诊断提供了可靠的依据,具有重要的临床价值.
